瑞舒伐他汀通过UCP2-SIRT3信号调控脑I/R对神经元的损伤

目的:研究瑞舒伐他汀对脑缺血-再灌注损伤的保护作用及作用机制。方法:(1)建立脑梗死及OGD/R细胞模型,检测不同浓度瑞舒伐他汀对细胞增殖及细胞凋亡的影响;(2)用不同浓度瑞舒伐他汀处理OGD/R细胞模型,观察瑞舒伐他汀对细胞形态和细胞中UCP2/SIRT3表达和定位的影响;(3)构建UCP2沉默的细胞系,观察细胞线粒体形态和细胞中TOMM20及SIRT3分子表达与定位,研究瑞舒伐他汀在OGD/R细胞模型中发挥保护作用的通道和机制;(4)检测线粒体膜电位,PCR检测线粒体生成基因PGC1、Drp1和Opa1表达,研究瑞舒伐他汀对线粒体的保护作用。结果:(1)不同浓度瑞舒伐他汀均可以明显减低OGD/R细胞凋亡,提高细胞存活率;(2)瑞舒伐他汀通过影响细胞UCP2和SIRT3表达,进而发挥细胞保护作用,使细胞免受OGD/R损伤;(3)瑞舒伐他汀通过调控UCP2影响TOMM20表达,增加线粒体跨膜转运和能量代谢,增强线粒体功能,提高细胞存活;(4)瑞舒伐他汀阻止OGD/R细胞膜电位下降,保护线粒体,改善细胞状态,减少细胞凋亡。结论:瑞舒伐他汀通过调控UCP2/SIRT通路来抑制OGD/R细胞线粒体损伤,从而发挥神经元保护作用。     

瑞舒伐他汀通过调控UCP2-SIRT3通路减轻脑缺血/再灌注对神经元线粒体的损伤

目的探讨瑞舒伐他汀(rosuvastatin,RS)通过UCP2-SIRT3信号通路在脑缺血/再灌注(CIR)神经元线粒体损伤中的作用及其机制。方法建立SH-SY5Y细胞的脑梗死再灌注模型(OGD/R),给予不同浓度RS(40和2.5μmol·L^-1)分别处理,观察两组中细胞增殖和凋亡的变化及UCP2和SIRT3分子的表达;构建UCP2沉默细胞系,研究不同浓度RS对UCP2沉默前后细胞形态和线粒体膜电位的影响、以及SIRT3分子、线粒体外膜异位酶20(TOMM20)和线粒体合成相关蛋白(Drp1、Opa1和PGC1)的表达变化。结果RS能提高OGD/R细胞的存活率、抑制细胞凋亡、改变细胞形态、稳定细胞线粒体膜电位;增加OGD/R细胞中UCP2、SIRT3分子和TOMM20蛋白表达,并诱导Drp1和Opa1 mRNA的表达,抑制PGC1 mRNA的表达;沉默UCP2后能明显降低OGD/R细胞的存活率及TOMM20蛋白的表达,降低Drp1和Opa1 mRNA的表达,使PGC1 mRNA的表达增加。结论RS通过调控UCP2-SIRT3通路减轻CIR对神经元线粒体的损伤,发挥神经细胞保护作用。     

