应激因素对胰腺炎发病的影响

急性胰腺炎是外科常见的急腹症,轻症预后较好,重症病情复杂,总体死亡率达5%[1]。胰腺炎的发生主要是各种病因导致的胰腺腺泡细胞内的蛋白酶激活及产生许多炎症刺激因子。这些腺泡细胞内的一系列变化(形成含有一定消化酶含量和溶酶体水解酶大液泡,最后发生坏死)与腺泡细胞的形态改变有关,这些改变已经在由蛙皮素诱导的胰腺炎动物模型上被观察到,同样这些变化也发生于人体的胰腺炎。受损的胰腺细胞释放的趋化因子能引起炎性细胞的     

RIP3蛋白在重症急性胰腺炎小鼠胰腺组织中表达

目的观察胰腺组织受体相互作用蛋白3(RIP3)的表达变化,初步探讨RIP3与胰腺细胞坏死的关系。方法建立重症急性胰腺炎小鼠模型,HE染色观察胰腺组织形态,应用免疫组化法测定RIP3蛋白的表达。结果对照组及研究组胰腺组织结构清晰,细胞形态正常,无出血坏死。研究组小鼠6 h呈现水肿胰腺炎改变;12、24 h胰腺小叶结构紊乱,明显充血,腺泡细胞坏死,坏死区周围炎细胞侵润。免疫组化显示,对照组RIP3胰腺组织阴性表达;研究组RIP3表达随着时间推移逐渐增强,12、24 h研究组RIP3蛋白表达较对照组显著升高;免疫组化平均光密度值示3 h与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);6、12、24 h与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RIP3蛋白可能在胰腺细胞坏死过程中具有重要作用。     

凋亡相关基因Bax、Bcl-2在大鼠急性胰腺炎中的表达

1　引言　　近年来在急性胰腺炎动物实验研究中发现 ,腺泡细胞死亡存在两种不同的方式 :坏死和凋亡。凋亡很少甚至完全不引起炎症反应[1] ,而坏死则伴随剧烈的炎症反应。细胞凋亡对胰腺具有保护作用 ,与急性胰腺炎的严重程度呈负相关 [2 ] 。我们用大鼠制作两种不同程度的急性胰腺炎模型 ,检测凋亡调控基因 Bax、Bcl- 2蛋白的表达程度 ,进一步探讨细胞凋亡在急性胰腺炎发生发展中的作用和地位。2　材料和方法2 .1　材料雄性 S- D大鼠 30只 ,体重 30 0～ 40 0 g,购自南方医院动物所 ;蛙皮素 ( Caerulein)、牛磺胆酸钠( sodium taurocholate…     

一次性力竭运动对小鼠肝脏和骨骼肌内质网应激的影响

目的:观察一次性力竭运动对小鼠肝脏和骨骼肌组织内质网应激的影响。方法:16只雄性C57/BL6小鼠随机分为安静组和运动组,每组8只。运动组进行一次性力竭游泳,4小时后取材;安静组不运动,取材时间和方法同运动组。测定肝脏和股四头肌内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、磷酸化和非磷酸化的双链RNA依赖的蛋白激酶样内质网类激酶[double-stranded RNA-dependent protein kinase(PKR)-like ER kinase,PERK]、磷酸化和非磷酸化的肌醇需酶1(inositol requiring enzyme 1,IRE1)的蛋白表达量及GRP78、剪切型的X盒结合蛋白1(X box binding protein 1 splicing,XBP1s)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、生长停滞和诱导DNA损伤基因34(growth arrest and DNA damage-inducible gene 34,GADD34)mR-NA的表达量,测定血糖、肝糖原和肌糖原水平,光镜下对肝脏和骨骼肌组织进行形态学观察。结果:与安静组相比,运动组肝脏和股四头肌内质网应激标志性蛋白GRP78、p-PERK/PERK、p-IRE1/IRE1及GRP78、XBP1s、CHOP、GADD34的mRNA表达均显著增加(P<0.01),血糖、肝糖原和肌糖原均显著下降(P<0.05)。运动组糖原含量与内质网应激标志物表达量呈负相关(P<0.01),部分肝细胞胞浆水肿。结论:一次性力竭性游泳可引起内质网应激增强。肝糖原和肌糖原的储备和消耗可能与内质网的应激程度有关。     

