异基因间充质干细胞在体内免疫调节作用的时间及剂量依赖性

背景：异基因间充质干细胞移植时,发挥作用需要的剂量、持续的时间及是否具有不良反应是目前研究的热点。 目的：观察异基因的骨髓间充质干细胞在体内免疫调节作用的时间、剂量依赖性。 方法：免疫系统正常的BALB/c小鼠模型,制备骨髓来源间充质干细胞,24只BALB/c小鼠随机分为4组,实验组每只小鼠分别通过尾静脉注射0.3 mL细胞悬液,分别含5×105,5×104,5×103骨髓间充质干细胞,对照组小鼠仅注射0.3 mL生理盐水。进行淋巴细胞增殖检测、混合淋巴细胞反应、间充质干细胞移植对异基因小鼠免疫系统的影响等实验。 结果与结论：不同剂量的C57BL/6骨髓来源间充质干细胞经尾静脉注射给BALB/c受体小鼠后,骨髓间充质干细胞体内对免疫系统的调节呈剂量依赖性。间充质干细胞促进异基因移植物的植入,同时这种免疫下调作用在2周时最强,1个月逐渐减弱,2个月基本消失,提示间充质干细胞的免疫调节作用具有剂量依赖性,并且只能维持一段时间。     

载脂蛋白E拟肽对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑脊髓CD4+、CD8+T淋巴细胞表达的影响

目的 探讨载脂蛋白(Apo)E拟肽对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑脊髓CD4+、CD8+T淋巴细胞表达的影响.方法 40只C57BL/6J雌性小鼠随机分成EAE组、EAE治疗组、正常对照组、正常治疗组;采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白制备的完全抗原诱导EAE模型小鼠.免疫诱导次日,EAE治疗组和正常治疗组小鼠每隔2d皮下注射ApoE拟肽,EAE组和正常对照组小鼠皮下注射等量的生理盐水.免疫诱导后各组每日进行神经功能缺损评分(NDS);35 d后用免疫组化检测各组小鼠脑脊髓CD4+T细胞、CD8+T细胞的表达.结果 EAE治疗组NDS的峰值及终末评分显著低于EAE组(均P＜0.05).与正常对照组及正常治疗组比较,EAE组大脑、脑干和脊髓中CD4+T细胞数明显增高,大脑CD8+T细胞数明显增高(均P＜0.05).EAE治疗组小鼠大脑、脑干、脊髓组织CD4+T细胞表达显著低于EAE组(均P＜0.05);两组间CD8+T细胞表达水平的差异无统计学意义.结论 ApoE拟肽可抑制CD4+T细胞的表达,减轻免疫炎症反应,对EAE小鼠有神经保护作用;而对CD8+T细胞的表达无明显影响.     

外周血T淋巴细胞与腰椎间盘突出类型及直腿抬高试验的相关性

的：观察腰椎间盘突出症患者外周血T淋巴细胞变化水平,探讨患者外周血T淋巴细胞水平变化与其突出类型、体征的关系。 方法：收集2008-01/10在天津医科大学总医院需外科治疗的49例单阶段腰椎间盘突出症患者外周血,男 26例,女23例。发病部位：L4~5 22例,L5S1 27例。治疗前直腿抬高试验阳性34例,阴性15例。根据术中所见腰椎间盘位置分为破碎疝出组30例和退变突出组19例。以同期健康献血者20名为对照组。采用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞分类。 结果：破碎疝出组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平较对照组高(P < 0.05),CD8+低于对照组(P < 0.05);直腿抬高试验阳性组CD4+、CD4+/CD8+水平较阴性组高,阳性组CD8+水平较阴性组低,差异有显著性意义(P < 0.05)。破碎疝出组直腿抬高试验试验阳性率高于退变突出组直腿抬高试验阳性率。 结论：腰椎间盘疝出后出现外周血T淋巴细胞免疫变化,且其不同病理类型也存在差异,T细胞介导免疫反应在患者体征发生、发展中起重要的作用。直腿抬高试验可能有助于证实突出间盘对神经根的损伤及治疗方式的选择。     

