产KPC酶肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类药物的分子机制研究

摘要：目的 研究临床分离肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物的分子耐药机制,为临床合理用药提供理论及实验依据。方 法 收集2020年1月-2020年12月皖南医学院弋矶山医院临床分离非重复肺炎克雷伯菌株923株,利用全自动微生物分析系统进 行菌种鉴定及药敏分析,并用16S rRNA PCR扩增产物测序验证菌种,K-B法复核碳青霉烯类药物耐药情况;胶体金法对耐碳青 霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumonia, CRKP)菌株进行碳青霉烯酶的表型检测,并用碳青霉烯酶PCR扩 增结果进行验证;同时利用全自动微生物分析系统对产KPC酶CRKP产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases, ESBLs) 进行检测,并用ESBLs耐药相关基因PCR扩增结果进行验证;多位点序列分型技术(MLST)对产KPC酶CRKP进行序列分型 (ST)。 结果 923株肺炎克雷伯菌中256株(27.74%)为CRKP,其中183株携带blaKPC,ST分型为ST11型和ST12型,产KPC酶CRKP 携带3种ESBLs基因blaTEM-1、blaSHV-11和blaCTX-M-1。结论 CRKP产碳青霉烯酶以KPC酶型为主,blaKPC可合并3种ESBLs的产生。     

2013~2017某医院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因检测及分析

目的分析耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因,为进一步控制耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯菌感染提供参考。方法收集2013~2017年某院培养、保存的81株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌株,成功复活55株。经MALDI-TOF-MS鉴定为肺炎克雷伯菌。采取琼脂稀释法进行包括美罗培南在内13种抗生素药敏试验,采用PCR分析耐碳青霉烯酶基因,采用PFGE对菌株进行分型。结果复活的肺炎克雷伯菌共55株,药敏提示对多种抗生素耐药,采取琼脂稀释法进行包括美罗培南在内13种抗生素药敏试验,55株CRKP复活菌株美罗培南耐药率达95%(52株),其中18株呈现高度水平耐药,仅2株对美罗培南敏感,采用PEGE分型,存在17个分型,显示菌株之间差异明显。结论某院耐肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类情况突出,耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌共分为A~Q 17个型,以A型株数最多。     

肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性与分子流行病学分析

目的了解我院住院患者临床肺炎克雷伯菌分离株的耐药性与分子流行特征,为临床抗感染及合理用药提供依据。方法收集2018年4-12月我院住院病人肺炎克雷伯菌临床分离株,采用纸片扩散法或自动化仪器法按统一方案进行抗菌药物敏感性试验;聚合酶链反应(PCR)法检测耐药基因;脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)技术对菌株进行同源性分析和分型。结果共分离到肺炎克雷伯菌211株,对第3代头孢(头孢噻肟)和第四代头孢(头孢吡肟)的耐药率分别为54.5%和44.1%,对碳青霉烯类抗菌药物亚胺培南和美罗培南的耐药率为32.7%和34.1%;其中107株(107/211,50.6%)菌株分离自ICU病房,56株(56/107,52.3%)为碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CR-KP),MLST分型显示以ST11为主,PFGE分型结果主要为A型和F型两大聚类。结论肺炎克雷伯菌耐药率高,特别是分离自ICU病房的菌株耐药情况尤为严重,且携带KPC-2基因的ST11克隆株在ICU病房流行传播。     

下呼吸道标本肺炎克雷伯菌产ESBLs和AmpC酶的检测及耐药分析

目的探讨下呼吸道标本肺炎克雷伯菌产头抱菌素酶（Ampc酶）和超广谱6-内酰胺酶（ESBLs）的情况及耐药分析。方法采用纸片扩散确证法检测ESBLs,酶提取物三维试验方法检测AmpC酶。并检测肺炎克雷伯菌对15种抗生素的耐药率。结果120株肺炎克雷伯菌中检出产酶菌株69株。检出率57．5％,其中单产ESBLs38株,单产AmpC酶17株．同时产ESBLs和AmpC酶14株,检出率分别为31．7％、14．2％和11．7％。肺炎克雷伯菌产酶菌株对15种抗生素的耐药率均高于平均水平（除亚胺培南）。结论我院下呼吸道标本肺炎克雷伯菌对抗生素耐药的主要原因是产生AmpC酶和ESBLs,对产酶菌株临床经验用药首选碳青霉烯类抗生素。     

