Ⅱ型胶原蛋白的热稳定性、圆二色性和红外光谱研究

目的以蓝鲨Ⅱ型胶原蛋白为材料,分析Ⅱ型胶原蛋白的热稳定性、圆二色性和红外光谱特性。方法采用限制性酶解法分离蓝鲨软骨Ⅱ型胶原蛋白,通过SDS-PAGE、DSC、CD、IR分析Ⅱ型胶原蛋白的相对分子质量、热变性温度、二级结构特征和红外光谱特征。结果蓝鲨Ⅱ型胶原蛋白是由相对分子质量为130kDa的α1链构成;蓝鲨Ⅱ型胶原蛋白的热变性温度为40.5℃,[Na+]和[H+]改变了胶原蛋白的热稳定性;蓝鲨Ⅱ型胶原蛋白在3411、3008、1648、1549cm-1有红外特征性吸收峰;蓝鲨Ⅱ型胶原蛋白以β-折叠为主,占主链的36.9%,接近于全β型三级结构,[H+]将改变Ⅱ型胶原蛋白的二级结构元件构成,使其β-折叠消失,出现少量的α-螺旋,Ⅱ型胶原蛋白肽链转变成无规卷曲。结论蓝鲨Ⅱ型胶原蛋白是典型的纤维状蛋白质,具有作为生物功能物质的优良生物化学特性。     

巴沙鱼皮胶原蛋白的提取、组成及变性温度研究

目的 从巴沙鱼皮中提取胶原蛋白并分析其结构类型及氨基酸组成,同时研究物理、化学交联法对其变性温度的影响。 方法 采用酸提法和酶提法提取巴沙鱼皮中的胶原蛋白,并用SDS-PAGE凝胶电泳、FTIR和HPLC分析胶原蛋白的结构类型和氨基酸组成。通过测定粘度值研究物理、化学交联法对其变性温度的影响。 结果 酸提法提取胶原蛋白的提取率为58.2%,酶提法的提取率为22.0%;巴沙鱼皮鱼胶原蛋白为I型胶原蛋白;经120 ℃热交联后,巴沙鱼皮胶原蛋白的变性温度从34.2 ℃下降至28.0 ℃,经四甲基乙二胺(EDC)交联后,其变性温度上升至35.8℃。 结论 巴沙鱼皮富含I型胶原蛋白,酸提法比酶提法提取效率高,采用化学交联法可提高其变性温度,因而巴沙鱼皮可作为胶原蛋白的重要来源,可用于制备多种生物医用材料,具广泛的应用前景。     

大马哈鱼皮胶原蛋白制备和表征

用稀碱处理大马哈鱼皮,然后进行限制性酶解,制备得到胶原蛋白,检验制备样品的纯度,测定样品的热变性温度和细胞相容性。制备的胶原蛋白α链的含量≥75%,β链的含量≤25%,有微量的γ链;变性温度是12.5℃;细胞培养3天的相对活力是80.0±3.6%;大马哈鱼皮胶原蛋白为基质的细胞活力仅次于对照组(空白细胞培养板),优于聚乳酸、聚羟基丁酸和聚-3-羟基丁酸戊酸。海鱼皮胶原蛋白可进一步应用于生物材料研究。     

3种卵黄抗体分离提取方法对其生物活性影响的比较

目的比较3种卵黄抗体(IgY)提取方法对其生物活性的影响,筛选出最佳的IgY分离提取法。方法以鸡法氏囊病病毒抗原多次免疫产蛋鸡,收集高含量的IgY,用水稀释法、缓冲液稀释法和浓盐水稀释法3种不同的方法提取IgY,采用竞争法检测IgY的生物活性。结果浓盐水稀释法提取分离IgY,对其生物活性的影响最大,下降得最多;水稀释法和缓冲液稀释法的影响较小。缓冲液稀释法在绝对值上优于水稀释法,但t检验表明二者之间并无显著差异。结论缓冲液稀释法操作简单、成本低廉,对生物活性影响低,可为大规模生产提供依据。     

“超滤”技术在硫酸软骨素生产应用

<正> “超滤”(UF)是利用半透膜原理在压力的作用下使溶液中的水(溶剂)和低分子物质(如盐类)通过膜微孔除去,大分子物质被截留。从而达到物质分离和浓缩的目的。目前国内硫酸软骨素的生产,利用稀碱法或浓碱法工艺,用大量的乙醇沉淀出软骨素。在此生产过程中,乙醇使用量会最终影响产品     

