重组人表皮生长因子的基因重组研究进展

天然的重组人表皮生长因子(hEGF)存在于人体的多种组织和体液中,但主要是从人尿中分离提纯,因其含量非常少,难以大量制备应用于研究和临床当中. 自20世纪80年代以来,随着生物技术的飞速发展,基因重组技术不断地得到发展与完善,人们便开始对重组hEGF进行大规模生产的尝试.     

人表皮生长因子在转基因番茄中成功表达

目的以转基因番茄生产人表皮生长因子(hEGF)。方法构建hEGF基因的表达载体pCAM-35S-hEGF,通过电激法转化到农杆菌菌株C58中,采用叶盘法转化番茄品系cg2002-14。结果子叶经发芽及生根诱导培养后得到了再生植株。PCR分析表明,hEGF基因已整合到番茄的基因组中。放射免疫法(RIA)测得hEGF在果实中平均含量为3.78ng·g-1。结论成功构建了hEGF基因的表达载体,获得了表达hEGF的转基因番茄植株。     

人源表皮生长因子变构体对实验性阿尔采默病的治疗作用

目的：为了赋予hEGF新的特性，对hEGF结构进行改造，构建hEGF变构体，使其能够穿越细胞膜并且能够通过血脑屏障，为脑神经退行性疾病的治疗研究提供可能性。结果：成功地构建了hEGF变构体的分泌型表达载体，并在原核细胞中完成了有生物活性的可溶性表达。对其生物活性进行研究，实验结果表明，本实验表达的hEGF变构体能够穿越细胞膜及通过血脑屏障。动物行为学测定，Morris水迷宫实验表明hEGF变构体能够缩短AD模型小鼠及自然老化小鼠的潜伏期，穿梭箱实验表明hEGF变构体能够减少AD模型小鼠及自然老化小鼠被电击的时间，证明能够改善AD模型小鼠及自然老化小鼠的学习记忆能力；海马神经干细胞检测，hEGF变构体能够增加AD模型小鼠海马齿状回nestin的表达量；GFAP的表达量减少；Brdu的参入量明显增加。证明具有促进AD模型小鼠海马神经干细胞增殖作用；正电子断层扫描（positron emission tomography，PET）实验，治疗AD模型大鼠脑的亮区比未治疗的AD模型鼠分布面积大，证明能显著增加葡萄糖代谢。结论：hEGF变构体对实验性阿尔采默病具有治疗作用。hEGF的改构从而使hEGF有了新的实用性研发前景。     

谷胱甘肽-S-转移酶-人表皮生长因子融合蛋白基因的表达及其产物的生物活性

目的　通过融合蛋白的表达使人表皮生长因子(hEGF)易于纯化。方法　构建基于tac启动子的pGEX 4T-1-hEGF原核表达载体,转化大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ,以异丙基 1 硫代-β-D半乳糖苷诱导,表达谷胱甘肽 S 转移酶(GST) hEGF融合蛋白。结果　表达产物占细菌总蛋白的3 4%。部分为可溶性的,部分形成包涵体。菌体裂解上清液经GlutathioneSepharose 4B纯化后,SDS PAGE电泳出现一条3 2ku蛋白条带,与GST hEGF融合蛋白的计算分子量相符。菌体裂解液中的可溶性GST hEGF的产率为63mg·L- 1 。将其添加到培养的HEK-2 93细胞中,能明显促进该细胞的分裂和生长。结论　成功地构建并表达了GST-hEGF融合蛋白基因,其表达产物GST hEGF显示良好的促细胞增殖活性     

