沉默CDK7通过下调YAP表达诱导子宫内膜癌细胞凋亡

目的 研究沉默细胞周期蛋白依赖性激酶7（CDK7）诱导Yes相关蛋白（YAP）表达下调对子宫内膜癌HEC-1-A细胞凋亡的影响。方法 利用siRNA干扰技术沉默HEC-1-A细胞中CDK7的表达，采用qPCR和Western blotting检测siRNA干扰后CDK7的表达水平，CCK-8实验检测沉默CDK7对HEC-1-A细胞活力的影响，流式细胞术检测沉默CDK7对HEC-1-A细胞凋亡的影响，Western blotting检测沉默CDK7对YAP和磷酸化YAP蛋白及其下游蛋白Cyr16、CTGF表达的影响，凋亡实验检测共转染si-CDK7和pcDNA3.1-YAP对细胞凋亡的影响。结果 转染si-CDK7后，HEC-1-A细胞中CDK7 mRNA和蛋白表达水平均显著下降（P<0.01），细胞活性显著降低（P<0.01），细胞凋亡率显著升高（P<0.01），YAP和磷酸化YAP蛋白及其下游蛋白Cyr16、CTGF表达水平明显下降（P<0.01）；共转染pcDNA3.1-YAP可逆转沉默CDK7导致的细胞凋亡（P<0.01）。结论 沉默CDK7可诱导YAP蛋白表达下调，促进子宫内膜癌HEC-1-A细胞凋亡。     

八子补肾胶囊对快速衰老小鼠视网膜的保护作用

目的 研究八子补肾胶囊（BZBS）对快速衰老小鼠视网膜的保护作用。方法 将快速衰老小鼠SAMP6随机分为模型组和BZBS（2.8 g·kg^-1）组,取抗快速老化SAMR1小鼠作为同源对照（对照组）,每天ig给药1次,对照组与模型组ig 0.9%氯化钠溶液,连续给药9周。HE染色观察视网膜组织病理变化;试剂盒法检测各组小鼠视网膜组织总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平;Western blotting法检测各组小鼠视网膜组织中衰老蛋白P21、P16和自噬蛋白P62、LC3 II/I表达水平。结果 与对照组相比,模型组小鼠视网膜外节段呈现空泡样改变,内外核层细胞数量减少且排列不连续,中间的丛状层变薄;T-AOC、SOD水平显著下降,MDA水平显著上升（P<0.001）;衰老蛋白P16、P21表达显著上调（P<0.001）,自噬蛋白P62、LC3 II/I表达显著下调（P<0.001）。与模型组比较,BZBS组小鼠视网膜病理改变得到明显缓解;T-AOC、SOD水平均显著上升,MDA水平显著下降（P<0.05、0.01）;衰老蛋白P16、P21表达显著下调（P<0.001）,自噬蛋白P62、LC3 II/I表达均显著上调（P<0.05、0.01）。结论 BZBS对快速衰老小鼠视网膜有保护作用,能够减少视网膜病理改变,降低衰老蛋白表达,提高视网膜抗氧化水平;其作用机制可能与激活p62-LC3 II/I从而增强自噬有关。     

7-羟乙基白杨素对低压低氧致脑组织损伤的保护作用

目的 研究7-羟乙基白杨素（7-HEC）对低压低氧诱导大鼠脑组织损伤的保护作用。方法 将52只健康♂ Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、乙酰唑胺组、7-HEC组，每组13只。连续灌胃给药5 d，末次给药后，除正常组，将其余3组置于低压低氧动物实验舱，升至8 000 m海拔缺氧处理24 h。HE染色观察脑组织病理改变，酶标法检测脑组织中过氧化氢（H₂O₂）和丙二醛（MDA）水平，以及超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和ATP酶的活力；Western blotting检测蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白抗体（Bax）及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（caspase-3）的表达。结果 与正常组相比，低压低氧导致大鼠脑组织出现明显损伤，H₂O₂和MDA水平显著升高，抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px以及Na⁺-K⁺-ATPase和Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase的活力显著降低。7-HEC预处理能够逆转这些变化。此外，低压低氧能够显著升高脑组织中促凋亡蛋白Bax和cleaved caspase-3表达，降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，而7-HEC能够下调Bax和cleaved caspase-3表达，上调Bcl-2的表达。结论 7-HEC对低压低氧致脑组织损伤具有明显的保护作用，其作用机制可能与其缓解氧化应激，抑制细胞凋亡，改善能量代谢有关。     

