食管癌抗原和超抗原构建肿瘤疫苗的抗癌作用研究

目的利用食管癌肿瘤可溶性抗原(TSA)和超抗原(SEC)构建肿瘤疫苗,刺激外周血淋巴细胞,诱导产生细胞毒性T细胞(CTLs),对肿瘤细胞进行体内外杀伤作用研究,以探讨其抗肿瘤作用。方法外周血淋巴细胞经肿瘤疫苗作用,进行体外培养,诱导产生细胞毒性T细胞;细胞毒实验测定效应细胞杀伤活性;建立小鼠移植瘤模型,用肿瘤疫苗进行干预治疗,观察其治疗效果。结果经肿瘤疫苗刺激的淋巴细胞组诱导的CTLs对靶细胞杀伤活性显著高于单纯淋巴细胞组(P<0.05),对TSA来源的食管癌细胞具有选择性杀伤作用;体内研究发现肿瘤疫苗能显著减轻小鼠荷瘤负担,延长生存期。结论肿瘤可溶性抗原与超抗原SEC构建的肿瘤疫苗能产生高效特异性的抗肿瘤效果,显示出良好的抗肿瘤免疫治疗作用。     

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素C和肿瘤可溶性抗原诱导的细胞毒性T淋巴细胞的杀瘤效应

目的 探讨肿瘤可溶性抗原(TSA)联合超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素C(SEC)诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)对肿瘤细胞的杀伤作用.方法 实验分为对照组(淋巴细胞)和实验组(SEC+ TSA+淋巴细胞).分离肿瘤患者外周血淋巴细胞,经TSA、超抗原SEC联合作用诱导产生CTLs,对其增殖、细胞表型、杀瘤活性进行观察和测定.结果 经TSA、SEC联合刺激的淋巴细胞组增殖活性明显增强.实验组和对照组CD3均阳性表达,实验组CD8+明显高于对照组(49.07％比27.52％,P＜0.05).经肺癌TSA、超抗原SEC联合刺激淋巴细胞组培养诱导的CTLs,当效靶比为20∶1时对CALU-6、自体肺癌细胞、Hela细胞杀伤活性明显高于效靶比为10∶1[分别(89.6±3.7)％比(51.5±4.0)％,(92.0±4.0)％比(54.5±4.0)％,(65.0±3.8)％比(35.3±2.4)％,均P＜0.05];效应细胞对人肺癌细胞株CALU-6、自体肺癌细胞的杀伤活性明显高于Hela细胞(P＜0.05).结论 经肿瘤抗原和超抗原SEC诱导的CTL能够产生高效特异性的杀瘤效应.     

树突状细胞疫苗对人肺腺癌GLC-82细胞体外杀伤作用的实验观察

目的 通过建立负载人肺腺癌细胞株GLC-82可溶性抗原的树突状细胞(DC)疫苗,探讨应用DC疫苗的致敏特异性杀伤性T细胞(CTL)体外杀瘤细胞的可行性和实验条件,为后期l临床应用提供实验依据.方法 通过用定量摩尔氯化钾提取法获得人肺腺癌细胞GLC-82的可溶性抗原多肽(TSA),从人外周血单核细胞(PBMC)中用GM-CSF、白细胞介素-4和肿瘤坏死因子-α体外诱导扩增并鉴定获取DC,构建DC疫苗;利用DC疫苗刺激同种异体外周血T淋巴细胞活化增殖,诱导产生具有识别肺癌细胞抗原的特异性CTL的可行性及MTT法检测该CTL对GLC-82、肺癌CALU-6和人红白血病K 562细胞的体外杀伤效应.结果 人PBMC体外经7d诱导出的DC,经形态学、免疫组化证实具有典型的树突状细胞特性;负载GLC-82抗原的DC疫苗能有效诱导同种异体T淋巴细胞活化增殖产生CTL,最适浓度为1:10;诱导活化的CTL对靶细胞的杀伤活性明显高于未经肿瘤抗原致敏的组.结论 诱导培养人外周血PBMC中的Mo可获取大量DC,诱导出的DC功能较强,适宜临床应用;DC疫苗能强烈刺激初始型同种异体T淋巴细胞增殖产生CD 8+表达增加的CTL;激活的CTL对肺癌靶细胞发挥高效而特异的细胞毒效应,对非肺组织瘤靶细胞也具有非特异性杀伤效应.     

