基于连接酶反应检测硫唑嘌呤基因多态性及应用

目的：建立并探讨基于连接酶反应检测硫嘌呤甲基转移酶（thiopurine S—methyltransferase,TPMT）基因分型分布的新方法。方法：建立多重PCR／连接酶检测方法检测TPMT基因多态性,并对50份健康志愿者样本进行检测。结果：本方法可靠、迅速,自动化程度高。研究未发现导致TPMT酶活性降低的基因型^＊2,^＊3A,^＊3B和^＊4,TPMT^＊3C仅发现2例杂合子。结论：本文建立的基因分型技术可为TPMT基因型检测提供可靠的方法。     

Pyrosequencing检测CYP2C9^＊3基因多态性方法的建立及其可靠性研究

目的：建立基于焦磷酸测序技术（Pymsequencing）的高通量的CYP2C9^＊3突变检测方法。方法：应用带有生物素标记的扩增引物,经PCR扩增及Beads分离,制备该突变位点焦磷酸测序单链模板,并在PyroMark ID焦磷酸测序仪上进行焦磷酸测序,以经典ABI测序法测序结果作为标准对照,观察批量分析的可靠性并批量检测220例人DNA标本。结果：建立了基于焦磷酸测序技术的CYP2C9^＊3突变位点检测平台,实现了DNA标本的高通量检测。能一次获得96份DNA的CYP2C9^＊3突变位点检测结果。经重复性检测和标准的ABI测序可靠性检测,CYP2C9^＊3突变位点的突变检出率及重复率均达100％。结论：本方法可准确、高通量、快速检测CYP2C9^＊3突变,特别适宜该SNP位点批量检测需要。     

乙肝病毒PreS1抗原和HBV-DNA检测在病毒感染和复制中的意义

目的探讨PreS1定性检测和HBV-DNA定量检测在乙肝临床诊断中相关性。方法ELISA定性检测乙肝待检血清中的PreS1-Ag,PCR定量检测乙肝待检血清中HBV-DNA的含量,并进行比较分析。结果而ELISA检测PreS1-Ag阳性率为40.1%,HBV-DNA检测阳性率为42.9%,两者差异无显著性（P〉0.05）,PreS1抗原的检测相对阳性率分别为72.9%、94.2%、97.4%和100%。HBV-DNA的考贝数在10^3～10^4、10^4～10^5、10^5～10^6和〉10^6之间。结论ELISA检测PreS1抗原更适合在基层医院开展,但并不能完全取代PCR定量HBV-DNA检测。     

某地区汉族人群氯吡格雷代谢相关基因CYP2C19的多态性分布调查研究

目的探讨郑州及其周边地区氯吡格雷代谢相关基因CYP2C19多态性的相关分布。方法采用聚合酶链反应——限制性片段长度多态性检测技术对我院无亲缘关系的200例患者的基因型进行检测。结果CYP2C19^＊1／^＊1频率为44．5％、CYP2C19＊1／＊2频率为39．5％、CYP2C19^＊1／^＊3频率为6．0％、CYP2C19^＊2／^＊2频率为7．0％、CYP2C19^＊2／^＊3频率为2．5％、CYP2C19＊3／＊3频率为0．5％。结论郑州及其周边地区汉族人群CYP2C19多态性的相关分布与全国其他地区无显著性差异,临床医师在使用氟吡格雷药物时应参考相关基因检测结果。     

自体细胞因子诱导杀伤细胞治疗肝硬变的临床疗效研究

目的观察自体细胞因子诱导杀伤细胞（CIK细胞）治疗HBVDNA阳性肝硬化患者的近期疗效。方法CIK细胞在体外培养前后以及回输体内后检测CD3^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋、CD56^＋、CD25^＋细胞以及mDC和pDC。治疗肝硬化患者,比较治疗前后病毒学指标及肝脏功能的变化。结果培养结束以及回输体内后,CD3^＋细胞、CD3^＋CD8^＋细胞、CD3^＋CD8^＋细胞较培养前显著升高,mDC和pDC在回输后也明显增高,肝脏功能较治疗前有所好转。所有患者均能耐受治疗。结论CIK细胞可明显提高免疫效应细胞数量,具有一定的抗病毒效应作用,毒副作用低。     

