低氧对雄性大鼠睾酮分泌及其合成相关蛋白和酶表达的影响

目的研究低氧对雄性大鼠睾酮分泌及其合成相关蛋白和酶表达的影响。方法36只雄性Wistar大鼠随机分为常氧、低氧5d、低氧15d和低氧30d组。运用放射免疫测定法和反转录聚合酶链式反应（RT—PCR）方法，研究了模拟海拔5000m高度低氧5d、15d、30d对雄性Wistar大鼠血中睾酮浓度的影响，以及对睾丸组织中睾酮合成相关的类固醇急性调节蛋白（StAR）、胆固醇侧链裂解酶（P450scc）以及313-羟甾脱氢酶（3β-HSD）mRNA表达的影响。结果模拟海拔5000m高度低氧15d，大鼠血中睾酮浓度显著高于常氧组（P〈0．05），低氧30d，大鼠血中睾酮浓度显著低于对照组（P〈0．05）；低氧不引起雄性大鼠睾丸组织StARmRNA表达改变；低氧15d、30d，大鼠睾丸组织P450scc mRNA和3β-HSDmRNA表达分别显著低于常氧组（P〈0．05）。结论慢性低氧抑制了睾酮的分泌，并抑制了睾丸组织睾酮合成相关酶P450scc mRNA和3β-HSD mRNA的表达。低氧15d大鼠血中睾酮浓度升高的机制需进一步研究。     

耐力训练和益气补肾中药对睾酮合成的调节因素--StAR蛋白和P450SCC酶mRNA表达的影响

目的:探讨运动训练和益气补肾中药对影响睾酮合成的StAR蛋白和P450SCC酶的作用.方法:50只雄性Wistar大鼠随机分为安静对照组(n=10)、安静服药组(n=10)、耐力训练组(n=15)和训练服药组(n=15).经6周递增负荷游泳训练后,采用放免法测定大鼠血清睾酮水平,利用RT-PCR方法检测大鼠睾丸StAR和P450SCC mRNA的表达水平.结果:(1)训练组大鼠血清睾酮水平显著降低,而训练服药组大鼠的血清睾酮水平则未降低.(2)未服药训练大鼠的StAR mRNA水平比安静对照组明显下降(P<0.01);服用中药的安静大鼠和运动大鼠的StAR mRNA表达比安静对照组和训练组显著增强(P均小于0.001).(3)训练组和训练服药组大鼠P450SCC mRNA水平均显著低于安静对照组和安静服药组(P<0.05).结论:(1)研究结果提示长期大负荷训练后大鼠睾丸间质细胞StAR mRNA表达下降,益气补肾中药对StAR mRNA的表达转录水平有增强作用.长期大负荷运动造成的血清睾酮水平下降与StAR mRNA的表达强弱有关.(2)长期大负荷运动可造成大鼠睾酮合成限速酶P450SCC mRNA表达降低,益气补肾中药可维持血清睾酮水平,但其在mRNA水平对P450SCC的表达无明显效应,其对睾酮合成酶的影响仍需进一步探讨.     

氰戊菊酯对大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成的影响及其机制

目的 探讨氰戊菊酯(Fen)对大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成的影响及其可能机制。方法 采用差速贴壁法分离提纯SD大鼠睾丸Leydig细胞。用0、25、50和100μmol/L Fen处理Leydig细胞1、12和24 h，采用ELISA法检测睾酮水平。设置空白对照组(加入0.1%DMSO处理)、Fen暴露组(加入100μmol/L Fen处理)、Fen+NAC组(加入100μmol/L Fen和5 mmol/L NAC处理)、Fen+CsA组(加入100μmol/L Fen和2 mmol/L CsA处理)，给药后继续培养24 h。采用流式细胞仪检测活性氧(ROS)和线粒体膜电位变化，ELISA法检测睾酮水平及谷胱甘肽(GSH)、cAMP含量，化学发光法检测ATP含量，Western blotting检测超氧化物歧化酶(SOD)、类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(CYP11A1)的表达。结果 选择100μmol/L Fen处理24 h进行实验。与空白对照组比较，Fen暴露组Leydig细胞睾酮合成水平，GSH...     

