二甲双胍抑制Th17细胞反应对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用

目的探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠应用二甲双胍(MET)干预,观察MET对EAE小鼠发病情况、神经功能评分的影响及其对小鼠体内Th17细胞反应的作用。方法以MOG35-55免疫雌性C57BL/6小鼠建立EAE模型。随机分成对照组、EAE组和MET治疗组,比较不同组小鼠神经功能评分。在发病高峰期,比较小鼠脊髓中炎性细胞浸润程度,脾细胞中Th17细胞比例,脾细胞培养上清及血清中IL-17A含量以及小鼠脾及脊髓中IL-17A、RORγt mRNA转录水平。结果与EAE组相比,MET治疗组发病率减低(P0.05),疾病严重程度减轻(P0.01);脾细胞中Th17细胞比例降低(P0.01),脾细胞培养上清及血清中IL-17A含量减少(P0.01);脾及脊髓组织中IL-17A、RORγt mRNA转录水平均降低(P0.01)。结论 MET通过抑制外周免疫器官及中枢神经系统的Th17细胞反应而对EAE小鼠起到保护作用。     

JAK2抑制剂AG490对EAE小鼠C57BL/6的Th17/Treg细胞平衡的影响

目的探讨AG490对EAE小鼠Th17/Treg平衡的影响及其治疗作用。方法以MOG33-35多肽免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型,观察AG490干预前后EAE组、AG490组和对照组小鼠脊髓组织炎性细胞浸润情况及p-STAT5、Foxp3和IL-17免疫组化染色阳性细胞数目。结果 AG490组较EAE组小鼠炎症细胞浸润及IL-17阳性细胞数目减少(P<0.05),AG490组小鼠p-STAT5和Foxp3阳性细胞数目较EAE组增多(P<0.05),两组小鼠发病高峰期较发病初期炎症细胞浸润及IL-17阳性细胞数目增多,而p-STAT5和Foxp3阳性细胞数目减少(P<0.05)。结论 (1)AG490通过抑制JAK2-STAT3信号通路抑制炎症反应和免疫应答;(2)JAK2抑制剂可以通过JAK2-STAT3信号通路调节Th17/Treg细胞平衡。     

二甲双胍通过调节Treg细胞反应治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎

目的给予实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠应用二甲双胍(MET)干预性治疗。观察MET对EAE小鼠发病情况及体内Treg细胞反应的作用。方法将雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、EAE模型组和MET治疗组,采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白MOG35-55免疫小鼠建立EAE模型。自身免疫后第1天开始,按100mg·kg~(-1)·d~(-1)给予MET治疗组腹腔注射。正常对照组及EAE模型组小鼠给予等量的生理盐水每日腹腔注射作为对照。应用Knoz评分观察小鼠的神经功能评分,流式细胞学检测方法检测小鼠脾细胞中Treg细胞比例,ELISA方法检测脾细胞培养上清及血清中IL-10、TGF-β含量。qPCR方法检测小鼠脾及脊髓中Treg细胞转录因子Foxp3 mRNA表达水平。结果与EAE模型组相比,MET治疗组发病程度减轻(P0.01);脾细胞中Treg细胞比例增高(P0.01),脾细胞培养上清及血清中IL-10、TGF-β含量增加(P0.01);脾组织中Foxp3mRNA表达水平升高(P0.01);脊髓组织中Foxp3mRNA表达水平升高(P0.01)。结论 MET通过提高外周免疫器官及中枢神经系统的Treg细胞数量,增加抑制炎症因子的表达而达到对EAE模型小鼠的保护作用。     

马索罗酚对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠Th1/Th2细胞炎症因子平衡的影响

目的探讨马索罗酚对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠白细胞介素-4(IL-4)、IL-12、干扰素-γ(IFN-γ)表达的调节作用。方法将8~10周雌性C57BL/6小鼠54只随机分成对照组、模型组、治疗组。每组再随机均分为发病后10d及20d亚组,每亚组9只。采用皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)多肽0.1mL诱导EAE模型。自发病当天起,治疗组小鼠给予马索罗酚10mg/(kg·d)治疗,模型组及对照组给予等量5%二甲基亚砜(DMSO)10mL/(kg·d)处理。比较3组小鼠临床症状评分。应用实时定量PCR检测小鼠脊髓和脾组织中IL-4、IL-12、IFN-γmRNA表达水平。应用ELISA检测脑组织中IL-4、IL-12、IFN-γ蛋白表达水平。结果与模型组比较,治疗组小鼠临床症状较减轻(P0.05)。与模型组相比,治疗组小鼠10d时脊髓和脾组织IL-12、IFN-γmRNA表达水平降低(P0.05),IL-4mRNA水平增高(P0.05),脑组织IL-12、IFN-γ蛋白水平降低(P0.05),IL-4蛋白水平增高(P0.05);与模型组相比,治疗组20d时脊髓组织IL-12、IFN-γmRNA表达水平降低(P0.05),脑组织IFN-γ含量降低(P0.05)。结论马索罗酚可能通过降低脑、脊髓及脾组织中IL-12、IFN-γ表达,增加IL-4表达,调节Th1/Th2细胞炎症因子平衡,进而改善EAE小鼠疾病严重程度。     

