肿瘤细胞节律基因对其药物敏感性的影响

目的 通过体外实验诱导节律基因表达,探讨肿瘤细胞节律基因对其药物敏感性的影响.方法 采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(PMA)诱导体外培养的EMT6乳腺癌细胞节律基因的表达;在不同时间点,以RT-PCR检测节律基因的代表mPer1基因的表达水平.在mPer1基因表达的高峰与低谷分别给予阿霉素(ADM)处理.采用二甲基噻唑二苯基四唑嗅蓝(MTT)法和流式细胞术检测ADM对EMT6细胞增殖的影响.结果 PMA诱导后,EMT6细胞的mPer1基因呈近日节律.在mPer1基因表达高峰时,ADM对肿瘤细胞的抑制率高于其在低谷的抑制率.结论 肿瘤细胞节律基因能够影响其对药物的敏感性.     

穿膜肽mCLOCK's DNA-BIND作为药物载体的生物安全性初步评价

目的 研究一种新的来源于节律蛋白mCLOCK's DNA结合域的穿膜肽mCLOCK's DNA-BIND(CDB)作为药物携带载体的生物安全性.方法 化学合成穿膜肽CDB.体外采用Phorbol 12-Myristate 13-acetate(PMA)诱导NIH3T3细胞的近日节律.于诱导后不同时间点,CDB与小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞共孵育,RT-PCR检测其对近日节律核心分子mPeriod1(mPer1)基因表达的影响.此外,培养的NIH3T3直接与CDB共孵育12 h和24 h后,MTT法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对细胞周期和凋亡的作用.结果 CDB没有明显影响PMA诱导的mPer1节律基因表达.此外,CDB不干扰NIH3T3细胞增殖及生长周期,亦无明显的诱导凋亡作用.结论 CDB对细胞近日节律、细胞增殖、生长周期及细胞凋亡均无明显毒副效应,可望作为一种安全有效药物载体,并具有广泛的临床应用前景.     

白藜芦醇抑制膀胱癌细胞生长增殖及影响miR-34a表达的研究

目的观察白藜芦醇(resveratrol,Res)对人膀胱癌细胞T24生长增殖的影响,初步探讨miR-34a在Res影响T24细胞中的作用。方法不同浓度Res分别作用T24细胞24 h,采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测p53蛋白水平,实时定量PCR(Real-time PCR)检测T24细胞miR-34a的基因表达。结果 Res剂量依赖性地抑制T24细胞增殖,诱导细胞凋亡,明显增加p53的蛋白表达。此外,Res处理后T24细胞中miR-34a的基因表达亦显著升高。结论 Res能够有效抑制膀胱癌细胞生长增殖,可能与诱导细胞凋亡、上调miR-34a及p53表达有关。     

葡萄籽原花青素联合顺铂对喉癌细胞Hep-2生物学作用及机制研究

目的利用葡萄籽原花青素及其联合顺铂在体外作用于喉癌细胞Hep-2,观察其对喉癌细胞增殖、凋亡的影响,并探讨抗肿瘤作用的可能机制。方法 MTT法检测各组药物对喉癌细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;TUNEL法检测各组药物对喉癌细胞凋亡率的影响;采用流式细胞仪分析凋亡细胞比例,Western blot法检测各组药物对喉癌细胞Bax/Bcl-2表达情况的影响。结果 MTT和TUNEL结果显示,GSPE+顺铂组的喉癌细胞抑制增殖作用明显高于单纯GSPE组和单纯顺铂组,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞周期结果显示,GSPE+顺铂组处于S+G2M期的细胞数明显低于单纯GSPE和单纯顺铂组,差异均有统计学意义(P<0.05);蛋白表达结果显示,GSPE+顺铂组的Bax/Bcl-2的表达明显高于单纯GSPE组和单纯顺铂组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论葡萄籽原花青素可诱导喉癌Hep-2细胞凋亡;与单纯应用葡萄籽原花青素或顺铂比较,葡萄籽原花青素联合顺铂可以起到更好的增殖抑制并诱导喉癌细胞凋亡,两者具有协同作用。     

近日节律基因Per2对人肺癌细胞生长的抑制作用

目的 研究近日节律基因Per2对肺癌细胞(A549)生长的抑制作用及其机制.方法 将pcDNA3.1(+)-Per2转导入A549细胞内,过表达Per2,以空质粒pcDNA3.1(+)为对照.采用MTT和细胞平板集落形成实验检测肺癌细胞的生长情况;通过流式细胞技术观察细胞的凋亡.结果 近日节律基因Per2能够抑制A549细胞的生长和增殖,诱导细胞凋亡.结论 近日节律基因Per2能够抑制肺癌细胞的生长,其机制可能涉及诱导肿瘤细胞的凋亡.     

