胆道闭锁患儿肝组织细胞因子及相关基因表达的研究

目的 研究胆道闭锁(BA)患儿肝脏组织中上皮-间充质转化过程中特异性细胞因子的表达及胚胎期发育相关基因的表达激活.旨在探讨BA肝脏纤维化等系列改变的分子机制.方法 取经手术证实为BA患儿的8例肝活检组织(年龄2～3个月),以无消化道疾病尸检婴儿8例肝脏组织做正常对照(年龄0～2个月),RT-PCR半定量法检测胆管上皮细胞特异性因子CK19,纤维化早期指标Ⅰ型胶原蛋白COL1A1,发育相关基因Notch基因受体HES1,TGF-β及其阳性信号分子Smad3的表达水平变化.结果 BA患儿肝脏组织中CK-19,COL1A1、HES1、TGF-β及Smad3等基因表达水平均明显提高,实验组及对照组差异显著.结论 BA患儿肝脏组织胶原组织增生,同时有胆管上皮细胞增生,胚胎期肝脏组织发育相关基因Notch信号通路系统重新激活,TGF-β及其阳性信号分子Smad3在这一过程中发挥作用.     

肾小管间质纤维化大鼠肾脏转化生长因子-β1和纤溶酶原激活物抑制剂-1的定量分析

目的 观察肾小管间质纤维化(TIF)大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)mRNA及其蛋白的定量表达,探讨TGF-β1、PAI-1在TIF中的作用及二者之间的相互影响机制.方法 SD大鼠60只,随机分为假手术(SOR)组和单侧输尿管梗阻手术(UUO)组.输尿管结扎后剪断制备UUO模型.分别于手术后第7、14、21天,每组各处死10只大鼠,留取手术侧.肾脏标本,采用病理、实时定量PCR、Western blotting等方法动态观察二组大鼠第7、14、21天梗阻侧肾脏组织学变化和TGF-β、PAI-1在梗阻侧肾脏中的表达情况.采用SPSS 10.0软件进行统计学分析.结果 1.HE、Masson染色结果:SOR组术后第7、14、21天.肾脏未见纤维化改变.UUO组术后第7天肾小管上皮细胞宅泡变性,肾间质炎性反应细胞浸润,术后第14天肾脏纤维化程度加重,术后第21天呈重度纤维化.2.术后第7天开始UUO组TGF-β1 mRNA和蛋白表达量显著高于SOR组(P<0.05,0.01);术后第14天开始UUO组PAI-1 mRNA和蛋白表达量显著高于SOR组(P<0.05,0.01).3.相关性分析:肾小管间质损害与TGF-β1、PAI-1蛋白表达量均呈显著正相关(r=0.975 P<0.01;r=0.801 P<0.05);肾脏TGF-β1表达量与PAI-1呈显著正相关(r=0.937 P<0.01).结论 TGF-β1、PAI-1足肾间质纤维化形成促进因素之一.TGF-β1诱导PAI-1过度表达,PAI-1是TGF-β1的下游靶基因之一,PAI-1也可影响TGF-β1的表达,二者共同促进肾脏纤维化形成.     

JNK2、TIMP-1及Collagen Ⅲ在胆道闭锁肝纤维化中的作用研究

目的研究c-Jun氨基末端激酶2(c-Jun N-terminal kinase,JNK2)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP-1)及CollagenⅢ在胆道闭锁(BA)肝组织中的表达情况及在肝纤维化进程中的作用。方法选取胆管扩张症肝活检病例10例,为胆扩组;BA肝活检病例15例,为BA组;BA晚期因肝功能衰竭而行肝移植患者自体肝活检10例,为肝移植组。采用HE染色观察并评价肝标本纤维化程度;免疫组化染色检测JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ在肝组织中的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肝组织中JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ基因表达情况。结果①HE染色:胆扩组偶可见少许纤维细胞增生;BA组汇管区增宽,纤维组织增生、桥接纤维化现象普遍,可见假小叶形成;肝移植组汇管区明显增宽,纤维组织增生较重,广泛桥接纤维组织形成,假小叶显著。②免疫组化:胆扩组JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ表达为弱阳性,BA组及肝移植组JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ蛋白均在肝细胞、汇管区胆管上皮细胞及血管内皮细胞胞质中阳性表达。(3)半定量分析:三组JNK2(0.122±0.008、0.182±0.017和0.198±0.033),TIMP-1(0.123±0.009、0.185±0.012和0.201±0.017)和CollagenⅢ(0.126±0.012、0.194±0.008和0.208±0.033)表达比较,差异有显著统计学意义(P0.001);三组中,BA组及肝移植组JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ表达明显高于胆扩组(P0.05);肝移植组JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ蛋白含量与BA组比较,差异无统计学意义(P值均0.05)。(4)qRT-PCR:三组JNK2、TIMP-1和CollagenⅢmRNA表达水平比较,差异有统计学意义(0.221(0.17)vs 1.395(1.22)vs 1.095(1.21),H=17.686,P=0.003;0.439(0.31)vs 1.404(0.85)vs 1.571(0.66),H=20.648,P=0.000;0.917(0.09)vs 1.802(1.35)vs 1.957(1.30),H=15.555,P=0.007),BA组及肝移植组肝内JNK2、TIMP-1及CollagenⅢmRNA表达含量比胆扩组高(P值均小于0.017)。结论JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ在BA患儿随着肝纤维化加重而表达升高,表明其可能参与并促进BA肝纤维化进程。     