某院不同病区间由肺炎克雷伯菌引起血流感染的相关分析

目的 了解不同病区肺炎克雷伯菌引起血流感染的临床特征、药物敏感性和产碳青霉烯酶的耐药基因型，为临床的预防与治疗提供依据。方法 收集某院2014年1月-2016年12月内科病区、外科病区、重症监护病区和老年病区间由肺炎克雷伯菌引起血流感染患者的临床资料和感染菌株，应用Whonet 5.6进行耐药性分析；PCR法检测产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药基因，并采用多点位序列分型(MLST)进行分子遗传学分析。结果 共纳入血流感染患者135例，以院内感染为主，男性患者居多。基础疾病以消化系统疾病为主，以合并肺部感染最常见，分别为31.11%和21.48%，不同病区间在性别分布和感染类型上有显著意义(P<0.05)。内科病区分离的肺炎克雷伯菌对11种药物敏感率普遍高于其他病区，除复方磺胺甲噁唑(P>0.05)外，其余10种药物(头孢曲松、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/三唑巴坦、头孢他啶、亚胺培南、美罗培南、阿米卡星、环丙沙星和左氧氟沙星)敏感性在不同病区间有显著差异(P<0.05)。共检出CRKP 28例，其中重症监护病区25例(89.29%)，外科病区2例(7.14%)，内科病区1例(3.57%)；MLST结果显示，重症监护病区ST11型24株(96%)、ST1855型1株(4%)，外科病区2株为ST11型，内科病区1株为ST1224型；所有菌株均检测出blaKPC-2和外膜蛋白ompk35基因，外膜蛋白ompk36基因占96.43%。结论 不同病区间由肺炎克雷伯菌引起的血流感染在临床特征、体外药物敏感性和碳青霉烯类耐药的基因型存在不同，预防和治疗该类患者时应根据不同病区的特点区别对待。     

替加环素对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的临床应用

目的 通过对56株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的菌株同源性分析,探讨替加环素对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的临床应用价值.方法 收集本院2010年1月～2012年12月临床分离出的肺炎克雷伯菌151株,其中碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌56株,采用MIC法检测碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌对药物的敏感性.结果 151株肺炎克雷伯菌中有56株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌,替加环素对56株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌均敏感.结论 替加环素做为新一代抗生素,对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌引起的感染具有很好的疗效.     

改良碳青霉烯灭活试验在检测肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶中的应用评价

目的评估改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)和EDTA改良碳青霉烯灭活试验(eCIM)在中国产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(CPKP)中的应用价值。方法分别用mCIM和eCIM筛查中国271株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)中产酶阳性菌株,并以碳青霉烯酶基因聚合酶链反应(PCR)及测序结果为标准计算灵敏度和特异度。结果 271株非重复CRKP菌株中碳青霉烯酶基因阳性菌有209株,未检测出耐药基因的菌株有62株。mCIM检测到209株基因阳性菌株中208株为阳性菌株,62株基因阴性菌均为阴性; eCIM检测出的阳性菌株有58株,阴性菌株有150株。mCIM检测敏感度为99. 5%,特异度为100. 0%; eCIM检测敏感度为100. 0%,特异度为99. 3%。其中有1株产IMP-4型碳青霉烯酶菌株的mCIM结果为阴性,1株产KPC-2型碳青霉烯酶菌株的mCIM和eCIM都为阳性。结论 mCIM和eCIM在肺炎克雷伯菌中检测碳青霉烯酶有很好的敏感度和特异度,值得推广使用。     

肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌产KPC酶的检测研究

目的了解肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌产KPC酶的情况和耐药关系。方法收集2007年3月至2008年10月临床分离的肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌681株,采用KB纸片法进行药敏试验,以亚胺培南,美罗培南,厄他培南为检测药物,筛选出碳青霉烯类耐药菌株,采用改良的Hodge试验、聚合酶链反应（PCR）扩增检测细菌产KPC酶及基因分型。结果在491大肠埃希菌株和190肺炎克雷伯菌株中,对碳青霉烯类耐药的大肠埃希菌6株,肺炎克雷伯杆菌6株。进行Hodge试验,12株菌全部阴性,聚合酶链反应（PCR）扩增没出现目的基因片段。结论在12株对碳青霉烯类抗生素耐药的细菌中未发现产KPC酶的菌株。据国内的同类研究报道,目前我国主要以产KPC-2酶为主,而且产KPC酶存在地域性差异,课题研究显示本区域暂时没发现产KPC酶的菌株,有待进一步监测研究。     

耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌种群结构和耐药机制研究

耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)是临床常见的耐药菌之一。本研究对88株全国49家医院收集的CRKP菌株进行碳青霉烯类耐药基因检测,其中65株(73.9%)检出blaKPC类基因(64株检出blaKPC-2、1株检出blaKPC-3)、9株(10.2%)检出blaNDM类基因(均为blaNDM-1)、7株(8.0%)检出blaIMP类基因(均为blaIMP-4)。通过多位点序列分型(multi-locus sequence typing, MLST)将88株CRKP分为25个MLST型,其中ST11型为优势型别,包含48株菌。88株CRKP通过脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis, PFGE)分为79个PFGE型,呈现高度多态性。本研究揭示了我国blaKPC-2阳性CRKP菌株存在克隆化现象,存在ST11型流行克隆;而blaNDM-1和blaIMP-4阳性CRKP菌株分子型别多态性大,还没形成流行克隆。需要密切监测并采取措施控制携带blaKPC-2基因的ST11型CRKP的传播扩散。     

亚洲地区肺炎克雷伯菌耐药基因和毒力基因分析

目的:分析亚洲地区肺炎克雷伯菌毒力基因和耐药基因的携带情况,为制定菌株防治措施提供依据。方法:从GenBank中收集并分析了4 549株肺炎克雷伯菌的完整基因组(下载日期:2020年12月31日)。通过MLST、Kleborate和ABRicate等生物信息学软件分析肺炎克雷伯菌的MLST分型、KL分型、毒力基因以及耐药基因。结果:MLST分型结果显示,ST11是亚洲地区肺炎克雷伯菌的主要序列类型,共检测到1 519(33.39%)株,其中ST11-KL64、ST11-KL47,分别占51.15%(777/1 519)、37.20%(565/1 519)。毒力基因检测发现,ST11-KL64型菌株中,有36.04%(280/777)的菌株同时携带4种铁载体基因,有33.33%(259/777)的菌株同时携带rmpA和rmpA2基因。在ST11-KL47型菌株中,有13.52%(76/565)的菌株同时携带4种铁载体基因,有5.49%(31/565)的菌株同时携带rmpA和rmpA2基因。耐药基因检测发现,有97.25%(4 424/4 549)的菌株检测出β-内酰胺类耐药基因,有3.06%(139/4 549)的菌株携带粘菌素耐药基因。结论:亚洲地区肺炎克雷伯菌MLST分型以ST11为主、血清荚膜型以KL64、KL47为主。ST11-KL64型菌株的高毒力表型基因携带率高于ST11-KL47。应规范抗菌药物使用,加强对肺炎克雷伯菌的监测和医院内感染的防控工作,防止肺炎克雷伯菌的大规模流行。     

