替莫唑胺和Bcl-2 siRNA对人胶质瘤U251细胞生长的影响

目的 探讨联合应用Bcl-2 siRNA和替莫唑胺(TMZ)能否有效提高TMZ对人胶质瘤U251细胞生长的抑制作用.方法 应用转染试剂LipofectaminTm2000将Bcl-2 siRNA转入U251细胞,同时加入TMZ联合培养.24 h后验证Bcl-2基因沉默效应,并检测U251细胞增殖、凋亡、侵袭和细胞线粒体膜电位变化.结果 Bcl-2 siRNA明显抑制U251细胞Bcl-2基因的表达;联合应用TMZ和Bcl-2 siRNA有效抑制人胶质瘤U251细胞生长,诱导凋亡,同时降低U251细胞线粒体膜电位(P＜0.05).结论 联合TMZ和Bcl-2 siRNA可能通过改变神经胶质瘤细胞线粒体膜电化水平,有效提高U251细胞对TMZ敏感性.     

靶向P75NTR的siRNA技术诱导U251胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的:利用靶向P75神经营养因子受体(P75NTR)基因的小干扰(siRNA)技术诱导胶质瘤凋亡.方法:利用脂质体介导P75NTR-siRNA质粒转染U251胶质瘤细胞系,RT-PCR方法检测P75NTR的mRNA表达以确定基因沉默效果,绘制细胞生长曲线,原位细胞凋亡实验检测细胞凋亡情况,Western blot方法检测稳定转染后第3天时P75NTR、促凋亡基因Caspase-3和凋亡抑制基因Bcl-2的蛋白表达.结果:转染P75NTR siRNA质粒后U251细胞P75NTR的mRNA表达水平显著下降,细胞增殖能力下降,凋亡细胞数量增加.与对照组和空载组比较,P75NTR与Bcl-2在RNAi组蛋白表达水平显著降低,Caspase-3则明显升高.结论:靶向P75NTR的siRNA技术可通过调控凋亡相关基因表达机制诱导胶质瘤细胞凋亡.     

siRNA抑制PTTG1表达对人脑胶质瘤细胞增殖、侵袭性的影响

目的构建针对人脑胶质瘤细胞系的高效沉默PTTG1的RNAi载体;探讨PTTG1 siRNA干扰质粒对人脑胶质瘤细胞系U373增殖、侵袭性的影响。方法设计三对PTTG1基因干扰序列,合成能够特异干扰PTTG1的siRNA,然后将其与p Genesil2载体连接,构建pGenesil2-PTTG1 siRNA干扰载体,在脂质体作用下将PTTG1 siRNA质粒转染至胶质瘤U373细胞后,用RT-PCR和Western blot方法检测PTTG1 mRNA及蛋白表达水平的变化,通过细胞增殖实验、划痕实验和Transwell小室实验检测PTTG1对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果在胶质瘤U373细胞转染3个不同的siRNA片段干扰PTTG1的表达,RTPCR检测结果显示,PTTG1 siRNA1干扰质粒对PTTG1表达的抑制作用最明显[(0.47±0.12)vs(1.00±0.15),P0.01]。转染PTTG1 siRNA质粒的胶质瘤细胞U373在48h和72h细胞增殖能力均显著低于对照组。细胞划痕实验显示干扰PTTG1可明显缩短U373细胞的迁移距离;Transwell小室结果显示干扰PTTG1后U373的穿膜细胞百分率明显下降[(58.00±8.72)%vs(36.3±7.76)%,P0.05]。结论 PTTG1 siRNA干扰质粒可明显抑制胶质瘤U373细胞PTTG1的表达,并可抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭及迁移能力。     

