HPLC法测定注射用盐酸头孢吡肟中2-巯基苯并噻唑

摘要：目的 建立HPLC法测定注射用盐酸头孢吡肟中2-巯基苯并噻唑基因毒性杂质含量的方法。方法 HPLC法,采用 Inertsil ODS-3柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以50 mmol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调pH值至6.25)-甲醇-80%乙腈(60:10:30, V/V/V) 为流动相,等度洗脱,流速为1 mL/min,柱温为35℃,检测波长为320 nm,进样体积为10 μL。结果 2-巯基苯并噻唑在浓度 0.01~102.9 μg/mL范围内,呈良好的线性关系,回归方程y= 70652x+2167.2,相关系数r=0.9999;定量限为0.3 ng,检测限为 0.1 ng, 回收率均值(n=9)为91.7%。结论 本方法专属性强、准确、快捷、灵敏且耐用性良好,为测定注射用盐 酸头孢吡肟中2-巯基苯 并噻唑含量的有效补充检测与定量方法,并为该产品临床应用安全性提供保障。     

改进HPLC法测定酮洛芬肠溶胶囊中酮洛芬的含量

目的:改进高效液相色谱法测定酮洛芬肠溶胶囊中酮洛芬的含量。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Chiralpak IC,流动相为正己烷(含0.1%三氟乙酸)-异丙醇(90∶10,V/V),流速为0.8 m L/min,检测波长为268 nm,柱温为25℃,进样量为10μL。结果:酮洛芬检测质量浓度线性范围为0.025~0.5 mg/m L(r=0.999 8),定量限为1.0 mg/L,检测限为0.2 mg/L;精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2%;加样回收率为96.36%~100.32%(RSD=1.87%,n=6)。结论:该方法操作简便,准确快速,适用于测定酮洛芬肠溶胶囊中酮洛芬的含量。     

曲安奈德新霉素贴膏中硫酸新霉素含量测定方法的建立

目的 建立HPLC法测定曲安奈德新霉素贴膏中新霉素含量测定的方法。方法 首先,通过正己烷溶解膏剂,水萃取的方法提取贴膏剂中的硫酸新霉素,然后建立HPLC法测定其含量,色谱条件为：Apolllo C18色谱柱(250mm×4.6mm, 5μm),流动相：0.1mol/L三氟醋酸溶液-乙腈(80:20,V/V),流速：0.5mL/min,进样量：20μL,柱温为30℃;蒸发光散射检测器：漂移管温度：80℃,载气流速：2.0L/min,增益为1。结果 硫酸新霉素在1.0~5.0μg范围内,峰面积与样品浓度呈良好的log-log线性关系,线性方程为：Y=1.87X+7.12(r=0.999),定量限为：0.260μg,平均回收率为88.99%,重复性RSD为1.9%。结论 所建立的方法简便、准确且快速,可用于曲安奈德新霉素贴膏中硫酸新霉素含量测定。     

HPLC法测定头孢丙烯干混悬剂中苯甲酸钠的含量

摘要：目的 建立HPLC法测定头孢丙烯干混悬剂中苯甲酸钠含量的方法。方法 HPLC法,采用Waters X-Bridge柱 (250mm×4.6mm,5μm),以磷酸二氢钠溶液-乙腈为流动相,流速为1.0mL/min,柱温为30℃,检测波长为220nm,进样量为 20μL。结果 苯甲酸钠在浓度50.64~253.20μg/mL范围内,呈良好的线性关系,回归方程y=51213x-28750,相关系数r=0.9998; 定量限为0.31μg/mL,平均回收率(n=9)为100.2%。结论 该方法专属性良好、准确、快速,精密度及耐用性良好;可用于头孢 丙烯干混悬剂中苯甲酸钠含量测定,并对其药品质量控制提供了参考依据。     