T淋巴细胞亚群水平与带状疱疹病情发展的相关性分析

目的：探讨T淋巴细胞亚群水平与带状疱疹病情发展的相关性。方法选取2011年3月－2014年3月该院治疗的带状疱疹患者60例作为观察组,另选同期门诊体检结果正常60例作为对照组。检测2组外周血T淋巴细胞亚群（ CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋和CD4^＋／CD8^＋）的数量。结果观察组的CD3^＋、CD4^＋和CD4^＋／CD8^＋比值均显著低于对照组,CD8^＋数量显著高于对照组,差异均有统计学意义（P均＜0．05）。结论带状疱疹患者存在CD3^＋T、CD4^＋T淋巴细胞及CD4＋／CD8^＋比值的降低,及T淋巴细胞亚群免疫功能的下降,其在带状疱疹的发生和发展中起着重要的作用。观测T细胞亚群水平的变化,尤其是早期对于T淋巴细胞的检测,对带状疱疹患者病情发展的判定有重要意义。     

自体软骨细胞修复关节软骨缺损的实验研究

目的：探讨自体软骨细胞修复兔关节软骨缺损的技术和方法。方法：取兔自体关节软骨细胞，经体外扩增、^3H-TdR标记后与生物材料PluronicF127结合，修复人为造成的兔关节软骨缺损。结果：8周后关节软骨缺损由白色透明样软骨组织充填；12周后缺损修复，表面较光滑，组织切片显示软骨陷窝、基质均匀；放射自显影显示修复组织带放射活性。结论：组织工程技术是修复关节软骨缺损的较好方法。     

人参皂苷Rg3激活MAPK/ERK信号通路促进T细胞功能的抗肿瘤机制北大核心CSCD

目的探讨人参皂苷Rg3调节CD8^(+)T细胞功能从而增加抗肿瘤的作用,并阐明其作用机制。方法MTT法检测Rg3对CD8^(+)T细胞的影响以及对Rg3作用后的CD8^(+)T细胞对黑色素瘤B16F10的杀伤能力,并通过显微镜进行细胞形态学观察;EDU检测B16F10细胞增殖情况;流式细胞术分析对CD8^(+)T细胞功能作用;Western blot检测相关蛋白表达;实时定量PCR检测mRNA变化。结果Rg3可显著增加CD8^(+)T细胞对肿瘤细胞的杀伤能力,并促进功能性记忆T细胞的转化。Rg3增加T细胞释放杀伤因子IL-2及IFN-γ及其mRNA的表达,增加功能性T细胞(central memory T cell,TCM)的比例。进一步数据显示,Rg3促进功能性T细胞分化进而促进T细胞杀伤活性抗肿瘤与激活MAPK/ERK通路正相关。结论人参皂苷Rg3通过激活MAPK/ERK通路促进CD8^(+)T淋巴细胞的杀伤性作用而增加抗肿瘤作用。     

慢性乙肝血清免疫学检测阴性的原因分析

目的通过对慢性乙肝患者进行血清免疫学检测、基因检测与肝组织免疫组化检测,探讨临床上慢性乙肝血清免疫学检测阴性产生的原因,从而有利于临床医生对慢性乙肝的诊断及治疗。方法采用美国雅培Elisa试剂盒检测患者血清HBsAg、HBsAb、HBeAg三项,通过PCR方法定量检测血清HBV-DNA,采用menghini法穿刺取肝组织,用免疫组化法检测HBV抗原表达。同时采用组织学活动指数（HAI）评估肝细胞损伤程度;按慢性肝炎病理诊断标准进行分级（G）和分期（S）。结果24例血清HBVM阴性者（即HbsAg、HBeAg均阴性）被临床疑为慢性乙肝携带者10例,其中7例有10^4-10^5 copies／ml病毒负荷,3例有10^4copies／ml病毒负荷。剩余14例中,6例被临床原疑为慢性肝炎,有3例为10^5-10^6copies／ml、3例〉10^6copies／ml;剩下的8例临床疑为病毒负荷量低于10^4copies／ml的肝硬化者,均有HbsAg、HbcAg单独或同时在细胞质或细胞膜上表达,其中4例分级、分期为G2、S1,4例分级、分期为G3、S2。结论对可疑病例必须联合血清HBV-DNA检测和肝组织免疫组化检测才能明确诊断,弥补血清学检测的不足,从而使临床医生作出准确的诊断及预后判断。     

