山柰酚在大鼠肝亚细胞体系和培养的肝细胞中与葡糖醛酸和硫酸的结合物

作者用雄性Wistar大鼠肝亚细胞体系和培养的肝细胞，研究了山柰酚的体内代谢。     

山柰酚对大鼠主动脉平滑肌细胞PDGF受体酪氨酸磷酸化及其下游胞内信号转导的抑制作用

山柰酚是一种存在于人们饮食和植物中的黄酮类化合物,因其抗氧化活性而对心血管有保护作用。但山柰酚对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响鲜有报道,因此作者研究了该化合物对血小板衍生生长因子(PDGF)-BB诱导的原代培养大鼠主动脉VSMCs增殖的影响。将大鼠主动脉VSMCs在有或无山柰酚(5-50μmol/L)或表儿茶素3-酸酯(EGCG)存在情况下,于无血清培养基中预培养24h,然后用PDGF-BB50ng/mL刺激。细胞被胰蛋白酶作用24h后用血细胞计数仪计数。还以[3H]胸腺嘧啶掺入法检测了DNA合成、进行免疫印迹分析和c-fos mRNA表达试验。结果显…     

基于细胞色素P450 2B6酶的补骨脂素对环泊酚代谢的影响

目的 通过体外大鼠肝微粒体孵育实验考察环泊酚的酶促反应动力学,并进一步探究补骨脂素对其代谢的影响。方法 色谱柱：Diamonsil C18色谱柱(250.0 mm×4.6 mm, 5μm),柱温：30℃,流动相：乙腈-水=73∶27,检测波长：272 nm,流速：1.0 mL·min^-1,进样量：20μL,内标为丙泊酚。大鼠肝微粒体与系列浓度的环泊酚注射液共同孵育,用Graph Pad Prism 8软件计算环泊酚的米氏常数(K_m)、最大反应速度(V_max)和固有清除率(CL_int);孵育体系中加入系列浓度的补骨脂素,用HPLC法测定大鼠肝微粒体中的环泊酚减少量,并计算半数抑制浓度(IC₅₀),考察补骨脂素对环泊酚代谢的影响。结果 环泊酚在大鼠肝微粒体孵育体系中的K_m为129.8μmol·L^-1,V_max为98.42 nmol·min^-1·mg protein^-1,CL...     

异种肝细胞移植对大鼠药物性肝衰存活率和肝功能的影响

目的　观察异种肝细胞移植对大鼠药物性肝衰的存活率和肝功能的影响。方法　豚鼠为供体 ,海藻酸钠 氯化钡法微囊化。SD大鼠为受体 ,氨基半乳糖腹腔内一次性注射制作肝衰模型。 4 8h后将微囊化豚鼠肝细胞 (1 5× 10 7个 )移植于大鼠脾脏内。豚鼠裸肝细胞 (1 5× 10 7个 )移植及生理盐水 1 2ml脾脏注射为对照。移植后观察受体大鼠 14d存活率和肝功能的改变。结果　微囊化肝细胞移植组存活率 80 % ,明显高于生理盐水组 (2 5 % )和裸肝细胞移植组 (70 % ) (P <0 0 1与P <0 0 5 )。微囊化肝细胞移植组 14d总胆红素 (0 6 8± 0 0 5 μmol/L)和ALT(5 5± 6 7U/L) ,明显低于生理盐水组 (0 82± 0 0 7μmol/L和 91 0± 8 0U/L)和裸肝细胞组 (0 76± 0 0 6 μmol/L和 74 0±7 1U/L) (P <0 0 5和P <0 0 1)。总蛋白 (117 0± 8 4 g/L)和球蛋白 (6 6 0± 5 6 g/L) ,明显高于对照组 (78 0± 6 9g/L和 4 3 0± 6 2 g/L)、(96 0± 7 4 g/L和 5 2 0± 6 9g/L) (P <0 0 5与P <0 0 1)。结论　药物性肝衰大鼠脾内移植微囊化异种肝细胞有显著逆转肝功能和提高生存率的作用。     

大鼠松果腺培养上清对淋巴细胞功能的影响

本文观察了异丙肾上腺素(10μmol/L)与松果腺体外培养60min上清对淋巴细胞功能的影响。结果表明,松果腺培养上清1/45稀释度时可分别促进ConA和LPS诱导小鼠脾淋巴细胞增殖反应,1 /135稀释度可促进ConA诱导大鼠脾细胞IL-2的产生。     