大鼠长期摄入贫铀对睾酮合成及StAR、P450scc基因表达的影响

目的 研究长期摄入贫铀(DU)对雄性大鼠生殖功能改变的机制。方法 大鼠长期摄入贫铀,剂量分别为4和40 mgDU·kg^－1·d^－1。在 F₀代20个月,F₁代15个月时,测定其血中性激素含量,并用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)研究在睾酮(T)合成中起限速作用的类固醇合成急性调节蛋白(StAR)和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)基因表达的影响,同时设健康对照组。结果 食入组血清T的含量均低于健康对照组,最低为51.73 U/L,但黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)含量均高于健康对照组。StAR mRNA的表达,除F₁低剂量组(StAR/β-actin半定量值为1.35)上调外,其余组的表达均较健康对照组(1.035)下调;P450scc mRNA的表达在F₀代低、高剂量组较健康对照组(P450scc/β-actin比值为0.313)下调,P450scc/β-actin降至0.21;在F₁代低、高剂量组较健康对照组上调,P450scc/β-actin升至0.623。结论 长期摄入DU,可通过抑制StAR、P450scc mRNA的表达从而干扰T合成途径来抑制雄性的生殖作用。     

类固醇激素合成急性调控蛋白(StAR)与睾酮的生物合成

大量的研究已对"运动性低血睾酮"状态下内分泌机能的紊乱进行了全面、深入的讨论,认为运动训练可导致下丘脑-垂体-性腺轴各个环节的机能受到不同程度的抑制.但是下丘脑-垂体对睾丸分泌睾酮的调节变化,最终要通过睾丸组织内睾酮生化合成时反应底物的转运以及酶促反应等几个关键步骤来实现.其中的一个重要环节即睾酮合成的底物--胆固醇通过载体蛋白StAR(Steroidogenic acute regulatory protein,类固醇激素合成急性调控蛋白,简写为StAR)转运至线粒体内膜和P450SCC(cytochrome P450 Side chain cleavage,细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶)的过程成为当今生殖生理和内分泌研究领域的一个热点[1,2],下面我们就此做一综述.     

5周间歇性负重游泳训练对大鼠睾丸Leydig细胞胆固醇代谢的影响

采用实时荧光定量PCR的Taqman技术探讨5周间歇性负重游泳训练导致大鼠血清睾酮水平降低时,大鼠睾丸Leydig细胞胆固醇代谢关键环节上的HMG-CoA还原酶、LDL-R、SR-BI、类固醇激素合成急性调控蛋白(StAR)基因表达的变化。结果显示,运动引起血清睾酮显著降低时(P<0.01),Leydig细胞内LDL-R mRNA表达量显著增加(P<0.05),HMG-CoA还原酶、SR-BI、StAR mRNA表达量无显著性变化。结果表明当大鼠以负重5%体重的负荷强度进行5周的间歇性游泳训练引起血清睾酮显著降低时,Leydig细胞通过LDL-R介导的内吞作用摄取外源性胆固醇作用加强,Leydig细胞内胆固醇的合成、摄取和转运的关键环节未发生障碍。     

氢化可的松对大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响

目的研究氢化可的松对体外培养的大鼠睾丸间质细胞(kydig ceus)睾酮分泌的影响，探讨氢化可的松影响睾酮分泌的作用机制。方法将雄性大鼠处死，取睾丸间质细胞悬液分别加入氢化可的松、促性腺激素、雄烯二酮进行体外培养，用放射免疫分析方法测定睾酮含量。结果氢化可的松可抑制促性腺激素刺激的睾酮分泌，但对睾酮的基础分泌及雄烯二酮升高的睾酮水平无影响。结论在睾丸间质细胞，氢化可的松以剂量依赖性方式抑制促性腺激素刺激的睾酮的合成，但对细胞中17β-羟甾脱氢酶的活性无影响。     