高效液相色谱法测定醋酸来法莫林的有关物质

摘要：目的 建立高效液相色谱法测定醋酸来法莫林的有关物质。方法 采用C18色谱柱(25 cm×4.6 mm,5 μm),流动相 A：60 mmol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调pH至2.5)-乙腈(80:20,V/V),流动相B：60 mmol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调pH至2.5)-乙腈 (50:50,V/V),梯度洗脱;流速1 mL/min;检测波长210 nm;柱温30℃;进样体积20 μL。结果 醋酸来法莫林与各有关物质分 离良好;醋酸来法莫林在0.50~75.33 μg/mL的浓度范围内,浓度与峰面积呈良好的线性关系,相关系数为1.000,醋酸来法莫林 的检测限为0.20 μg/mL。结论 该方法专属、可靠,可用于醋酸来法莫林有关物质的测定。     

TSK凝胶色谱系统测定头孢丙烯干混悬剂中的高分子杂质

目的 建立针对头孢丙烯干混悬剂中高分子杂质的检测方法。 方法 采用HPLC法,色谱柱为TSK-GEL G2500 PWXL(7.8mm×30mm, 7μm),以0.1mol/L pH6.8磷酸盐缓冲液为流动相,流速0.8mL/min,波长254nm,进样体积为20μL。结果 高分子杂质峰与头孢丙烯(Z)异构体峰能有效分离,辅料不产生干扰,方法专属性良好;头孢丙烯溶液在4.6944~93.8880μg/mL浓度范围内线性关系良好,线性回归方程为y=24226.5x-19.3(r=1.0000);检测限为0.183μg/mL;定量限为0.549μg/mL;方法精密度良好(RSD=0.9%),中间精密度良好(RSD=0.6%);头孢丙烯干混悬剂中高分子杂质均低于1.5%。结论 该方法操作简便、检测灵敏度高、方法重现性好,适用于头孢丙烯干混悬剂高分子杂质的检测。     

高效液相色谱法测定复方甘草酸单铵系列注射剂中乙二胺四乙酸二钠含量

目的 建立快速测定复方甘草酸单铵系列注射剂中乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法 色谱柱为Hypersil GOLD C₁₈柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为50 mmol/L磷酸二氢钠溶液(含5 mmol/L四丁基溴化铵,用磷酸溶液调pH至4.5)-乙腈(90∶10,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为257 nm,柱温为40℃,进样量为10μL。结果 EDTA-2Na质量浓度在2～200μg/mL范围内与EDTA-Fe³⁺线性关系良好(R²=0.999 8,n=7);检测限为0.02μg/mL,定量限为0.06μg/mL;精密度、重复性、稳定性试验的RSD均小于2.0%;复方甘草酸铵注射液、复方甘草酸单铵注射液、复方甘草酸单铵S氯化钠注射液、甘草酸单铵半胱氨酸氯化钠注射液、注射用复方甘草酸单铵S的平均回收率分别为100.57%,100.90%,100.86%,100.95%,101.03%,RSD分别为0.21%,0.82%,0.60%,0.64%,0...     

HPLC法同时测定复方氯霉素滴眼液中醋酸泼尼松龙、氯霉素及其降解产物氯霉素二醇物的含量

目的:建立同时测定复方氯霉素滴眼液中氯霉素、醋酸泼尼松龙及其降解产物氯霉素二醇物含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Dionex Acclaim C_(18),流动相为0.1%庚烷磺酸钠溶液-冰乙酸-乙腈-甲醇(60∶0.2∶30∶10,V/V/V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为271 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。结果:氯霉素、醋酸泼尼松龙、氯霉素二醇物检测质量浓度线性范围分别为11.73~703.71μg/mL(r=0.999 8)、12.40~744.06μg/mL(r=0.999 8)、1.03~62.03μg/mL(r=0.999 8);氯霉素二醇物的定量限为0.01μg/mL;精密度、稳定性试验的RSD<2.0%;氯霉素、醋酸泼尼松龙重复性试验的RSD<2.0%,氯霉素二醇物的RSD=4.5%;回收率分别为100.6%~102.7%(RSD=0.60%,n=9)、97.5%~100.3%(RSD=0.80%,n=9)、100.0%~103.2%(RSD=1.10%,n=9)。结论:该方法结果准确、操作简便,可用于复方氯霉素滴眼液中氯霉素、醋酸泼尼松龙及其降解产物氯霉素二醇物含量的同时测定。     

高效液相色谱法测定格列齐特缓释片的含量

目的 采用高效液相色谱法测定格列齐特缓释片的含量.方法 采用Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水-磷酸(70:30:0.1),流速为0.8 mL/min,检测波长为228 nm.结果 格列齐特在0.64～32 μg/mL浓度范围内呈良好线性(r=0.999 9,n=7),检测限为0.5 μg/mL,平均回收率为99.77%,RSD=1.07%(n=9).结论 本方法简便,准确,精密度好,适用于格列齐特缓释片的含量测定.     