补骨脂酚对HepG2的细胞毒性及BSEP、NTCP、FXR、CYP7A1的影响

目的 观察补骨脂酚对体外HepG2细胞的毒性和对胆汁酸转运体的影响。方法 用MTT法检测不同浓度补骨脂酚作用于HepG2细胞2、6和24 h对细胞增殖的影响,计算相应IC50值,并检测细胞培养基中AST和ALP活性。用实时定量PCR检测BSEP、NTCP、FXR和CYP7A1的mRNA。结果 HepG2细胞的存活率与补骨脂酚终浓度和作用时间呈负相关,在62.5~187.5μmol/L之间有良好的量效关系。补骨脂酚作用HepG2细胞6 h的IC50=177.9μmol/L,24 h的IC50=41.6μmol/L。补骨脂酚作用24 h的细胞毒性明显,细胞培养基中的AST和ALP活性显著升高,而60μmol/L的环孢菌素A(CsA)几乎可以完全对抗补骨脂酚对HepG2细胞的抑制作用。实时定量PCR检测表明,补骨脂酚作用于HepG2细胞2 h时BSEP被抑制,而24 h时BSEP、NTCP、FXR和CYP7A1的mRNA增加。结论 补骨脂酚对HepG2细胞的细胞毒性可能需要通过线粒体,并可能与其影响肝细胞胆汁酸转运有关。     

补骨脂素和补骨脂酚舒张血管的作用机制研究

目的:探讨补骨脂素和补骨脂酚舒张血管的作用机制。方法:取大鼠胸主动脉制备离体血管环及去内皮血管环。采用血管收缩率为考察指标,分别以一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME,100μmol/L)预孵育内皮完整或去内皮血管环后,考察低、中、高剂量补骨脂素或补骨脂酚(0.1、1、10μmol/L)对去甲肾上腺素(NE,1μmol/L)或氯化钾(KCl,60 mmol/L)预收缩血管环的舒张作用;分别以钙依赖型钾离子通道抑制剂氯化四乙胺(TEA,0.1 mmol/L)、内向整流型钾离子通道抑制剂氯化钡(BaCl2,0.1 mmol/L)预孵育去内皮血管环后,考察低、中、高剂量补骨脂酚(0.1、1、10μmol/L)对NE(1μmol/L)预收缩去内皮血管环的舒张作用。采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法分离大鼠心脏微血管内皮细胞,采用酶联免疫吸附法考察低、中、高剂量补骨脂素或补骨脂酚(0.1、1、10μmol/L)对细胞中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达的影响。结果:各剂量补骨脂素和补骨脂酚均能显著降低NE预收缩的内皮完整血管环收缩率(P<0.01),中、高剂量补骨脂素和补骨脂酚能显著降低KCl预收缩的内皮完整血管环收缩率(P<0.05或P<0.01),而去内皮和抑制一氧化氮合酶后血管环收缩率显著升高(P<0.05或P<0.01);中、高剂量补骨脂酚能显著降低NE预收缩去内皮血管环收缩率(P<0.05或P<0.01),而抑制血管平滑肌内向整流型钾离子通道后血管环收缩率显著升高(P<0.01)。各剂量补骨脂素和补骨脂酚均能显著提高大鼠心脏微血管内皮细胞中e NOS蛋白表达水平(P<0.01)。结论:补骨脂素和补骨脂酚可能通过内皮依赖性的NO途径以及促进内皮细胞中eNOS蛋白表达来发挥血管舒张作用;补骨脂酚还可能通过开放内向整流型钾离子通道这一非内皮依赖途径发挥血管舒张作用。     

HPLC法测定大鼠UGT1A6的酶活性及体外动力学分析

目的:建立灵敏、稳定的高效液相色谱法,以对硝基酚为探针底物,评价体外大鼠肝微粒体中UGT1A6酶活性。方法:色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为20 mmol.L-1磷酸二氢钾缓冲液-甲醇(50∶50,V/V),流速0.8 mL.min-1,柱温30℃,检测波长280 nm。对硝基酚与大鼠肝微粒体在37℃共同孵育一段时间后,加入冰乙腈终止反应,于4℃下12000 r.min-1离心15 min后,吸取上清进行HPLC分析,以双倒数作图法计算酶动力学参数。结果:对硝基酚保留时间为8.95 min,线性范围为0.5～100μmol.L-1,回归方程为Y=5973.12X+571.58(r=0.9999),最低检测限(LOD)为0.1μmol.L-1(S/N≥3),最低定量限(LLOQ)为0.5μmol.L-1,回收率为104.5%～105.5%,日内、日间RSD均小于10%,温孵体系中其他内源性物质不干扰测定;计算酶动力学参数Km为24.63μmol.L-1,Vmax为18.87 nmol.min-1.mg.protein-1。结论:该方法灵敏度高、稳定性好,适合体外对硝基酚的测定,可用于大鼠体外UGT1A6酶活性的评价及酶动力学研究。     

