耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对替加环素不同体外药敏试验方法学评估

目的 比较不同药敏试验方法检测替加环素对耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)的敏感性。初步了解辽宁地区CRKP对替加环素的耐药情况，为临床合理用药提供依据。方法 回顾性收集辽宁省内多家大型三甲医院2011年1月-2016年12月分离的CRKP共269株，采用微量肉汤稀释法、KB纸片扩散法、Vitek-2仪器法及E试验法检测替加环素对CRKP的敏感性。结果 微量肉汤稀释法、E试验法、Vitek-2仪器法测定替加环素MIC50和MIC90分别为(0.5/1)、(0.25/0.5)和(0.5/4)μg/mL。按美国食品与药品监督管理局(FDA)和欧洲药敏试验委员会(EUCAST)判读标准，微量肉汤稀释法测得CRKP对替加环素的敏感率为97.4%/93.3%，中介率为2.2%/4.1%，耐药率为0.4%/2.6%。E试验法敏感率最高，为100%/98.9%，Vitek-2法耐药率最高，为8.6%/13.4%，纸片扩散法的中介率最高，为11.9%/46.5%。与微量肉汤稀释法比较，E试验法的基本一致率(EA)和分类一致率(CA)均≥90%，但存在重大误差(VME)，分别为0.4%/1.9%；Vitek-2法EA仅为61.7%，CA为87.4%/72.1%，且大误差(ME)为6.3%/7.4%，无VME；纸片扩散法CA仅为85.9%/46.5%，小误差(mE)为1.9%/2.6%，ME为0.7%/5.6%。结论 辽宁地区绝大多数CRKP对替加环素仍保持较高的敏感性。对于CRKP、E-试验法、Vitek-2仪器法和纸片扩散法均不适合单独检测替加环素敏感性，可考虑联合检测，若结果不一致，均应参考微量肉汤稀释法。     

多黏菌素B药敏条在肠杆菌科药敏检测中应用研究

目的 使用微量稀释法和E-test法分析肠杆菌科细菌对多黏菌素B体外敏感性，评估E-test法多黏菌素B药敏条在临床药敏检测中的价值。方法 收集了887株临床肠杆菌科细菌，同时采用E-test法和微量稀释法进行体外药敏试验，考察两种方法的一致性，针对不一致的进行复测，复测仍不一致者判为不一致，对两种检测方法进行统计学分析。结果 887株菌的平行检测中，842株用药敏条和微量稀释法测定MIC值在|±1|个稀释倍数的范围内，有45株菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)值超出了此范围，复测有8株菌的MIC值回到了|±1|个稀释倍数的范围内，即纠正后的EA(essential agreement)%为95.94%(851/887)。肠杆菌科内按照种属分析，EA值最高的为沙门菌属的97.09%(100/103)，EA最低的为其他属肠杆菌的94.03%(126/134)，统计学分析，不同属间无显著性差异。结论 多黏菌素B药敏条用于肠杆菌科细菌检测药敏检测所测定的MIC值判定结果准确可靠，与CLSI推荐的微量稀释法的符合率在94%以上，能满足临床和实验室药敏检测需求。     

2018—2020年多中心耐黏菌素病原菌及耐药状况分析

摘要：目的 了解2018—2020年国内不同地区三级医院耐黏菌素临床分离菌株的分布特征及其对其他抗菌药物的药敏 结果。方法 对临床分离的菌株按照统一方案，采用自动化仪器法进行细菌药敏试验，按照美国临床和实验室标准化协会 (Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)2020年标准判读结果，并采用WHONET 5.6软件进行耐药数据分析。结果 共 收集375株非重复分离的耐黏菌素菌株，主要分离于ICU病区。其中非发酵菌226株，占60.3%；肠杆菌目149株，占39.7%。从菌 株分布来看，排名前3位的依次是铜绿假单胞菌46.1%(173/375)、肺炎克雷伯菌20.3%(76/375)、鲍曼不动杆菌14.1%(53/375)。从 药敏结果来看，耐黏菌素菌的MIC值主要分布在4~32μg/mL。其中非发酵菌对黏菌素耐药的MIC值主要集中在4和32μg/mL，肠 杆菌目对黏菌素耐药的MIC值主要集中在4μg/mL；耐黏菌素的铜绿假单胞菌对氨基糖苷类和哌拉西林/他唑巴坦仍保持一定的抗 菌活性，耐药率均<25%，而耐黏菌素的肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌对替加环素外的其他抗菌药物呈现高度耐药性，两者对碳 青霉烯类抗生素耐药率分别为82.8%和79.2%。 结论 黏菌素耐药菌株尤其是高水平耐药株已在不同地区出现，临床应引起重 视，合理使用抗菌药物。     

