我国不同人群抗输血传播病毒抗体的检测

1997年 ,Ｎｉｓｈｉｚａｗａ等[1 ] 应用代表性差异分析法 (ｒｅｐｒｅ ｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｎａ1ｙｓｉｓ,ＲＤＡ) ,从 1名非甲～非庚型输血后肝炎患者血清中获得 1个新的病毒克隆 ,后将其命名为输血传播病毒 (ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｖｉｒｕｓ,ＴＴＶ)。随后许多国家开展了相关的研究工作。国内的研究表明 ,中国人群中存在ＴＴＶ感染 ,且该病毒具有嗜肝性[2 ] 。我们应用ＥＬＩＳＡ方法对2 96例不同人群进行了抗＿ＴＴＶ的流行病学调查。1　材料与方法1.1　调查对象随机选取 1995年 1～ …     

TT病毒的研究进展

随着医学分子生物学研究的飞速发展,在甲型、乙型和非甲非乙型肝炎之后,人们已相继揭示了ＨＣＶ、ＨＤＶ、ＨＥＶ及ＨＧＶ。1997年10月日本学者Ｎｉｓｈｉｚａｗａ等应用代表性差异分析方法(ＲＤＡ)从一名为ＴＴ的患者血清中分离出一种新的与ＡＬＴ相关的ＤＮＡ病毒,称为输血传播病毒(ＴｒａｎｓｆｕｓｉｏｎＴｒａｎｓｍｉｔｔｅｄＶｉｒｕｓ,ＴＴＶ)[1]。现就这种病毒的研究现状综述如下。1　ＴＴＶ生物学特征ＴＴＶ为单链ＤＮＡ病毒,经5%吐温80处理无包膜,全长3739个核苷酸,对ＤＮａｓｅＩ敏感,抗ＲＮａｓｅＡ.有2个开放读码框架(ＯＲＦ)…     

一种新型病毒与乙型肝炎病毒混合感染对临床的影响

最近日本学者〔１、２〕报道在输血后肝炎的病人中发现了一种新的、命名为输血传播的病毒（ｔｒａｎｓｆｕ－ｓｉｏｎｔｒａｎｓｍｉｔｅｄｖｉｒｕｓ，ＴＴＶ）。我们在一次病原不明的经肠道传播的病毒性肝炎的流行中，收集了粪便和血液标本，也检出了与ＴＴＶ核苷酸序列...     

中国人TTV部分基因的克隆及序列测定

目的：了解我国人群中是否存在ＴＴ病毒（ＴＴＶ）感染，分析国内ＴＴ病毒株基因结构特点。方法：用ＰＣＲ方法检测血清标本中ＴＴＶ ＤＮＡ，对ＴＴＶ ＤＮＡ阳性的标本进行序列测定。结果：１０例临床诊断为非甲至非戊型肝炎病人血清标本中，用ＰＣＲ方法检测出５例为ＴＴＶ ＤＮＡ阳性。将其中的一株命名为ＴＴＶＣＨ１（ＴＴＶ中国株１）并进行序列测定，该序列与日本ＴＴＶ部分基因（ＣＬＯＮ２２）相对位置的核苷酸同源性为     

西安地区不同背景人群输血传播病毒感染状态初步调查

１９９７年１０月Ｎｉｓｈｉｚａｗａ等〔１〕首次报道分离出新型肝炎相关病毒,暂命名为输血传播病毒（ＴＴＶ）。本研究报道了西安地区不同人群ＴＴＶ基因的检测结果。检测对象为西安地区来我院的职业献血员,共２０８例,男６４例,女１４４例,年龄４０～８３岁,经查体后３１例ＡＬＴ升高（４０Ｕ／Ｌ以上）,７例抗－ＨＢｃ阳性,１例抗－ＨＢｅ阳性,１例ＨＢｅＡｇ阳性,５例抗－ＨＣＶ阳性,其余ＨＢＶＭ５项、抗－ＨＣＶ、抗－ＨＩＶ均为阴性。血液透析患者３０例,男１７例,女１３例,年龄２３～７７岁,ＡＬＴ异常升高８例,抗…     