铁皮石斛多糖对缺氧/复氧诱导星形胶质细胞AMPK/ULK1通路相关自噬的影响

目的 探讨铁皮石斛多糖对缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation，H/R）诱导星形胶质细胞腺苷酸激活蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase，AMPK）/UNC-51类似自噬激活激酶1（UNC-51 like autophagy activating kinase 1，ULK1）通路相关自噬的影响。方法 体外培养人星形胶质细胞，分为对照组、H/R组（H/R建模）、低浓度铁皮石斛多糖组（H/R建模+100 μg·mL^-1铁皮石斛多糖）、中浓度铁皮石斛多糖组（H/R建模+200 μg·mL^-1铁皮石斛多糖）和高浓度铁皮石斛多糖组（H/R建模+400 μg·mL^-1铁皮石斛多糖）。MTT法检测细胞增殖情况；流式细胞仪检测细胞凋亡情况；试剂盒测定细胞中丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）水平；Western blotting检测细胞中p-AMPK、AMPK、p-ULK1、ULK1、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3（light chain 3，LC3） I、LC3 Ⅱ蛋白表达情况。结果 与对照组相比，H/R组星形胶质细胞存活率、细胞中SOD水平及LC3 I/LC3 Ⅱ蛋白表达水平显著降低（P<0.05），细胞凋亡率、细胞中MDA水平及p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1、Beclin1蛋白表达水平显著升高（P<0.05）；随着铁皮石斛多糖的处理及处理浓度的升高，星形胶质细胞存活率、细胞中SOD水平及LC3 I/LC3 Ⅱ蛋白表达水平显著升高（P<0.05），细胞凋亡率、细胞中MDA水平及p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1、Beclin1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论 铁皮石斛多糖对H/R诱导的星形胶质细胞AMPK/ULK1通路激活及自噬具有抑制作用，可促进细胞存活并减少细胞凋亡。     

基于CXCL12/CXCR4轴探讨琥珀散含药血清促进子宫内膜异位症患者经血源间充质干细胞自噬活性的作用机制

目的 基于CXCL12/CXCR4轴探讨琥珀散对子宫内膜异位症（EMT）经血源间充质干细胞（MenSCs）自噬活性的调控作用。方法 从EMT患者和健康女性志愿者的月经血中分离提取EMT MenSCs（E-MenSCs）和正常MenSCs（HMenSCs）。采用12只7周龄雄性SD大鼠制备空白血清和含药血清（ig给予大鼠琥珀散9.9 g·kg^-1,临床等效剂量）。将细胞分为3组：对照组（H-MenSCs）、模型组（E-MenSCs）和琥珀散组（E-MenSCs）,对照组和模型组使用20%空白血清干预,琥珀散组使用20%含药血清干预,均干预48 h。分别采用CCK-8法、透射电镜、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Westernblotting法检测3组细胞的细胞活力、自噬体和自噬溶酶体表达、CXCL12和CXCR4的mRNA水平和CXCL12/CXCR4及自噬标志分子（Beclin1和LC3Ⅱ）的蛋白表达量。结果 与对照组比较,模型组的细胞活力、CXCL12和CXCR4的mRNA和蛋白表达水平均显著提高（P<0.05、0.01、0.001）,自噬体和自噬溶酶体数量、Beclin1和LC3Ⅱ的蛋白表达均显著降低（P<0.05、0.01）;与模型组比较,琥珀散组的细胞活力、CXCL12和CXCR4的mRNA及蛋白表达水平均显著下调（P<0.05、0.01、0.001）,自噬体和自噬溶酶体数量、Beclin1和LC3Ⅱ的蛋白表达均显著上调（P<0.05、0.01、0.001）。结论 琥珀散含药血清能够上调E-MenSCs自噬活性,其作用机制可能与其抑制CXCL12/CXCR4轴有关。     

