洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)的选择和分离培养基研究

目的：对现有洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)选择性培养基配方进行优化和调整,以获得更优的选择和分离培养效果,提高Bcc的检出效率,形成《中国药典》拟收载Bcc检查法中的选择和分离培养基。 方法：调整选择性培养基营养成分和指示剂组分,使用分离自制药环境及产品的Bcc菌株,通过计数回收、表型观察和生长曲线试验等方法,从选择性培养基的促生长能力、指示特性、抑制能力几方面评估其配方优化后的结果。结果：优化获得的Bcc选择性培养基(BCCSA),对Bcc菌株的回收优于其他选择性培养基,生长曲线试验结果也表明Bcc菌株在BCCSA中的生长速率更快并更早到达生长稳定期; BCCSA对Bcc生长的指示特性相较于其他培养基更好,表现为培养基颜色变化更为明显,菌落颜色更易观察;对于美国药典中要求的抑制特性试验菌株,BCCSA可满足其抑制能力要求。结论：综合而言, BCCSA表现出更优的促生长能力和指示特性,可作为《中国药典》拟收载Bcc检查法中的选择和分离培养基。     

洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)的分类鉴定研究进展

目的：探讨适用于药品微生物控制中的洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)的鉴定策略。方法：结合药品微生物控制中对Bcc的鉴定和分型需求，对目前应用较为广泛的微生物鉴定技术的特点和鉴定或分型能力进行阐述和讨论，提供满足不同鉴定水平要求的鉴定策略。结果：对于Bcc，不同的鉴定方法能达到的鉴定水平存在差异。手动/自动化的生化鉴定系统可达到属/菌群水平的准确鉴定；基质辅助激光解析电离飞行质谱(MALDI-TOF MS)以及16S rRNA序列分析技术可达到菌群的准确鉴定；看家基因如 recA或hisA等的序列分析，基本可达到菌种水平的鉴定，必要时，可补充多位点序列分型(MLST)进行确认。MLST、核糖体分型(Ribotyping)或全基因组测序(WGS)技术则适用于菌株水平的分型和溯源。结论：明确不同的鉴定技术对于Bcc的鉴定能力和应用特点，针对不同的鉴定需求给出相应鉴定方法的建议，为在实际应用中涉及Bcc检验、鉴定和溯源分析的生产企业、检验人员提供参考和借鉴。     

14株伯克霍尔德菌的鉴定分析

目的 对从菌种保藏中心获得以及样品分离的14株伯克霍尔德菌进行鉴定分析，为该菌的鉴定和溯源分析提供参考。方法 分别用生理生化(API20NE和Biolog碳源分析系统)、基因型(自动化核糖体分型、16S rDNA和recA序列分析)的方法对11株标准菌株和3株未知菌进行了鉴定，并对结果进行了分析比较。结果 生理生化的方法能够鉴定到属的水平，Biolog能够区分BCC与非BCC类群微生物；16S rDNA序列分析能够鉴定到属水平，对于非BCC的部分菌可以鉴定到种水平，并且能够将BCC正确分类；recA序列分析能够将包含BCC的部分菌正确鉴定到种水平；Riboprinter技术能够鉴定到属水平，但是该技术能够对菌进行溯源分析。结论 在进行该菌的鉴定时，可以参考中国药典2015年版四部9204微生物鉴定技术指导原则的要求，根据自身的需求、技术能力以及能够承担的成本，选择适宜的鉴定方法和技术，依据多相鉴定原则进行鉴定分析，第一步判断是否属于伯克霍尔德菌属，第二判断是否属于BCC，第三尽可能准确鉴定到种水平，有必要的情况下进行溯源分析以确认污染来源。     