骨髓间充质干细胞对免疫介导再生障碍性贫血的治疗

背景：骨髓间充质干细胞具有免疫调节作用,可以影响淋巴细胞和其他免疫细胞的功能,同时其分泌的因子尚有支持造血的作用。而再生障碍性贫血的发生、发展与T细胞功能亢进引起的造血干、祖细胞凋亡密切相关。 目的：比较骨髓间充质干细胞和全骨髓细胞治疗免疫介导再生障碍性贫血小鼠的疗效。 方法：建立BALB/C小鼠免疫介导再生障碍性贫血模型。将BALB/C小鼠随机分成正常组、对照组、注射骨髓间充质干细胞和注射全骨髓细胞组。观察骨髓间充质干细胞和全骨髓细胞对实验动物的疗效及骨髓的造血组织容量、脂肪细胞和血窦结构。 结果与结论：再生障碍性贫血模型小鼠至第20天,对照组全部死亡,骨髓间充质干细胞组4例死亡,全骨髓细胞组1例死亡。②骨髓间充质干细胞组和全骨髓细胞组存活小鼠,其体质量变化趋势、血细胞计数、骨髓造血功能恢复均无显著性差异。③检测骨髓间充质干细胞组和全骨髓细胞组脾脏CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+的比值示无差异,与正常小鼠相比,骨髓间充质干细胞组外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞水平有下降趋势。全骨髓细胞组CD8+T细胞水平明显下降。提示,单独使用骨髓间充质干细胞治疗能够使部分再生障碍性贫血模型小鼠症状改善、造血恢复。骨髓间充质干细胞治疗有效率不如全骨髓细胞,但两组无显著性差异。     

旋毛虫对BALB/c小鼠体内C6胶质瘤细胞的干扰作用

目的观察旋毛虫感染对BAlB/c小鼠体内C6胶质瘤细胞生长的抑制作用。方法用不同剂量的旋毛虫感染BALB/c小鼠,并在不同时间接种C6胶质瘤细胞,荷瘤20d后解剖小鼠,测定小鼠体内肿瘤重量及抑瘤率,并对T淋巴细胞亚群进行检测。结果(1)治疗组(先荷瘤,后接虫)小鼠肿瘤重量均显著低于对照组(P<0.01),CD4 /CD8 显著高于对照组(P<0.01);(2)预防组(先接虫,11d后荷瘤)肿瘤体积和重量均显著低于对照组(P<0.01),CD4 /CD8 显著高于对照组(P<0.01)。结论旋毛虫对BALB/c小鼠体内的C6胶质瘤细胞的生长有一定的抑制作用,并且预防组的抑瘤效果好于治疗组。     

降钙素促进骨质疏松骨床中植入体的骨整合☆△

背景：降钙素具有提高骨量、骨质量,降低骨折发生的效果。 目的：评价鲑鱼降钙素对羟基磷灰石植入体骨整合的影响,及其在治疗骨质疏松症同时促进植入体生物学固定的能力。 方法：将SD大鼠随机分为假手术+羟基磷灰石棒组、卵巢切除+羟基磷灰石棒组、卵巢切除+降钙素+羟基磷灰石棒组,后2组建立绝经后骨质疏松动物模型。建模后分别在3组大鼠的胫骨平台处开孔植入多孔羟基磷灰石假体,卵巢切除+降钙素+羟基磷灰石棒组大鼠皮下注射鲑鱼降钙素12周。 结果与结论：卵巢切除后,大鼠的腰椎骨密度降低,而持续皮下注射鲑鱼降钙素后,大鼠的腰椎骨密度逐渐改善。应用降钙素处理后的大鼠,其骨结合率较卵巢切除+羟基磷灰石棒组提高了22.0%(P < 0.05)。结果证实,全身给予鲑鱼降钙素能提高骨质疏松大鼠骨床和植入体周围骨量、促进主体骨-植入体的骨整合。     