HPLC法测定洛索洛芬银乳膏中洛索洛芬银的含量

目的:建立测定洛索洛芬银乳膏中洛索洛芬银含量的方法,为该制剂的质量控制提供参考。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Diamonsil C_(18),流动相为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(55∶45∶0.1∶0.1,V/V/V/V),流速为1.0 m L/min,检测波长为223nm,柱温为30℃,进样量为20μL。结果:洛索洛芬银检测质量浓度线性范围为6.53~130.7μg/m L(r=0.999 9);定量限为0.253μg/m L,检测限为0.076μg/m L;精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2%;加样回收率为96.79%~103.68%(RSD=2.23%,n=9)。结论:该方法操作方便、结果准确、重复性好,可用于洛索洛芬银乳膏中洛索洛芬银的含量测定。     

超高效液相色谱串联质谱法测定滴眼剂中6种抑菌剂含量

目的 建立超高效液相色谱串联质谱法(UPLC/MS/MS)同时测定滴眼剂中6种抑菌剂含量。方法 采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm, 1.7μm)，以含0.05%甲酸的2.5mmol/L醋酸铵溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.4mL/min，柱温为40℃，以多反应监测负离子模式检测。结果 羟苯甲酯、羟苯乙酯在0.002~0.5μg/mL范围内，羟苯丙酯在0.02~0.5μg/mL范围内，山梨酸在0.4~100μg/mL范围内，苯甲酸在0.1~25μg/mL范围内，硫柳汞在0.75~10μg/mL范围内，线性关系良好(r≥0.995)；6种抑菌剂的回收率均在80%~115%(RSD≤6%, n=9)。结论 该法专属性良好，准确，灵敏，快速，可用于多种滴眼剂中6种抑菌剂的含量测定，为高通量快速分析滴眼剂中抑菌剂及提高滴眼剂质量标准提供借鉴。     

淋球菌对头孢曲松的敏感性及淋球菌多抗原测序分型研究

目的了解中国广东地区2010—2016年淋球菌对头孢曲松的敏感性以及相应菌株的淋球菌多抗原测序分型(NGMAST)基因型别。方法 2010—2016年在广东省疾病预防控制中心收集的285株淋球菌,经分离纯化及鉴定后,采用美国临床实验室标准化委员会(CLSI)推荐的琼脂稀释法测定其对头孢曲松的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);菌株培养后利用试剂盒提取DNA,并进行淋球菌多抗原测序分型(NG-MAST)。结果本次测试的285株淋球菌除1株MIC>0.25μg/mL外,其他都属于敏感菌株(CLSI敏感标准为≤0.25μg/mL),MIC≥0.06μg/mL的菌株比例为63.2%,其中2016年度MIC≥0.06μg/mL菌株比例为44.4%,2010年MIC≥0.06μg/mL菌株比例为70.6%。NG-MAST分型研究显示,285株淋球菌共有166个型别,菌株多样性较高,其中73种为已知型别,93种为新型别。测定的所有菌株中主要包括ST568(n=13),ST270(n=9),ST421(n=7),ST2288(n=5),ST1731(n=4),ST1766(n=4),ST1866(n=4),ST1870(n=4),ST1053(n=4),ST2318(n=4),ST5990(n=4),ST1614(n=4),ST1866(n=3)等。相同NG-MAST型别的菌株具有相同或相近的MIC值。结论广东地区淋球菌对头孢曲松MIC≥0.06μg/mL菌株比例较高,需要对此进行长期监测。7年间菌株的优势型别有较大变化,显示该地区性网络可能发生较大波动。NG-MAST分型可以作为分子生物学标记用于淋球菌耐药监测。     