不同碳青霉烯酶酶型肠杆菌科细菌感染的治疗策略研究

摘要：目的 探讨表达不同碳青霉烯酶的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)治疗策略,为临床有效治疗CRE感染提供依据。方法 回顾性分析我院2016年1月—2018年12月临床标本中分离的CRE的相关资料及药敏数据。复苏碳青霉烯耐药的肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和弗氏柠檬酸杆菌,PCR检测其携带的碳青霉烯耐药基因,并比较碳青霉烯酶表型试验与基因结果的一致性。采用肉汤稀释法检测替加环素和头孢他啶/阿维巴坦的敏感性,K-B法检测氨曲南和头孢他啶/阿维巴坦联合作用效果。结果 CRE对常用抗生素具有较高的耐药性。128株CRE菌株均含碳青霉烯耐药基因,其中81株含blaKPC,37株含blaNDM,5株含blaIMP,5株同时含blaKPC和blaNDM。酶抑制剂增强试验能够准确检测各种碳青霉烯酶酶型。替加环素的敏感率为97.6%,头孢他啶/阿维巴坦对产丝氨酸酶菌株的敏感率为100%,而对产金属酶和双酶菌株无效。氨曲南和头孢他啶/阿维巴坦有协同作用,对产金属酶和双酶菌株有很强的抗菌活性。结论 不同酶型CRE可考虑采用不同治疗策略,利用酶抑制剂增强试验确定酶型后,合理选择抗生素进行有效治疗。     

High prevalence of CTX-M-15-producing Klebsiella pneumoniae isolates in Asian countries: diverse clones and clonal dissemination

The characteristics of 218 Klebsiella pneumoniae isolates from patients with hospital-acquired pneumonia in nine Asian countries were investigated. In total, 92 isolates (42.2%) produced extended-spectrum β-lactamases (ESBLs), amongst which 67 (72.8%) possessed CTX-M ESBL genes; CTX-M-15 was the major ESBL (55 isolates; 59.8%). Multilocus sequence typing (MLST) and plasmid replicon typing were performed to investigate the genetic backgrounds of the 55 CTX-M-15-producing K. pneumoniae isolates. Twenty-five sequence types (STs) were identified. Clonal complex 11 (CC11) including ST11 was the most prevalent clone (20 isolates; 36.4%) and was distributed in all Asian countries except Taiwan. ST15 was the next most frequently identified clone (8 isolates; 14.5%). An IncFIIA-type plasmid was predominantly associated with bla_CTX-M-15 (45 isolates; 81.8%). However, another plasmid type (IncA/C) was also identified and replicon types of seven isolates could not be determined. The high prevalence of CTX-M-15 amongst K. pneumoniae isolates in Asian countries may be due both to the acquisition of plasmids carrying bla_CTX-M-15 and the spread of certain clones such as ST11 and ST15.     

广东省肇庆市肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性与MLST分型研究

目的 了解广东省肇庆市肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae, KP)临床分离株的抗生素耐药情况及多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)特征。方法 收集肇庆市两家医院KP临床分离株63株，采用肉汤微量稀释法进行30种抗生素的体外药物敏感性试验，并对所有菌株进行多位点序列分型。结果 63株KP临床分离株的耐药谱特点可分为4类，即全敏感的高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent K. pneumoniae, hvKP)、产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌(extended spectrum β-lactamases K. pneumoniae, ESBLsKP)、耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant K. pneumoniae, CRKP)和其他类型的多重耐药肺炎克雷伯菌(multidrug-resistant K. neumoniae，MDRKP)；MLST分型结果显示63株临床分离株可分成41个ST型。其中，ESBLsKP以ST37型(9株，39.13%)为主，CRKP以ST11型(5株，62.50%)为主，hvKP以ST65(5株，25.00%)型和ST23(3株，15.00%)型为主，而其他类型的多重耐药KP的ST型(12株9种ST型)则呈现明显的多态性。结论 我市肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药情况比较严重，要加强院内感染监测，警惕其成为优势菌型并引发院内感染的风险。     

深圳地区住院病人MRSA的药敏试验及分子分型

目的 研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分离株对抗生素的敏感谱和分子分型.方法 对58份来自住院病人的MRSA分离株进行药敏试验,SCCmec分型和PVL基因的检测.结果 58份MRSA的药敏试验为万古霉素(100%),庆大霉素(86.2%),氯林可霉素(39.7%)和红霉素(12%)敏感.根据SCCmec分型,其中Ⅰ型1份;Ⅱ型1份;Ⅲ型52份(ⅢA49份);未检测到Ⅳ型.在所有的MRSA分离株中,没有检测到pv1基因.结论 深圳地区住院病人分离的MRSA存在多种抗生素耐受,主要以ⅢA为主.     