肿瘤蛋白 53靶基因 1靶向微小 RNA-33a对胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的 探讨肿瘤蛋白53靶基因1(TP53TG1)对胶质瘤细胞增殖、凋亡及迁移侵袭的影响和机制.方法 本研究起止时间为2019年1—6月,人正常神经胶质细胞(HA)和神经胶质瘤细胞U251购于上海斯信生物科技有限公司.实时定量PCR(qRT-PCR)检测HA和U251细胞中TP53TG1的表达水平.构建过表达TP53TG1的U251细胞株,噻唑蓝(MTT)法用于评估细胞增殖能力,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell法测定迁移和侵袭数,Western blotting检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白激酶抑制剂(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl相关x蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、E钙黏蛋白(E-cad?herin)表达水平.双荧光素酶报告基因实验和Western blotting验证TP53TG1和微小RNA-33a(miR-33a)的靶向关系.结果 与人正常神经胶质细胞HA比较,神经胶质瘤细胞U251中TP53TG1的表达水平[(1.03±0.10)比(0.28±0.03)]显著降低.过表达TP53TG1能够显著抑制U251细胞活力,下调Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白水平,减少细胞迁移数[(138±14.01)个比(72±7.26)个]和侵袭数[(126±12.54)个比(65±6.63)个],上调P21、Bax和E-cadherin蛋白表达,促进细胞凋亡[(8.16±0.86)％比(22.57±2.65)％].TP53TG1能够靶向负性调控miR-33a的表达.过表达miR-33a能够逆转miR-33a对U251细胞增殖、凋亡[(22.68±2.69)％比(11.36±1.20)％]、迁移[(70±7.05)个比(108±11.37)个]和侵袭[(70±7.05)个比(108±11.37)个]的影响.结论 TP53TG1通过靶向miR-33a抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡.     

RNAi沉默PRDX Ⅲ基因表达诱导U251胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨RNAi沉默PRDXⅢ基因表达诱导U251胶质瘤细胞凋亡。方法设计合成针对PRDXⅢ的siRNA,脂质体介导转染人U251多形胶质母细胞瘤细胞,RT-PCR法检测转染后24 h PRDXⅢmRNA的表达水平,Western-blotting检测转染后48 h PRDXⅢ蛋白的表达水平,筛选出有效的干扰序列;流式细胞仪、DNAladder、PI染色检测转染后48 hU251细胞的凋亡状况,MTT检测转染后48 h U251细胞的生长抑制率。结果 RT-PCR、Western Blotting检测显示空白对照组、空载体组和无关序列组PRDXⅢmRNA表达无明显变化,干扰序列1、3使PRDXⅢmRNA的表达明显降低。DNA ladder显示干扰组出现明显梯形电泳条带,空白对照组、空载体组和无关序列组细胞未见明显梯形电泳条带。PI染色结果显示空白对照组,空载体组和无关序列组细胞未见明显凋亡,而干扰组细胞核的染色质高度浓染,部分细胞核裂解为碎块,符合凋亡形态学的改变。FCM检测结果显示干扰组细胞凋亡率明显高于空白对照组、空载体组、无关序列组（P〈0.01）。MTT检测干扰组对U251细胞生长的抑制率为44.4%,明显减慢了细胞生长（P〈0.01）。结论 RNAi技术成功地抑制了U251细胞中PRDXⅢ基因的表达,并诱导U251细胞凋亡,表明PRDXⅢ基因与胶质瘤的凋亡有关,PRDXⅢ基因有可能成为胶质瘤基因治疗的靶基因。     

Experimental study on the expression of PRDXⅢ in human gliomas and cell apoptosis of U251 gliomas cells induced by RNAi silencing PRDXⅢ gene