基于PARP在胃癌中的作用探讨胃复春胶囊对SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的 分析胃癌患者中多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）族基因的表达情况及其与预后的关系,体外细胞实验研究胃复春胶囊醇提物（WFCEE）对胃癌SGC-7901细胞及PARP表达的影响。方法 基于TCGA/GTEx/GEO数据库分析PARP族基因表达及预后,蛋白互作网络分析PARP族基因的主要生物功能,并采用MCODE联合cytoHubba预测核心基因及其作用通路。将SGC-7901细胞与WFCEE（10、20、50 μg·mL^-1）共孵育,采用CCK-8细胞增殖与活性检测试剂盒检测细胞活力,流式细胞术Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡,Western blotting法检测PARP及凋亡相关蛋白表达情况。结果 与正常组比较,胃癌患者PARP1、PARP4、PARP6、PARP9等基因表达有显著性差异;K-M曲线生存预后分析显示PARP平均表达量低组患者生存率高、中位生存时间更长。蛋白互作分析显示PARP家族主要与蛋白质ADP-核苷酸化、戊糖基团转移酶活性、糖基团转移酶活性、染色体上蛋白质定位、正或负向调节DNA代谢过程等过程相关,其中PARP1、PARP2、PARP3、PARP9、PARP10、PARP12、PARP14为核心基因,调节碱基切除修复、细胞凋亡、坏死性凋亡等信号通路。与对照组比较,WFCEE可时间、剂量相关性地抑制SGC-7901细胞活力并诱导凋亡（P＜0.05、0.01） ;20、50 μg·mL^-1组PARP蛋白表达量显著降低（P＜0.05）;各浓度组cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、Bax蛋白表达量显著增加（P＜0.01、0.001）,Bcl-2蛋白表达量显著降低（P＜0.01、0.001）。结论 PARP在胃癌组表达与正常组比较存在显著差异,并且与预后相关性显著,在胃癌临床应用方面有一定的价值;WFCEE可抑制胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与Bax/Bcl2-caspase3/9-PARP路径相关。     

氧化苦参碱介导细胞自噬减轻溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜氧化性损伤的作用机制研究

目的 探讨氧化苦参碱介导细胞自噬减轻溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）小鼠结肠黏膜氧化性损伤的作用机制。方法 采用2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠复制小鼠UC模型,将造模成功小鼠按体质量随机分为模型组、氧化苦参碱组（50 mg·kg^-1·d^-1,ig）、羟基氯喹组（50 mg·kg^-1·d^-1,ig）、氧化苦参碱+羟基氯喹组,另设正常组,每组10只。治疗1周后测定各组小鼠疾病活动度（disease activity,DAI）、结肠质量系数及病理形态;MitoSOX Red法测定结肠ROS含量,ELISA法测定结肠组织SOD、MDA、MPO、GSH-PX含量;透射电镜结合免疫荧光观测结肠细胞自噬程度,Western blot测定Atg5和Beclin-1蛋白表达。结果 与模型组和羟基氯喹组比较,氧化苦参碱组小鼠DAI和结肠质量系数均有显著减小（P<0.01）,结肠病理损伤明显减轻;ROS、MDA和MPO含量极显著降低（P<0.01）,SOD和GSH-PX含量极显著增加（P<0.01）;结肠黏膜细胞自噬,程度显著增强,Atg5和Beclin-1蛋白表达极显著上调（P<0.01）。结论 氧化苦参碱可促进UC小鼠细胞自噬,减轻小鼠结肠黏膜氧化性损伤。     

艾地苯醌对帕金森病小鼠行为学改善的作用及其机制

目的 研究艾地苯醌对于1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）诱导的帕金森病小鼠行为学改善的作用及可能的机制。方法 将小鼠分为对照组,模型组,艾地苯醌高、低剂量组。除对照组外,其余组别连续1周注射20 mg·kg^-1的MPTP诱导小鼠帕金森病,低剂量组小鼠每日给予艾地苯醌5 mg·kg^-1,高剂量组小鼠每日给予艾地苯醌10 mg·kg^-1,模型组给予等体积的生理盐水,连续干预14 d,对照组小鼠常规饲养。小鼠行为学实验采用旷场实验、爬杆实验、转轮实验、游泳实验、悬挂实验。免疫组化法检测小鼠黑质酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）的表达,Nissl染色检测小鼠中脑蛋白合成能力,MDA、SOD试剂盒检测小鼠黑质氧化损伤的水平,TUNEL染色检测小鼠黑质神经元的凋亡,免疫荧光法检测小胶质细胞IBA-1的表达,Western blot检测小鼠黑质中Bax、Bcl-2、caspase-9的表达。RT-QPCR检测线粒体DNA拷贝数mt-ND1以及线粒体DNA复制关键转录因子POLG1、POLG2、TFAM的mRNA表达水平。ELISA法检测小鼠外周血中炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6的表达水平。结果 模型组小鼠的运动能力相比对照组显著下降,且平衡感受到严重影响。艾地苯醌干预后,小鼠行为学得到显著改善,相比模型组具有显著性差异（P<0.05）。相比对照组,模型组小鼠黑质中TH、SOD的表达显著下调（P<0.05）、神经元凋亡率和MDA、IBA-1的水平显著上调（P<0.05）,外周血中炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6的表达水平显著上调（P<0.05）,Bax、caspase-9表达上调,DNA拷贝数以及相关转录因子表达下调。与模型组相比,艾地苯醌可以提高黑质中TH和SOD的表达,下调黑质中神经元凋亡率、IBA-1的表达以及外周血炎症因子水平,下调凋亡相关蛋白Bax、caspase-9,上调Bcl-2的表达,提高DNA的拷贝数和相关转录因子的表达。结论 艾地苯醌可以改善帕金森病小鼠的行为学,其机制和抗氧化应激损伤、抑制线粒体凋亡信号、改善线粒体损伤有关。     