转化生长因子-β1/Smad3信号通路在肾间质纤维化大鼠肾脏组织中的表达和作用

目的 通过检测单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和Smad3的表达,探讨TGF-β1/Smad3信号通路在肾间质纤维化(RIF)中的作用.方法 雄性6周龄Wistar大鼠48只随机分为假手术组和UUO组,每组24只.UUO组大鼠麻醉后,背侧切口行左侧输尿管结扎术,假手术组大鼠在同样条件下仅探及肾包膜.分别于造模第7、14、21、28天每组各处死6只大鼠,取其左侧肾脏.HE染色和Masson染色行肾脏病理学检查,并计算RIF指数,应用Western blot法和实时荧光定量-PCR检测肾脏组织Smad3蛋白及其mRNA表达;免疫组织化学法检测肾脏组织TGF-β1、Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)和纤维连接蛋白(FN)的蛋白表达.结果 1.与假手术组大鼠比较,UUO组大鼠各时间点:(1)病理学检查显示,肾小管上皮细胞萎缩,胶原纤维化形成,弥散性单核细胞、淋巴细胞浸润,RIF指数显著增高(P<0.01),梗阻时间越长,RIF指数越高;(2)肾脏组织Smad3蛋白及其mRNA表达均增高(Pa<0.05),梗阻时间越长,表达水平越高;(3)肾脏组织TGF-β1、Col-Ⅳ和FN的蛋白表达均增高(Pa<0.05),梗阻时间越长,表达水平越高.2.相关性分析:(1)UUO组大鼠肾脏组织Smad3、TGF-β1蛋白表达与RIF指数均呈显著正相关(r=0.520、0.727,Pa< 0.01);(2)Col-Ⅳ和FN的蛋白表达与RIF指数均呈显著正相关(r= 0.794、0.786,Pa<0.01);(3) Smad3的蛋白表达与TGF-β1、Col-Ⅳ和FN的蛋白表达均呈显著正相关(r= 0.592、0.672、0.508,Pa<0.01).结论 UUO所致RIF大鼠肾脏组织TGF-β1及Smad3表达均显著升高,梗阻时间越长,表达水平越高,RIF程度越重.TGF-β1/Smad3信号通路可能参与了RIF的发生发展.     

microRNA-145对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞上皮间充质转化的影响

目的研究micro RNA-145(miR-145)对转化生长因子(TGF)-β1诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)上皮间充质转化(EMT)的影响。方法人工合成miR-145基因序列,构建真核重组质粒p CMVmiR-145。以未处理HK-2细胞为对照组;以TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1组;以p CMV-myc空白质粒转染后经TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1空白质粒组;以p CMV-miR-145质粒转染后经TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1+miR-145组。采用实时荧光定量PCR检测miR-145表达。采用Western blot检测TGF-β/Smad信号传导蛋白TGF-β1、Smad3、Smad2/3、p-Smad2/3,以及EMT生物标记物蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)和I型胶原蛋白(ColⅠ)的表达水平。采用ELISA法检测培养细胞上清液中FN和Col I的含量。结果miR-145表达质粒构建成功,重组质粒有效转染TGF-β1诱导HK-2细胞。与对照组比较,TGF-β1+miR-145组细胞中miR-145表达上调(P0.01);与对照组和TGF-β1+miR-145组比较,TGF-β1组和TGF-β1空白质粒组细胞中miR-145表达均下降(P0.01)。与TGF-β1组和TGF-β1空白质粒组比较,TGF-β1+miR-145组细胞内TGF-β1、Smad3、Smad2/3和p-Smad2/3蛋白表达量减少(P0.05);α-SMA、FN、ColⅠ蛋白表达亦明显减少(P0.05);TGF-β1+miR-145组培养液上清中FN、ColⅠ含量减少(P0.05)。结论 miR-145参与TGF-β1处理HK-2细胞EMT的调控。miR-145可能通过抑制TGF-β依赖的Smad信号通路活性,从而抑制肾小管EMT。     