目的 探讨RNAi沉默PRDXⅢ基因表达诱导U251胶质瘤细胞凋亡.方法 设计合成针对PRDXⅢ的siRNA,脂质体介导转染人U251多形胶质母细胞瘤细胞,RT-PCR法检测转染后24 h PRDXⅢmRNA的表达水平,Western-blotting检测转染后48 h PRDXⅢ蛋白的表达水平,筛选出有效的干扰序列;流式细胞仪、DNAladder、PI染色检测转染后48 hU251细胞的凋亡状况,MTT检测转染后48 h U251细胞的生长抑制率.结果 RT-PCR、Western Blotting检测显示空白对照组、空载体组和无关序列组PRDXⅢmRNA表达无明显变化,干扰序列1、3使PRDXⅢmRNA的表达明显降低.DNA ladder显示干扰组出现明显梯形电泳条带,空白对照组、空载体组和无关序列组细胞未见明显梯形电泳条带.PI染色结果显示空白对照组,空载体组和无关序列组细胞未见明显凋亡,而干扰组细胞核的染色质高度浓染,部分细胞核裂解为碎块,符合凋亡形态学的改变.FCM检测结果显示干扰组细胞凋亡率明显高于空白对照组、空载体组、无关序列组(P<0.01).MTT检测干扰组对U251细胞生长的抑制率为44.4%,明显减慢了细胞生长(P<0.01).结论 RNAi技术成功地抑制了U251细胞中PRDXⅢ基因的表达,并诱导U251细胞凋亡,表明PRDXⅢ基因与胶质瘤的凋亡有关,PRDXⅢ基因有可能成为胶质瘤基因治疗的靶基因.     

circ_0013958靶向miR-622对胶质瘤U251细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨circ_0013958对胶质瘤U251细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制.方法 选取2017年6月至2020年6月收治胶质瘤患者的脑组织标本23例,以23例内减压术获得的正常脑组织作为作对照,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circ_0013958和miR-622的表达水平.将胶质瘤细胞株U25...     

阿司匹林体外抑制U251细胞增殖及其机制研究

目的研究阿司匹林体外抑制U251胶质瘤细胞的作用及其机制。方法采用MTT法观察药物对人胶质瘤细胞U251的增殖抑制作用;采用流式细胞仪检测U251细胞周期的变化;FITC-AnnexinⅤ/PI双标记检测U251细胞的凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2的表达和Caspase-3的激活。结果阿司匹林可明显抑制人胶质瘤细胞U251的增殖,细胞阻滞在G2/M期;诱导细胞发生凋亡,下调凋亡相关蛋白Bcl-2的表达以及诱导Caspase-3的激活。结论阿司匹林在体外对胶质瘤细胞U251有明显的抑制作用,并可诱导其凋亡。     

miRNA-99b负调控mTOR抑制脑胶质瘤细胞的侵袭能力

目的研究miRNA-99b及mTOR在胶质瘤中的表达水平及其对脑胶质瘤侵袭能力的影响及机制。方法用real-time PCR法检测脑胶质瘤组织与对照脑组织中miRNA-99b及mTOR的表达。miRNA-99b模拟物与野生型或突变型mTOR 3'UTR重组载体共转染后,应用荧光素酶基因报告系统检测miRNA-99b是否与mTOR基因3'UTR结合。应用real-time PCR法和Western blot检测miRNA-99b模拟物转染U251细胞后,细胞中miRNA-99b、mTOR mRNA和mTOR蛋白的表达,Transwell法检测细胞的侵袭能力。mTOR质粒转染U251细胞后,检测细胞中miRNA-99b的表达及细胞的侵袭能力的变化。统计学分析miRNA-99b表达水平与胶质瘤及预后的相关性。结果脑胶质瘤组织中miRNA-99b表达明显低于对照脑组织,mTOR mRNA表达明显高于对照脑组织;miRNA-99b模拟物和野生型mTOR 3'UTR重组载体共转染的U251细胞的荧光强度明显降低。miRNA-99b模拟物转染后,U251细胞中miRNA-99b的表达水平上升,而mTOR蛋白及mRNA的表达水平下降,U251细胞及侵袭能力下降。改变mTOR表达后,U251细胞中miRNA-99b的表达水平无明显变化,升高mTOR表达能够恢复因miRNA-99b抑制的细胞侵袭能力。Kaplan-Meier生存分析及Log-rank检验显示,低表达miRNA-99b患者的总生存期明显低于高表达组。结论过表达miRNA-99b可能通过靶向调控mTOR抑制脑胶质瘤细胞的侵袭能力,miRNA-99b可作为脑胶质瘤的治疗靶点。     

