灯盏花素对肝癌细胞HepG2和正常肝细胞LO-2的体外增殖抑制作用

目的 观察灯盏花素对人肝癌细胞HepG2及人正常肝细胞LO-2体外增殖的影响.方法 以不同浓度(0、3.125、6.25、12.5、25、50 mg·L-1)的灯盏花素分别处理HepG2和LO-2细胞,24 h后采用MTT法检测各组细胞生长情况;Hoechst 33258荧光法和流式细胞术观察HepG2和LO-2的凋亡情况.结果 灯盏花素在3.1~50.0 mg·L-1范围内呈浓度依赖性地抑制HepG2细胞的增殖,24 h的IC50为8.4 mg·L-1,并能诱导HepG2细胞凋亡;但对LO-2的增殖影响较小,且几乎无诱导凋亡作用.结论 灯盏花素体外可选择性地抑制肝癌细胞的增殖,可能与其诱导肝癌细胞凋亡有关.     

男性不育症精液、精浆、精子中微量元素锌、硒含量分析

本文采用荧光分析方法检测了80例原发性男性不育症和30例正常生育者精液、精浆、精子中的Se、Zn含量。结果显示：不育组与正常组相比有显著差异。精液中的Zn含量正常值为1．8￣2．4mmol／ml，当精液中的Zn浓度达到6．2mmol／ml时，30min对精子有制动作用，Zn浓度达到9．6mmol／ml时，对精子的制动作用达100％，30mmol／ml时约20sec即可制动。精液中的Se对精子运动具有保护作用，因为Se是谷胱甘肽过氧化物酶的重要成份，可清除过氧化脂质的毒性作用，从而保护细胞膜结构的完整性和功能免受自由基的损害。     

高效液相色谱法测定人精浆中的游离肉碱

目的:建立精浆游离肉碱的测定方法.方法:用高效液相色谱法测定正常人与不育症患者的精浆游离肉碱.结果:方法线性范围为12.5～500μmol·L-1;最低检测浓度为5 μmol·L-1,总分析时间6.7 min.肉碱平均保留时间(5.24±0.19)min.高、中、低3种浓度的平均回收率为86.93%.批内、批间RSD分别为5.3%和10.8%.测得正常人与精子异常症病人精浆游离肉碱浓度分别为(903.8±470.1)(n=20)和(308.1±156.2)μmol·L-1(n=20),两者差异有极显著性(P＜0.01).结论:HPLC法测定精浆游离肉碱浓度灵敏、可靠、简便,适用于快速检测肉碱缺乏症病人的临床筛选工作.     

化合物LH-17对谷氨酸导致原代皮层神经元凋亡的保护作用

研究化合物LH-17对谷氨酸诱导原代皮层神经元凋亡的保护作用及其机制。L-谷氨酸钠(0.1,0.5和1.0 mmol·L-1)处理神经元30 min进行造模,化合物处理组在加入L-谷氨酸钠前给予美金刚(1μmol·L-1)或不同剂量的LH-17(0.1,1和10μmol·L-1)预孵育1 h再造模;换正常神经元培养基继续培养24 h后,MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检查细胞凋亡和坏死率,琼脂糖电泳分析凋亡后DNA lad-der情况;Fura-2对细胞内钙进行染色,荧光显微镜观察LH-17瞬时给药后细胞内钙离子浓度的影响,试剂盒分析NO水平。结果表明,L-谷氨酸钠浓度依赖性地诱导神经元发生凋亡和坏死,LH-17能抑制L-谷氨酸钠对细胞的毒性作用,减少凋亡小体,降低DNA断裂程度;L-谷氨酸能引起细胞内钙浓度大幅增加,用LH-17预处理后,增加幅度明显降低(P<0.05);同时,LH-17逆转了L-谷氨酸导致的细胞内NO浓度增高。以上结果提示,LH-17可能通过抑制神经元内钙超载,及下游NO浓度增高而起到减少谷氨酸引起的兴奋性氨基酸毒性的作用。     