骨髓间充质干细胞对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的Iba1、IL-1β和IL-10影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠的小胶质细胞Iba1、IL-1β和IL-10表达的影响。方法以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽35-55(MOG 35-55)免疫诱导C57BL/6雌性小鼠制备EAE小鼠模型。将30只雌性C57BL/6小鼠随机分为3组:BMMSCs移植组、EAE组和正常组。采用免疫组化检测脑和脊髓的Iba1(离子钙结合衔接分子1)、IL-1β和IL-10的表达。结果 BMMSCs移植组神经功能缺损症状要轻于EAE组,BMMSCs移植组脑和脊髓的Iba1和IL-1β表达水平低于EAE组(P0.05),而BMMSCs移植组脑和脊髓的IL-10表达水平高于EAE组(P0.05)。结论 BMMSCs能改善EAE小鼠的症状,其作用机制之一可能是抑制了小胶质细胞的激活、抑制炎症因子IL-1β及促进抗炎因子IL-10的表达。     

雷公藤多甙对EAE大鼠脊髓β-APP和IL-17表达的影响

目的观察雷公藤多甙对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脊髓中β-APP和IL-17表达的影响。方法将30只大鼠随机分为空白对照组(CON组)、模型组(EAE组)、治疗组(TWP组),建模后分别行神经功能评分,大鼠脊髓组织行HE染色,免疫组化检测脊髓中β-APP和IL-17表达水平。结果与EAE组比较,TWP组大鼠发病率下降,平均神经功能评分降低,炎性细胞浸润减少,在神经功能评分和病理学改变方面差异明显(P<0.05);免疫组化示TWP组较EAE组β-APP和IL-17表达水平降低(P<0.05)。结论雷公藤多甙对EAE大鼠有一定保护作用,可能与抑制β-APP、IL-17表达有关。     

咪唑克生对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠小胶质细胞激活和白介素17、肿瘤坏死因子α表达的影响

目的观察咪唑克生对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脑组织中小胶质细胞、白介素17(IL-17)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法 SD大鼠30只随机分成3组:EAE-咪唑克生组(免疫当日开始给予咪唑克生2 mg·kg~(-1),腹腔注射,连续14 d)、EAE-生理盐水组(给予相同剂量生理盐水)和空白对照组。用豚鼠全脊髓匀浆免疫诱导制作EAE大鼠模型。每天观察评估各组大鼠神经功能变化;苏木精-伊红染色观察病理学改变;免疫组化法检测小胶质细胞(Iba1阳性)的激活与表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测发病高峰期(免疫后15 d)脑组织中IL-17,TNF-α表达水平。结果与EAE-生理盐水组比较,EAE-咪唑克生组(1)日均神经功能评分降低(P0.05),最大临床症状评分显著降低(P0.01);(2)苏木精-伊红染色:中枢炎症细胞浸润减少(P0.05);(3)免疫组化:Iba1阳性细胞表达减少(P0.05);而EAE-生理盐水组大鼠腰髓内Iba1阳性细胞表达较空白对照组明显升高(P0.01);(4)ELISA:炎性细胞因子IL-17和TNF-α表达明显降低(P0.01)。结论咪唑克生能够减缓大鼠EAE病情,其机制可能与抑制中枢神经系统小胶质细胞激活,下调中枢神经系统炎症因子IL-17和TNF-α的表达,扰乱中枢神经系统内炎症因子的平衡有关。     

载脂蛋白E拟肽对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑脊髓CD4+、CD8+T淋巴细胞表达的影响