人表皮生长因子在大鼠体内的剂量依赖性血浆清除率

给予外源性人表皮生长因子（hEGF），在鼠内具有显著的剂量依赖性血浆处置过程。在目前的研究中，hEGF的血浆总清除率（CLt）在30～1000ug·kg－1的剂量范围内，通过肝血流量和敏感的EGF受体进行测定。在第1组大鼠中，向下调节EGF受体致使受体数目减少（低于正常水平50％），同正常鼠相比，其血浆CLt只有当给予中剂量（100ug·kg-1）的hEGF时才降低；在第2组大鼠中，由于四氯化碳引起的肝中毒致使EGF受体和肝血流量均减少50％，血浆CLt在给予低和中剂量时下降，低剂量时血浆CL的降低与肝血流量的减少成比例；在第3组大鼠中，降低…     

基因重组hEGF融合蛋白的发酵条件优化

对hEGF融合蛋白基因工程菌的发酵条件进行优化。结果表明，当起始pH为6．6～7．0，以100ml／500ml的装液量，6％接种量，37℃培养2h，加入0．1mmol／L的IPTG诱导4h后，收获菌体可得到较高的生物量和hEGF融合蛋白表达量。其中IPTG诱导开始时间和菌体收获时间对蛋白表达有显著影响。     

慢性萎缩性胃炎患者血清TNF、IL-2及hEGF含量测定及临床意义

为探讨慢性萎缩性胃炎(CAG)的发病机制．应用放射免疫法测定55倒CAG患血清肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-2(IL-2)及人表皮生长因子(HEGF)含量，并与21例正常健康对比。结果表明，CAG患血清中上述3种细胞因子含量明显高于对照组(P＜0.01或P＜0．05)．且随着病变程度的加重．血清TNF、IL-z及hEGF含量有升高的趋势。结果提示TNF，IL-2及hEGF可能参与CAG的病理过程，并与病变程度密切相关。     

工程菌LacU V5par8egf产hEGF发酵方法的比较

目的：明确培养条件对工程菌LacUV5par8egf表达水平和质粒稳定性的影响,方法：采用优化MBL培养基,利用摇瓶发酵研究工程菌LacUV5par8egf的最优培养条件,并与2L发酵罐上的发酵进行比较,结果：摇瓶发酵的最优培养条件为：温度32度,接种量10％,种子液OD5501．0－3．0,装液量10％,摇床转速220rpm;摇瓶发酵的最优诱导条件是在对数生长中后期诱导,IPTG最适浓度为0．2mM,2L发酵罐发酵与摇瓶发酵相比,发酵周期缩短了约三分之一,hEGF表达水平接近摇瓶中发酵水平,达到27．7mg/L,结论：利用摇瓶最优培养条件,较好实现了重组hEGF从摇瓶到发酵罐的放大。     

养胃颗粒联合铝碳酸镁治疗慢性萎缩性胃炎的临床研究

目的探讨养胃颗粒联合铝碳酸镁治疗慢性萎缩性胃炎的临床效果。方法选取2016年1月—2017年12月广元市第三人民医院收治的慢性萎缩性胃炎患者106例,随机分成对照组和治疗组,每组各53例。对照组患者口服铝碳酸镁片,1.0 g/次,3次/d。治疗组在对照组治疗基础上口服养胃颗粒,1袋/次,3次/d。两组均连续治疗4周。观察两组的临床疗效,比较两组患者治疗前后临床症状积分、胃肠激素、胃蛋白酶原(PG)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-12、人表皮生长因子(hEGF)、氧化氢酶(CAT)活性、降钙素基因相关肽(CGRP)、内皮素(ET)的变化情况。结果治疗后,对照组和治疗组的总有效率分别为81.13%、94.34%,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组胃痛积分、胃中嘈杂积分、胃脘胀满积分、嗳气反酸积分、乏力积分均显著降低,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P0.05);且治疗组治疗后,这些症状积分均显著低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组血清胃动素(MTL)、PGⅡ、IL-1β、hEGF、ET较治疗前均显著降低,但胃泌素(GAS)、PGⅠ、PGⅠ/PGⅡ、IL-12、CAT、CGRP均显著升高,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P0.05);且治疗后治疗组MLT、PGⅡ、IL-1β、hEGF、ET低于对照组,GAS、PGⅠ、PGⅠ/PGⅡ、IL-12、CAT、CGRP高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论养胃颗粒联合铝碳酸镁治疗慢性萎缩性胃炎具有较好的临床疗效,可明显改善患者症状,调节胃肠激素分泌与氧化应激状态,具有一定的临床推广应用价值。     

