miR-200a在儿童急性B淋巴细胞白血病中表达及意义

目的探讨miR-200a在儿童急性B淋巴细胞白血病中的表达及临床意义。方法收集B细胞ALL患儿45例,以非血液病患儿18例为对照组,采集骨髓标本,qRT-PCR检测各组miR-200a的表达,并分析B细胞ALL患儿中miR-200a的表达与临床指标间的相关性。结果 miR-200a在B淋巴细胞ALL患儿组中的表达为(3.9±1.4)×10-4,低于对照组(25.7±10.3)×10-4,差异有统计学意义(P0.05)。在≥10岁B淋巴细胞ALL患儿中miR-200a的表达低于10岁患儿,差异有统计学意义(P0.05)。不同治疗阶段和危险度分组miR-200a表达的差异有统计学意义(P0.05);以治疗第12周以及低危组的表达较高。结论 miR-200a低表达与儿童B细胞ALL的发生发展以及预后密切相关,可作为儿童B细胞ALL预后判断的潜在指标和治疗靶点。     

Wnt通路ZNRF3和RNF43在儿童急性B淋巴细胞白血病中的表达及意义

目的探究Wnt信号通路中ZNRF3和RNF43对儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)的意义。方法收集41例B-ALL患儿初诊(ND组)及化疗第33天的骨髓样本。初诊时依据危险度分为低危组(n=13)、中危组(n=17)和高危组(n=11)。41例患儿于化疗第33天骨髓均达到完全缓解(CR),定为CR组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ND组、CR组ZNRF3及RNF43 mRNA表达,采用蛋白印迹法(Western blot)检测其蛋白表达。结果 ND组ZNRF3、RNF43的mRNA及蛋白表达较CR组明显减低(P<0.05)。低危组ZNRF3、RNF43的mRNA及蛋白表达明显高于中、高危组(P<0.05)。结论初诊时ZNRF3和RNF43低表达可能与儿童ALL发生相关,其相对高表达可能与低危险度相关。     

儿童急性淋巴细胞白血病MRP1的表达及意义

目的分析多药耐药相关蛋白(MRP1)mRNA在急性淋巴细胞性白血病(ALL)患儿中的表达及其临床意义。方法入选67例初诊ALL患儿及10例正常对照儿童,采集骨髓。应用定量RT-PCR方法检测并比较骨髓中MRP1 mRNA表达水平。结果标危、中危、高危组MRP1 mRNA表达水平分别为4.28(2.75~6.12)、5.62(4.99~8.60)和7.56(3.66~11.13),三组间差异有统计学意义(P0.01);高危组和中危组的MRP1 mRNA均高于与标危组,差异有统计学意义(P0.05)。T-ALL组MRP1 mRNA表达水平为7.71(6.49~14.35),高于B-ALL组的表达水平[5.18(3.89~8.46)],差异有统计学意义(P0.01)。高表达组(n=34)第7天泼尼松预处理敏感率为70.59%,而低表达组(n=33)敏感率为90.91%,差异有统计学意义(P0.05)。高表达组第33天骨髓完全缓解率为64.71%,低表达组为87.88%,差异也有统计学意义(P0.05)。结论 ALL患儿MRP1表达与免疫分型、治疗反应以及疾病危险程度和复发紧密相关。     