MTERF3过表达对脑胶质瘤U251细胞线粒体基因表达及细胞增殖和迁移的影响

目的探讨MTERF3基因过表达对脑胶质瘤U251细胞线粒体基因表达及细胞增殖和迁移的影响。方法以U251细胞作为实验对象,构建MTERF3过表达的U251细胞稳定转染株。实验分为3组:空白对照组(无转染的野生型U251细胞)、阴性对照组(转染EGFP-Flag质粒的U251细胞)、实验组(转染MTERF3-Flag质粒的U251细胞)。采用半定量PCR和Western blot分别检测MTERF3过表达对U251细胞线粒体DNA拷贝量及线粒体编码蛋白的表达水平的影响;采用流式细胞术和XTT法分别检测MTERF3过表达对U251细胞周期及细胞增殖的影响;采用细胞划痕和Transwell小室迁移实验检测U251细胞迁移能力的变化。结果半定量PCR结果显示,与对照组比较,MTERF3过表达显著抑制U251细胞线粒体DNA的拷贝量(P<0.05);Western blot结果显示,与对照组比较,MTERF3过表达显著降低线粒体DNA编码ND1、ND6和CYB蛋白表达水平(P<0.05);XTT结果显示,与对照组比较,MTERF3过表达明显促进U251细胞的增殖(P<0.05);流式细胞术结果显示,与对照组比较,MTERF3过表达能促进U251细胞G1/S转换,未出现细胞周期阻滞和细胞凋亡。Transwell小室迁移实验结果显示,实验组在每个视野下迁移的细胞数[(435.00±42.26)个]显著多于空白对照组[(259.00±30.22)个]和阴性对照组[(252.00±27.58)个],组间差异极显著(P<0.01)。结论 MTERF3过表达对人脑胶质瘤U251细胞的线粒体DNA拷贝量和线粒体蛋白质表达有负调控作用,且上调U251细胞MTERF3的表达使细胞增殖和迁移能力显著提高,并且未出现细胞周期阻滞和细胞凋亡。     

H2S促进神经胶质瘤细胞增殖作用的机制探讨

目的为了明确硫化氢(H2S)是否能够促进人胶质瘤U251细胞的增长,探讨Survivin和Sirt1在U251细胞中是否有表达及H2S促进U251细胞增长机制。方法 CCK8(Cell Counting Kit-8)法测细胞活力,Western Blot检测U251细胞内Survivin和Sirt1表达。结果 100-400μmol/L的H2S呈浓度依赖性地促进了U251细胞的增长;100-400μmol/L的H2S处理U251细胞24 h后,细胞内Survivin和Sirt1呈H2S浓度依赖性地增加,与空白对照比较,差异有统计学意义(P<0.01);用100μmol/L Sirt1抑制剂,Sirtinol预处理U251细胞0.5 h后,在继续用200μmol/L H2S继续培养细胞4 h后,预处理组和单独的硫化氢组相比,细胞的活力显著下降,差异有统计学意义(P<0.001),但是单独Sirtinol组对细胞活力影响不大,说明H2S促进细胞增殖功能可能是通过促进Sirt1的表达来实现的。结论 H2S促进了U251细胞的增长,H2S促进了U251细胞内Survivin和Sirt1表达,Sirt1抑制剂抑制了H2S对细胞的促进增长作用。     