人参皂苷Rg1的肠内菌代谢及其代谢产物吸收入血的研究

目的 :研究人参皂苷Rg1(Rg1)在人及大鼠体内经肠内菌代谢后的变化及吸收入血代谢物的确定。方法 :生物样品 (血、尿、粪便 )经处理后分别做TLC ,ESI MS及HPLC检测分析。结果 :在大鼠尿和血中有代谢物Rh1/F1存在 ;在人的尿中有Rh1存在。结论 :在大鼠和人的血内 ,Rg1主要以其代谢产物形式存在。     

某院静脉用药集中调配中心相似药品管理中存在的问题与改进策略

目的研究某医院静脉用药集中调配中心(PIVAS)相似药品管理中存在的问题与改进策略。方法从该医院PIVAS常备药品中分类整理出在规格、剂型、名称外观等方面相似的药品,采用鱼骨图分析法分析相似药品管理中存在的问题。结果共有相似药品52组,其中规格不同的有30组,剂型不同的有8组,名称外观相似的有14组。该院PIVAS在相似药品管理中存在的问题主要有人员问题、制度问题、环境问题和系统问题。结论PIVAS可从建立相似药品信息册和交班制度、加强对人员培训、加强流程管理等方面着手,提高相似药品管理的质量,保障患者用药安全有效。     

抗抑郁药的药效学性别异质性研究进展

抑郁症存在高患病率、高致残率和高自杀率的特点,严重影响患者的生活质量。药物治疗为该病的首选治疗方式,在临床治疗过程中,抗抑郁药物的药效学存在着明显的性别差异,可能与男女之间的大脑结构、性格、激素水平存在差异有关,但具体原因和机制尚未有统一结论。本文对抗抑郁药物的药效学性别异质性及其产生原因进行综述。     

转运体和核受体影响药物代谢的研究进展

转运体是存在于体内几乎所有器官上的有转运功能的蛋白,对药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄有非常重要的作用.而核受体是存在于细胞内的配体依赖性转录因子,可以激活配体影响代谢酶和转运体的表达和活性,进而影响药物在机体内代谢.本文综述了转运体和核受体家族中几个重要的成员以及它们对药物代谢影响的研究进展.     

胆红素及其衍生物的高压液相色谱分析

<正> 胆红素Ⅸ_α(Bilirubin Ⅸ_α),简称胆红素(BR),是哺乳动物体内血红素的代谢产物,存在于胆汁和血液中。在胆囊中由于葡糖醛酸转移酶的作用,胆红素主要成结合产物,以葡糖醛酸酯的形式存在,有双酯、单酯,还有与葡萄糖、木糖结合的酯,以及游离的胆红素。在血液中主要以和血清蛋白键合的形式存在,结合的本质尚不清楚,另外还有少量和糖类结     

人参皂苷Rg1 总被引：25，自引：1，他引：25

王毅  刘铁汉  王巍  王本祥 《药学学报》2000,35(4):284-288

冬虫夏草重金属化学形态的研究

目的:研究铅、砷、汞、镉4种重金属在冬虫夏草中存在的化学形态。方法:通过逐步提取法来分析冬虫夏草中铅、砷、汞、镉的化学形态。结果:化学形态分析结果表明Pb以盐酸提取态为主;As主要以残渣形式存在,其次是乙醇提取态和去离子水提取态;Hg基本为残渣态;Cd含量很低,且主要是氯化钠提取态。结论:冬虫夏草中4种重金属的主要存在形态有很大的差异。     