微小残留病在儿童急性B 淋巴细胞白血病预后中的意义

目的探讨在微小残留病(MRD)指导治疗下,不同时间点MRD水平在儿童B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)预后中的意义。方法回顾分析417例初诊B-ALL患儿在治疗第15、33、90及180天MRD水平,并探究其与预后的关系。结果 417例患儿中,男240例、女177例,中位年龄5.0(3.0～10.0)岁,中位生存时间44.0(33.7～56.2)月,3年总生存(OS)及无事件生存(EFS)率为(90.9±1.4)% 和(85.2±1.7)%。417例患儿中,第15、33、90和180天4个时间点分别有336、415、414、414例接受了骨髓MRD检测。治疗第15天,MRD≥10%组的3年OS及EFS率均低于其他MRD水平组;治疗第33天,MRD≥1%组的3年OS及EFS率均低于其他MRD水平组;第90天或180天,MRD≥0.1%组的3年OS及EFS率均低于其他MRD水平组,差异均有统计学意义(P0.05)。白细胞(WBC)≥50×10~9/L组3年OS及EFS率均低于WBC50×10~9/L组,3个时间点MRD均阴性组的3年OS及EFS率均高于3个时间点MRD至少1次阳性组,高危组的3年OS及EFS率均低于标危和中危组,差异均有统计学意义(P0.05)。COX分析显示,第33天MRD≥0.1%和第180天MRD≥0.01%均是影响OS和EFS的独立危险因素(P均0.05)。结论 B-ALL患儿治疗第33和180天的MRD水平是提示预后的敏感指标。连续监测MRD在儿童B-ALL的治疗中至关重要。     

诱导缓解第33天MRD与IKZFl基因型对于儿童急性B淋巴细胞白血病生存率的影响

目的 研究诱导缓解第33天微小残留病（MRD）与IKZF1基因型对于儿童急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）生存率的影响。方法 以第一疗程化疗获得完全缓解且有完整随访信息的152例初诊B-ALL患为研究对象。采用流式细胞术检测化疗第33天MRD,并分为3组：残留白血病细胞<10^-4者为MRD标危组（60例）,10^-4 ≤ MRD < 10^-2为MRD中危组（55例）,MRD ≥ 10^-2为MRD高危组（37例）。应用巢式RT-PCR检测化疗前所有患儿的IKZF1基因型。分析诱导缓解第33天MRD及IKZF1基因型对B-ALL患儿无复发生存率的影响。结果 152例初诊B-ALL患儿有7种常见IKZF1基因亚型：IK1、IK2/3、IK4、IK6、IK8、IK9和IK10,其中130例表达IKZF1基因功能亚型、22例为IKZFl基因功能缺失亚型。随访期间26例（17%）患儿复发,以高危患儿复发率最高（P < 0.05）,而标危、中危组复发率的差异无统计学意义（P > 0.05）。IKZFl基因功能缺失亚型阳性患儿的累计复发率高于IKZFl基因功能亚型阳性的患儿（P < 0.01）。MRD标危、中危、高危患儿的预计5年无复发生存率分别为（94.2±2.9）%、（86.7±3.8）%和（56.2±4.5）%,三组间的差异均有统计学意义（P < 0.05）。IKZFl基因功能亚型阳性患儿的5年无复发生存率高于功能缺失亚型阳性患儿（P < 0.01）。MRD标危组IKZFl基因功能亚型阳性患儿的预计5年无复发生存率与功能缺失亚型阳性患儿的差异无统计学意义（P > 0.05）,中危组和高危组中IKZFl基因功能亚型阳性患儿的预计5年无复发生存率均高于功能缺失亚型阳性患儿（P < 0.05）。结论 IKZFl基因功能缺失亚型阳性的B-ALL患儿复发率高,尤其是化疗第33天MRD ≥ 10^-4的IKZF1基因功能缺失亚型阳性B-ALL患儿。     

miR-98在哮喘患儿外周血单个核细胞中的表达及意义

目的 探讨支气管哮喘患儿外周血单个核细胞(PBMCs)中miR-98的表达及其临床意义.方法 收集43例发作期和缓解期哮喘患儿,30例健康儿童(对照组)的外周血标本,分离PBMCs,采用实时定量PCR法检测PBMCs中miR-98及IL-13、IL-4 mRNA的相对表达量.结果 miR-98在哮喘发作期患儿PBMCs中的表达低于缓解期和对照组儿童,而IL-13、IL-4在哮喘发作期患儿PBMCs中的mRNA水平均高于缓解期和对照组,差异有统计学意义(P均<0.01);缓解期患儿和对照组间miR-98、IL-4 mRNA和IL-13 mRNA水平差异无统计学意义(P均>0.05).哮喘患儿发作期,miR-98水平与IL-4、IL-13 mRNA相对表达量均呈负相关(r=-0.794、-0.804,P均<0.001),IL-4和IL-13 mRNA相对表达量呈正相关(r=0.853,P<0.001).结论 miR-98在哮喘发作期患儿PBMCs中表达降低,可能与小儿哮喘的发作相关.     