上调microRNA-34a抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭

目的 探讨microRNA-34a （miR-34a）在胶质瘤组织中的表达情况以及对人脑胶质瘤细胞系U251增殖及侵袭的影响。方法 选取川北医学院附属医院2013年3月至2017年3月胶质瘤组织标本30例和重症脑外伤需行手术者正常脑组织标本10例作为研究对象,采用荧光定量PCR法检测miR-34a在胶质瘤组织表达情况。体外实验,将人工合成的miR-34a模拟物miR-34a mimic转染至U251细胞系,采用荧光定量PCR、MMT、Transwell法检测miR-34a在U251细胞系中表达以及对U251细胞增殖和侵袭能力的影响。依据细胞转染情况,分为Control组（不转染任何基因）、Mock组（转染miRNA-neg序列）和miRNA-34a mimic组（转染miRNA-34a mimic序列）。结果 miRNA-34a在人脑胶质瘤组织中相对表达水平为（0.35±0.07）,低于正常人脑组织的（1.00±0.13）,差异有统计学意义（P<0.05）;转染后,荧光定量PCR结果显示,Control组、Mock组、miRNA-34a mimic组miRNA-34a相对表达水平分别为（1.00±0.08）、（0.98±0.11）和（6.19±0.34）,miRNA-34a mimic组与Control、Mock组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;MMT结果显示,在不同时间点,miRNA-34a mimic组U251细胞增殖抑制率高于Control组、Mock组,差异有统计学意义（P<0.05）;Transwell结果显示,Control组、Mock组、miRNA-34a mimic组侵袭细胞数分别为（90.53±5.84）个、（88.21±5.04）个和（27.46±2.76）个,miRNA-34a mimic组与Control、Mock组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-34a在胶质瘤组织中表达下调,上调miR-34a表达可抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭。     

Downregulation of MicroRNA‐320d predicts poor overall survival and promotes the growth and invasive abilities in glioma

Previous studies have demonstrated that miRNAs play an important role in tumor development and progression. The role of miR‐320d has been studied in several cancers except for glioma. The aim of the study was to investigate the expression levels, biological function, and mechanism of miR‐320d in glioma. The expression levels of miR‐320d were detected in glioma tissues and cell lines (U87 and U251) by RT‐qPCR. Cell proliferation, colony formation, apoptosis, cell cycle, and transwell assays were performed in glioma cell lines transfected with miR‐320d mimics or controls to evaluate the effects of miR‐320d in vitro. The expression levels of invasive‐related proteins were determined by Western blot analysis. Results showed that the expression of miR‐320d was significantly decreased in glioma tissues and cell lines. Overexpression of miR‐320d could significantly suppress cell growth, migration and invasion, and induced cell apoptosis as well as cell cycle at G0/G1 arrest in U87 and U251 cell lines. Additionally, expression levels of MMP‐2, MMP‐9, N‐cadherin, and integrin‐β1 reduced, while E‐cadherin increased in miR‐320d mimic group. Overall, this study is the first to demonstrate that miR‐320d may serve as an independent prognostic factor, indicating that miR‐320d is a biomarker for prognosis and therapy in glioma.     

TIM-3在人胶质瘤中的表达及其对人胶质瘤细胞U251凋亡与侵袭的作用研究

目的 探讨T细胞免疫球蛋白黏蛋白3（TIM-3）在人胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞U251凋亡与侵袭的影响。方法 收集2018年3月—2019年3月在我院进行手术切除的30例胶质瘤患者术后的瘤组织和瘤旁正常组织,免疫组化检测胶质瘤组织中TIM-3的表达情况。将胶质瘤U251细胞分为正常组、对照组、实验组：正常组细胞常规培养,不做任何处理;对照组和实验组细胞分别转染TIM-3-siRNA-NC和TIM-3-siRNA。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组细胞中TIM-3 mRNA的表达,四甲基偶氮唑盐（MTT）实验检测各组细胞的增殖活力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,Transwell小室检测各组细胞的侵袭能力。结果 TIM-3的表达主要定位在胞质中。TIM-3在Ⅰ级和Ⅱ级胶质瘤组织中的阳性表达率为（48.37±4.68）%,在Ⅲ级和Ⅳ级胶质瘤组织中的阳性表达率为（87.94±6.41）%,与正常组织中的阳性表达率［（12.34±4.92）%］相比,差异均有统计学意义（t=24.87, P<0.05）。与正常组细胞相比,实验组细胞中TIM-3的表达水平、细胞的增殖和侵袭能力均明显下降,凋亡率明显上升,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 TIM-3在胶质瘤中呈高表达,沉默其表达能明显抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭,并促进其凋亡。     