鮑氏志贺菌临床分离株的毒力基因检测及分子分型

目的 了解鲍氏志贺菌临床分离株毒力基因分布、耐药性、分子分型及菌株间流行病学相关性。 方法从我院 2015 年 6 月—10 月间门诊就诊腹泻病患者的粪便中分离收集 9 株鲍氏志贺菌。 采用 K-B 纸片扩散法行抗生素药敏试验, 聚合酶链反应技术检测毒力基因, 脉冲场凝胶电泳技术及多位点序列分型确定分子分型, 分析菌株间流行病学相关性。 结果 9 株鲍氏志贺菌共分为 3 个血清亚型： Ⅰ 型 1 株, Ⅱ 型 3 株, Ⅳ型 5 株。 9 株菌均为多重耐药菌： 对氨苄西林耐药率为 9/9, 对头孢他啶、链霉素、庆大霉素、复方新诺明、头孢噻肟、头孢曲松、四环素、诺氟沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为 1/9、4/9、4/9、4/9、5/9、5/9、6/9、6/9、6/9, 未发现阿米卡星、头孢哌酮-舒巴坦和亚胺培南耐药株; ipaH 的检出率为 100%, sen、set1A、set1B、ial、virA、icsA、sigA 的检出率均为 0, pic、sepA、sat 的检出率分别为 4/9、5/9、7/9; 9 株鲍氏志贺菌通过脉冲场凝胶电泳共分为 8 种谱型, 相似性在 63.21%~100%。 多位点序列分析结果显示 6 株为 ST648, 2 株为 ST131、1 株为 ST10。 结论 本院分离的 9 株鲍氏志贺菌共分 3 个血清亚型, 多重耐药情况严重, 菌株间亲缘关系相对较远, 属非暴发病例。     

分离自下呼吸道感染患者的肺炎克雷伯菌耐药性调查

目的了解下呼吸道感染致病菌肺炎克雷伯菌对临床常用抗感染药物的耐药现状,为临床合理使用抗感染药物提供依据。方法采集下呼吸道感染住院患者送检的1528份痰培养标本中分离所得的肺炎克雷伯菌（同一患者分离多株的按1株计）,采用法国梅里埃ATB—Expression分析仪进行细菌鉴定,K-B法做药物敏感试验,并同时用双纸片扩散法确证试验检测超广谱p内酰胺酶（ESBLs）。结果下呼吸道感染患者送检的1528份痰培养标本中分离培养出病原菌1004株,其中肺炎克雷伯菌177株,占17．6％。产ESBLs的肺炎克雷伯菌检出率为40．1％（71／177）。药物敏感试验显示产ESBLs肺炎克雷伯菌对常见抗感染药物呈多重耐药性,耐药率〉50％的抗感染药物有氨苄西林（93．0％）、哌拉西林（91．5％）、复方新诺明（88．7％）、头孢呋辛（85．9％）、头孢噻肟（80．3％）、庆大霉素（73．2％）、环丙沙星（64．8％）、头孢他啶（60．6％）、头孢吡肟（53．5％）,耐药率〈50％的抗感染药物有哌拉西林他唑巴坦（29．6％）和阿米卡星（23．9％）,而对亚胺培南和美罗培南敏感率为100．0％,产ESBLs菌株对抗感染药物的耐药率高于非产ESBLs菌株。结论肺炎克雷伯菌具有多重耐药性,临床应加强对肺炎克雷伯菌的耐药性监测,依据药敏试验结果合理使用抗菌药物,亚胺培南和美罗培南是治疗的有效药物。     

Role of IncHI2 plasmids harbouring blaVIM-1, blaCTX-M-9, aac(6')-Ib and qnrA genes in the spread of multiresistant Enterobacter cloacae and Klebsiella pneumoniae strains in different units at Hospital Vall d'Hebron, Barcelona, Spain