槐耳颗粒联合DC-CIK细胞对乳腺癌MDA-MB-231干细胞体内外杀伤作用研究

目的 探究白屈菜红碱（CHE）对腺样囊性癌细胞（ACC2）生长的抑制作用及机制。方法 利用CCK8法、EdU法、Hoechst33342/PI双染色法、试剂盒法检测CHE对ACC2细胞活力、细胞增殖、细胞凋亡和活性氧（ROS）水平的影响;通过Western blotting技术检测CHE对Cleaved-Caspase 3、PARP、NF-κB、p-JNK、p-p38蛋白表达的影响;利用斑马鱼移植瘤模型检测CHE对斑马鱼体内ACC2细胞生长的抑制作用。结果 CCK-8结果显示：与对照组比较,2、3、4、5、6、7、8、9、10 μmol/L的CHE显著降低ACC2细胞的存活率（P<0.05、0.01）,且呈浓度相关性; ROS检测结果显示：与对照组比较,5、8 μmol/L的CHE导致ACC2细胞内的ROS水平显著上升（P<0.05、0.01）; EdU增殖检测结果表明：与对照组比较,5、8 μmol/L的CHE致使ACC2细胞的增殖能力显著下降（P<0.01）;Hoechst/PI染色结果显示：与对照组比较,CHE 5、8 μmol/L组ACC2细胞凋亡率显著上升（P<0.01）。抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）显著抑制CHE诱导的ROS水平升高、细胞凋亡增加（P<0.01）;Western blotting结果显示：2、5、8 μmol/L的CHE能够显著上调Cleaved-Caspase 3、PARP、NF-κB蛋白的表达（P<0.01）,且呈现浓度相关性,5、8 μmol/L的CHE能够显著上调p-JNK的蛋白表达（P<0.01）,8 μmol/L的CHE能够显著上调p-p38的蛋白表达（P<0.01）;NAC显著降低由CHE导致的Cleaved-Caspase 3、PARP、NF-κB、p-JNK、p-p38蛋白表达增加（P<0.01）,5、8 μmol/L CHE能够有效抑制斑马鱼体内肿瘤的生长（P<0.01）。结论 体外及斑马鱼移植瘤模型证明,CHE可以有效抑制ACC2细胞生长,其机制与提高细胞ROS水平,上调NF-κB、p-JNK、p-p38表达,从而抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡相关。     

大蒜素联合顺铂对人宫颈癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨大蒜素联合顺铂对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用并探讨其机制。方法取对数生长期HeLa细胞，设对照组、大蒜素（50 μg/mL）组、顺铂（5 μg/mL）组、联合给药组（大蒜素50 μg/mL+顺铂5 μg/mL）。药物干预48 h后，通过MTT法检测细胞增殖抑制率，运用CompuSyn软件计算大蒜素与顺铂联合指数（CI），流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡水平，Western blotting法检测Cyclin D1、CDK2、P27、Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与大蒜素组和顺铂组比较，联合给药组HeLa细胞增殖抑制率显著升高（P<0.05、0.01），CI为0.69（提示大蒜素与顺铂具有中度协同效应）。与对照组比较，大蒜素组和顺铂组G₀/G₁期细胞比例和细胞凋亡率显著升高（P<0.05、0.01），Cyclin D1、CDK2、Bcl-2表达显著下调且P27、Cleaved Caspase-3、Bax表达显著上调（P<0.05、0.01），Bax/Bcl-2比值显著升高（P<0.01）。与大蒜素组和顺铂组比较，联合给药组G₀/G₁期细胞比例和细胞凋亡率显著升高（P<0.05、0.01），Cyclin D1表达显著下调且P27、Cleaved Caspase-3、Bax表达显著上调（P<0.05、0.01），Bax/Bcl-2值显著升高（P<0.01）。结论大蒜素联合顺铂具有协同抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖的作用，可能与调节细胞周期和凋亡相关蛋白表达，进而阻滞细胞周期进程并促进细胞凋亡有关。     