Bex2抑制神经胶质瘤细胞凋亡及其与JNK/MAPK通路关系的研究

目的研究Bex2对神经胶质瘤细胞凋亡的影响并探讨其作用机制,为胶质瘤的基因治疗提供理论和实验依据。方法 1利用前期构建pEGFP-N1-Bex2真核表达载体,脂质体转染法过表达Bex2后12、24、48、72 h收集U251神经胶质瘤细胞,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用免疫印迹法检测Bex2基因的表达及活化型caspase-3、p-JNK、p-c-Jun的变化。2收集临床神经胶质瘤手术标本,通过免疫组织化学检测Bex2、活化型caspase-3、p-JNK、p-c-Jun蛋白的表达,并与正常脑组织比较,分析它们之间的相关关系。结果 1流式细胞术检测结果显示,过表达Bex2后12、24、48、72 h各时间点细胞凋亡率明显低于空载体组(P<0.05),转染48 h组低于其他时间点组(P<0.05)。免疫印迹法检测表明,转染后48 h细胞的活化型caspase-3、p-JNK、p-c-Jun含量较空载体组和空白对照组降低(P<0.05)。2免疫组织化学结果表明,神经胶质瘤组织较正常脑组织中Bex2表达增高,活化型caspase-3、p-JNK、p-c-Jun蛋白低表达(P<0.05)。结论 Bex2在神经胶质瘤组织中高表达,并通过下调JNK/MAPK通路活性抑制胶质瘤细胞凋亡,进而促进肿瘤的发生和发展。     

过表达miRNA-495联合替莫唑胺对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响 #br#

目的探讨过表达微小RNA（miRNA）-495联合替莫唑胺（TMZ）对神经胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及其 作 用 机 制 。 方法 将 miRNA-495 类 似 物（miRNA-495 mimics）以 及 阴 性 对 照 序 列（miRNA-495 NC）应 用 LipofectamineTM 2000转染至神经胶质瘤U251、A172细胞中,并设空白对照组。采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测 转染后miRNA-495、高迁移率族核小体结合域5（HMGN5）mRNA的相对表达量;Western blot法检测HMGN5及基质金 属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白表达水平;CCK-8检测神经胶质瘤细胞的增殖能力。miRNA-495 mimics和TMZ单独或联 合作用于U251细胞后,应用CCK-8、流式细胞术检测神经胶质瘤细胞增殖及凋亡情况。 结果在神经胶质瘤U251、 A172 细胞中,与空白对照组和 miRNA-495 NC 组比较,miRNA-495 mimics 组 miR-495 相对表达量升高,HMGN5 mRNA相对表达量及HMGN5、MMP-9蛋白表达量均降低;且细胞增殖能力明显减弱（P＜0.05）。在神经胶质瘤U251 细胞中,与TMZ组和miRNA-495 mimics组比较,TMZ+miRNA-495 mimics组细胞增殖能力明显被抑制,细胞凋亡明 显增加。 结论过表达miRNA-495与化疗药物TMZ联合应用可协同抑制神经胶质瘤细胞增殖、促进细胞凋亡;其机 制可能是通过抑制HMGN5/MMP-9信号通路实现的。     