新型肝炎病毒的研究进展

目前 ,新型肝炎病毒尚未正式命名 ,但已提出有多种诊断名称 ,如己型肝炎、庚型肝炎、输血传播病毒 (ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｖｉｒｕｓ ,ＴＴＶ )型肝炎及非甲～非庚型肝炎 (ＮＡ～ＧＨ)等。新型肝炎病毒的正式命名有待国际病毒分类与命名委员会的最后论定。现就近 2 0年来新型肝炎病毒研究的进展综述如下。1　研究策略与方法2 0世纪 80年代 ,分子生物学技术的迅速发展及广泛应用 ,一些传统的病毒分离、培养技术及病毒鉴定方法 ,已被盲克隆 (ｂｌｉｎｄｃｌｏｎｉｎｇ)表达蛋白供免疫筛选及新核酸序列检测等新技术所…     

恒河猴中TTV感染的回顾性实验研究

目的：了解接种患者血清的恒河猴能否复制ＴＴ病毒（ＴＴ ｖｉｒｕｓ,ＴＴＶ）,正常恒河猴中是否有ＴＴＶ感染,分析猴中ＴＴＶ基因结构特点。方法：用ＰＣＲ方法检测血清标本中ＴＴＶ ＤＮＡ,对ＴＴＶ ＤＮＡ阳性的标本进行序列测定。结果：健康猴中无ＴＴＶ感染;１０只接种患者血清的恒河猴中,经验检测有４只为ＴＴＶ阳性,将其中一株ＴＴＶ进行序列测定,该序列与日本ＴＴＶ部分基因相对应位置的核苷酸同源性为９６％,将     

输血相关病毒母婴传播的分子病毒学鉴定

为了解输血相关病毒在我国绩婴传播 可能及分子病毒学依据,应用半巢式ＰＣＲ调查我院１９９８年１－１２月间住院的８７例产妇及其新生儿的ＴＴＶ感染情况,用克隆后序列分析测定两对母婴同时阳性者ＴＴＶ基因序列。结果发现,在８７例产妇中有１２例用半套式ＰＣＲ可检测出ＴＴＶ,检出率为１３．８％,其中４例产妇与新生儿同时阳性;     

PCR法对献血人员中HCMV的筛选

巨细胞病毒 (Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ,ＣＭＶ)属疱疹病毒属 ,人是ＣＭＶ的惟一宿主 ,在健康人群中绝大多数表现为隐性或轻症状感染。输血是ＣＭＶ传播的一个重要途径。我们应用聚合酶链反应 (ＰＣＲ)技术对健康献血人员中ＣＭＶ的感染状况进行了研究分析 ,现报告如下。1　材料和方法1.1　材料 :142 0份检测标本分别来自兰州军区兰州总医院输血科和第四军医大学西京医院输血科健康献血人员。选择ＣＭＶ早期外显子 4基因 ,其序列为 :引物 1:5′ -ＴＡＴＡＣＣＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＡＧＡＡＡＴＴＣＡ - 3′ ;引物 2 :5′ -ＡＴＡＡＧ…     

输血传播病毒-DNA聚合酶链方法的建立及应用

目的：建立输血传播病毒（ＴＴＶ）－ＤＮＡ聚合酶链反应方法并应用于新疆地区不同人群ＴＴＶ感染的检测。方法：根据已报道的ＴＴＶ基因痛列（ＤＤＢＪ序列号：ＡＢ００８３９４）,通过引物设计软件ＳＱＮＣＥ和ＯＬＩＧＯ在其ＯＲＦ１区设计一对ＰＣＲ引物,扩增产生一个３１５ｂｐ的扩增片段,产物经ＢｇⅠⅡ酶切分别产生一个２１９ｂｐ和９６ｂｐ的酶切片段。结果：用建立的ＰＣＲ方法在１５例维存尔族转氨酶升高的非甲－非庚型     