金华市中心医院碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌药物敏感性及流行病学研究

目的了解金华市中心医院碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)对常用抗菌药的敏感性及流行病学。方法收集2019年7-11月临床分离的CRKP菌株,采用微量肉汤稀释法测定其对17种临床常用抗菌药物的敏感性;采用酶抑制剂复合纸片法检测菌株产碳青霉烯酶表型;采用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法检测碳青霉烯酶基因、ESBLs基因和AmpC酶基因;采用多位点序列分型(Multiple-locus sequence typing,MLST)方法检测菌株的序列型(Sequence type,ST)。结果共25株CRKP主要分离自痰液(64%,16/25);标本主要来源于神经外科病区(48%,12/25)和康复病区(16%,4/25)。药敏试验结果显示,CRKP对大多数抗菌药高度耐药,对多黏菌素、替加环素和头孢他啶/阿维巴坦均敏感。全部菌株均产KPC-2型碳青霉烯酶,未检测到其他碳青霉烯酶基因和AmpC酶基因;bla_(TEM)、bla_(SHV)和bla_(CTX-M)基因检出率分别为60%(15/25)、100%(25/25)和88%(22/25),分别以bla_(TEM-1)(100%,15/15)、bla_(SHV-12)(52%,13/25)和bla_(CTX-M-14)(59.1%,13/22)为主。25株CRKP菌株主要以ST11型(60%,15/25)和ST290型(24%,6/25)菌株为主。结论金华市中心医院分离的CRKP菌株对除外多黏菌素、替加环素和头孢他啶/阿维巴坦以外的多数临床常用抗菌药物均高度耐药,其主要耐药机制是产KPC-2型碳青霉烯酶。该耐药菌株流行菌株以ST11型为主。     

多黏菌素B对多重耐药铜绿假单胞菌体外药物敏感试验分析

目的：探讨多黏菌素B对多重耐药铜绿假单胞菌（PAE）的体外作用。方法：对仪器检测多重耐药的PAE进行部分手工药敏试验筛选出多重耐药PAE23株，再用纸片扩散法观察多黏菌素对多重耐药PAE的敏感性。结果：23株多重耐药PAE对多黏菌素B均敏感，抑菌环直径均在12～14mm之间。结论：对重症感染多重耐药PAE患者，可以考虑使用多黏菌素，以及不同的给药方式。     

硝酸镓对耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌生长及其生物膜的抑制作用

目的 检测新型抗菌剂硝酸镓(gallium nitrate, GaN)对耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumonia, CRKP)生长及其生物膜(biofilm, BF)的抑制作用。方法 收集2015-2016年安徽省地区34家医院临床分离的CRKP共82株，采用VITEK-2 Compact全自动微生物分析系统进行细菌鉴定，琼脂倍比稀释法进行药敏试验；微量肉汤稀释法测定GaN对CRKP的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)；96孔板结晶紫染色法检测82株实验菌株BF的A570值，筛选出BF强阳性菌株；检测1/2MIC的GaN对BF强阳性菌株的BF形成的抑制作用。比较GaN与庆大霉素(gentamicin, GEN)分别对CRKP的BF形成的抑制作用。激光共聚焦扫描显微镜观察GaN作用下的菌株生物膜三维立体结构。结果 临床分离的CRKP呈多重耐药。GaN对82株CRKP的MIC范围为0.0625~2μmol/mL，其中MIC50、MIC90分别为0.25和0.5μmol/mL。BF强阳性菌株所占比例为37.8%(31/82)。三维立体图片显示CRKP在不同GaN浓度作用下BF形成的量不同。1/2MIC的GaN可显著抑制CRKP的BF形成。GaN对CRKP的BF形成的抑制作用优于GEN。结论 GaN对CRKP生长及其BF有明显抑制作用。     