生物衍生骨支架材料制备及在体内的组织相容性***☆

背景：理想的支架材料必须对机体无毒性，无免疫排斥反应，并能适 时地降解，具有良好的生物相容性，生物衍生骨支架材料能否长期存留体内并发挥功能值得研究。 目的：观察生物衍生骨支架材料植入鼠体内后机体局部组织生物相容性及对免疫功能的影响。 设计：随机对照动物实验。 单位：吉林大学基础医学院病理生物学教育部重点实验室。 材料：实验于2006-03/2006-07在吉林大学基础医学院病理生物学教育部重点实验室完成，选用18只雄性BALB/C小鼠，体质量（202）g，雌雄各半；1只昆明小鼠，体质量20 g；1只雌性家兔，体质量2.5 kg，以上实验动物均由吉林大学基础医院实验动物部提供，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。猪松质骨（髂骨）为市售。实验用IMDM 培养基为美国Hycolone公司产品，FBS购自美国GIBCO公司，四甲基偶氮唑盐及ConA均为美国Sigma公司产品。 方法：采用猪髂骨制备生物衍生骨支架材料。①采用随机抽签法将BALB/C小鼠分成支架材料植入组、异种骨植入组及对照组，每组6只。支架植入组将支架植入到BALB/C小鼠的下肢肌肉内，异种骨植入组将昆明鼠骨植入到BALB/C小鼠下肢肌肉内，对照组仅将局部肌肉损伤。②术后21 d取材料植入部位及周围组织，大体及苏木精-伊红染色法进行观察材料与组织相容性；采用刀豆蛋白A诱导各组脾淋巴细胞转化，酶联免疫检测仪在λ570 nm波段检测并记录淋巴细胞刺激指数。以补体依赖性细胞毒实验评估各组小鼠免疫功能，即采用酶联免疫检测仪在λ570 nm波段检测并记录各组吸光度值，计算细胞杀伤率。 主要检测指标：①植入物周围组织相容性。②刀豆蛋白A诱导后淋巴细胞刺激指数。③补体依赖性细胞毒实验各组细胞杀伤率。 结果：18只BALB/C小鼠均进入结果分析。①植入物周围组织相容性：支架材料植入组植入21 d后，支架材料组肉眼可见，埋植物周围软组织均无明显充血、变性、坏死、化脓及积液等表现，大量纤维结缔组织长入材料的孔隙之中，包裹并形成纤维囊。苏木精-伊红染色结果显示埋植物周围未见大量中性粒细胞及多核巨细胞等炎细胞浸润。材料周围有大量纤维结缔组织增生，材料被纤维囊包裹。同时有部分材料已经开始降解，材料降解后的空间有纤维结缔组织增生。异种骨组肉眼见肌肉剖面有坏死组织，苏木精-伊红染色结果显示埋植物周围有大量的中性粒细胞和巨噬细胞浸润，并可见坏死组织。②淋巴细胞刺激指数：异种骨植入组淋巴细胞刺激指数高于对照组，差异有显著性意义（P < 0.05），支架材料组与对照组之间差异无统计学意义（P > 0.05）。③细胞杀伤率: 异种骨植入组的细胞杀伤率明显高于对照组，差异有显著性意义（P < 0.05），支架材料组的细胞杀伤率与对照组差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论：本实验获得的生物衍生骨支架材料引起的免疫反应较弱，无明显细胞毒性，不产生明显的炎症反应，具有良好的生物相容性和生物安全性。     

抑郁症患者淋巴细胞亚群免疫表型分析

目的探索抑郁症患者的淋巴细胞亚群免疫表型并比较不同程度抑郁症患者的淋巴细胞亚群免疫表型,为抑郁症的发生机制及诊疗提供参考。方法通过整群抽样方法抽取某三甲医院符合《国际疾病分类(第10版)》(ICD-10)诊断标准的抑郁症患者110例为患者组,其中轻度组34例,中度组38例,重度组38例。同期在绵阳市第三人民医院随机抽取60名健康体检者为对照组。采用流式细胞术对所有研究对象的血液标本进行淋巴细胞亚群检测。结果患者组CD3~+T细胞、CD3~+CD4~+T细胞、CD3-CD56~+CD16~+NK细胞的比例和绝对值均低于对照组,重度组低于轻、中度组,中度组低于轻度组,差异均有统计学意义(P均0.05);患者组CD4~+/CD8~+比值低于对照组,重度组低于轻、中度组,中度组低于轻度组,差异均有统计学意义(P均0.05);患者组CD3~+CD8~+T细胞的比例和绝对值高于对照组,重度组高于轻、中度组,中度组高于轻度组,差异均有统计学意义(P均0.05)。结论抑郁症患者的CD3~+T细胞、CD3~+CD4~+T细胞、CD3-CD56~+CD16~+NK细胞比例和绝对值较健康人群低,而CD3~+CD8~+T细胞比例和绝对值较健康人群高,且不同程度抑郁症患者的CD3~+T细胞、CD3~+CD4~+T细胞、CD3~+CD8~+T细胞及CD3-CD56~+CD16~+NK细胞比例和绝对值存在差异。     