96例急性乙型肝炎患者HBV多聚酶区的耐药变异分析

目的检测未接受过核苷(酸)类似物(NA)治疗的急性乙型肝炎患者感染的HBV是否存在耐药变异。方法收集96例急性乙型肝炎患者住院早期血清,提取HBV DNA,采用巢式PCR方法扩增HBV反转录酶(RT)全基因,对PCR产物进行DNA双向测序,对RT/S基因序列进行分子进化树分析反基因分型,对rt80、rt173、rt180、rt181、rt184、rt202、rt204、rt236和rt250等位点上的耐药相关变异进行分析,并用克隆测序法进行验证,每个样本测定10～20个克隆。结果用直接测序法检出NA耐药变异8例(8.3%),C型6例,B型2例。其中6例为拉米夫定(LAM)耐药变异,包括4例rtM204I、1例rtL80I+rtM204I和1例rtL180M+rtM204I;另2例检出与阿德福韦酯(ADV)耐药相关的rtA181V变异。变异株多数与野生型病毒株共存。克隆测序法的结果与直接测序法的结果大体相符,部分样本中有2种或多种耐药变异株共存,其中1例患者的样本中除LAM变异株外,还检出了ADV和恩替卡韦(ETV)耐药变异株,变异形式分别为rtA181T+rtN236T和rtL180M+rtS202G+rtM204V。结论未接受过NA治疗的急性乙型肝炎患者可以感染NA耐药株病毒,NA耐药病毒可以在人群中传播引起急性乙型肝炎,变异病毒的传播致病不只局限于LAM耐药株。     

戊型肝炎病毒F86株的某些生物学性状及分子生物学特征的鉴定

目的：对法国赠送的戊型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＥｖｉｒｕｓ,ＨＥＶ）Ｆ８６株进行生物学性状与基因特征的鉴定,并与我国分离的８７Ａ株病毒进行比较。方法：用常量法测定病毒的血凝滴度;微量滴定法测定在２ＢＳ、Ａ５４９、ＬＬＣ－ＭＫ２细胞中的病毒滴度;腹腔注射ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,３周后取血清进行抗体检测;利用ＲＴ－ＰＣＲ方法从接种病毒的细胞培养液中直接检测病毒ＲＮＡ,ＰＣＲ阳性产物纯化回收后克隆并测序。结果：Ｆ８６株病毒血凝试验阴性;在２ＢＳ、Ａ５４９细胞中连传３代,病毒滴度稳定,在ＬＬＣ－ＭＫ２细胞中病毒滴度稍低;在接种Ｆ８６株病毒的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠中可检出特异性抗体;在其细胞培养物中检出ＨＥＶ聚合酶区一段核苷酸序列,测序结果与我国８７Ａ株的同源性为９８．７％。结论：Ｆ８６株病毒不能凝集人Ｏ型红细胞,对２ＢＳ、Ａ５４９及ＬＬＣ－ＭＫ２细胞均敏感,对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠不致病。部分序列的测定结果表明该株病毒确为ＨＥＶ,从而由国外实验室证实ＨＥＶ可用人源性细胞分离。     

丙型肝炎的发病机制

丙型肝炎病毒（HCV）是输血后肝炎的主要原因，急性丙型肝炎多数发展为慢性肝炎，一旦形成慢性肝炎很少能自行缓解，且往往演化成肝硬变，甚至肝细胞癌。1HCV基因变异HCV属RNA病毒，很易Ill现变异。特别是基囚组的EZ／NSI的5'端，变异最大。5'端有两个高变部位（HVR），称为HVRI和HVR。。HCV分离株的HVR序列不尽相同，HVRI比HVRZ更易变异。在同一个体，不同时间分离出的HCV基因组HVRI也不同。这种在同一区位上出现的异源性序列的病毒株，称为类似株（quasisPecies）。这种类似株的出现，是因为在名免疫压力下，病毒通过…     