维生素E对尾部悬吊大鼠雄性生殖损伤的防护作用

目的 研究维生素E（VE）对尾部悬吊大鼠雄性生殖损伤的防护作用。方法 选用性成熟期健康SD雄性大鼠30只，随机分为对照组、尾吊组、VE＋尾吊组3组。14d后观察各组大鼠的睾丸重量、形态，精子数量和质量以及血清激素含量。结果 与对照组相比，尾吊组大鼠睾丸重量、精子数量和质量以及血清睾酮含量均显著下降（P〈0．0．5）。VE可以显著改善这些指标（P〈0．05）。另外，尾吊组大鼠睾丸生精小管萎缩，间质水肿。生精上皮层数减少，细胞排列松散，生精小管腔内的精子数明显减少。VE＋尾吊组大鼠睾丸形态结构部分恢复正常，生精小管腔内的精子数量增多。结论 VE对尾部悬吊造成的大鼠雄性生殖损伤有防护作用。     

雄激素对衰老大鼠阴茎组织转化生长因子β基因表达的影响

目的探讨雄激素对阴茎组织中TGF-βmRNA的调控作用。方法将30只雄性大鼠随机分为3组，衰老组、丙酸睾酮组与对照组（2个月龄大鼠），其中丙酸睾酮组给予丙酸睾酮治疗，于24d取阴茎组织，用PCR检测其TGF-βmRNA的表达。结果衰老组TGF-βmRNA的表达较其他2组增强，而表现TGF-βmRNA减弱的组，由少到多依次排定为对照组、丙酸睾酮组及衰老组；对照组、丙酸睾酮组及衰老组其TGF-βmRNA内控量较少，与衰老组比较有显著性差异（P〈O．01）。结论雄激素可能通过调节TGF-βmRNA表达而在阴茎勃起中发挥重要作用。     

尾部悬吊对雄性大鼠生殖的影响

目的：探讨尾部悬吊对雄性大鼠生殖腺及生殖激素的影响。方法：雄性大鼠尾部悬吊及恢复重力，测量睾丸重量、HE染色后观察其组织形态变化，观察附着精子有无，放免法测睾酮含量，免疫组织检测垂体LH-β亚单位阳性细胞率。结果：睾丸重量极显著减轻、曲精细管明显萎缩、精母细胞明显少，附睾未发现精子，睾酮含量极显著降低，垂体细胞LH-β亚单位阳性细胞数量显著增加。结论：尾吊对雄性大鼠性腺及生殖功能有负面影响。     

模拟失重大鼠腹主动脉内皮依赖性舒张反应变化与氧化应激水平有关

目的探讨模拟失重大鼠腹主动脉内皮依赖性舒张反应的变化与氧化应激水平的关系。方法采用3周尾吊大鼠模型模拟失重状态,通过血管环张力实验检测内皮依赖性血管舒张反应,蛋白印迹技术以及DHE荧光探针技术观察悬吊(SUS)大鼠和正常对照(Con)大鼠动脉血管NOX4、p22phox蛋白表达及氧化应激水平变化。结果尾吊3周后,大鼠腹主动脉内皮依赖性舒张反应减弱,NADPH氧化酶抑制剂Apocynin以及超氧化物歧化酶SOD能够部分恢复舒张反应。SUS组腹主动脉活性氧簇(ROS)水平较Con组增高(P<0.05);腹主动脉p22phox蛋白表达悬吊组较对照组增高(P<0.05);NOX4蛋白表达两组间无明显变化。结论氧化应激水平增高可能与模拟失重所致腹主动脉内皮依赖性舒张反应减弱有关。     

回转器模拟微重力对大肠杆菌基因和蛋白表达的影响(英文)

目的研究回转器模拟微重力对革兰氏阴性菌大肠杆菌(Escherichia coli)基因与蛋白表达的影响。方法采用回转器模拟微重力效应,连续2周作用于大肠杆菌ATCC 25922菌株,选取16个靶基因,RT-PCR反应检测处理菌株和对照菌株基因表达的变化;提取菌体蛋白进行双向电泳,电泳图谱采用ImageMaster 2D Platinum软件分析,找出差异表达蛋白,进行基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI TOF/TOF质谱)分析。结果在模拟微重力效应作用下,处理菌株与对照菌株相比,16个靶基因中有4个靶基因表达上调,5个下调;15个差异表达蛋白点,其中4个表达上调蛋白质谱鉴定为抗转录终止蛋白NusG、固氮铁蛋白、硫醇过氧化物酶,1个表达下调蛋白为未知蛋白,2个新增蛋白为谷氨酰胺ABC转运周质蛋白,1个表达消失蛋白为IclR转录调节蛋白家族。结论模拟微重力效应可引起大肠杆菌基因及功能蛋白表达的变化。     