Genistein联合小剂量他克莫司在胰腺移植排斥反应中的作用

背景：有实验表明CXCR3拮抗剂Genistein可减轻胰腺移植大鼠的急性排斥反应。 目的：观察Genistein联合小剂量他克莫司在胰腺移植抗排斥反应中的作用。 方法：以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体,建立胰腺移植模型,随机分成5组：对照组(未进行药物治疗)、大剂量他克莫司组、小剂量他克莫司组、Genistein组、Genistein+小剂量他克莫司组。术后第7天行病理学,肝肾功能,血清中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞、干扰素γ、白细胞介素2浓度检测。 结果与结论：与对照组、小剂量他克莫司组、Genistein组比较,Genistein+小剂量他克莫司组移植胰腺组织损伤减轻,淋巴细胞浸润减少,急性排斥反应减轻,血清CD3+、CD4+、CD8+ T淋巴细胞明显减少,干扰素γ、白细胞介素2水平降低 (P < 0.05);并且避免了大剂量他克莫司对肝肾功能的损害。说明Genistein联合小剂量他克莫司能有效减轻胰腺移植急性排斥反应而不增加肝肾毒性。     

再生多孔丝素膜创面局部运用激活不同部位T细胞的作用

背景：丝素蛋白是从蚕丝中提取的天然高分子纤维蛋白,其具有良好的理化特性及生物相容性。而目前国内外有关再生多孔丝素膜植入体内后对T淋巴细胞的激活作用研究未见报道。 目的：观察再生多孔丝素膜植入大鼠局部创面后对外周血单个核细胞、脾脏及胸腺中T淋巴细胞的激活作用。 方法：切除SD大鼠背部皮肤建立2 cm×2 cm创面,随机分为2组：实验组覆盖经预处理的再生多孔丝素膜,将已切除皮肤的表皮盖在丝素膜上进行缝合,对照组仅覆盖自身表皮层。于术后第3,14,28,56,90天观察创面愈合及丝素膜的残留情况,采用双色免疫荧光及流式细胞术分析大鼠外周血、脾脏及胸腺中CD3+CD25+/ CD3+T细胞百分率。 结果与结论：植入早期,两组均可见局部、轻微的炎症细胞浸润,主要为淋巴细胞;至28 d后,炎症细胞逐渐减少,并且在整个动态观察过程中,两组结果一致。实验组外周血中活化T细胞在14 d之前呈一过性升高,随后开始下降,至28 d以后,活化T细胞水平趋于稳定,与对照组无明显差异(P > 0.05);脾脏与胸腺T细胞均有少量活化,随后即开始下降并趋于稳定,胸腺中CD3+CD25+/ CD3+T细胞的阳性率较脾脏微高,与对照组均无明显差异(P > 0.05)。说明再生多孔丝素膜对T淋巴细胞的激发作用较小,引发机体细胞免疫应答的能力较弱。     

BALB/c裸鼠与SCID小鼠皮下种植人肝癌模型的比较★

背景：建立良好的肝癌模型是进一步研究肝癌诊断、治疗的基础，目前各种模型较多，但是进行评价的很少。 目的：比较两种免疫缺陷小鼠种植性肝癌的成瘤情况。 方法：免疫磁珠法从Huh7肝癌细胞中分选出CD133+肝癌干细胞，取1×106个细胞分别种植于BALB/c祼鼠及SCID小鼠颈背部皮下，观察两组20 d的成瘤及死亡情况，游标卡尺分别测量种植性肝癌的直径，以大于0.5 cm为成瘤成功。 结果与结论：24只BALB/c裸鼠中18只成瘤成功；24只SCID小鼠中16只成瘤成功。行χ2检验，两组成瘤效果差异无显著性意义(P > 0.05)，两组死亡情况比较，差异有显著性意义(P < 0.05)。结果提示BALB/c组死亡率低，且价格低廉，更适合建立肝癌皮下种植模型。     