白藜芦醇体外诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡的实验研究

目的探讨白藜芦醇(Res)体外对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞的增殖抑制作用及其对细胞凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测Res对RA滑膜细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞光度分析术(FCM)检测细胞凋亡率及细胞周期时相分布,同时进行细胞的形态学观察。结果MTT的检测结果显示药物浓度和细胞增殖抑制率间具有正相直线相关关系(P<0.01),Res体外作用类风湿关节炎滑膜细胞24 h对滑膜细胞的IC50为365μmol.L-1。FCM检测和细胞形态学观察结果显示Res可阻滞滑膜细胞于S期并诱导细胞凋亡,但细胞凋亡率并不完全与药物浓度成正相关。作用24 h时Res诱导类风湿关节炎滑膜细胞发生凋亡的最佳浓度是在200~400μmol.L-1。结论Res对类风湿关节炎滑膜细胞具有较强的增殖抑制作用,在一定药物浓度范围内,随药物浓度的增加Res可使细胞凋亡率升高,但超过一定作用浓度,药物的细胞毒作用增强,细胞凋亡率则成下降趋势。     

槟榔碱对人体外精子运动能力的影响

目的:研究槟榔碱(Ar)对人体外精子运动能力的影响。方法:优选50例正常男性精液与3组不同浓度(10、50、100μg·mL-1)Ar溶液共同孵育,以精子优选液为对照组,在共同孵育0.5、1、2h后用计算机辅助精子分析(CASA)系统对精子活率(Mot)、(a+b)级前向运动精子百分率([a+b)PM]、曲线运动速度(VCL)、直线运动速度(VSL)进行检测。结果:精液与10μg·mL-1Ar溶液共同孵育1h后的Mot与对照组比较有显著性差异(P<0.01),2h后Mot、VCL与对照组比较均有显著性差异(P<0.01);精液与50、100μg·mL-1Ar共同孵育0.5、1、2h后的Mot、(a+b)PM、VCL、VSL与对照组比较均有显著性差异(P<0.01或P<0.05),表明Ar浓度越高,作用时间越长,精子运动能力越低。结论:Ar能降低正常男性体外精子运动能力,其毒性与浓度时间成正比。     

苦参碱对人突变肉瘤细胞系MS0812的抑制增殖和诱导凋亡体外实验

目的:观察苦参碱(matrine)对体外培养的人肉瘤细胞系MS0812细胞的增殖和诱导调亡作用.方法:苦参碱处理人肉瘤细胞系MS0812后,应用MTT比色法检测不同浓度苦参碱和不同作用时间对MS0812细胞的增殖作用的影响,TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:苦参碱浓度大于500.0 mg·L-1作用24h对MS0812 细胞增殖有抑制作用;通过TUNEL试剂盒可以发现凋亡阳性细胞;流式细胞仪检测随着苦参碱浓度的增加,凋亡率逐渐升高.结论:苦生碱体外对肿瘤细胞系MS0812的生长抑制和诱导凋亡作用有限.     

粤北地区5225例男性精液质量检查结果分析

目的研究粤北地区5225例男性精液质量状况,为本地区的男性不育症临床治疗提供依据。方法5225例进行精液常规检查的男性患者,根据年龄分为A组(年龄≤30岁,2422例)、B组(30岁<年龄≤40岁,2180例)、C组(40岁<年龄≤50岁,580例)、D组(年龄>50岁,43例)。使用计算机辅助精子自动分析系统(CASA)分析精子浓度、活力,采用Diff-Quik快速染色法分析精子形态,按照第五版《WHO人类精液检查与处理实验室手册》对其进行统计分析,并比较各年龄组患者的精液质量。结果本地区受检的5225例男性患者中,精液各项参数均正常占16.2%(846/5225),无精子症占1.8%(95/5225)。各单项精液参数检查中,精子形态异常率最高[79.5%(4152/5225)],其次分别为前向运动精子(PR)百分率异常率[20.7%(1081/5225)]和精子活动率异常率[7.8%(409/5225)]。患者的精液量、精子活动率、前向运动精子百分率、精子正常形态率和精子总数随着年龄增加精液质量呈现出下降的趋势。各年龄组之间,D组与其他3组精子浓度、精子活动率、前向运动精子百分率、精子正常形态率、精子总数比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。四组精液参数异常率比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论粤北地区男性精液质量异常主要为精子形态异常和向前精子百分率异常。同时,随着年龄增长,男性精液参数的异常发生率呈上升趋势。     