^14C-尿素呼气试验检测幽门螺杆菌病人的护理

幽门螺杆菌（Hp）是引起慢性活动性胃炎消化性溃疡的重要攻击因子，并且与胃癌及胃淋巴瘤有着密切的联系。我国人群中Hp的感染率一般在30％～80％，目前^14C-尿素呼气试验（^14C—UBT）被认为是检测Hp感染的“金标准”，是一项无创性的检查，可在30min内得到精确结果，为确保^14C—UBT检测过程中效果的准确度没有偏差，护理人员的操作和护理至关重要。现将2008年39月期间用^14C—UBT检测Hp的320例患者效果与护理体会报告如下。     

乙型肝炎病毒携带孕妇外周血T淋巴细胞亚群水平分析

目的探讨慢性乙型肝炎病毒携带在妊娠期对孕妇细胞免疫功能的影响。方法26例乙肝病毒携带孕妇为研究组,21例正常孕妇为对照组,采用流式细胞术检测两组外周血中CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋的水平。结果两组的CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋的水平无明显差异伊〉0．05）。结论乙肝病毒携带对孕妇细胞免疫功能无明显影响。     

应用自体细胞因子诱导杀伤细胞治疗肝硬化对肝功能影响的研究

目的观察自体细胞因子诱导杀伤细胞（CIK细胞）治疗慢性HBV DNA阳性肝硬化患者对肝功能的影响。方法CIK细胞在体外培养前后以及回输体内后检测CD3^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、CD3^＋、CD56^＋细胞以及mDC和pDC。治疗肝硬化患者,比较治疗前后病毒学指标及肝脏功能的变化。结果培养结束以及回输体内后,CD3^＋细胞、CD3^＋CD8^＋细胞、CD3^＋、CD56^＋细胞细胞较培养前显著升高,mDC和pDC在回输后也明显增高,肝脏功能较治疗前有所好转。所有患者均能耐受治疗。结论CIK细胞可明显提高免疫效应细胞数量,具有一定的抗病毒效应作用,毒副作用低。没有加重肝脏损伤,而对于肝功能有一定的改善作用。     

恢复期SARS患者外周血T淋巴细胞及亚群的变化

目的：追踪观察严重急性呼吸综合征(SARS)患者恢复后外周血CD3^ 、CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞及机体的免疫状况变化。方法：10例健康人和9例恢复期SARS患者采静脉血，用流式细胞仪检测总T淋巴细胞(CD3^ )、CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞。结果：全部患者外周血CD8^ T淋巴细胞均恢复正常；恢复后SARS患者外周血总CD3^ T淋巴细胞和CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞与对照组比较差异无显著性。结论：恢复期SARS患者外周血总T淋巴细胞和CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞有不同程度的恢复，SARS病毒感染后机体免疫功能的损害呈暂时性。     

胸腺肽α1对肿瘤患者淋巴细胞亚群影响

目的：探讨肿瘤患者在免疫治疗前后的外周血淋巴细胞亚群变化。方法：采用流式细胞术检测40例肿瘤患者外周血CD3^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋等5项免疫指标变化，其中22例患者应用参麦、黄芪等治疗，同时给予免疫治疗，其余18例仅给予参麦、黄芪等治疗，并对免疫指标变化的结果进行比较。结果：接受胸腺肽α1（日迭仙）治疗的病人治疗前后2次免疫指标检测差别有统计学意义（P〈0.01）；未接受免疫治疗者前后2次免疫指标检测差别无统计学意义（P〉0.05）。结论：用流式细胞仪检测淋巴细胞亚群为临床观察肿瘤患者的免疫状态提供有效的依据。胸腺肽α1治疗可显著改善免疫功能。     

