人KLK1和EGFP双顺反子重组腺病毒构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

目的：构建携EGFP为报告基因和人组织激肽释放酶1(hKLK1)基因双顺反子的重组腺病毒（Ad-hKLK1-IRES-EGFP）,并观察在自发性高血压大鼠（SHR）血管平滑肌细胞（VSMCs）中的表达变化。方法:通过双酶切质粒pBluescritII KS-hKLK1，将hKLK1基因定向克隆至带有IRES-EGFP的腺病毒穿梭质粒pDC316中，构建成重组穿梭质粒 ，将其与腺病毒骨架质粒BHGloxE1，3Cre共转染293A细胞，经包装并获得重组腺病毒，用PCR、酶切及测序方法对其进行鉴定，测定病毒滴度；用重组腺病毒感染VSMCs，用荧光显微镜下观察到的绿色荧光来测定感染率，用RT－PCR和Western blotting法测定hKLK1基因在VSMCs中的表达。结果:PCR、酶切和测序表明携EGFP的重组穿梭质粒pDC316-hKLK1-IRES-EGFP构建正确，并与骨架质粒在293A细胞中成功包装出重组腺病毒Ad-hKLK1-IRES-EGFP，其滴度为4.5×10¹¹/L。重组腺病毒感染VSMCs后，在荧光显微镜下观察到明亮绿色荧光蛋白表达，感染率高达90％以上，可检测到hKLK1基因的mRNA及蛋白表达，并与感染时间(1 d-7 d) 有显著依赖关系，峰值感染复数为100 MOI。结论:成功构建并包装了携EGFP和hKLK1基因的双顺反子重组腺病毒载体系统Ad-hKLK1-IRES-EGFP；感染VSMCs可检测到基因hKLK1和EGFP的独立共同高表达，该系统为一直观、安全、高效的基因转移系统。     

多波长吸收度比值差法测定复方雷琐辛涂剂的含量

目的：直接测定复方雷琐辛涂剂中间苯二酚和苯酚的含量。方法：应用多波长吸收度比值差法，以260，265，270，274，280nm波长为测试点。结果：平均回收率分别为99.71％（RSD=0.45%）和99.30％（RSD=0.53％）。结论：方法操作简便，测定结果理想，适宜于医院制剂的定量检测。     

血管紧张素Ⅱ1型受体基因多态性与原发性高血压患者左室肥厚的相关性研究

目的 :探讨血管紧张素Ⅱ 1型受体 (ATIR)基因多态性与高血压左室肥厚 (LVH)的关系。方法 :对139例原发性高血压 (EH)患者 ,采用二维超声心动图检测有无LVH ,同时作 2 4h动态血压监测 ,采血用PCR法检测AT 1R基因A 116 6C多态性。6 3例正常人作基因频率检测。结果 :①EHLVH(+)与LVH(- )两组动态血压指标除夜间平均收缩压、舒张压 (SBP、DBP)、平均动脉压 (MAP)差异有显著性意义外 ,2 4h及白天平均SBP、DBP、MAP两组间差异均无显著性意义 ;②EHLVH(+)组C等位基因频率明显高于LVH(- )组 ,LVH(+)组AC或CC基因型明显高于LVH(- )组 ;③ 6 3例正常人C等位基因频率C为 4 %。结论 :AT1R基因A 116 6C基因多态性与EHLVH明显相关。东方人与西方人AT1R基因频率分布不同。     