超抗原SEC抗胶质瘤的研究

目的　观察超抗原SEC活化淋巴细胞对胶质瘤的杀伤作用。方法　采用APAAP法对SEC活化的淋巴细胞进行亚群分析 ;按MTT法测定经SEC活化的淋巴细胞对胶质瘤的体外杀伤作用 ;通过建立荷瘤动物模型及人外周血淋巴细胞———SCID小鼠免疫嵌合模型 ,观察肿瘤生长曲线。结果　经SEC活化的淋巴细胞主要为CD4 + 细胞 ;经SEC活化的淋巴细胞对 8株胶质瘤细胞均产生强大的杀伤作用 ,其中以 1× 10 4U·L-1剂量组作用最明显。生长曲线显示 :A组、C组和B组对胶质瘤生长抑制率分别为 5 8 5 %、4 6 2 %及 36 3%。结论　经超抗原SEC活化的淋巴细胞对胶质瘤有杀伤作用。     

糖基化抗原致敏的DC与CIK共培养对高表达HER-2胃癌细胞免疫应答的研究

目的：探讨HER-2／neu胞外配体第2结构域（L2）经糖基化修饰后作为肿瘤疫苗在抗胃癌免疫中的作用。方法：纯化出目的蛋白HER-2／neu胞外配体第2结构域,并对其进行糖基化修饰（mL2）,同时选取12例经免疫组化证实为HER-2／neu阳性的胃腺癌患者,用mL2致敏这12名患者外周血来源的树突状细胞（DC）,同时诱导患者来源的细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）,将DC与CIK共培养后,研究CIK的增殖、细胞因子分泌以及CIK对HER-2／neu阴性胃癌细胞株和自体胃癌细胞的杀伤活性。结果：mL2致敏的DC刺激了CIK的增殖,促进了CIK向TH1方向分化,并提高了CIK对HER-2／neu阳性胃癌细胞株和自体胃癌细胞的杀伤活性,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：负载mL2的DCs提高了CIK对HER-2／neu阳性胃癌细胞株和自体胃癌肿瘤的特异性杀伤能力,甘露糖化抗原可能成为新型肿瘤疫苗应用于临床胃癌免疫治疗。     

脐血树突状细胞提呈抗原对特异性CTL诱导杀伤的探讨

利用pH3．3柠檬酸．磷酸盐缓冲液（0．131M柠檬酸／0．066M Na2HPO4）提取的QGY-7703细胞膜外抗原多肽（50μg／m1），经过细胞因子GM-CSF（100ng／m1）、TNF-a（1000U／m1）以及IL-4（50ng／m1）诱导脐血造血干细胞分化的脐血树突状细胞（DC）进行抗原加工和提呈后，可以有效地激活外周血淋巴细胞（PBLC），形成特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）．使其对QGY-7703细胞具有明显的杀伤活性，且这种杀伤活性在50：1以后随效：靶比例的增加而更加明显，在对QGY-7703、SPGA-1、HL-60以及K562细胞的杀伤比较时，更加明显地表现出杀伤细胞的特异性，而且研究还表明，这种选择性杀伤作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡途径杀死肿瘤细胞，本研究进一步表明应用脐血来源的脐血树突状细胞可以作为肿瘤免疫中的抗原提呈细胞（APC），并执行其抗原提呈作用，激活特异性细胞毒性T淋巴细胞执行其细胞免疫功能。     

膜抗原（Lipostn）对人胃腺癌LAK增殖及杀伤活性的影响

本实验研究膜抗原（Ｌｉｐｏｓｔｎ）对人胃腺癌ＬＡＫ增殖及杀伤活必的影响作用。患者胃肠道肿瘤相关抗原免疫电流检测阳性。结果表明，Ｌｉｐｏｓｔｎ对ＬＡＫ增殖有促进作用，以２．５μｇ剂量最为显著。同时，Ｌｉｐｏｓｔｎ与ｒＩＬ－２共激活的ＬＡＫ细胞体外杀瘤活性得到增强，杀伤率近似或超过效／勒比增加１倍时的ＬＡＫ杀伤率。提示该膜抗原增强了胃腺癌ＬＡＫ杀瘤活性，具有使过继免疫治疗敏感群体受益的潜在价值。     