小鼠钟基因Period2(Per2)抑制乳腺癌细胞生长的研究

目的 研究小鼠节律基因Period2（Per2）对小鼠乳腺癌细胞（EMT6）的生长抑制及诱导凋亡的作用。方法 将pcDNA3．1（＋）-Per2转导入EMT6细胞内，同时设立转染空质粒pcDNA3．1（＋）入细胞的对照组。以RT-PCR、Western blot、流式细胞技术来检测Per2基因和蛋白的表达；采用MTT、细胞生长曲线、细胞平板集落形成实验检测Per2过表达后对小鼠乳腺癌细胞的生长抑制作用；通过流式细胞技术、DNA梯形带、hochst33258荧光染色和电镜技术检测nr2过表达后对小鼠乳腺癌细胞凋亡的影响。结果 小鼠节律基因nr2过表达抑制EMT6细胞的生长和增殖，诱导细胞凋亡率增加。结论 本研究发现小鼠节律基因Per2可能通过使EMT6细胞阻滞于G1期，并诱导细胞凋亡来实现对该肿瘤细胞的生长抑制作用。     

白花蛇舌草多糖诱导人胃癌细胞凋亡作用的研究

目的研究白花蛇舌草多糖对体外培养人胃癌7901细胞增殖抑制的影响及其作用机理。方法采用MTT法测定不同浓度白花蛇舌草多糖对人胃癌7901细胞增殖的影响;流式细胞技术检测药物作用后的细胞周期和凋亡率;RT-PCR方法检测药物对人胃癌7901细胞P53和Bcl-2基因表达的影响。结果白花蛇舌草多糖能明显抑制人胃癌7901细胞的增殖,其作用48 h的IC50约为116.52 mg·L-1;流式细胞检测显示40 mg·L-1白花蛇舌草多糖联合5.0 mg·L-1顺铂组总凋亡率为69.42%,明显优于顺铂组的50.85%（P〈0.01）和40 mg·L-1白花蛇舌草多糖组的26.41%（P〈0.01）;PCR结果显示高、中浓度白花蛇舌草多糖可使人胃癌7901细胞的bcl-2 mRNA表达量降低,P53 mRNA表达量增加。结论白花蛇舌草多糖能明显诱导人胃癌7901细胞的凋亡,与顺铂联合可产生协同作用,其作用机制可能与降低细胞bcl-2和增加P53基因表达量有关。     

索拉非尼联合顺铂抑制肝癌HepG2细胞生长的体外研究

目的探讨索拉非尼联合顺铂(DDP)对肝癌细胞HepG2生长的抑制作用及其可能的分子机制。方法实验细胞分为4组:空白对照组、索拉非尼单药组、顺铂单药组、索拉非尼联合顺铂组。索拉非尼和顺铂单独或联合作用于细胞,以MTT法检测24、48、72、96h时间点药物对HepG2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测24、48h时间点的细胞周期与凋亡率。在药物作用后24h,用荧光染料罗丹明123(Rh123)染色细胞,流式细胞仪测定线粒体跨膜电位(ΔΨm),分光光度法检测caspase-3活性。结果索拉非尼及顺铂单独应用对HepG2生长均有抑制作用,且低剂量联合具有协同作用。联合用药可以使细胞周期阻滞于G0/G1期和G2期,且凋亡率明显高于单药组(P<0.05)。单独应用顺铂和索拉非尼均能使线粒体跨膜电位降低,而联合组作用强于单药组(P<0.05)。药物作用后caspase-3活性增高,联合组高于单药组(P<0.05)。结论索拉非尼联合顺铂能更好地抑制肝癌HepG2细胞增殖,并促进其凋亡,其机制可能与细胞周期阻滞、线粒体跨膜电位降低及caspase-3活性增加有关。     