利福平抑制对乙酰氨基酚代谢物耗竭谷胱甘肽的作用

目的研究小鼠肝微粒体温孵体系中利福平(RFP)抑制对乙酰氨基酚(APAP)毒性代谢物耗竭谷胱甘肽(GSH)的保护作用.方法取健康空白小鼠制备肝微粒体,体外温孵,通过高效液相色谱法(HPLC)测定GSH浓度.结果在体外P450体系中,50 mg·L-1 GSH温孵1 h后10.0%代谢,加入5 mmol·L-1 APAP温孵1 h后43.3%GSH耗竭,而加入100 mg·L-1 RFP和5mmol·L-1 APAP温孵1 h后仅19.7%GSH耗竭.结论利福平抑制对乙酰氨基酚的毒性代谢物导致的谷胱甘肽耗竭.     

不同浓度L-肉碱溶液体外透皮接收液中药物含量测定方法的建立及应用

目的:建立测定不同浓度L-肉碱溶液体外透皮接收液中药物含量的方法,并应用于体外透皮实验。方法:采用透皮扩散实验仪和反相高效液相色谱法,考察4mL浓度分别为10、20、40mg·mL-1的L-肉碱溶液的体外累积透皮量;色谱柱:Shim-pack VP-ODS,流动相:甲醇-0.05mo·lL-1磷酸二氢钾水溶液(5∶95,V/V,pH=2.4,含0.055%的庚烷磺酸钠),检测波长:224nm,流速:1mL·min-1,柱温:30℃,进样量:20μL。结果:L-肉碱检测浓度的线性范围为0.1～8mg·mL-1(r=0.9979,n=6),方法回收率为100.4%～101.2%,RSD均小于5%;10、20、40mg·mL-1L-肉碱溶液72h的体外累积透皮量分别为11.09、38.84、62.18mg。结论:本方法操作简便、准确、快速,可用于透皮接收液中L-肉碱的含量测定;体外透皮研究表明L-肉碱的透皮效果良好,累积透皮量呈浓度依赖性。     

番茄红素对CCl4诱导的正常肝细胞株HL-7702损伤的影响

目的体外观察番茄红素对人正常肝细胞株HL-7702细胞活力及凋亡的影响,探讨其对肝细胞的保护作用。方法体外培养人正常肝细胞株HL-7702,建立CCl4肝损伤模型,终浓度为2、5、10μmol·L-1的番茄红素干预处理,MTT法测定细胞活性、Horchest33342染色及TUNEL检测观察细胞凋亡。结果番茄红素在2～10μmol·L-1浓度范围内的对肝细胞无毒性,可抑制CCl4所致肝细胞活性下降,减少CCl4所致的肝细胞凋亡,一定剂量范围内与番茄红素浓度相关。结论番茄红素对正常肝细胞HL-7702具有保护作用。     