重组类人胶原蛋白与牛源Ⅰ型胶原蛋白的比较研究

目的比较重组类人胶原蛋白(RHCg)和牛源Ⅰ型胶原蛋白(BTCg)的异同。方法用有限胃蛋白酶水解和盐析沉淀法从牛肌腱中提取纯化BTCg。通过氨基酸分析测定BTCg和RHCg的氨基酸组成;用园二色谱表征BTCg和RHCg在溶液中变性前后的二级结构;用差示扫描量热仪(DSC)、调制差示扫描量热仪(MDSC)以及热重仪(TG)分析BTCg和RHCg的热学性质。结果RHCg和BTCg的氨基酸组成有显著差异。特别是RHCg不含羟脯氨酸;亚氨基酸含量为17.83%(残基数),低于BTCg的22.03%(残基数);赖氨酸含量为0.91%低于BTCg的2.37%;谷氨酸含量为8.13%低于BTCg的12.91%;精氨酸为1.01%低于BTCg的5.33%。在溶液中,温度为20℃时,BTCg和RHCg分子的二级结构均为左旋聚脯氨酸(P-Ⅱ)构型。BTCg和RHCg在140~280℃区间的热学性能显著不同。结论BTCg和RHCg分子的二级结构相似,但氨基酸组成和热学性质存在显著差异。充分认识和理解不同来源胶原蛋白质的特性对于合理设计和使用胶原基生物材料具有重要意义。     

非水毛细管电泳法分离测定黄连及其制剂中小檗碱的含量

建立了非水毛细管电泳法分离测定黄连及其制剂中小檗碱的含量。通过对有机溶剂以及醋酸钠浓度的选择,确定使用75mmol/L醋酸钠甲醇溶液含1mmol/L醋酸为分离用缓冲液,可使黄连及其制剂中的小檗碱与其它组分产生良好的分离。本法在小檗碱浓度为25～200μg/ml范围内具有良好的线性关系和重现性。     

绿豆胰蛋白酶抑制剂的分离和纯化

目的研究1种高效分离纯化绿豆胰蛋白酶抑制剂(MBTI)的方法。方法采用硫酸抽提,硫酸铵分级沉淀,缓冲液溶解沉淀,用相对分子质量(Mr)为30 000的超滤膜去除大分子蛋白质,Mr为5 000的超滤膜除盐及小分子蛋白质,亲和色谱纯化,得MBTI,高效液相色谱法(HPLC)和SDS-PAGE电泳法分别测定其纯度和Mr,以酪蛋白为底物测其活性。结果纯化的MBTI经HPLC和SDS-PAGE鉴定为2条蛋白质带,其Mr分别为12 000和8 000,其活性约为大豆蛋白酶抑制剂的3倍。结论超滤法与亲和色谱结合能快速高效地分离纯化MBTI。     

工艺过程中温度对甲壳素分子的影响

甲壳素的制备多以虾、蟹的甲壳为原料通过稀酸脱盐和稀碱消化蛋白质的方法,本文以该法为基础,考察了制备过程中温度变化对甲壳素分子的影响。综合表明了常温制备甲壳素除吸附水外尚含有缔合水。表观粘度分析结果表明常温处理可较好地维持甲壳素分子的聚合度。     

重组类人胶原蛋白与牛源I型胶原蛋白的比较研究

目的 比较重组类人胶原蛋白（RHCg）和牛源I型胶原蛋白（BTCg）的异同。方法 用有限胃蛋白酶水解和盐析沉淀法从牛肌腱中提取纯化BTCg。通过氨基酸分析测定BTCg和RHCg的氨基酸组成；用园二色谱表征BTCg和RHCg在溶液中变性前后的二级结构；用差示扫描量热仪（DSC）、调制差示扫描量热仪（MDSC）以及热重仪（TG）分析BTCg和RHCg的热学性质。结果 RHCg和BTCg的氨基酸组成有显著差异。特别是RHCg不合羟脯氨酸；亚氨基酸含量为17.83％（残基数），低于BTCg的22．03％（残基数）；赖氨酸含量为0．91％低于BTCg的2．37％；谷氨酸含量为8．13％低于BTCg的12．91％；精氨酸为1．01％低于BTCg的5．33％。在溶液中，温度为20℃时，BTCg和RHCg分子的二级结构均为左旋聚脯氨酸（P-Ⅱ）构型。BTCg和RHCg在140～280℃区间的热学性能显著不同。结论 BTCg和RHCg分子的二级结构相似，但氨基酸组成和热学性质存在显著差异。充分认识和理解不同来源胶原蛋白质的特性对于合理设计和使用胶原基生物材料具有重要意义。