Wnt通路中Wif-1和β-catenin在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达

目的研究Wnt通路中Wnt通路抑制因子1(Wif-1)和β连环蛋白(β-catenin)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的表达及可能的作用。方法收集初发并且诱导缓解治疗第33天完全缓解的35例ALL患儿的临床资料,以治疗前作为初发组,第33天达完全缓解时作为缓解组,对照组为15例非恶性血液病患儿。RT-PCR方法检测Wif-1和β-cateninm RNA的表达,ELISA法测Wif-1蛋白的表达。结果初发组Wif-1m RNA及蛋白的表达明显低于对照组和缓解组,β-cateninm RNA的表达高于对照组和缓解组(P0.05)。在初发组和缓解组,高危患儿的β-cateninm RNA表达均高于中危和低危患儿,Wif-1m RNA、蛋白表达低于中危和低危患儿(P0.05)。在初发组和缓解组,T-ALL患儿β-cateninm RNA的表达高于B-ALL患儿,Wif-1m RNA、蛋白表达低于B-ALL患儿(P0.05)。各组Wif-1和β-cateninm RNA表达呈负相关(P0.05)。结论 Wif-1表达下降、β-catenin表达增高是儿童急淋发病机制之一,Wif-1下降和/或β-catenin增高的程度可能与预后相关。     

原血细胞对于儿童急性B淋巴细胞白血病预后判断的价值

目的 探讨儿童急性B 淋巴细胞白血病(B-ALL)巩固化疗期骨髓原血细胞(HGs)对于儿童急性B 淋巴细胞白血病(B-ALL)预后判断的意义.方法 回顾性分析196 例初发B-ALL 患儿,根据危险分型分为高危(n=55)、中危(n=69)和低危(n=72)3 组;根据临床结局分为完全缓解(n=165)和复发组(n=31).采用欧洲BIOMED-1 标准化流式细胞术微小残留病(MRD)检测方案,检测巩固化疗期HGs 数量.Kaplan-Meier 生存曲线统计患儿无事件生存率(EFS).结果 高危组患儿HGs 明显低于中危和低危组,差异均有统计学意义(PP1.0% 组,差异有统计学意义(P结论 HGs 可反映B-ALL 化疗效果,可用于B-ALL患儿疗效及预后的监测.     

细胞周期蛋白A、生存素在儿童急性白血病中的表达及相关性

目的 探讨细胞周期蛋白A、生存素在儿童AL中的表达及相关性.方法 确诊为初治AL患儿47例.将其分为ALL患儿组(标危组,高危组)和急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)患儿组;对照组为33例非血液系统恶性疾病儿童;采用密度梯度离心法分离其新鲜骨髓标本单个核细胞,提取细胞总蛋白, 采用蛋白免疫印迹方法 检测其细胞周期蛋白A和生存素的蛋白表达.胶片出现特异性条带为阳性.结果 AL患儿47例细胞周期蛋白A和生存素蛋白阳性表达率均显著高于对照组(P<0.01);ALL高危组细胞周期蛋白A和生存素蛋白阳性率均高于ALL标危组(P<0.05);WBC≥50×109 L-1患儿组细胞周期蛋白A和生存素蛋白阳性率均高于WBC<50×109 L-1患儿组 (P<0.05);周期蛋白A和生存素蛋白的阳性表达率与AL患儿的年龄、性别均无相关性(Pa>0.05);细胞周期蛋白A与生存素在儿童AL中的表达呈正相关(r=0.491 P=0.001);细胞周期蛋白A和生存素蛋白阳性表达率与临床疗效有关.结论 细胞周期蛋白A和生存素与AL儿童发病有关,在儿童AL发生发展过程中可能有协同作用.     