我国两株森林脑炎病毒的生物学性质及E蛋白基因核苷酸序列的比较

目的：比较我国1953年从患者脑组织分离的森张株和2001年从患者血清中分离的MDJ01株森林脑炎病毒(TBE)的生物学特性及E蛋白基因核苷酸序列的变化，分析TBE病毒E蛋白基因的变化与功能的关系，从分子水平上探讨我国TBE的传播、流行规律及致病机制。方法：两株病毒同时接种乳鼠和，BHK／21细胞，观察两株病毒对乳鼠和BHK／2l细胞的致病性；从两株病毒感染的BHK／2l细胞中提取病毒的RNA，对E蛋白基因进行RT-PCIR扩增，扩增产物纯化后与pGEM-T载体连接，分别进行克隆测序。结果：森张株对乳鼠和BHK／21的致病性均比MDJ01株明显；两株病毒E蛋白基因长为l488nt，编码496个氨基酸，核苷酸的变异为33个，导致了2个氨基酸的变化，第一个氨基酸的变异发生在113位(MDJ01株由Ⅰ变成Ⅴ)，第二个氨基酸的变异发生在163位(MDJ01由P变成A)，两株病毒核苷酸序列的同源性为97．8％，推测的氨基酸序列的同源性为99．6％。与国外远东株比较，森张株核苷酸序列的同源性稍高于MDJ01株，与欧洲株、西伯利亚株的同源性基本一致。结论：新分离株MDJ01对细胞和乳鼠的致病性稍低于1953年分离的森张株，E蛋白基因的核苷酸序列分析表明两株病毒同属于远东亚型，推测MDJ01株可能是由森张株在自然界长期演变而来。     

我国登革2型病毒prM-E基因与SFV病毒载体重组RNA的构建

目的：构建我国登革２型病毒４３株ｐｒＭ－Ｅ基因的甲病毒（Ｓｅｍｌｉｋｉ ｆｏｒｅｓｔ ｖｉｒｕｓ,ＳＦＶ）重组ＲＮＡ,为登革新型疫苗的研究奠定基础。方法：首先将含有多种稀有限制酶位点的接头插入ｐＳＦＶ载体的多克隆位点,再把ｐｒＭ－Ｅ基因克隆至该载体中。将获得的重组质粒ＤＮＡ经体外转录后,通过电穿孔法将其转录的ＲＮＡ产物导入宿主细胞,并采用间接免疫荧光法检测ｐｒＭ－Ｅ基因的表达。结果：已获得含多种酶位点的ｐＳＦＶ病毒载体,并且所构建的含ｐｒＭ－Ｅ基因的重组ｐＳＦＶ病毒ＲＮＡ,在宿主细胞中的表达产物可与登革２型病毒特异抗体起反应。结论：构建的含ｐｒＭ－Ｅ基因的重组ｐＳＦＶ病毒ＲＮＡ可表达我国登革２型病毒株的特异蛋白。     

SEN病毒部分基因的克隆及序列测定

目的：了解我国人群中是否存在SEN病毒(SENV)感染,并分析SENV国内分离株的部分基因序列,方法：在SENV的保守区设计引物,建立巢式PCR方法检测血清中SENV DNA,并对PCR产物进行克隆,测序,结果,7例非甲－非瘐型肝炎,且输血传播病毒（TTV）阴性患者中,2例SENV阳性,其中一株的序列与意大利SENV－D株（AX－25730）相对应位置核苷酸序列同源性为90％,结论：本研究证初了我国存在SENV感染,建立了检测SENV的PCR方法,并对SENV部分基因进行了克隆及测序,对进一步开展SENV诊断和流行病学调查具有重要意义。     