新型磷酸二酯酶4抑制剂ZL-n-91对骨肉瘤U2OS细胞增殖的抑制作用

目的研究高选择性的新型磷酸二酯酶4抑制剂ZL-n-91对骨肉瘤的抗癌作用。方法CCK-8法检测不同浓度(0、20、40、80、160、240、320、400、480μmol·L^-1)和不同干预时间(0、24、48、72、96 h)的ZL-n-91对U2OS细胞的增殖抑制作用;平板克隆形成实验检测ZL-n-91对U2OS细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术检测细胞周期以及凋亡的影响;Western blot检测抗凋亡蛋白Bcl-2、周期蛋白CDK2、结果ZL-n-91明显抑制U2OS细胞的增殖,呈时间及剂量依赖性(P<0.05),其半数抑制浓度IC₅₀为174.1μmol·L^-1;ZL-n-91明显抑制U2OS细胞的克隆形成能力(P<0.01);ZL-n-91影响U2OS细胞的周期进程,将U2OS细胞阻滞在G₀/G₁期,并明显促进细胞凋亡(P<0.01);Western blot结果显示ZL-n-91明显下调U2OS细胞中Bcl-2、CDK2、CDK4、CyclinD1、CyclinE1蛋白的表达(P<0.05)。结论新型选择性磷酸二酯酶4抑制剂ZL-n-91显著抑制骨肉瘤细胞U2OS的增殖,促进细胞的周期阻滞和凋亡,可能是治疗骨肉瘤的潜在药物。     

7-羟乙基白杨素对低压低氧大鼠认知功能的保护作用及机制研究

目的：研究7-羟乙基白杨素（7-HEC）对低压低氧致大鼠认知功能损伤的保护作用及其机制。方法：将48只雄性大鼠随机分为正常对照组、缺氧模型组、白杨素组和7-HEC组，连续灌胃给药5 d，其中舱外2 d，然后将大鼠置于模拟海拔8 000 m环境停留3 d，期间每天给药一次。八臂迷宫检测大鼠空间学习记忆能力，HE染色观察脑组织海马区病理改变，检测海马组织中H₂O₂、MDA和抗氧化酶的活性变化，ELISA法检测炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α的水平，蛋白印迹法检测Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白的表达情况。结果：低压低氧导致大鼠海马组织损伤明显，参考记忆错误（RME）、工作记忆错误（WME）、总错误次数（TE）和总时间（TT）显著升高，海马组织中H₂O₂、MDA含量和炎性因子水平显著增加，抗氧化酶活性显著减低，Bax和caspase-3蛋白表达增加，Bcl-2蛋白表达降低。经7-HEC预处理后能够显著降低WME、RME、TE和TT，降低大鼠海马组织中H₂O₂、MDA含量和炎性因子水平，提高抗氧化酶活性，降低Bax和caspase-3蛋白表达，显著提高Bcl-2蛋白的表达。结论：7-HEC能够减轻低压低氧诱导的认知功能损伤，作用机制可能与清除自由基，提高抗氧化酶活性，降低机体氧化应激，抑制炎性反应和细胞凋亡有关。     

CyclinD1及CDK4在软骨肉瘤诊断中的应用

目的 观察CyclinD1及CDK4蛋白在软骨肉瘤中的阳性表达状态,探讨CyclinD1及CDK4蛋白在软骨肉瘤发生发展中的机制.方法 以SP法检测肿瘤组织中CyclinD1及CDK4蛋白表达的情况.结果 软骨肉瘤组织中CyclinD1、CDK4同时高表达,两者呈正相关关系(P<0$.05).结论 CyclinD1及CDK4蛋白均呈高表达,在软骨肉瘤的发生发展中起互相协同,使肿瘤细胞的生长优势增强,对肿瘤的发生发展中发挥重要作用.     