重组hIFN-α-2b-卡介苗激活杀伤细胞抗膀胱肿瘤作用的体外研究

目的:研究重组hIFN-α-2b-卡介苗(hIFN-α-2b-BCG)对人外周血单个核细胞(peripheralbloodmonocytes,PBMC)活化增殖,以及BCG激活杀伤细胞(bacilliCalmette-Guérinactivatedkillercell,BAK细胞)对膀胱肿瘤细胞的杀伤效应。方法:分别利用野生型BCG、野生型BCG 干扰素作为对照诱导活化PBMC,比较重组BCG对PBMC的活化增殖效应,采用噻唑兰比色分析法(MTT法),分别在不同时间点检测上述各成分对PBMC增殖活化效果;采用乳酸脱氢酶释放试验(LDH法)研究不同浓度重组BCG活化PBMC后对膀胱肿瘤细胞的不同杀伤效果。结果:MTT测定表明,重组BCG诱导PBMC活化增殖的能力明显强于同浓度的对照组刺激效果(P<0.05),且重组BCG在72h仍保持较强的活化能力;乳酸脱氢酶释放试验显示,不同浓度重组BCG诱导的BAK细胞抗癌效应均高于对照组诱导的抗癌效果(P<0.05)。结论:重组BCG对人PBMC具有较强的活化增殖作用,增强PBMC对肿瘤细胞的杀伤效应。     

跨膜型超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A融合蛋白的抗肿瘤作用

目的　为扩大超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)的抗瘤谱 ,制备跨膜型SEA融合蛋白 ,研究该蛋白制备的肿瘤疫苗的抗肿瘤作用。方法　在荷B16黑色素瘤的C5 7BL/ 6小鼠上 ,观察跨膜型SEA融合蛋白制备的肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用和免疫保护作用 ,并通过乳酸脱氢酶 (LDH)释放法检测治疗组和免疫组小鼠脾细胞的天然杀伤细胞(NK)和细胞毒性T细胞 (CTL)活性。结果　融合蛋白制备的肿瘤疫苗能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长 ,并延长其生存期 ,其脾细胞的NK和CTL活性显著增强。同时 ,该肿瘤疫苗对同种肿瘤细胞攻击可产生较强的免疫保护作用。结论　跨膜型SEA融合蛋白制备的肿瘤疫苗具有显著的抗肿瘤作用 ,可有效激发荷瘤小鼠机体的特异性和非特异性抗肿瘤免疫应答 ,增强CTL和NK活性。     

增殖细胞核抗原在食管鳞癌中的表达及其意义

增殖细胞核抗原在食管鳞癌中的表达及其意义福建省立医院肿瘤科欧德彬潘小杰施纯玫病理科施作霖肿瘤群体增殖动力学参数对研究肿瘤生物学行为有很高的价值。近年有关增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）研究表明，ＰＣＮＡ表达可反映细胞增殖活动，作为判断细胞增生活跃程度的一个...     

抗肿瘤坏死因子-α治疗对强直性脊柱炎患者外周血CD4~+T细胞增殖功能的研究

目的探讨rhTNFR-Fc治疗对AS患者外周血T细胞增殖功能的影响。方法于基线、第1、4次给药后收集患者和健康对照外周血,使用WST-1活细胞染色法检测治疗前后CD4+T细胞增殖率。并与临床指标进行相关性分析。结果①CD4+T细胞增殖率基线时和第4次给药后与对照组相比差异有统计学意义(P值分别为0.0034和0.0494);与基线时相比,差异均无统计学意义。②CD4+T细胞增殖率的变化率在第1、4次给药后均为负值。③各时间点临床指标与CD4+T细胞增殖率均无相关性。结论AS患者存在T细胞增殖功能的上调;rhTNFR-Fc治疗降低了AS患者CD4+T细胞增殖能力。     

树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞体外抗肺癌的实验研究

目的探讨树突状细胞（DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）在体内外能否有效的抗肺癌。方法正常人外周血单个核细胞经不同细胞因子作用后培养成DC和CIK细胞,单个核细胞经贴附塑料平皿获得单核细胞,加入GM—CSF,IL-4及TNF—a诱导获得DC,悬浮细胞加入IFN—g,24h后IL-1a,IL-2及CD3McAb诱导获得CIK,将A549制备成肿瘤细胞冻融物．作为肿瘤抗原刺激DC,并将DC与CIK细胞联合培养（DC＋CIK,负载抗原的DC＋CIK）,以CIK细胞单独培养作为对照。CytotoxicityTOX96体外杀伤实验测定体外细胞毒活性。结果在培养的第15d．与负载抗原的DC共同培养的CIK与CIK细胞单独培养细胞相比,增殖速率明显提高[（23．4±2．3）倍vs（16．7±2．7）倍,P〈0．05],CD3＋CD56＋细胞表达水平也明显提高,[（64．3±3．6）％vs（43．9±2．1）％,P〈0．05],同时负载抗原的DC的CIK对A549细胞的体外下细胞毒活性增强。结论DC与CIK细胞共培养后可提高CIK细胞的增殖速率,提高CIK细胞表型的表达水平,增强CIK抗肺癌的活性．将来可作为一种临床有效的过继免疫治疗策略。     