CircRNA4736通过“海绵状”吸附miR-206调控Seipin介导的线粒体自噬在缺血性脑卒中再灌注损伤的分子机制

目的缺血性脑卒中神经元损伤主要有2种形式:迟发性神经元坏死和凋亡。线粒体损伤和功能紊乱是脑缺血再灌注中导致神经元死亡的重要因素。因此,清除损伤的线粒体并避免对神经元造成更严重危害是缺血性脑卒中溶栓治疗后的再灌注损伤神经细胞保护的重要策略之一。内质网蛋白Seipin介导的线粒体自噬能够清除受损线粒体,但机制不清。本研究旨在探索circRNA4736是否竞争性吸附miR-206,解除miR-206对Seipin的抑制作用,从而上调Seipin蛋白的表达,促进Seipin介导的线粒体自噬,最终抑制神经元凋亡。方法通过RNA-seq检测PC12细胞正常组与OGD/R处理组中差异表达circRNA和miRNA的筛选及验证;构建circRNA4736和Seipin敲除、脑缺血再灌注的动物和细胞模型;检测目标circRNA4736、miR-206与靶基因Seipin内源性表达水平及其相关性;分析miR-206沉默对氧糖剥夺PC12细胞的影响;在PC12细胞中分析过表达circRNA4736通过充当"分子海绵"吸附miR-206,从而抑制miR-206对Seipin的阻碍作用;分析外源性circRNA4736对缺血再灌注损伤的神经细胞的保护作用。结果在Seipin-KO小鼠的MCAO模型发现,线粒体自噬水平较野生型小鼠MCAO模型显著降低;在Seipin敲低的PC12细胞经OGD/R处理后,线粒体自噬水平较野生型PC12细胞显著下降;PC12细胞Seipin缺失导致Akt-m TOR信号活性增加;通过全转录组测序分析获得了差异表达倍数最高的circRNA4736;同时我们发现,miR-206表达水平与circRNA4736呈负相关;双荧光素酶报告基因检测发现miR-206与circRNA4736和Seipin之间均具有相互结合位点,并且过表达circRNA4736或下调miR-206能够恢复Seipin表达及其介导的线粒体自噬;在PC12细胞的OGD/R模型中抑制miR-206水平,Seipin蛋白的表达得到回复,细胞纯化线粒体蛋白中P62和BNIP3的表达及Beclin-1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均显著上调,即线粒体自噬增强;过表达circRNA4736能够有效促进OGD/R模型的PC12细胞Seipin的表达上调及显著抑制PC12细胞凋亡。结论 Seipin及其介导的线粒体自噬可能作为缺血性脑卒中溶栓治疗后导致的缺血再灌注损伤的潜在研究靶点,外源性circRNA4736通过"海绵状"竞争性结合miR-206,解除miR206对Seipin的3'UTR区的抑制作用,从而重新激活Seipin蛋白生物学功能,进而促进Seipin介导的线粒体自噬,最终抑制神经元的凋亡。     

瓜子金皂苷己对连二亚硫酸钠致氧糖剥夺/复供诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的观察瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PGSF)对氧糖剥夺/复供(oxygen-glucose deprivation and reperfusion,OGD/R)所诱导的PC12细胞凋亡的作用及其机制。方法以连二亚硫酸钠合并无糖Earle’s液造成氧糖剥夺,继而恢复为完全培养基以建立体外OGD/R模型,以Hoechst33342/PI双染及流式细胞术观察细胞受损和凋亡情况;以JC-1荧光染色法测定细胞线粒体膜电位(mitochondrial membranepotential,MMP);以Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果 PGSF可明显改善细胞形态并降低细胞受损和凋亡百分率,抑制MMP水平的降低,增加Bcl-2/Bax表达比值。结论 PGSF对OGD/R诱导的PC12细胞凋亡具有明显抑制作用,机制与其调节Bcl-2和Bax的表达及稳定MMP有关。     