急性胰腺炎34例血清β-半乳糖苷酶活性水平变化及其意义分析

急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是常见急腹症,轻型时胰腺充血、水肿;严重者胰腺组织出血、坏死,并引起全身炎性反应综合征,甚至多脏器功能衰竭,病死率高达20%~40%[1,2]。维生素D结合蛋白(vitamin D binding protein,DBP)是分子量为51~58 ku的多功能血浆糖蛋白,多项研究发现,DBP水平与胰腺炎的病情相关,且在多种疾病(如脓毒血     

胰腺腺泡细胞癌的影像学表现与病理对照

目的：分析胰腺腺泡细胞癌（ACC）的CT和MRI表现,以提高对该病影像表现的认识。方法：回顾性分析经手术病理证实的胰腺腺泡细胞癌4例的CT和MRI表现,并与病理结果对照分析。结果：胰腺腺泡细胞癌均为单发肿瘤,肿瘤平均最大径为4.9 cm,2例位于胰头部,2例位于胰腺体尾部。3例形态不规则,呈浸润性生长;1例呈卵圆形,见完整包膜。4例肿瘤均以实性成分为主,1例可见出血,CT或MRI增强扫描各期实性成分轻度强化,其强化程度均低于周围胰腺组织,包膜强化。2例伴胰管扩张,其中1例伴低位胆管梗阻,1例伴肝转移。镜下见肿瘤细胞被细薄的纤维血管间质分隔呈腺泡状或条索状排列。结论：胰腺腺泡细胞癌的CT和MRI表现具有一定的特征性,认识该病的影像表现有助于正确诊断。     

胰腺腺泡细胞癌1例

<正>胰腺腺泡细胞癌是一种胰腺外分泌恶性肿瘤,临床较少见,最初由Berner于1908年报道,发病率仅占所有胰腺肿瘤的1%[1],与常见的胰腺导管腺癌的临床表现及影像学特征有较大不同,术前容易误诊。笔者搜集经手术病理证实的胰腺腺泡细胞癌1例,结合文献,分析本病的影像表现及病理基础,以提高对其认识和影像诊断水平。男,42岁,于1周前开始出现中上腹痛,主要为隐痛,不     

应激状态下胃粘膜耐受性细胞保护中表皮生长因子及其受体的免疫组化研究

采用重复浸水束缚应激制作动物模型,大体及光镜下动态观察粘膜损伤程度及组织学的变化,应用免疫组织化学方法动态监测胃粘膜表皮生长因子（ＥＧＦ）及其受体（ＥＧＦＲ）表达水平的变化。结果显示：①单次应激后腺胃区可见广泛的点、线状出血坏死灶,粘膜明显充血水肿。镜下见出血性坏死呈火山口状,几达粘膜肌层;粘膜下层充血水肿。重复应激后,出血性坏死灶明显减少、变浅,粘膜下层充血水肿减轻,同时粘膜细胞呈现出活跃的增殖状态。②ＥＧＦ主要位于正常粘膜增殖带细胞的胞浆内,腺底部较弱;ＥＧＦＲ则定位于粘膜增殖带细胞的胞浆及胞膜,以胞膜为主。单次应激使上述２种细胞因子的表达均明显减弱,坏死区表达缺失。重复应激后,ＥＧＦ及ＥＧＦＲ的表达明显增强,而且除了粘膜增殖带外,在粘膜的其它部位（包括胃腺腔内）亦有较强的表达。提示单次应激可引起严重的胃粘膜损伤,但重复应激后粘膜损伤逐渐减轻,表明粘膜产生了耐受性。胃粘膜耐受性细胞保护作用伴有粘膜细胞的增殖反应,这一反应是通过ＥＧＦ与ＥＧＦＲ的结合而介导的。     

低温暴露诱导卵巢组织TNF⁃α表达水平上调的信号转导机制

目的 探讨低温暴露对卵巢组织炎性因子表达的影响及相关分子机制.方法 将6～8周龄雌性小鼠随机分为对照组以及低温暴露组,暴露后取卵巢组织,通过RT?PCR方法检测炎性因子表达水平,Western印迹法检测炎性反应相关蛋白的表达变化及活化情况.体外培养SKOV3细胞,进行温和冷暴露(35℃),通过RT?PCR和Western印迹法检测炎性因子和炎性反应相关蛋白的表达水平及活化情况.结果 低温暴露后卵巢的组织局部出现肿瘤坏死因子(TNF?α)表达水平的显著上调,炎性转录因子NF?κB p65活化.体外培养的SKOV3卵巢癌细胞经温和冷刺激后,同样能观察到TNF?α表达水平的显著上调和炎性转录因子NF?κB p65的诱导活化;在SKOV3细胞中转染NF?κB p65 siRNA后,可显著抑制TNF?α的诱导表达.结论 低温暴露通过诱导卵巢组织NF?κB p65活化介导炎性因子TNF?α上调及炎症反应.     