四季青中原儿茶酸在beagle犬体内的药动学研究

目的 建立LC-MS/MS法测定血浆中原儿茶酸的浓度,并对beagle犬灌胃四季青水煎液后原儿茶酸的药动学进行研究。方法 Beagle犬血浆样品以酮洛芬为内标,用乙腈沉淀蛋白,采用LC-MS/MS法进行分离和测定。色谱柱为C18(4.6mm×100mm, 2.7μm);流动相为80%乙腈-20%水(含0.1%甲酸),流速为0.2mL/min,柱温为30℃。质谱条件：电喷雾离子源(ESI),负离子模式,多反应离子监测(MRM),检测离子为原儿茶酸m/z 153.0→109.0,内标酮洛芬m/z 253.1→209.1。6只beagle犬单次灌胃四季青水煎液50mL(0.2g/mL)后,于给药前及给药后0.083、0.167、0.333、0.5、0.667、0.833、1、1.5、2、3、4和6h采血,以LC-MS/MS法测定原儿茶酸在beagle犬体内的血浆浓度,并用非房室模型计算药动学参数。结果 原儿茶酸浓度在0.05~2.00μg/mL范围内线性关系良好,定量下限为0.05μg/mL,批内和批间精密度RSD均小于8.6%,准确度为92.3%~102.0%。Beagle犬分别单次灌胃1g/kg(生药量)四季青水煎液后,其主要药动学参数Cmax为(1.53±0.33)μg/mL,Tmax为(0.42±0.09)h,t1/2为(0.80±0.16)h,MRT0~t 为(1.04±0.14)h,MRT0~∞ 为(1.32±0.26)h,AUC0~t为(1.90±0.35)(μg/mL)·h,AUC0-∞为(2.02±0.33)(μg/mL)·h。 结论 本实验中建立的LC-MS/MS法专属性强、快速灵敏,可以用于犬血浆中原儿茶酸的测定。Beagle犬单次灌胃四季青水煎液后,血浆中原儿茶酸能快速吸收,达峰速度较快,在体内能滞留一定时间,有利于四季青药效作用的发挥。     

Simultaneous determination of ginsenosides Rg1, Re and Rb1 in rat plasma by HPLC and its application to pharmacokinetic study of SHENMAI injection

In the present study, we developed a sensitive and efficient high performance liquid chromatography (HPLC) method for the simultaneous determination of three ginsenosides (Rg₁, Re, Rb₁) in rat plasma. Chromatographic separation was performed on a C₁₈ (150 mm×4.6 mm) column utilizing gradient elution profile and a mobile phase consisting of (A) water and (B) acetonitrile. The calibration curve, with a great correlation coefficient greater than 0.998, was linear over the range of 1.0–30.0 μg/mL for ginsenoside Rg₁, 0.5–15.0 μg/mL for ginsenoside Re, and 0.5–200.0 μg/mL for ginsenoside Rb₁. The intra- and inter-day precisions for three ginsenosides (Rg₁, Re, Rb₁) were all less than 6.0%, and average recovery, examined at three concentration levels, ranged from 96.1% to 118.6%. The samples was stable within 24 h at 4 ºC storage, and 30 d at –20 ºC storage with three freeze-thaw-assay cycles. The low limits of quantification (LOQ) were 1.0, 0.5 and 0.5 μg/mL for Rg₁,Re and Rb₁, respectively. Taken together, the newly developed method was successfully applied to study the pharmacokinetics of ginsenoside Rg₁, Re and Rb₁ in rat plasma after intravenous administration of SHENMAI injection (SMI).     