前列腺癌CK5^+CK8^+细胞的分选及其分子生物学特性

目的在人前列腺癌细胞系中分选CK5^+CK8^+细胞,了解其分子生物学特性。方法流式细胞术在人前列腺癌细胞系PC3和LNCaP中分选CK5^+CK8^+细胞,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法方法检测LNCaP细胞分选的CK5^+CK8^+细胞CK5、CK8、雄激素受体(AR)和前列腺特异抗原(PSA)的表达,细胞迁移实验检测CK5^+CK8^+细胞迁移能力,琼脂糖凝胶克隆形成实验检测CK5^+CK8^+细胞成瘤能力。采用t检验进行统计学分析。结果采用流式细胞术可以在PC3中分选出(21.3±4.6)%的CK5^+CK8^+细胞,在LNCaP中分选出(1.2±0.4)%的CK5^+CK8^+细胞。与非CK5^+CK8^+细胞相比,LNCaP中分选的CK5^+CK8^+细胞CK5 mRNA表达差异有统计学意义(t=10.435,P<0.001),CK8 mRNA表达差异无统计学意义(t=1.974,P=0.121),AR和PSA mRNA表达差异有统计学意义(t=4.317,3.232;P=0.016,0.037)。蛋白质印迹法检测得到类似结果。细胞培养7 d后,CK5^+CK8^+细胞和非CK5^+CK8^+细胞均可以在Transwell小室迁移生长,迁移细胞数分别为(60±7)个和(32±5)个,2者比较差异有统计学意义(t=6.031,P=0.004)。细胞培养14 d后,CK5^+CK8^+细胞和非CK5^+CK8^+细胞均可以在软琼脂糖凝胶中克隆性生长,阳性克隆数分别为(71±5)个和(27±3)个,差异有统计学意义(t=13.009,P<0.001)。结论人前列腺癌细胞系LNCaP和PC3都可以分选出CK5^+CK8^+细胞,LNCaP中CK5^+CK8^+细胞AR和PSA均有一定程度表达,迁移和成瘤能力增强。     

壮尔颗粒对小鼠T淋巴细胞亚群的影响

目的观察壮尔颗粒（Zhuang＇er Granules,ZG）对细胞免疫抑制小鼠免疫器官指数及T淋巴细胞亚群的影响。方法用环孢菌素A（Cs A）建立小鼠模型,并在检测前第7天滴鼻肺炎链球菌（SP）。灌胃给药17 d后,测定小鼠免疫器官指数,并采用流式细胞仪（FACS）检测T淋巴细胞亚群的变化。结果胸腺指数与脾脏指数同空白对照组相比,模型组均有明显下降（P〈0.05）,各给药组与模型组比较均有明显提高（P〈0.05）,并随着给药量的增加而升高（P〈0.05）。脾脏中CD3^＋,CD4^＋,CD8^＋与空白对照组相比,模型组CD3^＋明显下降,CD4^＋有下降趋势,CD8^＋有上升趋势;各给药组CD3^＋,CD4^＋百分率随着给药剂量增加而升高,而CD8^＋的百分率随着给药剂量增加而降低。血中CD3^＋,CD4^＋,CD8^＋与空白对照组相比,模型组CD3^＋有下降趋势,CD4^＋明显下降（P〈0.05）,CD8^＋明显升高（P〈0.05）,各给药组CD3^＋和CD4^＋的百分率随着给药剂量的增加而升高（P〈0.05）,而CD8^＋的百分率随着给药剂量的增加而降低。结论壮尔颗粒有提高小鼠免疫功能的作用,提高CD3^＋和CD4^＋的同时,降低CD8^＋,以通过T细胞的平衡来调节小鼠自身的免疫功能。     