流式细胞术检测微小残留病对儿童急性B淋巴细胞白血病预后判断的临床价值

目的 探讨4色荧光标记B淋巴细胞抗体组合模板用于流式细胞术检测微小残留病(MRD)对儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)预后判断的临床价值.方法 回顾性分析2010年10月至2012年3月间采用流式细胞技术检测MRD的初发B-ALL患儿的相关临床资料.根据MRD检测的时间及检测的结果,将183例患儿分为诱导缓解期MRD阴性组(n=37),诱导缓解期MRD阳性组(n=18),维持治疗期MRD阴性组(n=113)和维持治疗期MRD阳性组(n=15).结果 诱导缓解期和维持治疗期MRD阳性患儿,其初诊危险分级为中、高危的患者比例较阴性者高(PRR=1.005,95%CI:0.864~1.170,P=0.032)、第15天骨髓象未达M1(RR=6.454,95%CI:2.191~19.01,P=0.002)和缓解后MRD≥0.01%(RR=1.923,95%CI:0.750~4.933,P=0.043)是儿童B-ALL发生复发的高危因素.结论 4色荧光标记B淋巴细胞抗体组合模板用于流式细胞术能区分化疗后MRD阳性和阴性的B-ALL患儿.MRD水平与强的松反应性、第15天骨髓象等指标一样,是儿童B-ALL重要的预后判断因素,对儿童B-ALL具有较好的临床预后判断意义.     

白细胞介素-8及其受体在小儿急性白血病骨髓单个核细胞中的表达和临床意义

目的：探讨白细胞介素8(IL8)及受体(IL8R)在小儿急性白血病骨髓单个核细胞中的表达和临床意义。方法：RTPCR法检测32例急性白血病骨髓单个核细胞IL8,IL8RmRNA表达。结果：急性髓系白血病(AML)组中有5例表达IL8(5/10),4例表达IL8R(4/10);急性淋巴细胞白血病(ALL)组中有13例表达IL8(13/22),9例表达IL8R(9/22)。IL8在急性髓系白血病组中的表达水平高于急性淋巴细胞白血病组,差异有显著性(P<0.05)。AML组中M4M5亚型中的表达水平高于M2M3,差异有显著性(P<0.05)。ALL组中B系列ALL表达水平高于TALL,差异有显著性(P<0.05)。化疗后患儿骨髓单个核细胞IL8,IL8R水平显著低于化疗前(P<0.05)。结论：小儿急性白血病有IL8,IL8R的表达,IL8尤其在AML组M4M5亚型及B系列ALL更明显,化疗后两者水平显著下降。     

儿童急性淋巴细胞白血病抗原错译表达的临床意义

目的 研究儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)抗原错译表达的临床意义。方法 对54例ALL患儿的骨髓标本分别进行细胞形态学及细胞化学染色，确定其FAB类型，运用一组相关的单克隆抗体，采用流式细胞仪及直接免疫荧光标记技术进行免疫分型，采用吉姆萨G显带技术进行核型分析。结果 儿童ALL54例髓系抗原阳性表达率为29.63％，其中CD13为25．93％，CD33为20．37％，CD14为11．11％。T—ALL和B—ALL髓系抗原阳性表达差异无统计学意义(30．77％vs529．27％ P＝0.918)。CD34表达阳性ALL髓系抗原阳性表达率明显高于CD34表达阴性ALL髓系抗原阳性表达率(40.63％vs13.64％P＝0．039)；ALL髓系抗原阳性表达与髓系抗原阴性表达的完全缓解(CR)率差异无统计学意义(81．25％vs94．74％ P＝0．148)；但生存率曲线比较分析，ALL髓系抗原阳性表达的生存时间短(P＝0.031)。结论 儿童ALL的抗原错译表达率为29．63％；CD34阳性的ALL抗原错译表达率明显高于CD34表达阴性的ALL抗原错译表达率；ALL髓系抗原阳性表达的生存时间短；ALL髓系相关抗原阳性表达可能是影响ALL患儿预后的不利因素。     