福辛普利对肾小球系膜细胞 TGF-β1/Smad 信号通路的干预作用

目的观察新型血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)--福辛普利(fosinopril,FOS)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)Ⅰ型胶原(ColⅠ)蛋白分泌和Smad2、Smad7mRNA表达量的影响。方法建立体外培养的大鼠GMC,鉴定后3～10代用于实验。实验分为正常对照组、TGF-β1刺激组(加5ng/L TGF-β1和5%的胎牛血清)和FOS组(加5ng/L TGF-β1、10μmol/L FOS和5%的胎牛血清)3组,分别于6、24和48h后ELISA法测定细胞培养上清液中ColⅠ蛋白表达量,荧光定量PCR法检测Smad2、Smad7 mRNA表达量的变化。结果①正常培养的大鼠GMC均有一定量的ColⅠ蛋白表达;TGF-β1刺激组在各时间点ColⅠ蛋白分泌均高于对照组(P<0.01),FOS各组ColⅠ蛋白分泌均低于TGF-β1刺激组(P<0.05)。②正常培养的大鼠GMC可表达一定量Smad2、Smad7 mRNA,TGF-β1刺激组在各时间点Smad2、Smad7 mRNA表达量均高于对照组,FOS治疗组Smad2 mRNA表达量均低于TGF-β1刺激组;Smad7 ...     

胆道闭锁基质金属蛋白酶-1和转化生长因子β1与肝纤维化关系的研究

目的研究胆道闭锁肝组织MMP-1、TIMP-11和TGF-β_1的表达与肝纤维化的关系,探讨胆道闭锁肝纤维化机制。方法利用免疫组化法(S-P法)检测33例胆道闭锁肝组织中MMP-1、TIMP-1、TGF-β_1蛋白的表达,通过图像分析技术进行定量研究。结果胆道闭锁肝组织中MMP-1、TIMP-1、TGF-β_1蛋白均有不同程度表达,以肝细胞胞浆、胞膜表达最为明显。TGF-β_1、TIMP-1蛋白在肝组织中的阳性表达随肝纤维化程度的加重而增强,有正的相关性;MMP-1蛋白在肝组织中的表达,随肝纤维化程度的加重无明显变化,无相关性;TGF-β_1蛋白表达与TIMP-1间有相关性,与MMP-1间无相关性。TGF-β_1、TIMP-1在胆道闭锁肝组织的表达强度明显高于对照组(P<0.01),MMP-1在两组间的表达差异无显著性意义(P>0.05)。结论MMP-1、TIMP-1、TGF-β_1与胆道闭锁肝纤维化的发生、发展有密切联系,TGF-β_1与TIMP-1有协同表达和调控作用,通过抑制肝组织TIMP-1、TGF-β_1蛋白表达,或促进MMP-1的表达,可成为抑制胆道闭锁肝纤维化的有效方法。     