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征对血压的影响

目的：探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）对血压的影响。方法：入选112名患者,行多导睡眠监测,根据是否伴有高血压及OSAHS[呼吸暂停低通气指数（AHI）〉20次/min,定义为中重度OSAHS],随机分为四组,血压正常＋轻度OSAHS组（30例）、血压正常＋中重度OSAHS组（25例）、高血压＋轻度OS-AHS组（22例）、高血压＋中重度OSAHS组（35例）。比较一般临床资料、血压参数、睡眠结构、血氧参数。结果：1.高血压患者中,与轻度OSAHS组比较,中重度OSAHS组的初醒时舒张压明显升高[（93.45±12.24）mmHg比（100.31±9.97）mmHg],睡前、初醒时脉压[（58.41±15.52）mmHg比（47.71±11.46）mmHg,（55.77±17.42）mmHg比（41.51±11.86）mmHg]明显降低（P〈0.01）;在血压正常患者中,上述各血压参数在中重度OSAHS组与轻度OSAHS组间均无显著性差异;2.与轻度OSAHS组比较,中重度OSAHS组的AHI、低氧指数和血氧饱和度〈90%时间均明显增加,平均血氧饱和度、最低血氧饱和度明显降低（P〈0.01）;3.高血压患者中,与轻度OSAHS组比较,中重度OSAHS组的非快速动眼Ⅱ期占总睡眠时间比例明显增加（37.55%比47.13%,P〈0.01）、入睡后清醒时间占总睡眠时间比例减少（22.83%比12.90%,P〈0.05）。结论：OSAHS对高血压患者血压有显著影响,表现在初醒时舒张压升高,睡前、初醒时脉压降低,并随着OSAHS病情加剧而加重。OSAHS患者夜间发生缺氧,这可能是合并OSAHS的高血压患者舒张压波动的重要机制之一。     

AT1R和ACE基因多态性对心血管疾病的共同影响

目前已清楚地认识到肾素-血管紧张素系统(RAS)不仅是循环内分泌系统，而且还是个自分泌和旁分泌系统。近年来，随着分子生物学技术的发展，转化酶抑制荆(ACEI)的广泛应用以及皿管紧张素Ⅱ受体拮抗剂的问世，已逐渐认识到RAS在调节、维持心血管系统功能稳定和心血管疾病的发生、发展及防治等方面均具有重要作用。然而这些作用又都是受其各类基因调控的。本重点讨论血管紧张素ⅡⅠ型受体(ATIR)基因和血管紧张素转化酶(ACE)基因的多态性在心血管疾病发生中的影响与作用。     

血浆脑钠素浓度与老年高血压患者左室肥厚及心功能的关系

目的观察老年高血压患者左室肥厚与血浆脑钠素(BNP)浓度的关系,并以贝那普利治疗前后左室肥厚及左室舒张功能不全的变化情况,探讨血浆BNP浓度可否作为判断左心室肥厚的逆转及左室舒张功能改变的临床指标。方法老年高血压患者74例,平均年龄(72.0±11.6)岁,其中伴左心室肥厚组患者34例、不伴左心室肥厚组患者40例,正常对照组30例,予以高血压病患者贝那普利5~10mg/d治疗36周,所有对象行超声心动图测定左心室质量指数(LVMI),E/A比值;采用美国博适Triage及其试剂盒快速测定血浆BNP水平,对BNP与LVMI、E/A比值作相关分析。结果老年高血压左心室肥厚患者组的血浆BNP水平明显高于高血压病不伴左心室肥厚患者组和正常对照组(P<0.01),经贝那普利治疗后高血压病左心室肥厚患者组血浆BNP水平明显下降(P<0.05),且与LVMI呈显著正相关,与E/A比值呈显著负相关。结论血浆BNP浓度能较好地反映老年高血压患者左心室肥厚及左室舒张功能状态。     

蛹虫草（北冬虫夏草）提取物对高糖诱导的内皮细胞衰老和细胞内活性氧的影响

目的：探讨蛹虫草乙酸乙酯提取物（GSCME）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的衰老和细胞内活性氧的影响。方法：体外培养HUVECs,分3组：对照组（D-葡萄糖5.5mmol/L）、高糖组（D-葡萄糖40mmol/L）、GSCME组（GSCME 50μg/ml＋D-葡萄糖40mmol/L）,检测各组细胞增殖情况,SA-β-gal阳性衰老细胞,周期分布和细胞内活性氧（ROS）含量。结果：与对照组相比,高糖干预24、48、72h后细胞增殖活性显著下降[OD：48h：（0.599±0.062）比（0.375±0.013）],P均〈0.01;高糖孵育48h后SA-β-gal阳性细胞率[（50.70±1.49）%比（89.63±0.69）%]、G0/G1期细胞百分率[（49.15±2.56）%比（76.59±3.58）%]、细胞内活性氧（ROS）水平[（1.03±0.15）比（3.60±0.36）]均明显增加,P均〈0.01。与高糖组相比,GSCME孵育48h、72hHUVECs增殖率显著上升[48h：（0.375±0.013）比（0.424±0.023）],P均〈0.05,孵育48h显著降低SA-β-gal阳性细胞率[（89.63±0.69）%比（65.81±1.50）%]、G0/G1期细胞百分率[（76.59±3.58）%比（52.70±5.64）%]及细胞内ROS水平[（3.60±0.36）比（1.67±0.21）],P〈0.05～0.01。结论：蛹虫草提取物可延缓高糖诱导的人脐静脉内皮细胞衰老进程,降低细胞内活性氧从而减轻细胞氧化损伤可能是其作用的机制之一。     