宁夏地区乙型肝炎病毒基因型分布及D基因型的测序鉴定

为确定乙型肝炎病毒Ｄ基因型在我国的存在,建立我国ＨＢＶ Ｄ基因型的参照序列,作者用聚合酶链式反应结合限制性片段长度多态性分析技术,调查了可能存在Ｄ基因型的我国宁夏地区ＨＢＶ基因型分布。对９０例ＨＢｅＡｇ阳性ＨＢＶ感染者的血清进行前Ｓ区ＲＦＬＰ基因型分型。结果发现：Ｃ基因型８６．７％（７８／９０）‘;Ｄ基因型１０％（９／９０）无Ａ、Ｂ、Ｅ和Ｆ型不能明确分型者３．３％（３／９０）。２例ＲＦＬＰ分型为Ｄ     

150例慢性丙型肝炎患者HCV基因型和NS3蛋白酶编码区序列的分析

目的 对来源于我国不同地区的150例慢性丙型肝炎患者进行HCV基因分型和NS3蛋白激酶编码区序列分析.方法 基因分型采用基因芯片法;NS3区序列扩增采用自行设计的型特异性引物介导巢式RT-FCR,序列分析采用PCR产物直接测序.结果 150例患者HCV基因分型结果为1b占66.7%(100/150),2a占22.7%(34/150),3a占4%(6/150),3b占4%(6/150),6型占2%(3/150),1a占0.7%(1/150).对NS3区序列采用进化树分析进行分型,其结果与基因芯片法分型结果高度一致,主要基因型(1a、2b)的NS3区序列无明显地区性聚集倾向.未检出与新型HCV蛋白酶抑制剂telaprevir耐药相关的V36M/A、T54A、R155K/T和A/156V/T变异.结论 我国慢性丙型肝炎患者仍以1b型感染为主,采用NS3蛋白酶编码区序列分析可同时进行基因分型和针对蛋白酶抑制剂的耐药变异检测,我国天然存在的相对优势变异株发生telaprevir原发耐药的可能性很小.     

DNA测序对Ⅱ型单纯疱疹病毒进行分型鉴定的方法研究

目的建立一种能够对标本中的Ⅱ型单纯疱疹病毒进行准确鉴定分型的方法。方法从生殖器疱疹(GH)患者病变部位采集标本,将标本接种Vero细胞,待出现细胞病变后收获病毒感染物;提取病毒感染物的基因组。根据HSV-1和HSV-2的gD基因序列,设计合成了一对能够同时扩增两个型的病毒引物,PCR扩增感染物中病毒的序列,PCR产物克隆到pMD18-T载体,然后进行序列测定,测定序列与数据库比对,根据比对结果确定HSV的型。结果用PCR成功扩增出200bp大小的片段;测定序列与数据库的比对结果显示,该序列与HSV-2的gD基因同源性最高,表明在标本中有HSV-2病毒。测定的gD序列与国外分离株的序列存在一定的差异。结论通过PCR扩增和产物的克隆测序,能够实现对临床上难以区分的HSV-1和HSV-2的分型鉴定。     

乙型肝炎病毒耐药的检测方法与临床意义

核苷(酸)类似物是目前临床进行抗乙型肝炎病毒(HBV)治疗的主要药物,但长期使用可引起病毒突变产生耐药。基因型耐药和表型耐药分析是病毒耐药性检测的两种基本手段,前者主要通过基因测序和线性反向探针杂交等方法检测HBV基因组中已知与耐药相关的病毒变异;后者则是确定"新发"与复杂HBV耐药变异的必要方法 ,其基本策略是构建HBV变异株与野生株基因组重组载体,转染细胞系后定量检测HBV复制中间体,比较在不同药物浓度下病毒复制力的受抑制程度。建立敏感、特异、经济、高效的检测方法是基因型耐药和表型耐药分析应用于临床的基础。我们近期的研究发现临床存在恩替卡韦和阿德福韦多药耐药突变病毒株,HBV基因型/亚型与耐药突变类型相关,耐药病毒株可以传播引起急性肝炎,rt229变异可以增强耐药变异病毒株的复制力等,这些发现对深入揭示HBV耐药变异的临床特点、加强HBV耐药管理具有重要意义。