咖啡酸对氧化应激诱导的PC12细胞5-脂氧酶激活的抑制作用

目的探讨咖啡酸是否通过抑制氧化应激诱导的5-脂氧酶(5-LOX)激活而减轻细胞损伤。方法稳定转染绿荧光蛋白(GFP)-5-LOX的PC12细胞,预先给予咖啡酸0.001~10μmol.L-1和对照药MK886,30min后观察缺氧缺糖/恢复(OGD/R)及过氧化氢(H2O2)160μmol.L-1处理后的变化。MTT法和碘化丙啶染色法分析细胞存活率和死亡率;荧光显微镜观察OGD 2 h/R2 h和H2O2处理40 min时5-LOX的核膜移位;ELISA法测定OGD 2 h/R 3 h时5-LOX代谢产物的生成;DCF法检测OGD 2 h/R 0.5 h细胞内活性氧(ROS)的产生。结果 OGD 2 h/R 24 h GFP-5-LOX转染和GFP-转染PC12细胞的存活率分别为(63.1±6.6)%和(70.7±6.9)%;H2O2处理24 h细胞存活率分别为(62.5±7.7)%和(75.7±9.5)%。在GFP-5-LOX转染的PC12细胞中,咖啡酸和对照药MK886可使OGD/R细胞存活率从(63.1±6.6)%分别增加到(87.3±2.0)%和(89.9±6.3)%,细胞坏死率从(31.4±1.5)%降低到(10.1±2.0)%和(11.7±1.3)%(P<0.01);使H2O2处理细胞存活率从(62.51±7.65)%增加到(92.59±4.02)%和(75.31±6.60)%;使OGD/R细胞CysLTs的生成从261.1±33.7降低到108.5±16.7和(90.6±19.5)ng.g-1蛋白(P<0.01)。此外,咖啡酸抑制OGD/R诱导PC12细胞的ROS产生,IC50值为8.021μmol.L-1;抑制OGD/R诱导的GFP-5-LOX转染的PC12细胞5-LOX核膜移位,IC50值为0.974μmol.L-1;抑制H2O2诱导的GFP-5-LOX转染的PC12细胞5-LOX核膜移位,IC50值为0.501μmol.L-1;MK886无上述作用。结论咖啡酸可抑制氧化应激诱导的PC12细胞5-LOX激活,对缺血损伤的PC12细胞具有保护作用。     

毛蕊花糖苷对皮质酮损伤HT22细胞保护作用研究

目的 探讨毛蕊花糖苷对皮质酮诱导小鼠海马神经元细胞株HT22损伤的保护作用及其机制。方法 用皮质酮构建慢性应激损伤HT22神经元细胞的体外模型。将HT22细胞分为空白组、模型组、雌二醇(E₂)组和毛蕊花糖苷组。空白组与模型组以DMEM培养24 h;雌二醇组加入DMEM和0.3μmol·L^-1E₂溶液；毛蕊花糖苷组加入DMEM和10μmol·L^-1毛蕊花糖苷溶液，培养2 h后，除空白组外，其余各组加入400μmol·L^-1的皮质酮储备液，继续培养22 h。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率；以蛋白质印迹法检测脑源性神经营养因子(BDNF)、原肌球蛋白受体激酶B(TrkB)、雌激素受体(ERβ)蛋白表达。结果 正常组、模型组、雌二醇组和毛蕊花糖苷组的细胞凋亡率分别为(3.31±0.35)%、(20.82±0.73)%、(9.35±0.87)%和(7.73±0.62)%,BDNF蛋白表达水平分别为1.16±0.02、0.17±0.02、0.70±0.02和0.43±0.03,TrkB蛋...     

獐牙菜苦苷对PC12细胞氧糖剥夺再灌注损伤的保护作用及机制

目的 探讨獐牙菜苦苷(Swe)对PC12细胞氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤的保护作用及其机制.方法 ① 将PC12细胞放入恒温缺氧箱内(缺氧缺糖)4 h,再置CO2培养箱正常培养(再灌注)24 h构建PC12细胞OGD/R模型.再灌注同时分别给予溶剂(OGD/R模型组)、Swe 0.1,1.0和10.0μmol·L-...     