共培养系统下骨髓间充质干细胞分化为颌下腺腺泡细胞的实验研究

目的 研究使用共培养系统将骨髓间充质于细胞分化为有分泌功能的颌下腺腺泡细胞的可行性.方法 分离成年SD大鼠骨髓间充质干细胞于体外培养、纯化和鉴定,同时分离新生SD大鼠的颌下腺细胞于体外培养、纯化和鉴定,取颌下腺腺泡细胞第二代和间充质干细胞第一代置于共培养系统诱导干细胞定向分化.使用免疫细胞化学法分析骨髓间充质干细胞是否表达淀粉酶抗体.结果 纯化后的颌下腺腺泡细胞呈铺路石样形态,原代至第5代培养基及细胞内均可检测到淀粉酶表达;体外培养的骨髓间充质干细胞呈梭形,呈束状、漩涡状排列,可成功诱导成脂肪细胞,油红-O染色显示含有脂滴;共培养后的骨髓间充质干细胞表达淀粉酶抗体,约30%的骨髓间充质干细胞在共培养1周后转化为腺泡细胞,约50%的骨髓间充质干细胞在共培养2周后转化为腺泡细胞.结论 成功构建大鼠颌下腺腺泡细胞和骨髓间充质干细胞的体外培养体系,并证明大鼠骨髓间充质干细胞具有转化为腺泡细胞的能力,因此骨髓间充质干细胞将有望应用于涎腺组织工程.     

醋酸铅对人肾小球系膜细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的探讨醋酸铅对人肾小球系膜细胞(HRMC)凋亡及Caspase-3表达的影响。方法取对数生长期的HRMC,分别采用含0、5、10、20μmol/L醋酸铅的完全培养液培养,于6、12、24、48h后以MTT法检测细胞增殖情况,并于培养24h后采用Hochest33342-PI染色法观测细胞的形态学变化,RT-PCR检测Caspase-3 mRNA的表达,细胞免疫化学法和Western blotting检测Caspase-3蛋白的表达。结果与对照组(0μmol/L)相比,5、10、20μmol/L的醋酸铅可不同程度地抑制HRMC的增殖(P<0.01)。Hochest33342-PI染色显示醋酸铅作用后HRMC呈凋亡形态学改变,细胞数量减少,核染色质凝集,核膜破裂。RT-PCR显示醋酸铅作用后Caspase-3 mRNA表达升高。细胞免疫化学和Western blotting检测显示醋酸铅作用后Caspase-3蛋白表达升高。结论醋酸铅可促进人肾小球系膜细胞凋亡,Caspase-3参与了该过程。     

游泳训练对大鼠腓肠肌铁代谢相关蛋白表达的影响

目的:研究游泳训练后大鼠腓肠肌二价金属离子转运体1(divalent metal transporter 1, DMT1)、转铁蛋白受体(transferrin receptor, TfR)及膜铁转运蛋白1(ferroportin1, FPN1)表达的变化,探究运动对腓肠肌铁代谢的影响机制.方法:40只雌性SD大鼠随机分为对照组和游泳训练组,分别于游泳训练5周及10周后取材,测定血清铁状态、腓肠肌非血红素铁含量,采用Western Blot方法检测腓肠肌铁代谢相关蛋白表达的变化.结果:(1)游泳训练5周及10周组大鼠血清铁、Hb及RBC均较对照组显著升高,游泳运动10周组大鼠腓肠肌非血红素铁含量显著增加(P<0.01);(2)游泳训练组大鼠腓肠肌DMT1(IRE)和TfR表达增加,FPN1表达减少(P<0.05),而DMT1(non-IRE)表达无明显变化.结论: 游泳训练可以增加腓肠肌非血红素铁含量,促进机体铁动员.这可能与腓肠肌细胞膜上向胞内转运铁的TfR和DMT1(IRE)蛋白表达增加,而向胞外转运铁的FPN1表达下降有关.     