健康人群499例不同性别备年龄组外周血T细胞亚群值分布规律的研究

目的 探讨正常人外周血T淋巴细胞亚群年龄及性别的相关性。方法 采用流式细胞法，分别检测306例男性和193例女性不同年龄组健康体检者的外周血T淋巴细胞亚群CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋的分布情况。结果 女性不同年龄段的CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋差异均无统计学意义；男性不同年龄段的CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋细胞的差异均无统计学意义，但CD4^＋／CD8^＋随年龄增大有增高的趋势，男女相同年龄组间有一定的差异。结论 外周血T细胞亚群值分布规律与年龄和性别有关。     

老年肺癌患者淋巴细胞亚群检测的临床意义

目的探讨应用流式细胞术检测老年肺癌患者外周血淋巴细胞亚群各项指标的变化,以及老年肺癌患者不同分期该指标变化的临床意义。方法采用流式细胞术检测184例老年肺癌、166例老年肺部良性疾病患者外周血CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4＋/CD8^＋、NK细胞抗原的各项免疫学指标,并观察其在不同TNM肿瘤分期的变化特点。结果老年肺癌患者与老年肺部良性疾病患者相比,淋巴细胞亚群CD3＋、CD4＋、CD4＋/CD8^＋比值下降,CD8^＋升高,NK细胞百分比下降,差异有统计学意义（P〈0.05）,且随着TNM肿瘤分期增高,上述变化越显著。结论流式细胞仪检测淋巴细胞抗原可作为临床评估老年肺癌患者免疫状态的有效依据。     

复发性生殖器疱疹细胞免疫与治疗的相关性研究

目的检测复发性生殖器疱疹患者治疗前、后外周血T淋巴细胞亚群,观察治疗效果,并探讨机体细胞免疫的相关作用机理。方法复发性生殖器疱疹患者口服泛昔洛韦250mg,每天3次,连服5天,同时给予胸腺五肽1mg肌注,每天1次,15次为一疗程,共4个疗程。采用流式细胞仪检测52例复发性生殖器疱疹患者治疗前、后T淋巴细胞亚群（CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋/CD8^＋）,并与40例健康对照组进行比较。结果治疗组与健康对照组相比外周血CD3^＋、CD4^＋及CD4^＋／CD8^＋下降,CD8^＋升高,两组间差异有统计学意义（P〈0．01）。经抗病毒药物与免疫调节剂联合治疗2个月后,外周血CD3^＋、CD4^＋及CD4^＋／CD8^＋回升,而CD8^＋下降,治疗前、后差异有统计学意义（P〈0．01）。治疗前每例年平均发作4．5次,治疗后每例年平均发作1．5次,治疗前、后差异有统计学意义（P〈0．05）。结论复发性生殖器疱疹患者存在细胞免疫功能紊乱,抗病毒药物与免疫调节剂联合应用能改善患者的细胞免疫功能紊乱状况,降低生殖器疱疹复发率。     

肝细胞生长因子对兔骨髓基质细胞生物学特性的影响

目的　观察腺病毒携带肝细胞生长因子cDNA(adHGF)转染兔骨髓基质细胞 (MSC)后的主要生物学特性。方法　抽取成年雄性新西兰白兔骨髓 ,密度梯度离心获得MSC。取兔膝关节软骨 ,体外培养软骨细胞至第 3代。adHGF转染第 5代MSC ,噻唑蓝 (MTT)法检测细胞增生活力 ,阿尔新蓝法检测细胞培养上清液中氨基己糖多糖 (GAG)含量。酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测adHGF转染MSC后HGF的表达。免疫组织化学染色及反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测Ⅰ、Ⅱ型胶原表达。结果　原代MSC为短梭形、簇状生长 ,传代细胞呈长梭形、旋涡样生长。adHGF转染前后细胞增生状态差异无显著性。MSC转染后GAG含量增加。免疫组织化学染色MSC转染前后I型胶原阳性 ,转染后Ⅱ型胶原弱阳性。转染后HGF表达量在转染 1周内最高 ,达 12 0 5ng/ml,并可持续至 6周。RT PCR表明MSC在adHGF转染前后均表达I型胶原 ,转染后微量表达Ⅱ型胶原。结论　MSC在体外培养过程中的自然转归是趋向于成骨。MSC不仅是HGF的源细胞 ,而且可作为靶细胞接受外源目的基因的转染并有效表达