毛蕊花糖苷促进神经递质释放的分子机制

目的研究毛蕊花糖苷对于AD发病过程中神经递质释放的影响。方法 (1)计算机模拟对接毛蕊花糖苷与L型、N型的钙通道。(2) MTT法检测细胞存活率。(3)酶标仪定量检测毛蕊花糖苷对钙离子浓度的影响。(4) Western印迹检测毛蕊花糖苷对囊泡相关蛋白表达水平的影响。(5)UPLC/Q Exactive MS法检测毛蕊花糖苷对于乙酰胆碱分泌的影响。结果 (1)毛蕊花糖苷与L型和N型钙通道的结合能分别为-1.54和138.13,说明毛蕊花糖苷主要通过与L型钙通道结合发挥作用。(2) Aβ1-4210μmol·L~(-1)暴露PC12细胞12 h后,MTT检测细胞存活率达(48.91±4.59)%,与正常对照组比较有显著性差异。(3)与模型组比较,药物干预后引发细胞外的钙离子内流,促进p-CamkⅡ及囊泡蛋白p-Synapsin,Synaptophysin和Synaptotagmin的表达增加,进而增加乙酰胆碱的释放。结论毛蕊花糖苷通过与L型钙通道结合促进细胞外钙离子内流,促使囊泡相关蛋白表达增加,进而引起乙酰胆碱的释放增加。     

丁苯酞抑制原代大鼠海马神经元氧糖剥夺/复氧诱导的凋亡

目的:观察丁苯酞对氧糖剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导的SD大鼠原代培养海马神经元损伤的保护作用。方法:原代培养新生24 h内SD乳鼠海马神经元,建立氧糖剥夺30 min/复氧8 h海马神经元损伤模型。实验分为正常对照组、OGD/R模型组、丁苯酞低、中、高剂量组(0.1,1,10μmol·L-1)。采用Hoechest33258染色测定细胞凋亡,免疫细胞化学检测各组细胞中Bcl-2蛋白的表达情况。结果:与OGD/R模型组比较,各丁苯酞给药物组神经元凋亡率均不同程度降低(P<0.01),且随药物浓度升高而降低;Bcl-2蛋白表达不同程度地增高(P<0.01),且随药物浓度升高而升高。结论:丁苯酞能抑制OGD/R诱导的海马神经元细胞凋亡,其可能通过增加神经元内Bcl-2凋亡抑制蛋白的表达而抑制凋亡,进而保护神经元。     

脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达与罗非昔布的影响

目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑梗死面积的变化、脑组织神经细胞凋亡、Bcl2与Bax蛋白表达以及罗非昔布的保护作用。方法线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞2h/再灌注24h模型,于再灌注开始时灌胃给予罗非昔布。TTC染色观察脑梗死面积,TUNEL法检测神经细胞凋亡,免疫组化法检测脑组织Bcl2和Bax蛋白表达。结果损伤侧脑组织出现明显梗死灶,神经细胞凋亡率与Bax蛋白表达均明显升高,Bcl2/Bax比值明显下降。罗非昔布1.12、2.24mg·kg-1均可明显减少脑梗死面积,2.24mg·kg-1剂量还可显著降低神经细胞凋亡率与Bax蛋白表达,增高Bcl2蛋白表达与Bcl2/Bax比值。结论选择性COX2抑制剂罗非昔布可促进Bcl2蛋白表达并减少Bax蛋白表达,上调Bcl2/Bax比值而抑制神经细胞凋亡,从而明显改善缺血再灌注引起的脑损伤。     

毛蕊花糖苷通过调节线粒体自噬保护帕金森病神经细胞的作用研究

目的 探讨毛蕊花糖苷(ACT)对帕金森病(PD)细胞模型的保护作用，并揭示其可能的机制。方法 应用鱼藤酮(ROT)和6-羟基多巴胺(6-OHDA)干预PC-12和SH-SY5Y细胞构建PD细胞模型，采用MTT比色法检测不同浓度ACT对PC-12细胞活性的影响；流式细胞技术分别检测ACT对6-OHDA和ROT损伤的SH-SY5Y细胞凋亡的作用。利用激光共聚焦显微镜观察ACT对NRK和PC-12细胞线粒体自噬的影响。应用分子对接技术预测ACT与PINK1、Parkin的对接姿势和能量。结果 ACT对PC-12细胞作用24 h的IC₅₀值为695.5μM;ACT能降低ROT和6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞的凋亡发生率，差异有统计学意义(P<0.01),且明显提高NRK和PC-12细胞的线粒体自噬水平；ACT对PINK1和Parkin均具有较强的对接亲和力，其亲和能量均为-9.0 kcal/mol。结论 ACT可能通过抑制细胞凋亡和调节PINK1/Parkin介导的线粒体自噬而保护PD神经细胞。     