知母皂苷元对高糖引起的体外培养大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的探讨知母皂苷元(sarsasapogenin,Sar)对高糖引起的海马神经元损伤是否有保护作用。方法选用出生0～24 h Sprague-Dawley(SD)大鼠乳鼠,取海马,进行海马神经元体外培养,培养7 d用于实验。实验分为正常对照组、高糖组、高糖+Sar(10、30、100μmol.L-1)组;对照组:加入等量含0.1%DMSO培养基;高糖处理组:分别加入葡萄糖(30、50、100 mmol.L-1)作用48 h;高糖+Sar(10、30、100μmol.L-1)组:先加入不同浓度Sar(10、30、100μmol.L-1)作用1 h,然后加入葡萄糖(50 mmol.L-1)作用48 h;应用MTT方法观察细胞活力,免疫荧光和Western免疫印迹方法观察神经元突触素表达的改变。应用Hoechst 33258核染色检测神经元凋亡。应用Western免疫印迹方法观察caspase-3和多聚ADP核糖聚合酶(PARP)蛋白表达改变。结果加入葡萄糖(30、50、100 mmol.L-1)作用48 h可使培养神经元细胞活力明显降低,神经元突触素蛋白表达明显降低。另外高糖也可引起神经元凋亡细胞百分比和活性caspase-3、PARP蛋白表达水平也较对照组明显提高。在加入高糖前加入不同浓度Sar(10、30、100μmol.L-1)可明显对抗高糖引起的这些变化。培养海马神经元突触素蛋白表达较高糖组(50 mmol.L-1)明显增加,神经元凋亡细胞百分比和活性caspase-3、PARP蛋白表达水平也较高糖组明显降低。结论 Sar对高糖引起的海马神经元损伤具有明显的保护作用。     

东北天南星根提取物细胞毒性部位的筛选

目的观察东北天南星根醇提取物及各萃取部位对人乳腺细胞(HBL-100)的细胞毒性作用,并对其机理进行初步分析。方法采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)考察4个萃取部位对人乳腺细胞(HBL-100)体外增殖的影响,使用倒置显微镜观察细胞形态学变化,并利用流式细胞术(FCM)检测不同质量浓度乙酸乙酯萃取物作用24 h后的细胞凋亡率。结果东北天南星根醇提取物中乙酸乙酯层抑制作用最强,其质量浓度在22¹76 mg·L-1内,抑制率差异极其显著(P<0.001)。流式细胞术显示:各组细胞凋亡率随药物剂量的增大而增大,当药物剂量为30 mg·L-1时,细胞凋亡以晚期凋亡为主;当药物剂量为60 mg·L-1时,以早期凋亡为主;当药物剂量为120 mg·L-1时,早期凋亡率和晚期凋亡率都明显增大。结论东北天南星根醇提物乙酸乙酯层对HBL-100细胞毒性作用显著,并且具有良好的诱导细胞凋亡的作用。     

瓜蒌皮提取物对高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨瓜蒌皮提取物(extractive pericarpium trichosanthes,EPT)对体外高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株(HUVECs),观察不同浓度瓜蒌皮提取物干预高糖处理的HUVECs凋亡的变化。MTT法检测HUVECs的存活率、采用Hoechst染色法检测细胞凋亡、采用比色法测定细胞内Caspase-3的活性、Western blot法以及免疫荧光染色法检测核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的蛋白表达和p65核移位情况。结果 30 mmol·L-1葡萄糖处理内皮细胞48h能引起细胞活性明显降低,细胞凋亡率及caspase-3的活性明显增加,细胞中NF-κB蛋白表达升高及p65核移位增加。用瓜蒌皮提取物(12.5、25、50 mg·L-1)预处理细胞1 h,可以增加细胞活性;降低细胞凋亡率、caspase-3的活性及NF-κB蛋白表达,呈浓度依赖性,且对高糖诱导的p65核移位有抑制作用。结论瓜蒌皮提取物对体外高糖诱导的HUVECs凋亡有抑制作用,其作用机制与下调NF-κB表达和降低caspase-3活性有关。     