参附通脉胶囊的制备与临床研究

目的：研究心缓康胶囊的制备与临床治疗效果。方法：选取门诊及住院病人198例随机分为两组,治疗组138例,口服心缓康胶囊,每次2粒,tid,1月为1疗程;对照组60例,口服心宝,每次3~4粒,tid,1月为1疗程。治疗前3d及治疗期间停用其他影响心率的药物。数据用SPSS20.0进行统计分析。结果：比较两组临床治疗效果,在治疗组中,显效的有78例,有效的有51例,无效的有9例,总有效率为93.48%;在对照组中,显效的有18例,有效的有33例,无效的有9例,总有效率为85.0%。结果表明,治疗组与对照组的治疗效果之间有差异(p<0.05)。比较两组治疗前后心率、SNRT、SACT的变化,在治疗组中,治疗后的平静心率、最慢心率、平均心率和SNRT高于治疗前,且存在显著差异(p<0.01),而SACT低于治疗前,且存在差异(p<0.05)。在对照组中,平静心率、最慢心率、平均心率、SNRT和SACT都高于治疗前,且存在差异(p<0.05)。比较治疗后在治疗组与对照组中的效果,平静心率、最慢心率、平均心率和SNRT在治疗组中高于对照组,且存在差异(p<0.05)。结果表明,心缓康胶囊能明显改善患者临床症状,提高心率,缩短SNRT及SACT。临床疗效和各项指标改善情况均明显优于对照组。结论：心缓康胶囊制备工艺、质控方法简便可靠,临床疗效稳定,是治疗缓慢性心律失常的有效制剂。     

炎症性疾病中糖皮质激素抵抗机制的研究进展

糖皮质激素因其强效的抗炎作用在临床上广泛使用,但是使用中发现在严重哮喘、慢性阻塞性肺病、急性淋巴细胞白血病、间质性肺病等炎症性疾病中有部分患者存在激素抵抗,限制了糖皮质激素的使用及预后。激素治疗患者存在糖皮质激素激素抵抗主要是由于糖皮质激素受体蛋白表达差异、基因多态性和基因突变、细胞转录因子的异常等引起的。不同疾病存在的糖皮质激素抵抗的机制也存在差异,对于哮喘和间质性肺病患者糖皮质激素抵抗主要是由于糖皮质受体基因多态性,急性淋巴细胞白血病患者主要是受体蛋白的表达差异,而糖皮质激素对于慢性阻塞性肺病患者可能无效。     

对氧磷酶的某些研究进展

对氧磷酶 (PON)多基因家族至少有 3个成员 ,包括PON1、PON2和PON3。PON1是PON多基因家族中发现最早 ,研究最多的成员 ,其基因产物血清对氧磷酶在有机磷神经毒剂解毒中起重要作用 ,其基因多态性与脑卒中、动脉粥样硬化、冠心病及 2型糖尿病发病等有密切关系 ;PON2基因多态性与家族性高胆固醇血症、糖尿病等有关 ;PON3基因产物目前尚未有在人体组织中存在的报道 ,它们的生理作用仍在探索中。现将PON研究的进展综述如下。1　PON多基因家族PON多基因家族至少存在 3个成员 :PON1、PON2、PON3,它们位于人类 7号染色体的长臂q2 1 …     

关于医学微生物学中包涵体滥用问题的探讨

2008年版<医学微生物学>中包涵体的名词在许多内容中都有引用和叙述,如麻疹病毒,呼吸道合胞病毒、沙眼衣原体,鹦鹉热嗜衣原体等.在阅读有关包涵体内容的记载时,也可发现同样包涵体的称谓在其中存在不同的含义,而事实上包涵体在该书中已作了明确的概念界定,并在多方面存在歧意,这说明了2008年版<医学微生物学>里存在着对包涵体滥用的问题.本文就此问题及其形成的原因进行初步的认识和探讨.