灯盏花乙素通过调节线粒体融合-分裂平衡抑制氧糖剥夺/复糖复氧诱导的N2a细胞焦亡

目的: 探讨灯盏花乙素对氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)诱导的N2a细胞焦亡的影响及作用机制。方法: 建立N2a细胞OGD/R损伤模型,设立对照组、模型组、灯盏花乙素给药组和线粒体分裂抑制剂Mdivi-1组。通过CCK-8检测N2a细胞增殖能力,检测各组细胞培养基中LDH和IL-1β水平,通过JC-1探针检测线粒体膜电位,Western blot检测线粒体融合分裂关键蛋白(Drp-1、Mfn-1、Mfn-2、OPA-1)和细胞焦亡标志蛋白(Caspase-1、NLRP-3和GSDMD)表达。结果: 与对照组相比,OGD/R可显著降低N2a细胞活力,灯盏花乙素可明显提高N2a细胞活力。与模型组相比,灯盏花乙素可减少LDH的释放,降低Caspase-1和IL-1β水平,提高线粒体膜势能,降低Drp-1的表达水平,上调Mfn-1、Mfn-2和OPA-1的表达,并减少细胞焦亡关键蛋白NLRP-3和GSDMD的表达。进一步给予Drp-1抑制剂Mdivi-1,与模型组相比,Mdivi-1可明显提高线粒体膜势能,减少Caspase-1、NLRP-3和GSDMD的表达。结论: 灯盏花乙素可通过抑制线粒体过度分裂,改善线粒体融合-分裂失衡与功能异常,进而缓解OGD/R所致N2a细胞焦亡。     

克拉霉素对糖氧剥离大鼠皮质神经细胞的保护作用及其抑制凋亡的机制研究

目的：研究克拉霉素对大鼠皮质神经细胞糖氧剥离（OGD）后的保护作用及其与抑制凋亡相关的作用机制。方法：提取培养原代大鼠皮质神经细胞,建立皮质神经细胞糖氧剥离模型,OGD前予以克拉霉素（CAM）预处理;通过存活/凋亡检测试剂盒于荧光显微镜下观察各组细胞凋亡情况;LDH试剂盒测定各组培养基LDH含量定量评估细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法测定各组细胞Caspase-3,Bax,Bcl-2的表达情况。结果：OGD处理后皮质神经细胞凋亡及乳酸释放含量较正常组明显增加,差异具有显著统计学意义（76.51±14.92% VS 15.37±3.91%,p＜0.01）,100μM CAM预处理可显著减少OGD造成的细胞凋亡及LDH释放（21.64±7.16% VS 76.51±14.92%,p＜0.01）;OGD处理后皮质神经细胞Caspase-3,Bax/Bcl-2表达显著升高,与Control组相比,均具有显著统计学意义（p＜0.01）,而CAM预处理有效降低了Caspase-3,Bax/Bcl-2表达。结论：克拉霉素对糖氧剥离大鼠皮质神经细胞具有保护作用,其作用可能与促进了Caspase-3,Bax上调,Bcl-2蛋白下调的凋亡相关通路有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对缺血再灌注损伤诱导的大鼠神经细胞凋亡的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对缺血再灌注损伤诱导的大鼠神经细胞凋亡、氧化应激的影响及其对长链非编码RNA MALAT1(lncRNA MALAT1)/微小RNA-2115-3p(miR-2115-3p)分子轴的调控作用。方法体外培养大鼠神经元细胞HT22,建立氧糖剥夺/复氧损伤(OGD/R)神经细胞模型,随机分为Con组、OGD/R组、EGCG-L组、EGCG-M组、EGCG-H组、EGCG-H+pcDNA组、EGCG-H+pcDNA-MALAT1组。检测氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测MALAT1、miR-2115-3p的表达量;双荧光素酶报告实验验证MALAT1、miR-2115-3p的靶向关系;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达量。结果与Con组比较,OGD/R组SOD含量降低(P<0.05),MDA含量升高(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),Bax蛋白水平升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05),MALAT1表达水平升高(P<0.05),miR-2115-3p表达水平降低(P<0.05);与OGD/R组比较,EGCG-L组、EGCG-M组、EGCG-H组SOD含量升高(P<0.05),MDA含量降低(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),Bax蛋白水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05),MALAT1表达水平降低(P<0.05),miR-2115-3p表达水平升高(P<0.05),且EGCG-L组、EGCG-M组、EGCG-H组各指标比较差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实MALAT1可靶向结合miR-2115-3p;MALAT1过表达可减弱EGCG对OGD/R诱导的神经细胞氧化应激及凋亡的作用。结论EGCG可通过调控MALAT1/miR-2115-3p分子轴,从而抑制缺血再灌注损伤诱导的大鼠神经细胞凋亡及减轻其氧化损伤。     