Seven Enterobacter cloacae isolates and seven Klebsiella pneumoniae isolates harbouring a phenotype compatible with the production of a metallo-β-lactamase were recovered between 2009 and 2011 in three Intensive Care Units of Hospital Vall d'Hebron (Barcelona, Spain). The presence of bla(VIM), bla(IMP), bla(NDM), bla(CTX-M), aac(6')-Ib, qnrA, qnrB and qnrS genes was screened by polymerase chain reaction (PCR) and sequencing. Clonal relatedness of the isolates was assessed by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) and, in the case of K. pneumoniae isolates, by multilocus sequence typing (MLST). PCR-based replicon typing, Southern hybridisation, plasmid double-locus sequence typing and MOB relaxase classification methods were used to identify and characterise the plasmids carrying the resistance genes. Transferability of the identified plasmids was tested by conjugation assays. All 14 isolates were found to carry bla(VIM-1), bla(CTX-M-9) (except one isolate), aac(6')-Ib and qnrA genes. Clonality assessment demonstrated that E. cloacae isolates were distributed in three clonal clusters, whereas all of the K. pneumoniae isolates belonged to one unique clone, identified as sequence type ST252. All studied isolates harboured a large conjugative IncHI2 MOB(H11) plasmid carrying all of the detected resistance genes. Plasmid DNA analysis showed that all of them belonged to the ST1 IncHI2 plasmid cluster and shared the same relaxase partial sequence. In conclusion, the present study describes the dissemination within a hospital of multiresistant E. cloacae and K. pneumoniae isolates producing VIM-1. A complex clonal epidemiology of the E. cloacae isolates was observed and plasmid DNA analysis strongly supports horizontal exchanges of the same IncHI2 plasmid between different strains and species.     

High clonal heterogeneity of Panton-Valentine leukocidin-positive meticillin-resistant Staphylococcus aureus strains from skin and soft-tissue infections in the Province of Bolzano, Northern Italy

Panton-Valentine leukocidin (PVL)-positive community-associated meticillin-resistant Staphylococcus aureus (CA-MRSA) isolates are widespread in many countries, with varying distribution and epidemiology. The aim of this study was to characterise 10 PVL-positive MRSA isolates collected during February 2010 to January 2011 from skin and soft-tissue infections in the North Italian Province of Bolzano. Accessory gene regulator (agr) typing, staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec) typing, staphylococcal protein A (spa) gene typing, multilocus sequence typing, toxin gene profiling, polymerase chain reaction for type I arginine catabolic mobile element (ACME) and antimicrobial resistance typing were applied to the isolates. Eight different CA-MRSA clones were identified, including ST30-IVc, ST772-V, ST80-IVc, ST5-IVc, ST88-IVa, ST93-IVa, ST8-IVc and the type I ACME-positive ST8-IVa. The high heterogeneity of PVL-positive MRSA probably reflects the introduction of different clones by international travellers or immigrants.     

High-level and novel mechanisms of carbapenem resistance in Gram-negative bacteria from tertiary hospitals in Nigeria

To determine the occurrence and molecular basis of carbapenem resistance in Gram-negative bacteria from tertiary hospitals in Nigeria, 182 non-duplicate Gram-negative bacterial isolates were investigated for antimicrobial susceptibility, presence of carbapenemases (tested phenotypically and genotypically), random amplified polymorphic DNA (RAPD) typing, plasmid sizing and replicon typing. Minimum inhibitory concentrations of carbapenems showed a high degree of resistance, with 67 isolates (36.8%) being resistant to all carbapenems, of which 40 (59.7%) produced enzymes able to hydrolyse imipenem. PCR and sequencing identified only 10 isolates (5.5%) carrying known carbapenemase genes, including bla_NDM, bla_VIM and bla_GES. The majority of phenotypically carbapenem-resistant and carbapenemase-producing isolates did not carry a known carbapenemase gene. Transconjugant or transformant plasmid sizes were estimated to be 115 kb for bla_NDM- and 93 kb for bla_VIM-carrying plasmids. These plasmids were untypeable for replicon/incompatibility and transferred various other genes including plasmid-mediated quinolone resistance (PMQR) genes and bla_CTX-M-15. Typing showed that the isolates in this study were not clonally related. There is a high level of carbapenem resistance in Nigeria. As well as the globally relevant carbapenemases (bla_NDM, bla_VIM and bla_GES), there are other unknown gene(s) or variant(s) in circulation able to hydrolyse carbapenems and confer high-level resistance.