微小 RNA-520a-5p通过靶向调控鼠双微体基因影响胶质瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探讨微小 RNA-520a-5p(miR-520a-5p)在胶质瘤发生发展中的作用和机制。方法选取 2016年 5月至 2018年 11月在宝鸡高新人民医院治疗的胶质瘤病人肿瘤组织作 56例为研究对象。实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测 56例胶质瘤组织和 56例正常脑组织中 miR-520a-5p表达水平。体外培养胶质瘤 U251细胞,转染 miR模拟对照序列( miR-NC)、 miR-520a-5p9模拟物( miR-520a-5p mimics)至 U251细胞,分别采用四甲基噻唑蓝染色法( MTT)、流式细胞仪、 Transwell和蛋白质印迹法检测过表达 miR-520a-5p对 U251细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及细胞中鼠双微体基因( MDM2)、细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、 P21、B淋巴细胞瘤 -2相关蛋白( Bax)、 B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶 2(MMP-2)和 E-钙黏蛋白( E-cadherin)蛋白表达的影响。双萤光素酶报告基因实验验证 miR-520a-5p与 MDM2靶向关系,蛋白质印迹法检测转染 miR-520a-5p mimics、miR-520a-5p抑制剂( anti-miR-520a-5p)对 U251细胞中 MDM2蛋白表达的影响。共转染 miR-520a-5p mimics和 MDM2过表达载体( pcD. NA3.1-MDM2)至 U251细胞,上述相同方法观察过表达 MDM2能否逆转过表达 miR-520a-5p对 U251细胞增殖、迁移和侵袭及相关蛋白表达的影响。结果与正常脑组织相比,胶质瘤组织中 miR-520a-5p表达降低( P<0.05)。与转染 miR-NC的 U251细胞比较,转染 miR-520a-5p mimics的 U251细胞 24 h、48 h和 72 h的 OD值［(0.36±0.04)比( 0.50±0.05)、(0.49±0.05)比( 0.95±0.09)、(0.71±0.07)比( 1.36±0.13)］、迁移细胞数［(67±6.26)比( 144±13.38)］、侵袭细胞数［(59±5.47)比( 135±13.12)］均降低( P<0.05),凋亡率［( 21.17±2.06)%比( 7.82±0.77)%］升高( P<0.05)细胞中 cyclin D1、Bcl-2和 MMP-2的蛋白表达水平均降低( P<0.05)而 P21、Bax和 E-cadherin的蛋白表达水平均升高( P<0.05miR-520a-5p可与 MDM2的 3’UTR靶向结合,mimics的 U251细胞中 MDM2蛋白水平显著低于转染 miR-NC的细胞,而转染 anti-miR-520a-5p的 U251细胞中 MDM2的蛋白水平显著高于转染 anti-miR-NC的细胞。与共转染 miR-520a-5p mimics与 pcDNA3.1的 U251细胞比较,共转染 miR-520a-5p mim. ics与 pcDNA3.1-MDM2的 U251细胞 24 h、48 h和 72 h的 OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数均升高( P<0.05)凋亡率降低( P< 0.05)。,同时转染miR-520a-5p,细胞中 cyclin D1、Bcl-2和 MMP-2的蛋白表达水平均升高( P<0.05),而 P21、Bax和 E-cadherin的蛋白表达水平均降低( P<0.05)。结论 miR-520a-5p在胶质瘤组织中表达降低,过表达 miR-520a-5p可能通过靶向负调控 MDM2抑制胶质瘤 U251细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡。     

汉黄芩素对胶质瘤U251细胞Survivin mRNA及Caspase-3mRNA表达的影响研究

目的 探讨汉黄芩素对胶质瘤U251细胞Survivin mRNA及Caspase-3 mRNA表达的影响.方法 192株人胶质瘤U251细胞株分别用汉黄芩素（96株）、替莫唑胺（TMZ）（48株）处理,留取48株作为空白对照组,半定量RT-PCR法检测Survivin mRNA与Caspase-3 mRNA表达强度,并在3组之间进行对比分析.结果 空白对照组Survivin mRNA表达强度为（0.773±0.176） μM,显著高于汉黄芩素组的（0.382±0.087） μM及TMZ组的（0.408±0.092） μM （P ＜ 0.05）;Caspase-3 mRNA表达强度为（0.097±0.043） μM,显著低于汉黄芩素组的（0.454±0.213） μM及TMZ组的（0.432±0.187） μM（P ＜ 0.05）,汉黄芩组与TMZ组之间比较差异无统计学意义（P ＞ 0.05）.结论 汉黄芩素可通过下调Survivin mRNA的表达并上调Caspase-3 mRNA的表达起到有效诱导人胶质瘤U251细胞凋亡的作用.