缺氧诱导乳鼠心肌细胞内质网应激的时效性观察

目的 研究不同缺氧时间心肌细胞内质网应激蛋白的表达变化,探讨内质网应激在心肌细胞凋亡中所起的作用.方法 将体外培养的乳鼠心肌细胞随机分为0h(对照组)及缺氧6、l2、18、24、30h组,缺氧组通入95％N,及5％ CO2混合气体进行不同缺氧时间处理,对照组在常氧状态下培养,不给予缺氧刺激.采用Western blotting检测内质网应激蛋白GRP78、CHOP及Caspase-12的表达变化,采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况.结果 对照组GRP78蛋白有一定量的基础性表达,缺氧6h后蛋白表达呈上升趋势,缺氧12h时表达显著增加(P＜0.05),缺氧18h时表达至高峰,但随着缺氧时间延长(＞18h)GRP78表达呈下降趋势.缺氧12h内质网应激蛋白CHOP、Caspase-12蛋白开始表达,缺氧18～30h呈持续升高(P＜0.05).流式细胞术检测显示,缺氧12h即出现典型的细胞凋亡特征,缺氧18、24、30h组心肌细胞凋亡数量明显增多,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 内质网应激在心肌细胞缺氧不同时期发挥不同的作用.     

急性有氧运动对糖尿病大鼠肝脏和胰腺内质网应激蛋白和血糖的影响

目的:探讨急性有氧运动对糖尿病大鼠肝脏和胰腺内质网应激蛋白和血糖的影响,为糖尿病的运动疗法提供参考。方法:SPF级雄性SD大鼠55只,高脂饲料喂养配合腹腔注射小剂量链脲佐菌素制备2型糖尿病大鼠动物模型后,随机分为安静组(DM)和大、中、小三个强度有氧运动组(HIE-1、MIE-1、LIE-1),三个有氧运动组进行急性跑台运动,其运动速度分别为20 m/min、15 m/min和10 m/min,相当于70%VO2max、50%VO2max和30%VO2max负荷强度,持续运动1 h。运动后即刻检测空腹血糖(FBG)、糖化血清蛋白(GSP)、空腹胰岛素(Ins)、肝脏和胰腺的GRP78和caspase-12含量,并计算胰岛素抵抗指数(IRI)、胰岛素敏感指数(ISI)和β细胞功能指数(HBCI)。结果:各运动组糖尿病大鼠急性运动后血清空腹胰岛素较安静组均显著下降(P<0.01,P<0.01,P<0.05),胰岛素抵抗指数显著降低,胰岛素敏感指数显著升高,其中,大、中强度运动组变化有统计学意义(P<0.01)。中、小强度运动组肝脏和胰腺内质网应激蛋白GRP78和caspase-12较安静组均显著降低。结论:急性有氧耐力运动可降低糖尿病大鼠血糖水平,增强胰岛素敏感性,降低内质网过度应激状态,其机制可能与内质网应激蛋白参与调节有关。     

外周血多形核白细胞凋亡情况及生存率与急性胰腺炎严重程度相关性研究

目的研究急性胰腺炎大鼠模型外周血多形核白细胞即中性粒细胞(PMN)的凋亡情况及生存率与急性胰腺炎严重程度的关系。方法采用在大鼠胰胆管共同通道内逆行注射不同浓度的脱氧胆酸钠,制备不同严重程度的急性胰腺炎模型。18只SD大鼠随机分为对照组、模型1组(0.75%脱氧胆酸钠剂量组)、模型2组(1.5%脱氧胆酸钠剂量组)。分别于造模后6 h处死各组存活大鼠。观察各组大鼠的胰腺组织病理学变化、组织病理学评分,血清、腹水淀粉酶水平,腹水量及外周血清IL-6、IL-8水平。同时用TUNEL法分析外周血多形核白细胞凋亡情况,用流式细胞分析法分析外周血多形核白细胞存活率。并与急性胰腺炎严重程度各项指标进行统计学相关分析。结果模型1组大鼠较模型2组大鼠胰腺组织坏死及出血程度轻,组织病理学评分低,腹水及血清淀粉酶水平低,腹水量相对少,外周血清IL-6,IL-8水平低;病变程度较轻的模型1组大鼠外周血多形核白细胞凋亡指数比病变重的模型2组大鼠高(30±6 vs 20±4P<0.05);病变程度较轻的模型1组大鼠外周血多形核白细胞存活率比病变重的模型2组大鼠低[(56.12±4.21)%vs(67.15±5.11)%,P<0.05]。结论急性胰腺炎时,外周血多形核白细胞凋亡指数与急性胰腺炎严重程度呈负相关,外周血多形核白细胞存活率与急性胰腺炎严重程度呈正相关。     