替加环素和多黏菌素对产KPC酶肺炎克雷伯菌的抗菌效应研究

目的 评价替加环素、多黏菌素对产KPC酶肺炎克雷伯菌的体外抗菌效应研究,指导临床正确选择并合理使用抗菌药物。方法 收集2012—2016年期间分离自温州医科大学附属第三医院临床样本中对碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌109株,采用Vitek-2 compact和Vitek MS进行菌种鉴定及药敏试验;采用聚合酶链反应(PCR)法检测菌株的KPC酶耐药基因并采用琼脂稀释法药敏试验分别检测替加环素、多黏菌素等药物的单药最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)值。结果 所分离的109株均为产KPC-2肺炎克雷伯菌,经过Vitek-2 compact和KB法试验可知109株肺炎克雷伯菌对阿米卡星的耐药率为82.57%,对亚胺培南、美罗培南等其他药物的耐药率均为100%。琼脂稀释法药敏结果显示109株肺炎克雷伯菌对亚胺培南、美罗培南耐药率均为100%;对阿米卡星耐药率为89%;对替加环素的敏感率为65.1%,29.4%中介;对多黏菌素的敏感率为100%。结论 产KPC-2型肺炎克雷伯菌对多黏菌素和替加环素较为敏感,可作为临床用药参考。     

念珠菌体外药敏试验K-B法与E-test法的对照研究

目的探讨分别采用K-B法与E-test法检测我院念珠菌体外药物敏感性,为临床合理用药提供参考。方法随机选择我院2010年~2014年间的110例念珠菌眼炎患者,收集110例眼分泌物标本,接种培养念珠菌菌株110株,分别采用K-B法与E-test法检测念珠菌对于伊曲康唑、氟康唑的敏感率,比较检测结果的差异性。结果采用K-B法对伊曲康唑敏感菌株的检出率为88.2%,对氟康唑敏感菌株的检出率为97.3%;采用E-test法对伊曲康唑敏感菌株的检出率为86.4%,对氟康唑敏感菌株的检出率为98.2%,二者的差异经统计学比较分析无明显差异(P>0.05)。结论采用K-B法与E-test法检测念珠菌体外药敏试验的结果具较高的符合率,均为较为理想的念珠菌体外药敏试验方法,可根据医院具体情况加以选择。     

血流感染产超广谱β-内酰胺酶细菌的药敏分析

目的筛选对超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的敏感抗生素,为提高ESBLs感染患者临床治愈率提供指导。方法血液感染患者用BacT/Alert全自动血培养仪细菌培养、VitekⅡ细菌鉴定仪进行鉴定,K-B药敏纸片测定法进行药敏试验并筛选出ESBLs细菌160株,肉汤稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)。结果 ESBLs菌以大肠埃希菌为主,对亚胺培南、美罗培南、头孢美唑、替加环素、黏菌素和阿米卡星的敏感性分别为100%、100%、94.38%、100%、100%和95.63%,而对头孢他啶和四代头孢菌素的头孢吡肟的敏感率仅达58%,加酶抑制剂的复合抗生素敏感性分别为哌拉西林/三唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、替卡西林/克拉维酸和氨苄西林/舒巴坦,敏感率分别为82.50%、80.63%、13.13%和3.75%。结论治疗ESBLs感染应以抗生素敏感性试验为指导,提高救治率。     