缬沙坦对尼古丁损伤血管内皮依赖性舒张功能的保护作用及机制

目的:探讨缬沙坦对尼古丁损伤大鼠肠系膜动脉内皮依赖性舒张反应的保护作用及机制。方法:将培养的成年SD大鼠肠系膜动脉环分为空白对照组(C组),尼古丁组(N组),缬沙坦低、中、高剂量组(V1、V2、V3组),吲哚美辛组(I组)和L-Nω硝基精氨酸甲酯组(L组)7个组。尼古丁组将血管环与0.1mmol/L尼古丁共同培养;缬沙坦组加入不同浓度(0.1、1、10μmol/L)缬沙坦与0.1mmol/L尼古丁,共同培养;吲哚美辛组和L组加入10μmol/L缬沙坦、0.1mmol/L尼古丁与10μmol/L吲哚美辛或100μmol/LL-Nω硝基精氨酸甲酯,共同培养。各组血管环均培养24h。培养后,应用离体血管环张力描记法,研究不同浓度的乙酰胆碱(ACh)对血管内皮依赖性舒张反应的影响。结果:除ACh浓度(10-9、10-8.5、10-7mol/L)外,大鼠的血管最大舒张率N组与C、V2、V3组,V3组与I组、L组之间差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:缬沙坦可能通过促进内皮细胞释放一氧化氮和前列环素而发挥保护尼古丁对血管内皮依赖性舒张功能损伤的作用。     

山柰酚静脉注射后在大鼠体内的药动学研究

目的:研究静脉注射山柰酚后大鼠体内药动学特点。方法:将60只大鼠随机分为10个时间组,每组6只。均静脉注射给药,给药容积0.1mL·kg-1,剂量5mg·kg-1。于给药后1、3、5、10、20、40、80、120、180、240min分别从相应时间组每只大鼠取血0.5mL(n=6),采用高效液相色谱法检测大鼠血浆中山柰酚浓度;色谱柱为PhenomenexC1(8100mm×4.6mm,6μm),预柱为DikmaEasyⅡGuardC18Kit(8mm×4mm),流动相为乙腈-水(1∶2,V/V),流速为0.5mL·min-1,检测波长为370nm,柱温为35℃,进样量为80μL;采用3p97软件计算药动学参数。结果:大鼠静脉注射山柰酚的浓度-时间曲线符合二室模型,t1/2α=(0.95±0.35)min;t1/2β=(5.68±0.94)min;AUC0～t=(155.10±7.43)μg·min·mL-1;AUC0～∞=(199.84±14.07)μg·min·mL-1;CL=(45.90±1.90)mL·kg-1·min-1。结论:山柰酚原型在大鼠体内消除迅速,血药浓度下降快,30min后消除95%以上。     

丹皮酚对体外培养乳鼠心肌细胞~(45)Ca摄取的影响

通过测定体外培养乳鼠心肌细胞~(45)Ca摄取及其搏动频率的变化,观察丹皮酚对心肌细胞Ca~(2+)内流的影响。结果50～400μg/ml的丹皮酚,能显著降低心肌细胞搏动频率,对心肌细胞快相(5min)和慢相(120min)~(45)Ca摄取均有显著抑制作用,且400μg/ml丹皮酚与10μmol/L的维拉帕米的作用相似。提示丹皮酚能抑制心肌细胞的Ca~(2+)内流,可能与阻滞慢钙通道有关。     

利福平、异烟肼合用与单用时的肝毒性比较

目的:探讨异烟肼(INH)与利福平(RFP)合用致肝毒性增加的部分作用机制.方法:采用在体心脏灌流法获取小鼠原代 肝细胞,将其常规培养72 h后,含INH(87.5 μmol/L)、RFP(48.6 μmol/L)、INH+RFP(87.5 μmol/L+48.6 μmol/L)培养液培养48 h后,常规HE染色,光镜下观察肝细胞生长情况并计数.结果:INH与RFP合用后与INH单用时比较肝细胞计数减少(P<0.05.P<0.01).结论:RFP和INH合用后使INH肝毒性代谢物浓度增加,可能是其肝毒性增加的原因之一.     