小檗碱对果糖诱导人肾小管细胞内质网应激PERK凋亡通路的影响

目的 探讨小檗碱对果糖诱导下肾小管上皮细胞凋亡的影响.方法 人肾小管上皮细胞株(HK-2细胞)于含10%胎牛血清的DMEM培养基中进行体外培养,然后随机分为正常组(C组)、果糖组(F组,含25mmol/L果糖培养液)、小檗碱组(B组,25mmol/L果糖+10μmol/L小檗碱)和TUDCA组(T组,25mmol/L果糖+2μmol/L TUDCA培养液).培养24h后收集细胞,Western blotting检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CHOP蛋白表达水平及蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核启始因子2α(eIF2α)的磷酸化水平,流式细胞仪检测各组细胞周期情况,TUNEL法检测各组细胞凋亡率.结果 与C组比较,F组GRP78、CHOP蛋白表达水平上调,同时p-PERK、p-eIF2α水平明显上升(P<0.05);与F组比较,B组、T组GRP78、CHOP、p-PERK、p-eIF2α表达水平均明显下降(P<0.05);T组与B组GRP78、CHOP、p-PERK、p-eIF2α表达水平比较无明显差异.与C组比较,F组HK-2细胞活力明显降低,细胞凋亡指数明显升高(P<0.05);与F组比较,B组和T组肾小管上皮细胞活力明显增加,细胞凋亡指数明显下降(P<0.05);T组B组细胞活力指数、细胞凋亡率比较无明显差异.结论 持续采用果糖培养HK-2细胞可激活细胞内PERK通路,引起内质网应激的发生,小檗碱能够抑制果糖诱导的PERK和eIF2α的磷酸化,下调GRP78、CHOP表达,从而调控PERK通路缓解细胞周期阻滞现象,降低细胞凋亡率.     

丁酸钠对肝癌Hep G_2细胞株Bcl-2表达的影响

目的：研究丁酸钠（NaB）引起HepG2细胞凋亡的作用及其分子机制。方法：用不同浓度丁酸钠处理HepG2细胞后，用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测Bcl-2mRNA的表达丰度；Hochest3342核染色后观察HepG2细胞核凋亡形态的变化；原位切口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果：丁酸钠在mRNA水平明显抑制Bcl-2基因的转录；荧光显微镜下可见丁酸钠处理后细胞核出现高度凝聚、边缘化，并可见凋亡小体出现；TUNEL法证明出现细胞凋亡。结论：丁酸钠通过下调Bcl-2的转录和表达，诱导肝癌HepG2细胞的凋亡。     

Ultrasonography of the gallbladder in acute pancreatitis

The sonographic appearance of the gallbladder in 52 patients with acute pancreatitis (AP) was evaluated and compared with the findings in acute cholecystitis (AC) and in normal gallbladder (N). The mean gallbladder wall thickness in the AP group, 3.2 mm, was significantly different from the thickness in the N group, 2.3 mm (p less than 0.001), and from that in the AC group, 5.2 mm (p less than 0.001). Wall edema, distension, tenderness (sonographic Murphy sign) and pericholecystic fluid collections were occasional findings in AP, and were not seen in normal gallbladders. A significant difference between the AP and AC groups was found in the prevalence of maximal local tenderness of the gallbladder (in only 2/52 in AP, but in 28/31 in AC).     

Irreversible Electroporation versus Radiofrequency Ablation: Comparison of Systemic Immune Responses in Patients with Hepatocellular Carcinoma

PurposeIrreversible electroporation (IRE) differs from thermal radiofrequency (RF) ablation, especially in terms of the reparative process in the ablation zone induced. To elucidate this, the systemic immune responses after 2 mechanistically different types of ablation (IRE and RF ablation) were evaluated in patients with hepatocellular carcinoma (HCC).Materials and MethodsTwenty-one patients with HCC who underwent either RF ablation (n = 11) or IRE (n = 10) were studied. Peripheral blood samples were collected from all patients at 4 timepoints: before ablation, within 1 hour after ablation, 1 day after ablation, and 4 days after ablation. The phenotypes and functions of immune cells in peripheral blood and serum levels of cytokines and chemokines were monitored and analyzed using the mixed-effects model. Follow-up radiological images were also obtained to assess temporal changes in the ablation zone.ResultsThe most significant difference was seen in the levels of macrophage migration inhibitory factor (MIF) in the IRE group compared to the RF ablation group (P = .0011): the serum levels of MIF in the IRE group significantly increased immediately after IRE and then rapidly decreased to the pre-ablation range 1 day after IRE, but, in contrast, no consistent trend was observed in the RF ablation group. The axial diameter (P = .0009) and area (P = .0192) of the ablation zone of IRE were significantly smaller than those of RF ablation 1 year after ablation.ConclusionsIRE was found to be associated with a significant early increase in MIF levels, which may facilitate the early reparative process and result in significant shrinkage of the ablation zone.