银杏二萜内酯葡胺注射液通过抑制p38/p53通路保护氧糖剥夺SY5Y细胞的机制

目的探讨银杏二萜内酯葡胺注射液(diterpene ginkgolides meglumine injection,DGMI)对缺糖/缺氧损伤(oxygen-glucose deprivation,OGD)的人神经母细胞瘤细胞(SY5Y)保护的作用及可能的机制。方法 SY5Y细胞OGD损伤4 h后,予药物复氧1 h,然后测定细胞存活率(CCK-8法)、凋亡坏死比率、线粒体膜电位(ΔΨm);蛋白质免疫印迹检测细胞中p-p38、p-p53、Bcl-2、Bax和cleaved caspase-9、cleaved caspase-3蛋白量的变化。结果 DGMI能明显提高OGD损伤的SY5Y细胞的存活率,降低细胞凋亡比率,挽救下降的线粒体膜电位(ΔΨm)。下调p-p38、p-p53、Bax/Bcl-2、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3等蛋白量,抑制p38和p53活性,保护神经细胞。结论DGMI对OGD损伤的SY5Y细胞具有明显的保护作用,其保护机制可能与细胞内p38/p53/Bcl-2/caspase-9/caspase-3信号通路的抑制有关。     

藏药甘肃马先蒿有效成分提取工艺研究

目的:优化藏药甘肃马先蒿提取工艺并比较不同产地甘肃马先蒿中2种成分毛蕊花糖苷及异毛蕊花糖苷的含量差异。方法:以毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷及干膏得率为综合评价指标,通过单因素试验及正交试验对提取溶剂、溶剂量、提取时间及提取次数进行考察以优化提取工艺,并进行验证试验。比较甘肃、青海及四川3个产地的甘肃马先蒿中2种成分毛蕊花糖苷及异毛蕊花糖苷的含量。结果:最优提取工艺为加8倍量的50%乙醇提取3次,每次90 min。验证试验中毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷含量及干膏得率平均值分别为3.49%、1.26%、37.99%(RSD分别为1.28%、1.32%、1.97%,n=3)。以青海产甘肃马先蒿中毛蕊花糖苷及异毛蕊花糖苷含量相对较高。结论:优化的提取工艺合理、稳定、可行,不同产地的甘肃马先蒿中指标成分的含量存在一定的差异。本试验可为甘肃马先蒿提取物的开发利用、药材品质评价的深入研究提供依据。     

N-硬脂酰酪氨酸对缺氧缺糖诱导神经元凋亡的影响

目的 探讨N-硬脂酰酪氨酸(NsTyr)对缺氧缺糖(OGD)诱导大鼠皮层神经元损伤的影响及作用机制.方法 采用MTT法及Hoechst 33342染色检测NsTyr对OGD诱导神经元损伤及凋亡的影响:通过免疫印迹法探讨NsTyr抗OGD诱导神经元凋亡的分子机制,并使用丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的特异性阻断剂SB203580、SP600125和U0126考察其抗凋亡的信号转导通路.结果 NsTyr对OGD造成的皮层神经元损伤有剂量相关的保护作用,促进细胞存活,减少细胞凋亡;NsTyr通过上调Bcl-2表达、下调Bax表达,保持Bcl-2/Bax的平衡,实现抗OGD损伤的作用,该作用通过ERK和p38信号通路介导.结论 NsTyr可通过ERK和p38信号通路调节凋亡基因的表达,抑制OGD引起的神经元凋亡.     