胆道闭锁Kasai术后肝移植患儿不同自体肝生存的临床与病理分析

目的分析和比较胆道闭锁(Biliary Atresia,BA)Kasai术后肝移植患儿不同自体肝生存情况,结合手术时病理及肝功能指标,初步探讨自体肝生存时间较长患儿的肝脏病理特点。方法将43例Kasai术后行肝移植的BA患儿按Kasai术与肝移植术间隔时间分为3组:G1组(n=17),间隔时间6个月;G2组(n=18),间隔时间6个月至2年;G3组(n=8),间隔时间2年。分析各组患儿临床资料包括Kasai手术时年龄、术后胆管炎发生情况、肝移植术前肝功能生化指标,同时对实施Kasai手术时及肝移植手术时的肝组织进行HE、Masson及免疫组化(CK19)染色,观察肝脏纤维化程度、胆管增生程度、淤胆情况以及炎性细胞浸润情况。结果 (1)三组Kasai手术时平均日龄分别为66.65 d、58.39 d、49.63 d,差异有统计学意义(F=3.757,P=0.032);三组患儿术后出现胆管炎的比例分别为12/17(70.6%)、14/18(77.8%)、4/8(50.0%),经统计学分析差异无意义(χ~2=2.035,P0.05);三组出现频发胆管炎的例数分别为7/10(41.2%)、12/18(66.7%)、1/8(12.5%),经统计学分析差异有意义(χ~2=6.679,P=0.032);肝移植手术前三组患儿肝功能指标显示G3组AST、ALT、TBI、DBI、GGT、TBA均低于前两组,但差异无统计学意义(P0.05)。(2)Kasai手术时肝纤维化分级为3(2～3),胆管增生分级为2(1～2.5),胆栓分级为1(1～2.5),汇管区炎细胞浸润程度分级为3(1.5～3);移植时肝脏病理显示三组肝纤维化程度分级分别为4(4～4)、4(4～4)、4(2～4),经统计学分析差异有意义(χ~2=5.978,P=0.047);胆管增生程度分级分别为3(3～3)、2(1～3)、0(0～2),经统计学分析差异有意义(χ~2=19.577,P0.001);胆栓分级分别为3(2.5～3)、1(1～3)、1(1～3),经统计学分析差异有意义(χ~2=13.998,P0.001);炎细胞浸润程度分级分别为2(1～2)、1.5(1～2)、1(1～1),差异具有统计学意义(χ~2=6.221,P=0.044)。(3)Kasai手术日龄越早,术后胆管炎发作次数越少的BA患儿,其肝纤维化进展速度缓慢,胆管增生、淤胆及炎细胞浸润程度轻,自体肝生存时间较长。结论 (1)BA患儿行Kasai手术的日龄及术后胆管炎发作的频次,是影响术后肝脏病理及自体肝生存时间的重要因素。(2)对于自体肝生存时间长的BA患儿,Kasai手术解除了胆道梗阻,降低了炎细胞浸润程度,有助于延缓肝纤维化进程。     

胆道闭锁肝脏组织MMP-2、TGF-β1的表达及意义

目的 研究胆道闭锁患儿肝脏组织中MMP-2、TGF-β1的表达,探讨其与胆道闭锁患儿肝纤维化的关系.方法 利用免疫组化法(SP法)检测33例胆道闭锁患儿肝脏组织中MMP-2、TGF-β1蛋白的表达,通过图像分析技术进行定量研究.结果 胆道闭锁患儿肝组织中MMP-2、TGF-β1蛋白均有不同程度的表达,以肝细胞胞浆、胞膜表达最为明显.MMP-2、TGF-β1蛋白在肝组织中的阳性表达随肝纤维化程度的加重而增强,呈正相关(前者r=0.5063,P＜0.05;后者r=0.6179,P＜0.05).MMP-2、TGF-β1在胆道闭锁患儿肝组织中的表达强度明显高于对照组(P＜0.01),MMP-2与TGF-β1的表达有高度相关性(r=0.9200,P＜0.01).结论 MMP-2、TGF-β1与胆道闭锁肝纤维化的发生、发展密切相关;抑制MMP-2、TGF-β1的表达有望阻止胆道闭锁患儿肝纤维化进程.     