莲房原花青素对乙醇诱导的人胚肝细胞株L-02氧化损伤的保护作用

目的研究莲房原花青素(LSPC)对乙醇诱导的人胚肝细胞株L-02氧化损伤的保护作用。方法观察200mmol·L-1乙醇,5、10、25mg·L-1的LSPC,5、10、25mg·L-1的LSPC与200mmol·L-1乙醇共同作用于肝细胞L-02 24h后,运用单细胞凝胶电泳(SCGE)实验和微核实验(MNT)观察DNA和染色体损伤情况,用流式细胞术(FCM)分析凋亡率的变化以及活性氧探针(2,7-二氯荧光素)探测细胞内活性氧(ROS)水平的变化。结果 LSPC组与正常对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。纯乙醇组与正常对照组比较,差异有显著性意义,与乙醇组相比,5mg·L-1和10mg·L-1LSPC能显著降低olive尾矩(OTM)、微核率(MNF)、凋亡率和ROS的水平(均P<0.05),但高剂量组(25mg·L-1)对乙醇引起的肝细胞损伤保护作用不明显。结论适量浓度的莲房原花青素对乙醇诱导的肝细胞L-02的氧化损伤有保护作用。其机制可能与LSPC的抗氧化活性有关。     

精加力复合肉碱在精子体外处理中的应用

目的探讨精子体外处理中,精加力复合肉碱的应用方法及对精子动力的影响。方法选取我院接诊弱精症男性35例,随机分为5组,分别设为空白组,A组(1 mg/mL精加力复合肉碱溶液,30 min),B组(2 mg/mL精加力复合肉碱溶液,30 min),C组(1mg/m L精加力复合肉碱溶液,60 min),D组(2 mg/mL精加力复合肉碱溶液,60 min),比较各组精子活动率、精子前向运动率。结果 A组精子活动率、精子前向运动率均高于B、C、D组、空白对照组(P<0.05)。结论运用精加力复合肉碱对精子体外处理,可有效提高精子活力。     

L-肌肽对鱼藤素诱导SH-SY5Y细胞神经毒性的保护作用

目的研究L-肌肽是否能通过抗氧化活性降低鱼藤素导致的神经毒性。方法 SH-SY5Y细胞在L-肌肽(1、10、20、40、60、80、100 mmol·L~(-1))中培养24 h,CCK-8法测定细胞存活率。30 mmol·L~(-1) L-肌肽、20μmol·L~(-1)鱼藤素、20μmol·L~(-1)鱼藤素与30 mmol·L~(-1) L-肌肽作用于SH-SY5Y细胞24 h,AO/EB法检测细胞形态和凋亡情况。8μmol·L~(-1)鱼藤素、8μmol·L~(-1)鱼藤素与3 mmol·L~(-1) L-肌肽、8μmol·L~(-1)鱼藤素与30 mmol·L~(-1) L-肌肽、20μmol·L~(-1)鱼藤素、20μmol·L~(-1)鱼藤素与3 mmol·L~(-1) L-肌肽、20μmol·L~(-1)鱼藤素与30 mmol·L~(-1) L-肌肽、50μmol·L~(-1)鱼藤素、50μmol·L~(-1)鱼藤素与3 mmol·L~(-1) L-肌肽、50μmol·L~(-1)鱼藤素与30 mmol·L~(-1) L-肌肽作用于SH-SY5Y细胞24 h,CCK-8法检测细胞的增殖情况;双染流式细胞术检测细胞凋亡率;DCFH-DA流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)水平。结果 20μmol·L~(-1)鱼藤素与30 mmol·L~(-1) L-肌肽共作用于细胞后,细胞抑制率降低9.07%,早期凋亡的细胞数减少,早期凋亡率降低9.35%,总凋亡率降低10.7%,ROS水平低于20μmol·L~(-1)鱼藤素组,结果差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 L-肌肽能有效降低鱼藤素诱导SH-SY5Y细胞的神经毒性,保护细胞,其机制可能与降低氧化应激水平相关。     