羟基红花红色素A抑制氧化应激和细胞凋亡改善OGD/R诱导的HT22细胞损伤

目的探讨羟基红花红色素A(HSYA)对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤小鼠海马神经元(HT22)细胞的保护作用及其作用机制。方法体外培养HT22细胞,随机分为5组,分别为正常组,OGD/R组,HSYA低、中、高给药组(浓度分别为40、60、80 μmol·L-~1)。除正常组外,其余各组细胞在氧糖剥夺6 h后迅速复糖复氧12 h进行OGD/R造模并分组给药。采用CCK8法检测HT22细胞活力,倒置显微镜观察HT22细胞形态。试剂盒检测LDH、NO、GSH、MDA、SOD水平。采用Hoechst染色和流式细胞术检测HT22细胞凋亡情况,ELISA检测CytC释放情况,Western blot检测Bax、Bcl-2和cleaved-caspase3的蛋白表达情况,qRT-PCR检测Bax和Bcl-2的mRNA水平。结果与OGD/R组相比,HSYA低、中、高给药组细胞存活率显著升高(P<0.05,P<0.01),细胞形态显著改变,HT22细胞LDH、NO、MDA及细胞凋亡率显著降低,SOD和GSH水平升高(P<0.05,P<0.01),胞浆内CytC释放量显著降低(P<0.01),Bax的蛋白表达和mRNA水平显著降低,Bcl-2的蛋白表达和mRNA水平显著升高,cleaved-caspase3的蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论 HSYA通过抑制氧化应激和细胞凋亡改善OGD/R诱导的HT22细胞损伤。     

二氮嗪对氧糖剥夺后PC12细胞凋亡及对Bcl-2蛋白的影响

目的探讨二氮嗪对氧糖剥夺(OGD)PC12细胞凋亡的保护作用及其机制。方法体外培养PC12细胞株,以OGD、二氮嗪、5-羟葵酸(5-HD)处理,分为A组(正常对照组),B组(氧糖剥夺组),C组(氧糖剥夺+二氮嗪组),D组(氧糖剥夺+二氮嗪组+5-HD组),采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞分析仪检测凋亡率,应用免疫荧光染色和Western blot检测Bcl-2蛋白表达水平,观察二氮嗪对氧糖剥夺PC12细胞凋亡的保护作用。结果氧糖剥夺后B,C,D组PC12细胞凋亡细胞数增加,C组与B、D组比较差异均有显著性(P<0.01)。B,C,D组Bcl-2蛋白表达增加,C组达到高峰。C组与A、B、D组比较差异均有显著性(P<0.01)。结论二氮嗪能抑制氧糖剥夺PC12细胞凋亡,这一作用机制可能是增加Bcl-2表达来实现其保护作用的。     

4个黄芪异黄酮类化合物对PC12细胞分化的影响

目的探究毛蕊异黄酮、刺芒柄花素、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷对PC 12细胞分化的影响。方法培养PC 12细胞,与不同浓度的神经生长因子(NGF)、毛蕊异黄酮、刺芒柄花素、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷共处理5 d,1次/d,连续3次,观察PC 12细胞突起向外生长的情况。同时,用免疫荧光染色检测上述化合物对β微管蛋白(βⅢ-tubulin)表达的影响。结果与对照组相比,毛蕊异黄酮、刺芒柄花素、毛蕊异黄酮苷和芒柄花苷(0.01~10.00μmol/L)未能促进PC 12细胞突起向外生长和β微管蛋白的表达。结论毛蕊异黄酮、刺芒柄花素、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷不能促进PC 12细胞分化。