雷公藤内酯醇诱导人脉络膜黑色素瘤株OCM-1凋亡的机制研究

目的探讨雷公藤内酯醇(TPL)对人脉络膜黑色素瘤株OCM-1增殖的影响,分析其诱导人OCM-1细胞凋亡的作用机制。方法将OCM-1细胞分为对照组和实验组,实验组加入20μl不同终浓度(5、10、20、40、80、160nmol/L)的TPL,对照组加入等量无血清RPMI 1640培养液,分别作用24、48、72h。采用MTT法检测TPL对OCM-1细胞增殖的影响,瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化,流式细胞术检测不同浓度TPL诱导后OCM-1细胞的凋亡比例,Western blotting检测TPL诱导后凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、survivin及caspase-3的表达。结果 TPL可抑制OCM-1细胞增殖,48h及72h的IC50值分别为56.14±6.72、15.57±4.28nmol/L。TPL诱导OCM-1细胞后,在瑞氏-吉姆萨染色中可观察到凋亡小体。流式细胞术在不同浓度TPL诱导后的OCM-1细胞中均检测到亚二倍体凋亡峰。TPL诱导OCM-1细胞凋亡过程中,Western blotting检测显示Bax蛋白表达上调(P<0.01),Bcl-2、survivin蛋白表达下调(P<0.01),并可检测到活化的caspase-3。结论 TPL可抑制人OCM-1的增殖并诱导其凋亡,Bax、Bcl-2、survivin及caspase-3蛋白在其中可能具有重要作用。     

PMA诱导C6细胞rPer1,rDbp基因的近日节律表达

目的寻找一种新的体外节律诱导剂以研究C6神经胶质瘤细胞近日节律基因的表达情况。方法采用PMA（phorbol 12-myristate 13-acetate），100nmol／L）及50％的马血清刺激体外培养的小鼠NIH-3T3细胞。RT-PCR检测不同时间点mPer1 mRNA的表达水平，比较两者的诱导效率；PMA刺激体外培养的大鼠C6神经胶质瘤细胞，RT—PCR检测不同时间点rPer1，rDbp mRNA的表达水平。结果PMA及50％的马血清均能诱导NIH-3T3细胞mPer1的近日节律表达且诱导效率近似；并首次发现C6细胞的rPer1，rDbp基因存在着近日节律振荡。结论PMA是一种有效的体外节律诱导剂；经PMA诱导后，C6细胞的节律基因存在近日振荡，为体外研究授时因子对近日节律的导引机制提供依据。     

抑癌基因PTEN在孕三烯酮诱导子宫内膜异位症细胞凋亡中的作用

目的　研究抑癌基因PTEN在孕三烯酮诱导体外培养的子宫内膜异位症细胞凋亡中的作用。方法　以不同浓度的孕三烯酮对体外培养人子宫内膜异位症细胞进行处理 ,MTT法测算孕三烯酮作用 0～ 4 8h对子宫内膜异位症细胞的抑制情况并绘制生长曲线 ;取 2 4h为作用时间 ,透射电镜观察细胞超微结构变化 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期 ,应用PTEN单克隆抗体经由流式细胞仪分析细胞内PTEN的表达。结果　细胞生长曲线显示孕三烯酮对子宫内膜异位症细胞的生长增殖有显著的抑制作用 ,且呈时间 剂量 效应关系 ;透射电镜观察发现 ,孕三烯酮可诱导子宫内膜异位症细胞发生典型的凋亡形态学改变 ;流式细胞仪检测显示 1× 1 0 -6mol/L和1× 1 0 -4mol/L浓度的孕三烯酮作用 2 4h后 ,子宫内膜异位症细胞的凋亡率分别为 1 3%和 1 5 0 % ,与对照组相比差异显著 ;同时细胞内PTEN的表达有不同程度的上调。结论　孕三烯酮能明显抑制子宫内膜异位症细胞的生长增殖 ,这一作用可能与上调PTEN的表达及诱导细胞凋亡有关     

LON基因下调对人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖以及药物敏感性的影响

目的：应用RNAi的方法抑制丝氨酸蛋白酶LON表达，研究该丝氨酸蛋白酶的表达与肿瘤增殖以及药物敏感性之间的关系。方法：以人乳腺癌细胞MCF-7为研究对象，通过RNAi下调LON基因表达，采用RT—PCR法、MTT增殖实验、流式细胞术等技术进行检测。结果：在瞬时转染与稳定转染细胞株中，RT—PCR结果证实LON基因的表达明显下调；MTT增殖实验结果显示，LON基因的下调可导致细胞的增殖能力降低，并且能够增加对化疗药顺铂的药物敏感性。流式细胞仪检测显示LON基因的下调对细胞周期没有显著影响。结论：通过RNAi下调LON基因能够抑制肿瘤细胞的增殖并且与顺铂有协同作用，其抑制作用未造成细胞周期的改变。     