特异性抗原致敏的DC-CIK细胞对B16黑色素瘤多途径抑瘤作用的研究

目的探讨特异性抗原致敏的树突状细胞(dentritic cells,DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer,CIK)细胞对B16黑色素瘤的作用。方法采用特异性肿瘤抗原致敏的DC与CIK细胞共同培养,分析其免疫表型,计算抑瘤率;流式细胞(FCM)检测癌细胞增殖周期中G0/G1期、S期、G2/M期细胞比率和细胞凋亡指数(apoptosis Index,AI)、细胞增殖指数(proliferation Index,PI)的变化;透射电镜观察形态学变化;并用MTT法检测其对肿瘤细胞的杀伤力。结果特异性抗原致敏的DC-CIK细胞组抑瘤率高于DC-CIK组和CIK组;FCM检测G0/G1期细胞比率、AI显著升高,S期无明显变化,G2/M期细胞比率、PI显著下降;特异性抗原致敏的DC-CIK细胞组杀伤活性明显升高(P<0.05)。结论特异性抗原致敏的DC-CIK细胞对B16黑色素瘤的抑瘤作用明显高于DC-CIK细胞和单纯CIK细胞。     

TLR9信号通路参与急性肺损伤的作用机制研究

目的研究Toll样受体-9在急性肺损伤中的作用机制,为临床诊疗提供理论依据。方法分离40例急性肺损伤患者的外周血单个核细胞,采用RT—PCR检测Toll样受体-9mRNA表达,外周血单个核细胞（PBMC）经过非甲基化胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸序列的寡脱氧核苷酸（CpGODN）和不含非甲基化胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸序列的寡脱氧核苷酸（non—CpGODN）、空白培养三种形式培养72h。采用3H—TdR掺入法测定PBMC增值变化,采用流式细胞仪检测T细胞亚群比例、T细胞表面CD69分子变化及CD8＋T细胞内IFN-γ和IL-4的表达。采用ELISA法对PBMC上清液IFN-α的浓度,并评价其对氯喹和抑制性ODN的反应程度。结果急性肺损伤患者PBMC表达TLR9mRNA的表达强度为（0．75±0．08）,与健康组（0．76±0．09）比较差异无统计学意义（P〉0．05）;CpGODN诱导急性肺损伤患者PBMC增殖（P〈0．05）,增加CD3＋T细胞表面CD69分子的表达（P〈0．05）;增强CD8＋T细胞产生IFN-γ的能力（P〈0．05）;增强CD4＋T／CD8＋T比值（P〈0．05）;CpGODN可促进IFN-α的分泌（P〈0．05）;氯喹和抑制性ODN会抑制CpGODN产生IFN—α。结论TLR9参与急性肺损伤患者的免疫调节,其激活效应包括促进PMBC活化、增加PBMC中CD4＋T的比例,诱导并增殖IFN-α产生,促进CD8＋T分泌IFN-γ。     

负载EB病毒潜伏膜蛋白基因的树突状细胞疫苗的体内抗肿瘤免疫作用

目的 观察负载EB病毒潜伏膜蛋白(EBV-LMP2)基因的树突状细胞(DC)疫苗体内激活的细胞毒T细胞(CTLs),在严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内对人鼻咽癌(NPC)细胞株CNE-2的免疫保护作用.方法 人外周血来源的单核细胞(PBMC)经细胞因子扩增培养为成熟DC,rAd-EBV-LMP2重组腺病毒转染DC制备疫苗,对疫苗进行致瘤性检测;采用人外周血T细胞悬液腹腔注射建立人外周血淋巴细胞-严重联合免疫缺陷小鼠(hu-PBL-SCID)模型,随机分为4组:对照组、T细胞组、未转染DC组、LMP2-DC组.末次免疫7d后,接种CNE-2细胞,观察小鼠成瘤率、成瘤潜伏期、肿瘤体积及重量;定期检测小鼠血清中人IgG水平;测定小鼠脾淋巴细胞的特异性细胞毒淋巴细胞(CTL)活性.结果 rAd-EBV-LMP2-DC疫苗接种于小鼠体内未见肿瘤形成,脾、肺、肝和肾等器官未出现肿瘤病变;小鼠血清均检测出人IgG,hu-PBL-SCID嵌合模型重建成功;LMP2-DC组肿瘤的潜伏期明显延长,肿瘤生长速度、体积及重量显著减小(P＜0.01),且LMP2-DC组小鼠脾淋巴细胞显示出对肿瘤细胞强大的杀伤活性(P＜0.01).结论 EBV-LMP2-DC疫苗能在hu-PBL-SCID小鼠体内诱导产生强大的CTL反应,保护小鼠免受肿瘤细胞的攻击,对肿瘤细胞具有有效的免疫保护作用.     