布地奈德对哮喘小鼠TGF-β/Smad 信号通路表达的影响

目的 探讨哮喘小鼠TGF-β/Smad信号通路表达及布地奈德(BUD)对其的影响.方法 昆明小鼠随机分为哮喘模型组(A 组)、治疗对照组(B组)、BUD治疗组(C组)和正常对照组(D组).A组以卵蛋白(OVA)致敏和激发复制哮喘模型.B、C 2组致敏和激发方法同哮喘模型组,激发前1 h分别吸人生理盐水(NS)和BUD.HE、PAS、VG染色观察气道嗜酸性细胞(EOS)浸润、黏液分泌、胶原增生情况.免疫组化和图像分析检测小鼠肺组织TGF-β、TGF-β受体Ⅰ、TGF-β受体Ⅱ,Smad 2/3、Smad 4、Smad 7的表达.结果 哮喘小鼠气道EOS浸润明显增多,黏液分泌亢进,胶原增生.IOD值在A、B、C、D 4组表达TGF-β为108.38±15.47、123.17±26.07、117.75±19.75、7.88±2.07,A、B、C 3组均明显高于D组;TGF-β受体Ⅰ为231.09±37.80、276.87±50.65、124.40±26.75、14.99±4.48,结果与TGF-β表达相似,但A、C 2组之间差异有统计学意义;TGF-β受体Ⅱ为200.55±26.49、150.32±31.05、193.72±34.17、243.08±54.32,4组之间差异无统计学意义;Smad2/3为206.63±36.19、202.24±28.79、138.87±14.11、24.64±6.36,A、B、C 3组均明显高于D组;Smad 4为129.50±21.51、140.48±19.31、118.70±22.96、22.77±4.86,结果与Smad 2/3表达相似;Smad 7为19.21±4.65、17.04±6.48、123.95±15.26、157.22±21.35,A、B 2组均明显低于C、D 2组,C、D 2组之间差异无统计学意义.结论 吸入BUD不能阻断哮喘小鼠气道TGF-β、TGF-β受体Ⅱ、Smad 2/3、Smad 4的表达,但可通过下调TGF-β受体Ⅰ的表达和上调Smad 7的表达抑制TGF-β/Smad信号通路,进而抑制TGF-β所致的气道重塑作用.     

HIF-1α和VEGF在胆道闭锁患儿肝组织中的表达及意义

目的研究胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿肝组织中缺氧诱导因子(HIF-1α)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达及与血管生成和纤维化的关系,探讨其在BA发病中可能的作用机制。方法选取胆道闭锁患儿(BA组)肝组织15例、胆管扩张症患儿(CBD组)肝组织10例、BA发展为肝硬化接受肝移植患儿(LT组)肝组织10例。HE、Vimentin染色观察各标本的组织学改变并判定纤维化程度,CD34染色标记血管计数微血管密度(MVD),免疫组化法检测HIF-1α和VEGF在各组肝组织中的表达。结果 CBD组、BA组、LT组微血管密度分别为16.8±1.9、23.2±3.8、25.9±2.1。HIF-1α在肝细胞胞浆和部分胞核中表达,BA组HIF1-α的光密度(0.160 7±0.029 7)高于CBD组(0.150 4±0.146 3)和LT组(0.151 3±0.005 9),P0.05。VEGF在肝细胞、胆管、动脉壁的表达,BA组VEGF的光密度(0.162 9±0.012 9)高于CBD组(0.132 2±0.025 7)和LT组(0.146 2±0.015 2),P0.05。结论 HIF-1α、VEGF可能通过参与BA中的血管生成过程,促进肝纤维化。     

Is the Kasai operation still indicated in children older than 3 months diagnosed with biliary atresia?

OBJECTIVES: The prognosis of hepatoportoenterostomy (the Kasai operation) for biliary atresia worsens when the age at surgery increases. This study examines whether the Kasai operation remains justified after 3 months of life. STUDY DESIGN: Records for all patients with biliary atresia living in France and born in the years 1986 to 1996 were reviewed, and patients were classified into 3 groups: group 1 (n = 30), no contraindication to the Kasai operation, but orientation to de novo transplantation; group 2 (n = 380), age at Kasai operation <90 days; and group 3 (n = 60), age at Kasai operation > or =90 days. Survival with native liver, survival after liver transplantation, and overall survival (Kaplan-Meier method) were compared by using the log-rank test. RESULTS: Five-year (10-year) survival with native liver was 35% (30%) in group 2 and 25% (22%) in group 3 (P =.03). Five-year overall survival was 57%, 74%, and 55% in groups 1, 2, and 3, respectively (P =.003). Poor results in groups 1 and 3 were mainly due to increased pre-transplantation mortality, but survival after transplantation was not significantly different in the 3 groups. CONCLUSIONS: Performance of the Kasai operation after 3 months of age is justified in selected cases, because it may obviate liver transplantation. Preoperative evaluation should exclude patients with advanced liver disease for whom liver transplantation should not be delayed.     