气相色谱法测定头孢妥仑匹酯中N,N-二甲基甲酰胺残留量

目的 建立头孢妥仑匹酯原料药中N,N-二甲基甲酰胺残留量的检测方法。 方法 采用气相色谱法，FID检测器，色谱柱为DB-624(30m×0.53mm, 3.0μm)，柱温采用程序升温，初始柱温为110℃，保持5min，再以30℃/min的速率升至200℃，保持5min，进样口温度为230℃，检测器温度250℃，以氮气为载气，流速为3.0mL/min，进样体积1.0μL，分流比2:1。 结果 DMF能够有效分离，在4.44~66.60μg/mL范围内线性关系良好，r=0.9993；检测限为0.777μg/mL，定量限为2.664μg/mL；平均回收率为100.72%(RSD=1.76%, n=9)。结论 方法简便灵敏、结果准确、重复性好，可用于头孢妥仑匹酯中DMF残留量的检测。     

HPLC法测定中空纤维感染模型中头孢曲松浓度及其药动学研究

摘要：目的 建立灵敏、稳定的头孢曲松肉汤浓度的高效液相色谱分析方法,评价中空纤维感染模型中头孢曲松的药动 学特征,为优化临床给药方案和延缓耐药性发展提供研究基础。方法 以甲硝唑为内标,肉汤样品经甲醇沉淀蛋白、浓缩后, 采用ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)分离,以0.05 mol/L KH2PO4水溶液(K2HPO4调节pH值至7.0)-甲醇 (91:9)为流动相,流速1 mL/min,检测波长254 nm,柱温36℃,进样量20 μL。建立中空纤维感染模型,模拟头孢曲松临床多 次给药方案(1.5 g,静脉滴注1 h,1次/12 h,疗程7 d),计算药动学参数。结果 头孢曲松在4.994~249.7 μg/mL内线性关系良好 (r≥0.998);批内和批间精密度均小于13.9%,准确度为94.3%~108.1%;提取回收率在74.7%~89.4%之间;稳定性良好。中空纤 维感染模型中头孢曲松药动学参数为Cmax=152.2 μg/mL,Tmax=1 h,t1/2=8.70 h,AUC0-36=1231 μg/mL·h,AUC0-∞=1286 μg/mL·h, 与药品说明书和相关文献数据基本一致。结论 所建立的高效液相色谱法,专属性强、重现性好、灵敏度高,适用于中空纤维 感染模型中头孢曲松的体外药代动力学研究。     

Activity of ceftobiprole against Streptococcus pneumoniae isolates exhibiting high-level resistance to ceftriaxone

Tracking Resistance in the US Today (TRUST) 2008 surveillance data showed that 6% of Streptococcus pneumoniae were non-susceptible to ceftriaxone [minimum inhibitory concentration (MIC) ≥ 2 μg/mL] and that 8% of the ceftriaxone-non-susceptible isolates exhibited high-level resistance (MIC ≥ 8 μg/mL). Here we describe the activity of ceftobiprole against ceftriaxone-resistant isolates and characterise the genotypic traits associated with resistance. Thirty isolates with ceftriaxone MICs ≥ 8 μg/mL were analysed by sequencing of penicillin-binding protein (PBP) and murM genes. Sequencing of pbp1a, pbp2b and pbp2x showed nine PBP patterns, with the most common (n=17) being: PBP1a T371S (STMK motif), P432T (SRNVP motif); PBP2b T446A (SSNT motif), A619G (KTGTA motif); and PBP2x T338A and M339F (STMK motif), L364F, I371T, R384G, M400T, L546V (LKSGT motif); six isolates had the same pattern without the PBP2b A619G change. For these 23 isolates, MICs were 8 μg/mL for ceftriaxone, 4-8 μg/mL for penicillin and 0.5-2 μg/mL for ceftobiprole. The remaining seven isolates with higher MICs (ceftriaxone 8-32 μg/mL, penicillin 4-32 μg/mL and ceftobiprole 2-4 μg/mL) had fewer PBP active-site motif substitutions. The majority of isolates (17/30) had murM alleles similar to the wild-type, whilst the rest had alleles reflecting a mosaic structure. No murM alleles were associated with higher MICs. Against these 30 isolates, ceftobiprole was 4-16-fold more active than ceftriaxone. Widely described PBP and MurM substitutions probably account for the high ceftriaxone MICs (8 μg/mL) in the majority of isolates. However, seven isolates with ceftriaxone MICs of 8-32 μg/mL had fewer PBP substitutions in active-site motifs, suggesting either that there is another resistance mechanism or that unique PBP mutations may contribute to high-level β-lactam resistance.