Hypothalamic self-stimulation in three inbred strains of mice

Male mice from 3 inbred strains (DBA/2 Orl, BALB/c Orl and C57 BL/6 Orl) were implanted with a bipolar electrode in the hypothalamus and tested for self-stimulation. The 3 strains differed in performances: the BALB/c mice showed higher scores than the DBA/2 mice which themselves showed higher rates than the C57 BL/6 mice. These strains also differed in frequency, threshold and the nature of seizures suspending their self-stimulation behavior.Moreover, for each strain, a comparison between dorsal and ventral hypothalamus implantation was made. In the 3 strains dorsal implantation gave higher self-stimulation scores than ventral. On the other hand the seizures occured more frequently with ventral implantations.     

生物材料在隆乳临床应用中的系统评价

目的：系统比较各种隆乳材料生物相容性及临床应用效果。 方法：收集2004/2008 CNKI数据库发表的有关隆乳材料方面的文献22篇。文章通过从隆乳材料,置入方式,临床效果,并发症处理难易程度及对机体的影响几方面对隆乳材料的临床应用进行评价;从距置入时间、置入体、并发症、原因及处理几方面分析了各种隆乳材料并发症;并从实验动物、实验分组、实验材料、观察方法、实验结果、实验结论方面整理分析,为临床应用提供了依据。 结果：从4篇有关硅凝胶假体的动物实验中可以看出实验动物均是鼠、兔,实验结论均显示硅凝胶假体对人体免疫系统无较大影响,无细胞毒性,组织相容性良好,无致癌性,是较理想的隆乳材料。从18篇隆乳材料的临床应用中选出14篇,从中可以显示硅凝胶假体在生物医学材料的特性,手术操作及植入并发症等方面优于其他材料。 结论：硅凝胶假体是一种良好的隆乳材料,组织相容性和细胞毒性良好。     

硅胶乳房假体的选择与临床应用

硅胶乳房假体一直是乳房美容和乳房重建使用最广泛的生物材料。隆乳术在中国开展起步较晚, 且以采用硅胶假体置入为主。硅凝胶充填的硅胶乳房假体历经40余年临床应用实践并不断演变完善，取得良好临床疗效的同时，也暴露了一些相关的问题。其主要的并发症有乳房假体破裂或渗漏，纤维包膜挛缩，假体移位及感染等。对待硅胶乳房假体置入材料，既要重视已明确的并发症，又要重视尚存争议的安全性问题。     

Susceptibility to Theiler's murine encephalomyelitis virus-induced demyelinating disease in BALB/cAnNCr mice is related to absence of a CD4+ T-cell subset

Two histocompatible substrains of BALB/c mice (BALB/cByJ, BALB/cAnNCr) are resistant and susceptible, respectively, to Theiler's murine encephalomyelitis virus-induced demyelinating disease (TMEV-1DD)--a model for viral etiology of human multiple sclerosis. BALB/cByJ mice become susceptible following low-dose irradiation given prior to infection. Resistance is restored by adoptive transfer of CD8+ (but not CD4+) splenic T cells from infected, unirradiated BALB/cByJ donors. In contrast resistance is conferred to BALB/cAnNCr mice by adoptive transfer of either CD4+ or CD8+ T cells from resistant BALB/cByJ donors. T cells from BALB/cAnNCr mice cannot confer protection. To integrate these two observations, we hypothesized that the BALB/cAnNCr mice possess precursors of the regulatory CD8+ T cells, but fail to activate them because they lack a critical CD4+ T-cell subpopulation. We tested this model using serial transfers. The transfer of CD4+ T cells from the BALB/cByJ to the BALB/cAnNCr mice permitted development of BALB/cAnNCr CD8+ T cells that in turn, provided resistance when transferred into susceptible recipients. The BALB/cByJ CD4+ T cells, which activated the CD8+ cells, were sensitive to low-dose irradiation, unlike CD4+ T cells involved in the later inflammatory demyelination. Thus, susceptibility of BALB/cAnNCr mice is due to a defective/absent CD4+ T-cell subset acting immediately after infection.     