白藜芦醇诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其机制

目的探讨白藜芦醇诱导人宫颈癌Hela细胞的凋亡作用及其分子机制。方法应用不同浓度的白藜芦醇作用于人宫颈癌Hela细胞,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡、细胞周期分布：免疫组化法检测Survivin及Caspase-3的表达。结果白藜芦醇能明显抑制Hela细胞的增殖,并呈剂量和时间依赖性。经白藜芦醇处理Hela细胞后,FCM分析发现各实验组S期细胞比例增高,G2／M期细胞比例减少,凋亡率明显高于对照组,并呈剂量依赖性（P〈0．01）;各实验组Heal细胞Survivin的表达均低于对照组,而Caspase-3的表达均高于对照组（P〈0．01）。结论白藜芦醇能明显抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,诱导其凋亡,其机制可能与抑制Survivin的表达、上调Caspase-3的表达有关。     

X射线诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及线粒体DNA基因表达下调

目的 研究不同剂量X线对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响，并检测其线粒体DNA（mtDNA）基因的差异表达。方法 以同步培养的未受照细胞为对照，8MVX线分别以2、4、6和8Gy的吸收剂量照射A549细胞，MTT比色法分析细胞增殖曲线；并于照射后24h，流式细胞仪测定细胞周期分布和凋亡率，电镜观察细胞超微结构，人mtDNA基因表达谱芯片检测靶基因的表达变化。结果X射线抑制A549细胞增殖，以4Gv为显著；随着照射剂量的增加，细胞凋亡率增加，G2／M期细胞比率增加，6和8Gy组表现出G2／M期阻滞，透射电镜下4Gy组可见凋亡的形态改变，8Gy组细胞近碎裂；X射线照射后mtDNA编码基因呈普遍下调表达，包括2Gy组的3种tRNA基因、4Gy组的2种tRNA基因和4种mRNA基因、6Gy组的6种tRNA基因和1种rRNA基因，8Gy组的2种tRNA基因。结论X射线可抑制A549细胞增殖，诱导细胞凋亡及mtDNA编码基因的普遍下调表达。随着辐射剂量的增加，剂量依赖性效应逐步减弱而解除。4Gy为体外研究的相对高效、安全剂量。     

全反式维甲酸对乳腺癌MCF-7细胞周期和增殖活性的影响及restin基因表达的初步研究

目的:检测全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)在乳腺癌MCF-7细胞周期、增殖、分化和凋亡过程中的作用,以及对。restin基因表达的影响,从而为研究其功能提供线索。方法:用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期的变化;MTT 法检测细胞增殖活性;RT-PCR检测restin基因表达。结果:在ATRA诱导下,细胞出现G1期阻滞和生长抑制,增殖活性下降,restin基因开始表达,并呈增长趋势。结论:在ATRA诱导MCF-7细胞分化、凋亡过程中,ATRA能使MCF-7细胞 G1期阻滞,并能抑制MCF-7细胞生长,促使其凋亡,restin基因参与细胞周期的调控,特别是细胞凋亡。     

EGB761对VH-64尤文肉瘤细胞的促凋亡作用

 目的 研究银杏叶提取物EGB761对VH-64尤文肉瘤细胞的促凋亡作用。方法 EGB761干预VH-64尤文肉瘤细胞后,CCK- 8 观察 50、100 和200 mg/L不同浓度EGB761作用下VH-64尤文肉瘤细胞的增殖状况,流式细胞仪分析用AnnexinV-FITC和PI双染检测不同浓度EGB761对VH-64尤文肉瘤细胞凋亡的影响。结果 EGB761可抑制VH-64尤文肉瘤细胞的增殖,呈浓度和时间依赖性反应;EGB761 100 mg/L、200 mg/L干预VH-64尤文肉瘤细胞后,流式细胞仪检测显示细胞凋亡率分别为6.85%±0.36%和14.36%±0.23%,明显高于对照组(P<0.01)。结论 EGB761可诱导VH-64尤文肉瘤细胞凋亡。