目的 探讨载脂蛋白(Apo)E拟肽对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑脊髓CD4+、CD8+T淋巴细胞表达的影响.方法 40只C57BL/6J雌性小鼠随机分成EAE组、EAE治疗组、正常对照组、正常治疗组;采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白制备的完全抗原诱导EAE模型小鼠.免疫诱导次日,EAE治疗组和正常治疗组小鼠每隔2d皮下注射ApoE拟肽,EAE组和正常对照组小鼠皮下注射等量的生理盐水.免疫诱导后各组每日进行神经功能缺损评分(NDS);35 d后用免疫组化检测各组小鼠脑脊髓CD4+T细胞、CD8+T细胞的表达.结果 EAE治疗组NDS的峰值及终末评分显著低于EAE组(均P＜0.05).与正常对照组及正常治疗组比较,EAE组大脑、脑干和脊髓中CD4+T细胞数明显增高,大脑CD8+T细胞数明显增高(均P＜0.05).EAE治疗组小鼠大脑、脑干、脊髓组织CD4+T细胞表达显著低于EAE组(均P＜0.05);两组间CD8+T细胞表达水平的差异无统计学意义.结论 ApoE拟肽可抑制CD4+T细胞的表达,减轻免疫炎症反应,对EAE小鼠有神经保护作用;而对CD8+T细胞的表达无明显影响.     

载脂蛋白E拟肽对实验性变态反应性脑脊髓炎小鼠基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1表达的影响

目的探讨载脂蛋白E(Apo E)拟肽对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响。方法将30只雌性C57BL/6J小鼠随机分为Apo E拟肽组、EAE组和正常组,每组10只小鼠。EAE模型通过以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽35-55为抗原诱导。Apo E拟肽组在免疫后第2 d到30 d每隔2 d按5 mg/(kg·d)背部皮下注射Apo E拟肽。EAE组和正常组均以等体积生理盐水替代。免疫后第0~35 d每日对小鼠进行神经功能评分。免疫后第35d解剖小鼠,分离大脑和脊髓并行HE染色。采用免疫组化染色法检测各组小鼠大脑、脑干和脊髓的MMP-9和TIMP-1的表达。结果正常组小鼠均未发病。Apo E拟肽组、EAE组的小鼠全部发病,但各有1只小鼠发病后死亡。Apo E拟肽组与EAE组的发病潜伏期差异无统计学意义(P=0.72)。Apo E拟肽组的神经功能评分在峰值和慢性期(第35 d)均明显低于EAE组(均P0.05)。HE染色示,正常组未见炎症细胞浸润;EAE组小鼠大脑、脑干和脊髓均有不同程度的炎性细胞浸润,以脑干和脊髓较为明显;Apo E拟肽组小鼠CNS炎性细胞浸润相对于EAE组明显减少。EAE组小鼠大脑、脑干和脊髓的MMP-9表达均高于正常组(均P0.05)。Apo E拟肽组小鼠大脑和脊髓的MMP-9表达要明显低于EAE组(均P0.05),其中Apo E拟肽组小鼠中脑和脊髓的MMP-9表达与正常组相比无明显差异(均P0.05)。正常组小鼠脊髓TIMP-1的表达明显高于EAE组和Apo E拟肽组(均P0.05)。而Apo E拟肽组与EAE组小鼠大脑、脑干和脊髓TIMP-1表达的差异均无统计学意义(均P0.05)。结论 Apo E拟肽能通过抑制大脑和脊髓MMP-9的表达改善EAE小鼠的症状。     

髓鞘少突胶质细胞诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的中枢病理损伤与Th1、Th17细胞分泌炎症细胞因子的变化观察

目的：观察实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的中枢神经系统（CNS）病理损伤与Th1、Th17细胞分泌的相关炎症细胞因子的变化,探讨EAE致病的分子免疫学机制。方法：用髓鞘少突胶质细胞（MOG35-55）免疫诱导野生型C57BL／6小鼠制作EAE模型,记录小鼠行为学变化,苏木精-伊红染色观察CNS病理损害,RT-PCR法检测中枢Th1细胞因子γ-干扰素（IFN-γ）、Th17细胞因子IL、17和IL-6的mRNA表达水平。结果：MOG诱导的EAE模型组小鼠出现典型的EAE行为及病理学表现,大脑组织中INF-γ、IL-17和IL-6mRNA表达水平均较CFA对照组有明显升高。结论：在EAE炎症反应的过程中,Th1细胞和Th17细胞激活,各自分泌的炎症细胞因子（INF-γ／IL-6、IL-17）增加,它们可能参与了EAE发病的重要免疫病理机制。EAE的致病并不是单-Th1或者Th17细胞作用的结果,而是两类细胞因子都参与了作用。