利福平、异烟肼合用与单用时的肝毒性比较

目的:探讨异烟肼(INH)与利福平(RFP)合用致肝毒性增加的部分作用机制.方法:采用在体心脏灌流法获取小鼠原代 肝细胞,将其常规培养72 h后,含INH(87.5 μmol/L)、RFP(48.6 μmol/L)、INH+RFP(87.5 μmol/L+48.6 μmol/L)培养液培养48 h后,常规HE染色,光镜下观察肝细胞生长情况并计数.结果:INH与RFP合用后与INH单用时比较肝细胞计数减少(P<0.05.P<0.01).结论:RFP和INH合用后使INH肝毒性代谢物浓度增加,可能是其肝毒性增加的原因之一.     

丹酚酸A对培养的大鼠肝星状细胞增殖与胶原生成的作用(英文)

目的:研究丹酚酸A对培养的大鼠肝星状细胞增殖与胶原生成的影响。方法:用链酶蛋白酶与胶原酶对肝脏进行原位灌流消化,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠肝星状细胞,传一代培养。MTT法与[~3H]TdR掺入法测定细胞增殖。丽春红染色、图象分析法半定量细胞胶原沉积量,ELISA法测定细胞培养上清中Ⅰ型胶原分泌量,检测细胞层总蛋白量校正细胞数。RT-PCR法分析前胶原α_2(Ⅰ)基因的表达。结果:丹酚酸A 100μmol/L引起部分细胞脱壁与死亡,有一定毒性反应。丹酚酸A 0.1-10μmol/L对细胞形态无明显影响。丹酚酸A1-100μmol/L浓度依赖性抑制细胞增殖,降低胶原沉积量与Ⅰ型胶原分泌量。丹酚酸A1-10μmol/L对前胶原α_2(Ⅰ)mRNA表达均有明显抑制作用。结论:丹酚酸A抑制肝星状细胞增殖与胶原表达,是丹参抗肝纤维化的主要有效成分之一,抑制肝星状细胞活化是其抗肝纤维化的主要作用机制。     

肝细胞内镉的吸收及其对钙稳态之影响

采用大鼠游离原代肝细胞培养技术,观察肝细胞对cd的吸收及cd对肝细胞内钙稳态的影响。实验发现,肝细胞对cd的吸收分为两个时期,即迅速吸收期和缓慢吸收期。在cd作用浓度为3.56μmol/L时,肝细胞内钙稳态并未发生明显变化;与此同时,肝细胞内CaM与Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性     

山奈酚阻滞JAK2/STAT3通路抑制宫颈癌细胞的增殖及糖酵解的作用研究

探究山奈酚对人宫颈癌细胞增殖、黏附、糖酵解及Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录启动因子3(STAT3)信号通路的调控作用。体外培养人宫颈癌HeLa细胞,分为对照组(不做干预)、10、20、40、80μmol/L山奈酚组,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法筛选出细胞活力接近50%的山奈酚(40μmol/L)用于后续实验。而后取对数生长期的HeLa细胞,分为对照组、实验组(40μmol/L山奈酚)、阳性药物组(20μg/mL 5-氟尿嘧啶)、抑制剂组(40μmol/L山奈酚+50μmol/L JAK2/STAT3信号通路抑制剂AG490)和激活剂组(40μmol/L山奈酚+0.5μmol/L JAK2/STAT3信号通路激活剂Colivelin)。干预24 h,采用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法、细胞黏附实验、乳酸检测试剂盒、葡萄糖检测试剂盒、蛋白免疫印迹(WB)法对细胞增殖、黏附能力、乳酸含量、葡萄糖消耗水平及JAK2/STAT3信号通路关键蛋白表达水平进行分析。40μmol/L山奈酚干预后细胞活力接近50%,故选取此浓度进行后续实验。与对照组相比,实验组和阳性...     

皮质酮对大鼠海马CA1区长时程抑制的影响

目的 观察皮质酮对大鼠海马CA1区锥体神经元产生的长时程抑制(LTD)的影响.方法 断头法分离Wistar大鼠海马半脑,切片机切出400μm厚度的海马脑片.对照组不加任何药品,皮质酮组、D-APV组和D-APV 皮质酮组的脑片分别以10μmol/L皮质酮、50μmol/L D-APV和50μmol/L D-APV 10μmol/L皮质酮预孵60min.记录基础兴奋性突触后电流(EPSC)10min,然后给予低频刺激(LFS),记录LTD的表达情况.结果 对照组给予LFS后,产生LTD,LFS后EPSC值为基础值的58.2 %(P＜0.05);皮质酮组给予LFS后EPSC值为基础值的45.4 %(P＜0.05),明显低于对照组(P＜0.05);给予NMDA受体特异性拮抗剂D-APV后,D-APV组和D-APV 皮质酮组大鼠海马CA1区LFS不能诱发LTD.结论 该实验条件诱发的LTD是NMDA受体依赖型的,10 μmol/L皮质酮使大鼠海马CA1区锥体神经元LTD表达增强.     