术前营养状态对胆道闭锁术后胆管炎的影响研究

目的 探讨胆道闭锁患儿术前营养状态对术后胆管炎发生的影响.方法 对2014年1月至2014年12月底收入我院的66例经手术探查确诊为Ⅲ型胆道闭锁的患儿采用STRONGKid方法进行营养不良风险评估并分组:低度营养不良风险组,中度营养不良风险组及重度营养不良风险组.通过门诊及电话进行随访,随访内容为首次发生胆管炎的时间,早期胆管炎发生情况及术后3个月内发生胆管炎的次数,术后6个月内黄疸消退情况.结果 低度营养不良风险患儿0例,中度营养不良风险患儿30例(45.5％),重度营养不良患儿36例(54.5％).中度营养不良组首次发生胆管炎的时间(44.31±18.75)d明显晚于重度营养不良组(26.75±7.96)d,P=0.002;中度营养不良组早期胆管炎的发生率13.3％明显低于重度营养不良组66.7％,P=0.04;重度营养不良组患儿术后3个月内胆管炎的平均发生次数(2.11次/人)明显高于中度营养不良组(1次/人),中度营养不良组术后6个月黄疸清除率60.0％高于重度营养不良组16.7％,P=0.014.结论 胆道闭锁患儿术前合并重度营养不良易于发生早期胆管炎且反复发生,中度营养不良组的患儿首次发生胆管炎的时间明显晚于重度营养不良组,重度营养不良组术后黄疸清除率明显低于中度营养不良组.     

CD58在儿童急性B淋巴细胞白血病中的表达及其用于微小残留病检测的可行性研究

目的 检测淋巴细胞功能相关抗原-3(CD58)在儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)中的表达情况,并探讨其用于儿童B-ALL微小残留病(MRD)检测的可行性。方法 选取2014年1~9月确诊为B-ALL的87例患儿为研究对象,同期选取20例非肿瘤、非血液病且骨髓涂片细胞形态正常的住院患儿作为对照组。应用四色流式细胞术(FCM)检测对照组及B-ALL患儿初诊时、诱导化疗15 d时骨髓标本的CD58表达水平。在诱导化疗33 d时,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和FCM对B-ALL患儿进行MRD检测。结果 87例B-ALL患儿骨髓CD58平均荧光强度(MFI)(91±33)高于对照组(14±6)(P< 0.01);其中44例B-ALL患儿CD58强表达。在诱导化疗过程中,诱导化疗15 d时B-ALL患儿骨髓CD58的表达量(105±22)与初诊时(107±26)比较差异无统计学意义(P> 0.05)。对44例CD58强表达B-ALL患儿进行MRD检测,FCM检测MRD阳性患儿9例,阴性患儿35例;RT-PCR检测MRD阳性患儿11例,阴性患儿33例,42例(95%)检测结果一致,两种检测方法检测MRD差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 CD58在B-ALL患儿中高表达且表达稳定,可以作为B-ALL患儿MRD检测的指标。     

PAX5缺失对于儿童无特殊重现染色体异常B系急性淋巴细胞白血病的预后意义

目的 初步了解PAX5 缺失在无特殊重现染色体异常的B 系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿中的发生情况,并进一步分析PAX5 基因缺失与ALL 预后的相关性.方法 用多重连接探针扩增(MLPA) 技术检测2008 年4 月至2013 年4 月初诊无特殊重现染色体异常的B-ALL 患儿及对照组(同期非血液系统疾病及肿瘤儿童)的PAX5 基因拷贝数情况.根据有无PAX5 基因缺失分为缺失组和非缺失组.结果 86 例患儿中18例(21%)发生了PAX5 缺失.缺失组初诊时白细胞总数明显高于非缺失组(P=0.001).Kaplan-Meier 法分析显示:缺失组无病生存(DFS)率明显低于非缺失组(0.69±0.12 vs 0.90±0.04,P=0.017),但两组患儿的总生存(OS)率差异无统计学意义(P=0.128).Cox 法分析显示,PAX5 缺失为影响DFS 的不利因素(P=0.03).结论 PAX5 缺失为无特殊重现染色体异常B-ALL 患儿DFS 的独立危险因素.     