一株样品分离菌-洋葱伯克霍尔德菌对抑菌效力评价体系的启示

目的：通过对一株样品分离菌株洋葱伯克霍尔德菌耐受力的考察及其对苯扎氯铵防腐体系的挑战,对产品抑菌效力评价体系的一些思考和建议,以供业内借鉴和参考。方法：采用微量稀释法测定质控菌株（洋葱伯克霍尔德菌）、样品中及其分离传代后的洋葱伯克霍尔德菌对苯扎溴铵的MIC值,并通过活菌计数法考察了回接到未受污染样品中的存活状态;在《中国药典》2015年版第四部1121抑菌效力检查法的基础上,增加洋葱伯克霍尔德菌作为挑战菌,对三种含不同浓度苯扎氯铵的玻璃酸钠滴眼液的抑菌效力进行评价。结果：苯扎溴铵对未经传代培养的野生型洋葱伯克霍尔德菌MIC值为128μg·mL^-1,高于分离传代后的洋葱伯克霍尔德菌和质控菌株的MIC值（均为64μg·mL^-1）;回接试验表明,在接种后24 h内,菌量下降,24 h后菌量逐渐回升,28天菌量回升至初始水平;洋葱伯克霍尔德菌能耐受0.03 g·L^-1和0.05 g·L^-1苯扎氯铵防腐体系,只有最高浓度的的苯扎氯铵防腐体系（0.10g·L^-1）抑菌效力符合药典规定。结论：环境或样品中分离出来的野生菌株对抑菌剂的耐受性有可能会高于实验室培养菌株或标准菌株,提示我们在进行产品的防腐剂抑菌效力评价时,企业应考虑环境和样品中的常见分离菌株,并针对相应的添加菌株建立相对完善的文件体系,以保障抑菌效力评价体系的有效性和完整性。     

现代微生物鉴定技术在药品质量控制中的应用研究进展

本文通过比较近年来报道的药品微生物鉴定文献,从表型鉴定和基因型鉴定两方面阐述各种技术的优势和缺陷。结果显示,文献重点研究的种群包括葡萄球菌属、伯克霍尔德菌属、肠杆菌属和芽孢杆菌属等:约65%的研究报道采用2种及以上鉴定技术,表型鉴定中生化鉴定系统VITEK的应用较广泛,基因型鉴定中16S核糖体RNA(16S ribosomal RNA,16SrRNA)核酸测序的应用较广泛:鉴定技术在环境菌库建设方面的应用研究较多。实践中,应针对药品微生物控制和鉴定需求,合理选择不同原理的鉴定技术,形成各自实验室独特的多相鉴定方案,以提高药品质量控制水平。     

重症监护病房革兰阴性杆菌耐药性监测分析

目的：了解川北医学院附属医院重症监护病房（ICU）革兰阴性菌的分离率及耐药情况。方法采用Bio-Merieux VITEK-32全自动细菌鉴定系统对细菌进行鉴定,琼脂稀释法进行药敏试验,双纸片表型确证试验检测产ESBLs 菌株,结果用美国临床实验室标准化协会（CSLI）2006年公布的标准进行判定。结果 ICU 分离454株革兰阴性杆菌,大肠埃希菌180株（占39.6%）,鲍曼不动杆菌78株（占17.2%）,阴沟肠杆菌59株（13.0%）,铜绿假单胞菌51株（占11.2%）,洋葱伯克霍尔德菌46株（占10.1%）为主。其中,超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和阴沟肠杆菌的检出率分别达54.5%和39.0%。且大多数革兰阴性杆菌对临床常用抗菌药高度耐药或多重耐药。结论该院 ICU 革兰阴性杆菌分离率高,临床耐药严重。     

黄海葵相关细菌抗菌活性菌株的筛选及其初步分类鉴定

目的 对分离自硇洲岛黄海葵(Anthopleura xanthogrammica)样品的126株细菌进行抗菌活性筛选和初步分类鉴定.方法 以8种微生物(3株革兰阳性菌、3株革兰阴性菌和2株真菌)作为指示菌,采用琼脂扩散法筛选抗菌活性菌株,采用基于16S rRNA基因序列的系统发育分析和生物学特性研究对其中抗菌谱较广且抗菌活性稳定的菌株进行初步分类鉴定.结果 67株菌具有抗菌活性,阳性率为53.2%,抗菌谱较广且活性较强的9株,占受试菌株总数的7.1%.经过形态观察、生理生化特征及基于16S rRNA基因序列的系统发育分析表明,9株具有较强抗菌活性的菌株分别属于芽孢杆菌属(Bacillus)、盐芽孢杆菌属(Halobacillus)、短杆菌属(Brachybacterium)、拟诺卡菌属(Nocardiopsis)、盐单胞菌属(Halomonas)、假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas)和弧菌属(Vi6rio)菌株.结论 分离自中国南海的黄海葵相关微生物抗菌活性菌株具有丰富的类群多样性.     