模拟微重力对人脐静脉内皮细胞形态及NO产生的影响

目的探讨回转模拟微重力对人的血管内皮细胞形态、NO产生及一氧化氮合酶表达的影响。方法利用体外培养的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC），采用回转器模拟微重力效应，在微重力条件下培养人脐静脉内皮细胞48h，同时设1g静止培养对照。倒置显微镜下观察细胞生长形态，透射电镜观察HUVEC超微结构。检测不同转速下细胞产生NO的量，及细胞中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达。结果微重力培养后，细胞变圆且重叠生长；回转组NO产生量高于1g对照组且与一定的回转速度呈正相关。回转组细胞eNOS表达较对照组增多且表达iNOS，对照组细胞未表达iNOS。结论微重力对体外人脐静脉内皮细胞的形态，NO产量及NOS的合成都有影响。     

Expression of cytoskeleton genes in culture of human mesenchymal stromal cells in different periods of simulating the effects of microgravity

Simulation of microgravity for cultivated multipotent mesenchymal stromal cells (MSCs) from human marrow changes transiently expression of genes associated with actin cytoskeleton; the effect fades away partially in 120 hrs. following microgravity and completely after 24-hr cell readaptation to static conditions. These changes in expression of some cytoskeleton genes seem to predetermine their reaction to simulated microgravity, and therefore inhibition of MSCs differentiation potential.     

模拟失重对大鼠心肌组织缝隙连接蛋白表达谱的影响

目的 研究模拟失重对大鼠心肌组织缝隙连接蛋白(CX)亚型表达谱的影响,为探讨模拟失重条件下心律失常部分发生机制提供新的实验依据.方法 将20只成年雄性Wistar大鼠随机平均分为正常对照组(Con)及尾部悬吊模拟失重组(SUS),应用电子透射电镜检测大鼠心肌组织超微结构,RT-PCR、Western bloting检测连接蛋白CX37、CX40、CX43、CX45 mRNA及CX40、CX43、CX45蛋白表达水平.结果 与Con组相比,模拟失重可致部分心肌细胞肌纤维变性,线粒体变性、数量减少,胶原增多,局部间隙连接增宽、结构消失.RT-PCR结果显示,SUS组心肌组织CX各亚型mRNA表达水平普遍显著下降,Western bloting结果显示,模拟失重条件下,CX43和CX45蛋白表达水平亦显著下降.结论模拟失重2 wk,大鼠心肌组织超微结构发生明显改变,缝隙连接出现非均质性结构变化,心肌组织缝隙连接蛋白表达谱普遍下调.结果提示,失重可以导致心肌缝隙连接蛋白重构,其可能影响心肌细胞间电兴奋传导的速度及方向,从而使传导阻滞和微折返易于出现,诱发心律失常.     

Binding of alpha-fetoprotein by immobilized monoclonal antibodies during episodes of zero-gravity obtained by parabolic flight.

Alpha-fetoprotein (AFP), a single chain polypeptide which is synthesized by the liver and yolk sac of the human fetus, provided a model ligand for assessing the effects of microgravity on ligand binding to surface-immobilized model receptor molecules. Monoclonal antibodies, used as receptors for AFP, were immobilized by covalent attachment to latex microparticles. Zero gravity environment was obtained by parabolic flight aboard NASA 930, a modified KC-135 aircraft. During the onset of an episode of zero gravity, ligand and receptor were mixed. Timed incubation (20 s) was terminated by centrifugation, the supernatant removed, and microparticles were assessed for bound AFP by immunochemical methods. The extent of binding was not influenced by microgravity, when compared with 1-G controls, which suggests that aberrant cellular activities observed in microgravity are not the simple expression of altered macromolecular interactions.     