嗜麦芽寡养单胞菌对黏菌素的耐药特征及体外联合抗菌活性研究

目的 研究黏菌素分别与氯霉素、左氧氟沙星、头孢他啶、米诺环素及复方磺胺甲噁唑联用对多重耐药嗜麦芽寡养单胞菌的体外抗菌活性。方法 收集2015—2018年分离自温州医科大学附属第一医院的431株嗜麦芽寡养单胞菌;采用微量肉汤稀释法检测黏菌素对嗜麦芽寡养单胞菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC),计算逐年耐药率;通过棋盘法和微量肉汤稀释法检测黏菌素分别与氯霉素、左氧氟沙星、头孢他啶、米诺环素与复方磺胺甲噁唑联用及各自单用时对多重耐药嗜麦芽寡养单胞菌的MIC值,并通过计算部分抑菌浓度指数(FICI)评价联合抑菌效果。结果 2015—2018年间,我院嗜麦芽寡养单胞菌对黏菌素的耐药率呈现逐年上升趋势;黏菌素与氯霉素、左氧氟沙星及米诺环素联用后均表现为协同或相加作用;与头孢他啶及复方磺胺甲噁唑联用都存在无关作用,未发现拮抗作用。结论     

左氧氟沙星联合哌拉西林他唑巴坦对产超广谱β-内酰胺酶耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的防耐药突变浓度及耐药机制的研究

目的：探讨左氧氟沙星（LEV）联合哌拉西林他唑巴坦（TZP）对产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）的防耐药突变浓度（MPC）及耐药机制,为降低细菌耐药提供依据。方法：采用棋盘法设计,微量肉汤稀释法测定抗菌药物对36株临床分离ESBLs耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度（MIC）,计算部分抑菌浓度（FIC）指数;用肉汤富集浓度为10¹³CFU·L^-1 CRKP,采用琼脂平板稀释法测定LEV和TZP单用及联用对36株临床分离CRKP的MPC,并计算相应的选择指数（SI）;通过PCR扩增和DNA测序法监测突变基因。结果：FIC值表明LEV联合TZP对36株临床ESBLs阳性CRKP主要表现协同和相加作用,无拮抗作用;LEV、TZP联用前后,MPC分别由32~1 024 mg·L^-1、512~1024 mg·L^-1降为4~256 mg·L^-1、16~512 mg·L^-1;SI明显下降。测序结果显示,联合用药较单一用药,耐药突变菌株的基因突变率明显降低。结论：LEV联合TZP显著降低了MIC、MPC,缩小突变选择窗（MSW）,耐药菌株的基因突变率明显降低,有效的减少CRKP突变菌株的产生。     

广东省肇庆市肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性与MLST分型研究

目的 了解广东省肇庆市肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae, KP)临床分离株的抗生素耐药情况及多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)特征。方法 收集肇庆市两家医院KP临床分离株63株，采用肉汤微量稀释法进行30种抗生素的体外药物敏感性试验，并对所有菌株进行多位点序列分型。结果 63株KP临床分离株的耐药谱特点可分为4类，即全敏感的高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent K. pneumoniae, hvKP)、产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌(extended spectrum β-lactamases K. pneumoniae, ESBLsKP)、耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant K. pneumoniae, CRKP)和其他类型的多重耐药肺炎克雷伯菌(multidrug-resistant K. neumoniae，MDRKP)；MLST分型结果显示63株临床分离株可分成41个ST型。其中，ESBLsKP以ST37型(9株，39.13%)为主，CRKP以ST11型(5株，62.50%)为主，hvKP以ST65(5株，25.00%)型和ST23(3株，15.00%)型为主，而其他类型的多重耐药KP的ST型(12株9种ST型)则呈现明显的多态性。结论 我市肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药情况比较严重，要加强院内感染监测，警惕其成为优势菌型并引发院内感染的风险。     

96点阵琼脂稀释法与微量肉汤稀释法药敏试验结果的对比

目的 为了验证96点阵琼脂稀释法进行药敏试验的可靠性和有效性，与国际通用的微量肉汤稀释法进行对比。方法 用微量肉汤稀释法和96点阵琼脂稀释法分别对质控菌株E. coli ATCC25922、临床分离E. coli进行4种不同药物(头孢噻呋、庆大霉素、氟苯尼考和多西环素)的药敏试验，并经过多次重复和对比。结果 这两种检测方法所测定的菌株的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)完全相同者占30%~50%，相差1个梯度占80%，3个梯度以内的吻合率高达96%以上，96点阵琼脂稀释法具有很好的重复性和稳定性。结论 96点阵琼脂稀释法与微量肉汤稀释法两种方法测定的MIC没有显著差异，可共用一个质控标准。96点阵琼脂稀释法的标准化和规范化，有利于高通量药敏检测的进行，推动建立完善的抗药性监测技术体系。     