Indications for the Kasai operation: experience with 103 Suruga II modifications

103 patients with biliary atresia were treated by the Suruga II operation. A close correlation was found between degree of liver fibrosis, the size of the ductuli and prognosis. Thus, it is often possible to predict the prognosis at the initial operation by evaluating frozen sections. In group I (large ductuli, mild fibrosis) a Kasai operation or a modification is recommended. For group II (smaller ductuli, moderate fibrosis) the necessity of liver transplantation is increased. Kasai operation without stoma is the appropriate procedure. For group III (small ductuli, marked fibrosis), Kasai operation should be avoided, but liver transplantation has to be considered. Offprint requests to: T. Miyano     

胆总管未闭锁型胆道闭锁的手术治疗及疗效分析

目的 分析24例胆总管未闭锁型胆道闭锁的临床疗效,旨在指导临床对此类胆道闭锁的手术方式进行选择.方法 回顾分析我院1995至2006年间收治的24例胆总管未闭锁型胆道闭锁患儿手术、术后病理及随访资料.对空肠肝门吻合(A组)与胆囊肝门吻合(B组)在自体肝生存率、黄疸清除率、反流性胆管炎发生率及临床疗效等方面比较分析;并对胆道闭锁胆囊病理标本及正常对照组胆囊进行胶原纤维Van Gieson染色和CD68免疫组化染色,比较其纤维化及炎性反应的差异.结果 平均(51±29.02)个月随访期内,自体肝生存率为66.7%.A组自体肝1年生存率为78.6%,3年生存率78.6%;B组1年生存率为66.7%,3年生存率33.2%,两组3年生存率差异有统计学意义(P＜0.05);A组术后6个月黄疸清除率明显高于B组(86.7%比33.3%,P＜0.05);术后1年胆管炎发生率,A组为60.0%,B组为44.4%(P＞0.05).胆道闭锁患儿胆囊表现为明显纤维化和CD68阳性细胞浸润.结论 胆囊肝门吻合治疗胆总管未闭锁型胆道闭锁的疗效较肝门空肠吻合差,可能与胆囊肝门吻合后残余胆道存在纤维化及炎症细胞浸润有关,对其治疗推荐采用肝门空肠吻合.     

腹腔镜与开放Kasai手术治疗Ⅲ型胆道闭锁中期疗效的对比

目的比较腹腔镜与开放Kasai手术治疗先天性胆道闭锁的中期疗效。方法回顾性分析2010年9月至2011年9月在本院行Kasai手术并获得随访的103例Ⅲ型胆道闭锁患儿,根据手术方式分为腹腔镜辅助Kasai手术组(LP组)和开腹Kasai手术组(OP组)。通过术后12~30个月肝生化ALT和TBil中位数的秩和检验,比较两组Kasai术后中期肝功能情况;应用Kaplan-Meier生存分析比较两组中期生存率;比较两组对二期自体肝移植手术及术后生存情况的影响。结果 103例Ⅲ型胆道闭锁患儿中,LP组55例,OP组48例;两组年龄分布、性别比例、术前肝功能(TBil、ALT、AST)中位数等均无统计学差异。术后12个月、18个月、24个月、30个月两组肝功能(TBil,ALT)恢复情况无统计学差异。Kasai术后LP组和OP组的自体肝生存率,1年生存率分别为78.2%和75%,2年生存率分别为66.9%和55.8%,3年生存率分别为66.9%和55.8%。Kasai术后实施肝移植11例(LP组4例,OP组7例),1例移植术后死亡。结论胆道闭锁患儿实施腹腔镜Kasai手术与开放Kasai手术后中期效果无明显差异。     

Different polyunsaturated fatty acid profiles in patients with biliary atresia after successful Kasai operation and liver transplantation

Background  Although Kasai operation eliminates jaundice in patients with biliary atresia, inflammation at Glisson’s area persists and fibrosis advances slowly to liver cirrhosis. Profiles of polyunsaturated fatty acids, on which metabolic products have an immunoregulative effect, were investigated in this study. Methods  Blood samples were obtained from patients including 21 jaundice-free patients with biliary atresia after Kasai operation (native liver group) and 18 patients in whom Kasai operation failed and liver transplantation was performed (transplantation group). All of these patients are without any complications for more than 6 months. Blood samples from 18 patients with inguinal hernia were assigned as normal controls (control group). Profiles of fatty acids in whole serum lipids were measured using gas chromatography. The n-3/n-6 ratio of polyunsaturated fatty acids was compared among the three groups. Results  The n-3/n-6 ratio was 0.114 in the native liver group, which was significantly lower than 0.145 in the transplantation group (P = 0.009) and 0.158 in the control group (P = 0.004). There was no significant difference between the transplantation and control groups (P = 0.83). Results  The n-3/n-6 ratio was abnormal after Kasai operation despite normal liver function. This seems to be one factor of persisting inflammation in Glisson’s area.     