大鼠体内槲皮素的血药浓度测定及其药代动力学研究

目的建立测定大鼠血浆中槲皮素浓度的高效液相色谱法,并应用于药代动力学研究。方法10只大鼠(雌雄各半)灌胃给予槲皮素50 mg/kg。采用高效液相色谱法测定槲皮素的血药浓度,以山柰酚为内标,流动相为甲醇-缓冲液(0.1 mol/L NH4AC+0.3 mmol/LEDTA-Na2)-乙酸=(60∶40∶1,V/V),色谱柱为迪马ODS C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),测定波长为370 nm,进样量为20μL,流速为1 mL/min,柱温为35℃。结果槲皮素血药浓度线性范围是0.01～50μg/mL(r=0.999 9),定量下限为0.01μg/mL。低、中、高(0.05,5,25μg/mL)3个质量浓度的回收率为97.2%～103.4%,日内、日间精密度的RSD均小于10%。大鼠灌胃给予槲皮素50 mg/kg后的最大血药浓度为(2.033±0.41)μg/mL,达峰时间为0.5 h,t1/2ke为(4.17±0.64)h,0-∞药时曲线下面积为(6.77±0.80)μg/(h.mL)。结论方法专属性高,准确、灵敏,可为今后槲皮素的药代动力学研究提供方法学依据。     

应用人肝细胞研究人参皂苷Rb1和Rg1、丹参素钠、冰片对CYP450药物代谢酶1A2、2B6和3A4的体外诱导作用

目的使用原代培养的人肝细胞研究人参皂苷Rb1和Rg1、丹参素钠、冰片对细胞色素P450酶(CYP450)的诱导作用。方法分别将3批次的冷冻原代人肝贴壁细胞进行接种培养,使用人参皂苷Rb1和Rg1、丹参素钠、冰片(30μmol/L)对CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4进行诱导,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定CYP450酶mRNA表达水平,评价4种单体成分对P450酶的诱导作用。阳性对照为20μmol/L利福平(CYP3A4诱导剂)、50μmol/L奥美拉唑钠(CYP1A2诱导剂)和1 mmol/L苯巴比妥钠(CYP2B6诱导剂);阴性对照组为10μmol/L红霉素。冰片(30μmol/L)与利福平联合给药,观察冰片对利福平的CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4诱导作用的影响。结果3批次人肝细胞的诱导结果显示,阳性诱导剂奥美拉唑、苯巴比妥、利福平分别显著诱导CYP1A2、CYP2B6、CYP3A4的表达,阴性对照红霉素对CYP1A2、CYP2B6及CYP3A4的mRNA表达水平未见明显影响,人参皂苷Rb1和Rg1、丹参素钠、冰片在30μmol/L浓度给药时,对3批次人肝细胞的CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4 mRNA表达水平未见明显影响;30μmol/L冰片与利福平联合给药,与利福平单独给药比较,3批次肝细胞的CYP2B6、CYP3A4 mRNA表达水平均减少,对CYP3A4的mRNA表达水平影响尤为显著。结论人参皂苷Rb1和Rg1、丹参素钠、冰片在30μmol/L浓度给药时,对3批次人肝细胞的CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4均没有诱导作用。冰片与利福平联合用药时,可以阻断利福平对CYP2B6和CYP3A4的诱导作用,对CYP3A4的影响尤为显著。     

甲基莲心碱对正常与高脂血人及动物血小板聚集功能的影响

用比浊法测定血小板聚集率,观察甲基莲心碱(Nef)体外给药对正常与高脂血的人、大鼠及家兔血小板聚集功能的影响。结果表明,Nef在体外抑制ADP、胶原、Adr诱导的人血小板聚集,呈明显剂量依赖性。健康人组,对ADP、Adr诱聚1min时的IC_(50)分别为59和36μmol/L;对ADP、Adr、胶原诱聚5min时的IC_(50)分别为42,89和110μmol/L。高脂血症患者组,Nef对ADP、Adr诱聚1min时的IC_(50)分别为45,38μmol/L;对ADP、Adr、胶原诱聚5min时的IC_(50)分别为36,27和16μmol/L。Nef 50、500μmol/L也能明显抑制ADP诱导的以正常或高脂饮食喂养大鼠的血小板聚集。Nef(0.3～300μmol/L)抑制ADP、胶原诱导的兔血小板聚集呈剂量依赖性。