胃肠道间质肿瘤DOG1和Ki67、p53的表达及意义

目的 探讨胃肠道间质瘤(GIST)患者中的DOG1和细胞增殖核抗原Ki67以及p53突变型蛋白的相互关系及病理学意义.方法 应用免疫组织化学方法检测86例GIST患者与20例非GIST患者组织中的DOG1及Ki67、p53的表达,比较分析各个指标在GIST各危险性分级和各部位的表达情况.结果 在86例GIST组织中,D...     

血清sST2、apelin和CPP水平与心力衰竭患者预后的相关性分析

目的:分析血清可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)、apelin及和肽素(CPP)水平与不同射血分数心力衰竭患者预后的相关性。方法:选择2018年11月至2020年5月在福建省立金山医院诊断为心力衰竭的119例患者,根据左室射血分数,将其分为射血分数降低组(HFrEF组,n=31)、射血分数中间值组(HFmrEF组,n=21)和射血分数保留组(HFpEF组,n=67)。检测3组患者血清中N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、sST2、apelin和CPP的含量。所有患者入院后根据指南规范化治疗心力衰竭,随访2年,分析各心脏生物学标志物与心血管死亡之间的关系。结果:3组间患者性别、收缩压、脉压、体质量指数、尿素氮、糖化血红蛋白、左心室舒张末期内径、右心房横径、右心室舒张末期内径差异均有统计学意义(P0.05)。3组患者血清中NT-proBNP和sST2含量差异有统计学意义(P0.05),CPP和apelin含量差异无统计学意义。多元线性模型分析结果显示,血清NT-proBNP水平与左室射血分数相关(F=3.49,P=0.03),而血清sST2、apelin、CPP水平与左室射血分数无相关性。随访24个月时HFrEF组、HFmrEF组、HFpEF组患者累计心血管死亡率分别为29.0%、23.8%、10.4%,差异有统计学意义(P=0.04)。Kaplan-Meier生存分析显示,HFrEF、HFmrEF、HFpEF组心血管病累计生存率依次升高(χ~2=6.48,P=0.04)。Cox回归分析结果显示,NT-proBNP、尿素氮水平及使用盐皮质激素受体拮抗剂是心力衰竭患者心血管死亡的独立影响因素(P0.01)。结论:左室射血分数、NT-proBNP、尿素氮水平及使用盐皮质激素受体拮抗剂对心力衰竭患者心血管死亡有预测作用,而血清sST2、apelin和CPP水平预测价值有限。     

吡哆胺对血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小管上皮细胞增殖的影响

目的研究吡哆胺对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人近端肾小管上皮细胞株HK-2细胞增殖的影响,并通过与替米沙坦的比较探讨其作用机制。方法以吡哆胺和替米沙坦分别干预经过AngⅡ诱导的HK-2细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞内活性氧簇(ROS)水平,实时荧光定量PCR及Western Blot分别检测糖基化终末产物受体(RAGE)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组比较,AngⅡ可抑制HK-2细胞的增殖,使细胞内ROS生成增加并上调RAGE、TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平(均为P<0.01);0.1,1mmol/L的吡哆胺均能明显减轻AngⅡ对HK-2细胞增殖的抑制作用,同时减少ROS生成,并下调RAGE、TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平(均为P<0.01);0.1,1mmol/L浓度吡哆胺的作用均优于替米沙坦。结论吡哆胺能减轻AngⅡ对HK-2细胞增殖的抑制作用。这一效应可能与吡哆胺减轻氧化应激、抑制AGEs-RAGE及下调纤维化因子TGF-β1的表达有关。