Role of genetic background in P selectin-dependent immune surveillance of the central nervous system

Although the blood-brain barrier and blood cerebrospinal fluid barrier maintain the central nervous system (CNS) as an immunologically privileged site, T lymphocytes can migrate through unstimulated brain endothelium and epithelium to perform immune surveillance or initiate inflammation. Our prior results suggested that early CNS migration of a CD4 Th1 cell line was facilitated by P selectin (CD62P) in (PL/JxSJL/J)F1 mice. Here, quantitative analysis of migration 2 h following adoptive transfer of fluorescently labeled cells revealed a 53-72% decrease in activated splenocyte, CD4 Th1 and CD8 migration, but not CD4 Th2, in CD62P-deficient C57BL6/J mice. Immunohistochemistry revealed constitutive expression of CD62P within the meninges and choroid plexus epithelia in C57BL6/J and SJL/J, but not BALB/cJ, mice. Activated splenocyte migration was approximately three- to four-fold greater in SJL/J as compared to BALB/cJ mice. Anti-CD62P treatment normalized this difference. Based on these results, we hypothesize that genetically determined kinetics of immune surveillance may regulate the phenotype of subsequent CNS inflammation.     

未成熟树突状细胞表面CD1d分子在体外移植免疫中的作用☆

背景：树突状细胞具有双向免疫调节作用,成熟树突状细胞激活免疫应答,而未成熟树突状细胞则倾向诱导免疫耐受。 目的：探讨鼠CD1d分子在未成熟树突状细胞诱导移植免疫耐受中的作用,以及在此过程中细胞因子的参与机制。 方法：利用vIL-10转染的BALB/c小鼠未成熟树突状细胞在体外用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因、脂多糖刺激成熟,经抗CD1d(anti-CD1d)干预。观察培养后的细胞表型、细胞因子表达。为探明CD1d分子在异体T细胞存在下的免疫作用,进行不同实验条件的初次、再次混合淋巴细胞培养(1stMLC、2ndMLC),观察T细胞增殖、细胞因子表达。 结果与结论：Anti-CD1d的干预降低了未成熟树突状细胞增殖异体T细胞的能力,anti-CD1d干预的未成熟树突状细胞致敏异体T细胞后其免疫功能低下;anti-CD1d干预在异体T细胞存在时影响未成熟树突状细胞在功能上的成熟,主要表现在抑制白细胞介素12的分泌,加强白细胞介素10的分泌。     

Frequency of naturally-occurring regulatory T cells is reduced in patients with ST-segment elevation myocardial infarction

BACKGROUND: Naturally-occurring regulatory T cells (Treg) constitute a mature T-cell population characterized phenotypically by co-expression of CD4 and CD25(high) surface molecules. We investigated here the frequency of circulating Treg in patients presenting with STEMI in comparison with subjects without coronary artery disease (CAD). The effect of primary percutaneous coronary intervention (PCI) with implantation of a bare (BS) or paclitaxel-eluting stent (PES) on peripheral Treg distribution was also examined. METHODS: Peripheral blood mononuclear cells were isolated from 30 consecutive patients presenting with STEMI and from 30 age-matched control subjects with angiographically normal coronary arteries. Treg were detected by flow cytometry according to their characteristic CD4+ CD25(high) membrane phenotype, and their frequency was assessed before PCI and at 48 h and at 6 days after PCI. CD27 expression identifying a highly suppressive Treg subset was also analysed. RESULTS: The percentages of both (CD27+)Treg and (CD27-)Treg were significantly lower in patients with STEMI in comparison with controls. In addition, the (CD27+)Treg/(CD27-)Treg ratio was skewed toward the CD27- population. The frequency of both Treg subsets significantly increased 48 h after either BS or PES implantation, remaining elevated for up to at least 6 days after PCI. CONCLUSIONS: Our data suggest that the percentage of circulating Treg is significantly reduced in patients with STEMI, suggesting that this immunosuppressive T-cell subset is compartmentalized within the acutely ischemic myocardium to limit the ongoing inflammation associated with this condition, and that coronary revascularization is associated with partial reconstitution of peripheral Treg pool.