纳米蜂胶对肿瘤细胞K562,L929,MNK28的杀伤效应及机理研究

目的:了解纳米蜂胶对常见肿瘤细胞的体外杀伤效应,并探讨其机理.方法:乳酸脱氢酶法测定纳米蜂胶体外对小鼠成纤维瘤细胞、人胃癌细胞、人红白血病细胞和非肿瘤源性的脐静脉内皮细胞的杀伤作用.流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率.结果:纳米蜂胶在浓度16～400μg·ml-1范围内对3种肿瘤细胞都有一定的杀伤作用,且随着浓度的升高杀伤率增加,其对肿瘤细胞的杀伤作用明显强于普通蜂胶,但低于氟尿嘧啶.纳米蜂胶对K562,L929,MNK28半数致死浓度(IC50)分别为(357.8±8.3)μg·ml-1,(472.3±27.5)μg·ml-1,(461.7±18.7)μg·ml-1.而普通蜂胶对K562,L929和MNK28的IC50分别为(737.6+74.3)μg·ml-1,(753.6±82.1)μg·ml-1,(939.3±75.5)μg·ml-1.而两种蜂胶对人脐静脉内皮细胞的毒性均较低.细胞凋亡率与杀伤率有一定的线形关系,纳米蜂胶作用后处于G0/G1期的肿瘤细胞的比例明显增高.结论:纳米蜂胶体外对小鼠成纤维瘤细胞、人胃癌细胞、人红白血病细胞具有明显的杀伤作用,诱导肿瘤细胞凋亡是其抗肿瘤的机制之一.     

氯化铝对人精子毒性作用及美洛昔康对其干预作用的体外试验研究

目的:研究氯化铝(AlCl3)对人精子的毒性作用及美洛昔康对其的干预作用。方法:采用体外试验方法,取5份正常人精液,每份精液稀释成1×106个/mL后均分为8份,4份为1组,每组4个亚组,第1组为对照组(生理盐水)和AlCl3低、中、高剂量组(5、10、15mol·L-1);第2组在第1组的基础上,除对照组改为加入美洛昔康1×10-5mol·L-1外,其余3组均预先加入美洛昔康1×10-5mol·L-1。在37℃水浴箱中孵育0、2、4h后检测精子存活率及活动率,精浆中超氧化物歧化酶(SOD)及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性。结果:AlCl3对精子的存活率、活动率、SOD活性均有抑制作用,对AST活性具有增强作用,并呈浓度、时间依赖性(P<0.05或P<0.01);加入美洛昔康后,在相应浓度及时间点,各组精子的存活率、活动率、SOD活性、AST活性均有好转,但不能完全改善。结论:体外试验中,AlCl3对人精子具有明显的毒性作用,美洛昔康对其具有明显的改善作用。     

前列腺素E1对尿酸所致人肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的观察前列腺素E1(PGE1)对尿酸所致人肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法取处于对数生长期的HK-2细胞随机分为5组:正常对照组、尿酸组(200、400、800μmol·L-1 UA)、尿酸+PGE1组。不同浓度的尿酸刺激HK-2细胞24、48、72 h,用MTT比色法检测细胞活性抑制率;不同浓度尿酸培养HK-2细胞24 h,用Annexin V FITC/PI流式细胞仪检测细胞凋亡率并检测细胞培养液NAG酶的活性,观察尿酸对HK-2细胞的毒性作用;并加入PGE1干预,探讨其对HK-2细胞的保护作用。结果尿酸作用HK-2细胞24 h后,与对照组比较,细胞凋亡率增加至(56.06±4.937)%(P<0.01),NAG酶释放量增加至(15.23±0.617)U·L-1(P<0.01)。加PGE1组,与同浓度单纯尿酸组比较,在不同时间点细胞活性抑制率均明显降低,凋亡率减少至(41.61±4.149)%(P<0.01);NAG酶释放量减至(11.24±0.468)U·L-1(P<0.01)。结论 1尿酸抑制HK-2细胞增殖和促进凋亡,增加其NAG酶的释放;2 PGE1对尿酸损害HK-2细胞有一定的保护作用。