89株纹带棒状杆菌耐药性及其耐药基因特征分析

目的 通过分析河北省华北理工大学附属医院临床分离的纹带棒状杆菌的耐药性和基因组特征，为临床鉴别、治疗和防控提供参考。方法 收集并鉴定临床分离非重复纹带棒状杆菌89株。经VITEK2-Compact全自动细菌仪联合16S rRNA鉴定为纹带棒状杆菌，采用微量肉汤稀释法进行体外药敏试验，使用全基因组测序技术进行测序。结果 药敏结果显示所有菌株对利奈唑胺及万古霉素都表现为敏感，对环丙沙星(89, 100.0%)全部耐药；全基因组测序共检出identity在90%以上耐药基因16种，大环内酯类和氨基糖苷类耐药基因和耐药表型匹配度较高；在基因组水平上，纹带棒状杆菌的传播具有优势克隆群。结论 该院分离的纹带棒状杆菌同时携带多种抗菌药物的耐药基因，其某些耐药表型和耐药基因型具有一致性。该院纹带棒状杆菌院内传播由于优势克隆群的存在，菌株在进化过程中能通过耐药基因的获得及累积而产生不同的克隆群。     

一株黄独内生放线菌活性研究及抗生素生物合成潜力的筛查

对一株分离自药用植物黄独的内生菌放线菌LCB-A281进行系统学鉴定,并研究其发酵产物的抑菌活性、抗肿瘤活性及抗糖尿病活性,最后再筛查其抗生素生物合成潜能.根据其形态特征、培养特征、生理生化特征、16S rRNA基因测序及系统发育分析结果,可将菌株LCB-A281确为Streptomyces sp..抑菌及抗肿瘤活性测试发现,该菌株对5株供试细菌均有明显的抑制作用,对肝癌细胞株HepG2也具有极强的抑制效果,表明LCB-A281具有较强的广谱抗菌活性和极强的细胞毒活性.抗生素生物合成基因的PCR筛查结果显示,NRPS和PKS-Ⅱ的基因筛查均呈阳性,可推知该菌株具有在筛选抗生素生产候选菌株方面的潜力.     

Phoenix-100全自动微生物鉴定/药敏系统在葡萄球菌药敏判断中的局限性

目的 观察对Phoen ix-100系统鉴定在葡萄球菌药敏结果判断中的局限性。方法 对Phoen ix-100系统鉴定的183株金黄色葡萄球菌、82株凝固酶阴性葡萄球菌进行药敏分析,对青霉素表现为敏感菌株进行β内酰胺酶测定,对红霉素耐药克林霉素敏感菌株进行D-试验。结果 1 Phoen ix-100系统显示青霉素敏感的15株,行β内酰胺酶测定,结果阳性1株,修饰为耐药。2 Phoen ix-100系统显示红霉素耐药克林霉素敏感122株,行D-试验,结果阳性51株(41.8%),修饰为克林霉素耐药。结论 Phoen ix-100系统鉴定葡萄球菌药敏时存在局限性,在青霉素敏感、红霉素耐药克林霉素敏感时不能给出准确报告,应结合β内酰胺酶检测结果、D-试验结果将结果进行修饰,指导临床合理用药。     

聚合酶链式反应法在中药材和饮片鉴别中的相关问题探讨

目的：为促进聚合酶链式反应法在中药材和饮片鉴别中的应用,提高检验质量提供参考。方法： 梳理《中华人民共和国药典》收载的中药材和饮片鉴别聚合酶链式反应法在应用过程中发现的问题,从取样代表性、基因组提取、PCR扩增、标准物质和实验室布局等方面探讨聚合酶链式反应法的注意事项,并提出针对性的建议。结果与结论：应结合性状和其他鉴别提高取样的代表性;基因组提取时应注意排除污染,根据样品类型选择合适的提取方法并检验提取基因组质量;PCR扩增用引物设计和DNA聚合酶选择存在局限,使用合适的标准物质、注意实验室布局合理才能提高检验质量。     

洋葱伯克霍尔德复合体研究新进展简

洋葱伯克霍尔德复合体（BurkholderiafP—paciacomplex,Bcc）是一组革兰阴性非发酵菌,是一种重要的条件致病茵,在肺囊性纤维化（CF）和慢性肉芽肿（CG）患者中特别容易引起感染,使患者出现无症状带菌、慢性感染或洋葱综合症。随着抗生素的大量使用,洋葱伯克霍尔德复合体引起上述两种疾病以外感染的报道逐渐增多,可引起肺炎、败血症、伤口感染、深部脓肿、尿路感染等。本文就洋葱伯克霍尔德复合体的基因型,流行病学特征、鉴定方法、毒力因子、耐药机制等方面的研究新进展进行了综述。     

我院2004-2008年洋葱伯克霍尔德菌耐药性分析

目的了解我院2004-2008年洋葱伯克霍尔德菌耐药状况,为临床有效治疗洋葱伯克霍尔德菌感染提供帮助。方法从各类标本中分离出洋葱伯克霍尔德菌株,并利用API系统鉴定,采用Kirby-Bauer法和微量肉汤稀释法进行药敏试验。结果共分离出599株洋葱伯克霍尔德菌。该菌的耐药率呈逐年上升趋势,其对哌拉西林/他唑巴坦和米诺环素的耐药率最低,2008年分别为8.6%和11.2%。结论洋葱伯克霍尔德菌作为院内感染的重要致病菌之一,对临床上常用的抗生素高度耐药。哌拉西林/他唑巴坦和米诺环素可作为治疗洋葱伯克霍尔德菌感染的首选。     

洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)及干扰菌在不同增菌培养基中的生长研究

目的：考察Bcc以及Bcc与干扰菌的混合物在不同的增菌培养基中能否生长和增殖;探讨不同的 Bcc菌种对增菌培养基的营养需求和抗生素的耐受是否存在差异。方法：将Bcc的代表菌株、干扰菌以及 Bcc与干扰菌的混合物分别接种至TSB、10倍稀释的TSB、添加10 mg·L-1庆大霉素的TSB和添加250000 U·L-1多粘菌素B的TSB中培养,划线分离至选择性培养基上观察结果,并对可疑菌落进行分离和鉴定。结果：只接种Bcc的4种增菌培养基均能使之良好地增殖。低量的Bcc(约102 cfu)与高量的干扰菌 (104 cfu)的混合接种,除了神秘伯克霍尔德菌CMCC(B)23010外,4种增菌培养基能使Bcc增殖并被检出。结论：添加抗生素的TSB与未添加抗生素的相比没有表现出明显的优势。TSB可以作为Bcc检验时的增菌培养基使用。生长缓慢且活力弱的Bcc菌株在特定条件下有可能会被漏检。     

仙龙解毒饮微生物限度检查方法学验证研究

目的:建立仙龙解毒饮的微生物限度检查法。方法:按照《中国药典》2010版规定,采用5株阳性对照菌回收率试验进行其方法学验证研究。结果:采用平皿法,仙龙解毒饮对5种试验菌株的回收率均在70%以上,大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌,符合药典的要求。结论:仙龙解毒饮在此实验条件下无抑菌作用,所确立的检验方法适合本品的微生物限度检查。     

Evaluation of preservative systems in opthalmic suspension of polymyxin B and dexamethasone by linear regression

An ophthalmic suspension of polymyxin B and dexametasone with 13 different preservative systems was evaluated by a linear regression method for rapid screening, using D-values. The products were challenged against Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia cepacia, Staphylococcus aureus, Candida albicans and Aspergillus niger. Since linear regression showed correlation coefficients higher than 0.84 the decimal reduction time (D-value) was then calculated. The comparison of D-values obtained for each microorganism and each product led to the selection of the formula 9 = 10, which was selected to be submitted to the efficacy of antimicrobial preservation according to the European Pharmacopoeia.     

24株洋葱伯克霍尔德菌耐药性分析及β-内酰胺酶耐药基因检测

目的 了解洋葱伯克霍尔德菌耐药情况及耐药基因,为临床用药提供指导.方法 琼脂稀释法检测洋葱伯克霍尔德菌对10种抗生素的最低抑菌浓度(MIC); PCR法测定β-内酰胺酶耐药基因.结果 洋葱伯克霍尔德菌对头孢呋辛耐药率最高,达71.5%,其次氨曲南69.9%,左旋氧氟沙星66.7%,美罗培南66.6%,氯霉素62%;耐药...     

59株伯克霍尔德菌感染的分布特点及耐药性分析

目的分析我院伯克霍尔德菌感染情况及耐药性,为临床科学预防和合理使用抗生素治疗伯克霍尔德菌引起的感染提供依据。方法对2009年3月至2011年12月我院伯克霍尔德菌感染病例进行回顾性分析。结果洋葱伯克霍尔德菌以院内感染为主,多见于重症监护病房和外科,类鼻疽伯克霍尔德菌以社区感染为主,多见于内科;洋葱伯克霍尔德菌感染主要以痰标本为主,类鼻疽伯克霍尔德菌感染主要以血液标本为主;该两种菌感染发生年龄均多见61岁以上患者。在抗生素耐药性方面,洋葱伯克霍尔德菌除对美罗培南、哌拉西林/他唑巴坦、复方新诺明有较高的敏感率达43.0%以上,其他的抗生素敏感率较低。类鼻疽伯克霍尔德菌对美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦、头孢他啶、亚胺培南等敏感率100%。结论我院伯克霍尔德菌感染具有菌种差异性,而且,来源不同的各伯克霍尔德菌种对抗生素敏感性具有明显的差别。因此及时、定期地监测伯克霍尔德菌感染的流行情况,是预防和控制其感染扩散的重要措施。