贵阳某医院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的分子流行病学分析

目的 研究耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)的耐药性、耐药基因与同源性，为临床用药与院感控制提供依据。方法 收集贵州省人民医院2016年5月-2017年2月临床上分离的50株CRKP，检测其对19种抗菌药的药物敏感性。PCR法扩增碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaIMP、blaVIM、blaOXA和blaNDM-1)并对扩增阳性产物进行测序，所得序列与GenBank数据库进行比对，确定耐药基因分型。采用ERIC-PCR法进行同源性检测。结果 50株CRKP均为多重耐药菌。19种抗菌药物中，耐药率低于50%的抗菌药物有多黏菌素0、替加环素4%、米诺环素20%、四环素38%。对复方磺胺甲噁唑的耐药率为60%，对碳青霉烯类、头孢菌素、氨曲南、含酶抑制剂、以及喹诺酮类、氨基糖苷类的耐药率为84%~100%。50株CRKP中，48株(96%)检出碳青霉烯酶基因，其中41株(82%)blaKPC-2、3株(6%)blaIMP-8和4株(8%)blaNDM-1。41株检出KPC-2型碳青霉烯酶的CRKP分为6个基因型(A-F型)，其中A型18株、B型6株、C型12株、D型3株、E型、F型各1株。结论 CRKP的耐药率高，主要耐药机制是产KPC-2型碳青霉烯酶，其次是产NDM-1、IMP-8型碳青霉烯酶。CRKP存在科室间、科室内的克隆传播，应加强对CRKP的监测和院感控制。     

碳青霉烯类异质性耐药铜绿假单胞菌的耐药机制研究

摘要：目的 筛选铜绿假单胞菌临床分离株的碳青霉烯类异质性耐药菌株,并分析相关机制。方法 采用E-test纸条法、 群体分析法(PAP)法对30株铜绿假单胞菌临床分离株进行亚胺培南异质性耐药的初筛和复筛、肉汤微量稀释法测定异质性耐药菌 株对亚胺培南及其他药物的MIC值、全基因组测序分析碳青霉烯类异质性耐药菌株的可能耐药机制。结果 通过E-test纸条法和 PAP法鉴别筛选出8株亚胺培南异质性耐药铜绿假单胞菌,检测发现异质性耐药菌株对多黏菌素B、头孢他啶、美罗培南耐药率 较高,对环丙沙星等更敏感。全基因组测序分析发现碳青霉烯类异质性耐药铜绿假单胞菌无可确证的基因突变,但可能与延伸 因子P基因有关。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的表型分析

目的分析昆山市中医医院临床分离肺炎克雷伯菌病原株的分布及耐药情况,并对分离耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的主要耐药机制进行初步分析,为临床抗菌治疗及院内感染控制提供依据。方法采用VITEK-2 compact微生物鉴定及药敏系统对临床分离菌株进行鉴定和药敏测定,对其分布及耐药情况进行统计分析。对临床初筛的CRKP菌株进行K-B药敏试验、表型确证试验(改良Hodge试验)、产超广谱-内酰胺酶(ESBLs)确证试验以及检测AmpC酶的三维试验。结果临床分离的295株克雷伯菌中有CRKP 23株,主要来源于痰标本,送检科室以ICU为主;其中AmpC阳性12株,ESBLs阳性6株,2种酶均为阳性2株;CRKP大部分来自重症老年患者;CRKP的多重耐药性明显高于非耐碳青霉烯类肺炎克雷伯杆菌(CSKP)(P<0.05),对环丙沙星、左氧氟沙星、妥布霉素和丁胺卡那霉素的耐药率低于50.00%,而既产AmpC酶又产ESBLs的菌株对上述4种抗生素敏感。结论CRKP的多重耐药性明显高于CSKP,其中产AmpC酶CRKP的检出率比产ESBLs更高,治疗由CRKP所致感染时,应根据其药敏检测结果,选用耐药性较低的抗生素治疗,如环丙沙星、左氧氟沙星、妥布霉素和丁胺卡那霉素等。