CD20阳性不提示高白细胞计数急性B淋巴细胞白血病患儿预后不良

目的 探讨初诊骨髓白血病细胞CD20表达联合白细胞计数在儿童B系急性淋巴细胞白血病（B-ALL）预后评估中的价值。方法 回顾性分析2008年4月至2015年4月接受CCLG-ALL2008方案治疗的821例初诊B-ALL患儿的临床资料，并随访观察其生存情况。结果 821例患儿中，CD20阴性患儿547例（66.6%），CD20阳性患儿274例（33.4%）。694例白细胞 < 50×10⁹/L（低白细胞计数）的患儿中，CD20阳性、CD20阴性患儿5年无事件生存（EFS）率分别为65.9%±3.2%、77.3%±2.0%（P=0.001），5年总生存（OS）率分别为78.3%±2.9%、87.5%±1.6%（P=0.005）；多因素分析示CD阳性是EFS率、OS率的独立危险因素（分别HR=1.634，P=0.001；HR=1.761，P=0.005）。127例白细胞≥50×10⁹/L（高白细胞计数）的患儿中，CD20阳性、CD20阴性患儿5年EFS率分别为64.3%±7.7%、53.7%±5.5%（P=0.135），5年OS率分别为81.4%±6.4%、58.6%±5.6%（P=0.022）；多因素分析示CD20阳性是OS率的独立保护因素（HR=0.367，P=0.016）。结论 接受CCLG-ALL2008方案治疗的B-ALL患儿中，初诊低白细胞计数、CD20阳性表达者长期预后较差，而初诊高白细胞计数、CD20阳性表达者有较好的生存趋势。     

血清miR-922及miR-506对儿童急性淋巴细胞白血病诊断及预后判断的价值

目的 探讨血清miR-922及miR-506表达水平对儿童急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）诊断及预后判断的价值。 方法 前瞻性选取132例ALL患儿（ALL组）和80例健康儿童（健康对照组）纳入本研究,采用实时荧光定量PCR技术检测ALL组和健康对照组血清miR-922及miR-506表达水平。绘制受试者工作特征曲线分析miR-922及miR-506对儿童ALL的诊断价值。应用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用多因素COX回归模型分析影响ALL患儿预后不良的因素。 结果 ALL组血清miR-922及miR-506表达水平均明显高于健康对照组（P<0.001）。受试者工作特征曲线分析结果显示,miR-922及miR-506诊断儿童ALL的最佳截断值分别为1.46、2.17。miR-922高表达组（≥1.46）及miR-506高表达组（≥2.17）的淋巴结肿大、白细胞计数≥50×10⁹/L、中高危险度分层、MLL基因重排、染色体核型异常的发生率均明显高于miR-922及miR-506低表达组（P<0.05）。Kaplan-Meier分析结果显示,miR-922及miR-506高表达与ALL患儿生存期短有关（P<0.05）。多因素COX回归分析结果显示,白细胞计数≥50×10⁹/L、危险度分层为中高危、MLL基因重排、miR-922≥1.46及miR-506≥2.17可提示ALL患儿预后不良（P<0.05）。 结论 miR-922及miR-506表达水平对儿童ALL诊断及预后判断均有较好的价值。     

Wnt通路中散乱蛋白在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及意义

目的 探讨Wnt信号通路中散乱蛋白（DVL）对儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）发病及预后的意义。方法 选取33例新发ALL患儿为病例组,根据危险度将ALL患儿分为低危组（n=14）、中危组（n=5）和高危组（n=14）;29例免疫性血小板减少症（ITP）患儿为对照组。采集病例组患儿初发及诱导治疗第33天时,以及对照组骨髓血各2 mL,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测骨髓血细胞DVL1、DVL2、DVL3 mRNA表达。结果 病例组初发期DVL1、DVL2、DVL3 mRNA表达水平高于缓解期及对照组（P < 0.05）,与对照组比较,病例组缓解期DVL2 mRNA水平升高（P < 0.05）。DVL2 mRNA表达水平在病例组初发期及缓解期均高于DVL 1、DVL 3 mRNA （P < 0.05）。高、中危组DVL1、DVL2 mRNA表达水平高于低危组（P < 0.05）。DVL2 mRNA表达水平在低、中、高危组均高于DVL1、DVL3 mRNA （P < 0.05）。结论 Wnt通路中DVL,尤其是DVL2的表达变化可能对儿童ALL的发病及预后有一定意义。