冻融人外周血树突状细胞基因疫苗体外抗肿瘤活性研究

目的观察EB病毒潜伏膜蛋白重组腺病毒(rAd-EBV-LMP2)转染的冻融人外周血树突状细胞(DC)诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)抗肿瘤活性。方法人外周血来源的单核细胞经细胞因子扩增培养为成熟DC,液氮冻存;rAd-LMP2重组腺病毒转染冻融DC制备疫苗。动态观察细胞形态学特征,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测DC疫苗刺激同种T淋巴细胞增殖活性,以及诱导的CTL对肿瘤细胞的杀伤活性。结果rAd-LMP2转染的冻融DC疫苗具有形态迥异、多突起的典型形态学特征,其刺激同种T淋巴细胞的增殖能力明显高于对照组(P<0.01),能诱导高效的CTL活性(P<0.01),与新鲜DC疫苗差异无统计学意义(P>0.05)。结论rAd-LMP2转染冻融DC疫苗在体外能激发较强的EBV-LMP2特异性的功能性CTL,为EBV相关的鼻咽癌(NPC)的免疫治疗提供策略。     

Activation of natural killer cell cytotoxicity of human blood monocytes by a low molecular weight component from viscum album extract

Viscum album extracts (Helixor) were investigated for their potency to influence natural killer cell (NK) cytotoxicity of human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in vitro. The samples investigated were unable to enhance NK cytotoxicity in PBMC/tumor cell co-cultures by direct short-term mediation but NK cytotoxicity of human PBMC was strongly stimulated when PBMC were pre-incubated for 72 h with a partly purified fraction (HM-BP) derived from extracts of V. album mali. Stimulation of NK cytotoxicity was not dependent from age and sex of PBMC donors and was directed against highly as well as moderately NK-sensitive human tumor cells. The responding effector cells were identified as monocytes/macrophages and stimulation of the NK cytotoxicity of these cells was not based on increased proliferation. The active component in the HM-BP fraction has a molecular weight of about 1000 Da or smaller and correlates with the structural criteria of an oligosaccharide. The activity was completely abrogated when the active fraction was treated with endoglycosidase F or alpha-glucosidase. Partial inactivation was observed after treatment with endoglycosidase D or hemicellulase. Moreover, the active fraction induced a reduction in tumor take incidence and tumor development in mice when applied before and after tumor challenge.     

牛磺酸对化疗后S_(180)荷瘤小鼠增效减毒作用的研究

目的研究牛磺酸对环磷酰胺化疗后S180荷瘤小鼠的增效减毒作用。方法取健康昆明小鼠50只,将S180肿瘤细胞种植于小鼠右腋窝皮下,建立移植性肿瘤模型。实验分为五组。腹腔注射给药,每日1次,连续8 d。观察不同剂量牛磺酸(Tau)与环磷酰胺(CTX)联合用药的抑瘤率;脾指数和胸腺指数;检测骨髓有核细胞数和外周血白细胞数;MTT法检测NK细胞杀伤活性和脾淋巴细胞增殖活性。结果与模型组比较,CTX组抑瘤率为56.65%,CTX+Tau低、中、高剂量组小鼠的抑瘤率分别为60.10%,72.41%,86.70%,有统计学意义(P<0.01);与CTX组比较,CTX+Tau各剂量组外周血白细胞数,骨髓有核细胞数,脾指数,胸腺指数,NK细胞活性,淋巴细胞增殖活性增高。尤其是CTX+Tau中、高剂量组作用显著(P<0.05)。结论牛磺酸与环磷酰胺联合用药具有增效减毒作用。