冬凌草甲素通过miR-217/ABCC1通路对索拉非尼耐药的肝癌细胞Huh-7/Sor增殖、凋亡的影响

目的探讨冬凌草甲素对人肝癌细胞Huh-7索拉非尼(Sor)耐药细胞株Huh-7/Sor的影响及其作用机制。方法体外培养Huh-7/Sor细胞株,qRT-PCR检测miR-217和ABCC1 mRNA的表达水平,Western blotting检测ABCC1蛋白的表达水平;用冬凌草甲素处理Huh-7/Sor细胞后,CCK-8法检测细胞活力,Annexin V/PI染色检测细胞凋亡,Western blotting检测凋亡蛋白和ABCC1的表达水平;数据库预测miR-217与ABCC1的结合位点,转染miR-217 mimic或inhibitor后检测ABCC1的蛋白水平,荧光素酶报告基因检测ABCC1 3‘UTR区域活性。结果与Huh-7细胞相比,Huh-7/Sor细胞中miR-217的表达水平显著下调,ABCC1的表达水平显著上调(P<0.05);冬凌草甲素能抑制Huh-7/Sor细胞的增殖,促进细胞凋亡,上调miR-217的表达水平,抑制ABCC1的表达(P<0.05);miR-217能与ABCC1 3‘UTR区域结合,抑制ABCC1的蛋白表达水平(P<0.05)。结论冬凌草甲素能通过上调miR-217而抑制ABCC1的表达,进而抑制Huh-7/Sor细胞增殖,诱导凋亡。     

SMYD3调控人乳腺癌MCF-7细胞增殖机制的研究

目的：通过转染技术抑制或增强SMYD3基因的表达,以探讨SMYD3对乳腺癌MCF-7细胞增殖的调控机制机制。方法：以MTY法和软琼脂克隆形成实验研究抑制或增强SMYD3基因表达对细胞增殖的影响,以RT-PCR法和Western印迹法检测MCF-7细胞经转染后,胞内SMYD3、ERK／MAPK通路相关蛋白及其磷酸化产物,以及凋亡和细胞周期调控相关蛋白表达水平的变化。结果：用针对SMYD3基因的shRNAs表达质粒转染MCF-7细胞后,其SMYD3基因mRNA和蛋白表达水平下调,细胞生长受到抑制,细胞中ERK1／2、CyclinD1和CDK4蛋白水平明显下调;软琼脂克隆形成实验显示,增强SMYD3基因表达能明显促进MCF-7细胞克隆形成。结论：SMYD3可通过激活ERK／MAPK信号转导通路和上调细胞周期相关蛋白CyclinD1和CDK4的水平提高肿瘤细胞的增殖能力。     

右美托咪定通过lncRNA H19介导香烟提取物诱导的肺泡巨噬细胞效应研究

目的探索右美托咪定(Dexmedetomidine,DEX)通过长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)H19对香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的RAW264.7巨噬细胞活力、凋亡和自噬的影响。方法制备CSE及CSE干预巨噬细胞模型,运用体外细胞培养,DEX以不同浓度(2、4和8μmol/L)作用于CSE诱导的巨噬细胞,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测模型细胞的凋亡率,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2及自噬相关蛋白LC3Ⅱ和ATG7表达情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测H19表达水平;为了进一步验证DEX对CSE诱导的巨噬细胞增殖、凋亡和自噬影响,运用双酶切法构建pcDNA3.1-H19表达载体。结果一定剂量的DEX可明显拮抗CSE诱导的巨噬细胞活力下降作用(P<0.05),具有浓度依赖性;DEX抑制CSE诱导的巨噬细胞凋亡,且细胞中凋亡蛋白Bax明显下调(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2上调(P<0.05),自噬相关蛋白LC3Ⅱ和ATG7表达上调(P<0.05),H19表达下调(P<0.05);成功构建pcDNA3.1-H19表达载体,DEX作用于CSE诱导的巨噬细胞,细胞活力明显降低(P<0.05),且细胞中凋亡蛋白Bax上调(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2下调(P<0.05),自噬相关蛋白LC3Ⅱ和ATG7表达下调(P<0.05)。结论DEX抑制H19表达,增强CSE诱导的巨噬细胞活力,抑制细胞凋亡和自噬。     