胆道闭锁肝内外胆系组织病理形态学分析

目的 通过胆道闭锁（BA）肝门纤维块、肝脏组织的病理及其超微结构观察，对肝门成纤维细胞分化程度进行评分，并与肝纤维化分级进行相关分析。方法 选取BA患儿作为研究对象，术中取肝门纤维块及肝脏组织标本；研究同期选取疑似BA经术中胆道造影除外BA，诊断为胆汁淤积综合征和先天性胆管扩张症患儿作为对照组，留取肝脏组织标本。在光镜和电镜下观察标本的病理改变，以及肝细胞、毛细胆管和肝门成纤维细胞的超微结构。采用SPSS 14.0软件，半定量比较BA与对照组肝脏纤维化的差异，检验肝门纤维块成纤维细胞活跃程度与肝纤维化分级的相关性。结果 2005年7月至2006年5月复旦大学附属儿科医院收治的21例BA Kasai根治术病例，手术平均年龄（66±20）d；对照组为5例胆汁淤积综合征和10例先天性胆管扩张症患儿。BA组肝组织病理改变主要是肝内门脉区胆管炎症及纤维化形成，肝纤维化程度明显高于同年龄胆汁淤积综合征和先天性胆管扩张症患儿；肝门纤维块毛细胆管增生，部分管腔闭锁、狭窄，腔内炎细胞浸润及部分淤胆，大量间质成分增生；电镜下肝门成纤维细胞活跃、肝脏毛细胆管上皮微绒毛缺失、肝细胞及肝血窦内电子致密物质增多及部分毛细胆管扩张；肝门成纤维细胞分化程度与肝组织纤维化程度相关（P=0.04）。结论 BA肝组织病理改变主要是肝内门脉区胆管炎症及严重纤维化形成；超微结构改变提示肝门部成纤维细胞活跃，其分化程度与肝纤维化程度相关。     

胆道闭锁肝纤维化与自体肝生存关系的研究进展

胆道闭锁是婴儿期最严重的肝胆系统疾病之一。肝门-空肠吻合术(Kasai手术)是治疗胆道闭锁的主要手段,但术后自体肝长期生存效果不佳,大部分患儿需要通过肝移植来挽救生命。肝纤维化是影响胆道闭锁患儿自体肝生存的重要因素之一,其发生机制复杂,涉及多种信号通路及细胞因子的调控。Kasai手术后胆汁引流不畅、胆管炎发作都会导致肝纤维化进展,进而发生肝硬化。在完善早期诊断、早期手术、通畅引流胆汁及控制胆管炎的同时,还应积极应对患儿肝纤维化的持续进展,以期达到自体肝的长期生存。     

Should open Kasai portoenterostomy be performed for biliary atresia in the era of laparoscopy?

Kasai portoenterostomy has been the treatment of choice for neonates with biliary atresia since its introduction. With the advance in laparoscopic techniques, a few centers have reported the feasibility of performing laparoscopic Kasai portoenterostomy. However, the outcome of this new technique is not known. Here, we aim to evaluate, as the only referral center for liver transplantation, our experience with patients referred for transplantation after failed Kasai portoenterostomy. A retrospective study was carried out between October 1996 and September 2005. The records of all patients with the diagnosis of biliary atresia were retrieved. The type of procedure and clinical outcome of the patients were noted. Early failure of Kasai enterostomy was defined as the need for liver transplantation within 1-year post-Kasai operation. For the period studied, a total of 72 patients with biliary atresia were identified. Sixty-three of the 72 patients had their Kasai portoenterostomies performed openly while nine patients underwent laparoscopic Kasai portoenterostomy in a center experienced in laparoscopic surgery. Six of these patients were referred for transplantation within 1 year, giving the early failure rate of 66.6%. In comparison, the early failure rate for open Kasai procedure was 38.5%. Regarding post-operative complications, one patient who underwent laparoscopic Kasai procedure also suffered intestinal volvulus after initial surgery and another was found to have internal herniation of the Roux loop. Laparoscopic Kasai portoenterostomy seems to be associated with more post-operative complications and worse early clinical outcome. As a result, we remain guarded about the present-day technique of laparoscopy for biliary atresia.