回转器模拟微重力对白色念珠菌致病性的影响

目的观察回转器模拟微重力对白色念珠菌致病性的影响。方法回转器处理白色念珠菌SC5314,观察模拟微重力对菌株生长、小鼠的致死能力、小鼠肾脏和大脑的菌落形成、巨噬细胞破坏作用的影响。检测cAMP分子在回转模拟微重力过程中的作用及Gβ-Gα-AC-cAMP信号通路蛋白的基因表达情况。结果回转模拟微重力导致白色念珠菌生长显著加快;对小鼠的致死速度加快;诱导巨噬细胞凋亡的作用显著增强。模拟微重力导致菌株细胞cAMP的水平显著升高;外源性cAMP显著促进菌丝生成,增加其对小鼠的致死率;模拟微重力导致Gβ基因表达显著增加,而其它与cAMP产生的相关基因没有明显变化。结论回转器模拟微重力显著增加白色念珠菌致病性,可能是通过激活Gβ-Gα-AC-cAMP信号转导途径实现的。     

模拟微重力诱导小鼠成骨细胞微丝变化对碱性磷酸酶及骨钙蛋白的影响

目的 研究模拟微重力诱导小鼠成骨细胞微丝结构改变对碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）及骨钙蛋白（osteocalcin,OCN）的影响,探讨失重导致骨质疏松的机制.方法本研究以已建株的小鼠成骨样细胞株（MC3T3-E1）作为对象,以回转器模拟微重力效应.实验将细胞分为4组：模拟微重力组、0.5 μg/ml细胞松弛素B组、模拟微重力＋0.5 μg/ml细胞松弛素B组及正常重力组（对照组）.培养48 h后,利用异硫氰酸荧光素鬼笔环肽（fluoresceine isothiocyanate phalloidin,FITC-phalloidin）进行免疫荧光染色,在激光共聚焦显微镜下观察各组细胞微丝的变化;同时用ALP试剂检测各组细胞培养液内ALP的酶活性,采用ELISA法检测各组细胞裂解液中OCN的表达量.结果 除正常重力组外,其余各组细胞微丝结构都出现了不同程度的解聚,张力纤维减少,失去方向性,以模拟微重力＋0.5 μg/ml细胞松弛素B组改变最为明显.和正常重力组比较,其余各组ALP的酶活性和OCN的表达量均成下降趋势（F=17.23、121.91,P〈0.01）,且模拟微重力＋0.5 μg/ml细胞松弛素B组与模拟微重力组和0.5 μg/ml细胞松弛素B组这两组之间的差别都有统计学意义（P〈0.05）.结论 微重力影响成骨细胞ALP的酶活性及OCN的表达可能与微重力诱导细胞骨架微丝解聚相关.     

模拟微重力条件下昆明小鼠早期胚胎体外发育及其G6PD基因表达

目的 研究模拟微重力条件下培养的小鼠早期胚胎体外发育与1g重力条件下体外发育的差异。方法 检测葡萄糖代谢关键酶6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PD）在昆明小鼠早期胚胎体外不同重力条件下培养各个时期基因的转录与表达。结果 模拟微重力培养条件下，胚胎体外发育受到明显的抑制，模拟微重力不利于小鼠胚胎的体外发育。用CZB＋10％FCS进行培养，2-细胞期培养的囊胚率为零，显著低于常规培养的23．92％；4-细胞期培养的囊胚率为18．44％，显著低于常规培养的80．12％。利用G6PD的内、外两对引物，检测昆明小鼠早期胚胎体外发育各个阶段的G6PD基因的转录与表达。从2-细胞期开始体外常规培养的胚胎，发育至4-、8-细胞胚胎、桑椹胚、囊胚及退化囊胚都有G6PD基因的转录与表达。在模拟微重力条件下，从2-细胞期开始培养的胚胎，发育至4-细胞期、桑椹期、囊胚期胚胎和退化桑椹胚皆有G6PD基因的转录和表达，而退化的2-细胞胚胎没有检测到G6PD基因的转录与表达。结论 两种培养方式之间，G6PD基因的转录与表达不存在差异，说明早期胚胎都存在磷酸戊糖途径。