肉苁蓉苯乙醇苷对大鼠高原脑水肿的防治作用

目的观察肉苁蓉苯乙醇苷预防给药对高原脑水肿模型大鼠的作用及可能的作用机制。方法大鼠随机分为正常对照组,模型组,大花红景天口服液组[1.78 mL/(kg·d)],肉苁蓉苯乙醇苷低、中、高剂量组[75、150、300 mg/(kg·d)],每组12只,灌胃预防给药10 d,第8日起除正常对照组外其余各组置于模拟海拔5 000 m高原环境72 h建立高原脑水肿模型,观察各组大鼠脑组织病理改变,检测脑组织含水量、脑组织匀浆中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)酶活力。结果与正常对照组相比,模型组大鼠出现明显的脑水肿,脑组织含水量显著升高,脑匀浆液中IL-6、TNF-α、MDA含量增高,SOD和GSH-Px酶活力显著降低。肉苁蓉苯乙醇苷能够改善高原脑水肿大鼠脑水肿病理改变,降低脑组织含水量,降低脑匀浆中IL-6、TNF-α、MDA含量,且能提高SOD和GSH-Px的酶活力。结论肉苁蓉苯乙醇苷能够预防高原脑水肿的发生,可能与其抗炎、抗氧化应激有关。     

Anti-oxidant and anti-apoptotic effects of luteolin on mice peritoneal macrophages stimulated by angiotensin II

PurposeLuteolin, a plant flavonoid, can be found in a variety of plants and possesses anti-tumorigenic, anti-mutagenic, anti-oxidant and anti-inflammatory properties. However, the protective effects of luteolin on mice peritoneal macrophages stimulated by Angiotensin II (Ang II) have not been fully elucidated.Methods and resultsMice peritoneal macrophages were confirmed to be strongly positive for the macrophage marker CD68. Cell viability was tested after cells were pretreated with different concentrations of luteolin (6.25, 12.5 and 25 μM) and stimulated by Ang II. Luteolin not only significantly increased the viability of macrophages in the presence of Ang II, but also decreased the apoptotic rate, up-regulated Bcl-2 expression, and down-regulated Bax expression, thereby raising the ratio of Bcl-2 to Bax. In addition, luteolin pretreatment significantly increased the activity of SOD and reduced the levels of malondialdehyde (MDA), which was up-regulated in the presence of Ang II. This protective effect was also seen with Vitamin E (VitE) pretreatment, which was used as a standard control in this study.ConclusionsThese data clearly demonstrate that luteolin suppresses Ang II-directed oxidative stress and apoptosis on mice peritoneal macrophages.     

贝母甲素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究贝母甲素对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及其机制。方法将SD大鼠随机分为5组:正常组,模型组,贝母甲素2.5、5、10 mg组,每组15只大鼠。采用大脑中动脉线栓法制局灶性脑缺血模型,贝母甲素给药组大鼠在手术前10 d每日分别灌胃贝母甲素2.5、5、10 mg·kg-1,在手术24 h后再连续3 d分别灌胃贝母甲素2.5、5、10 mg·kg-1。正常组和模型组在同一时间灌胃等量生理盐水。给药结束后进行神经功能评分,HE染色观察脑组织损伤,检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量,免疫组化法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达,ELISA法检测白细胞介素(IL)-6、IL-18和IL-1β的含量,Western blotting法检测caspase-9、caspase-3、bax、bcl-2、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、beclin1、p62、PI3K、Akt和mTOR蛋白的表达。结果正常组大鼠神经功能评分为0分,模型组神经功能评分为(2.8±0.4)分。与模型组相比,贝母甲素2.5、5、10 mg组大鼠的神经功能评分显著降低(P <0.05),脑组织形态得到改善;caspase-9、caspase-3、bax表达显著下调,bcl-2表达显著上调(P <0.05);MDA和LDH含量显著降低,SOD含量显著升高(P <0.05);ICAM-1阳性细胞比率显著降低,IL-6、IL-18和IL-1β的含量明显降低(P <0.05);p62、PI3K、Akt和mTOR表达明显下调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和beclin1表达明显上调(P <0.05),且效果随着给药量的增加而呈增强趋势。结论贝母甲素对大鼠脑缺血再灌注损伤起保护作用,减轻病理损伤和神经功能障碍,这可能与其抑制细胞凋亡、氧化应激和炎症反应,调节PI3K/Akt/mTOR自噬通路有关。