23价肺炎球菌多糖疫苗的规模化生产及质量控制

目的:扩大肺炎球菌发酵的培养规模,增加肺炎球菌多糖的收量,降低成品疫苗内毒素的含量,以提高肺炎球菌多糖疫苗的产能和质量;制备和标定企业用肺炎多糖参考品,及定性定量检测23价肺炎球菌多糖疫苗用的血清。方法:调整肺炎球菌培养参数及培养过程中糖、碱的补料方式、补料时间,放大肺炎球菌的发酵培养规模;在分段乙醇沉淀过程中添加速度和温度控制、调整乙醇浓度,在酚提过程中调控各种技术参数等,提高精制多糖的收量;控制加入生产过程中主要原辅材料的内毒素含量,并规范操作人员的行为习惯,降低肺炎球菌多糖疫苗成品的内毒素含量。标定自制多糖参考品以及用多糖免疫兔、鼠制备血清参考品。结果:肺炎球菌的发酵体积从500 L提高到1 000 L;精制多糖平均收量提高15%以上;内毒素平均含量控制在20 EU.mL-1以内;制备出23种型别的符合23价肺炎球菌多糖疫苗质量标准的多糖;获得3个型单抗和6个型的多抗。结论:23价肺炎球菌多糖疫苗的产量增加,疫苗质量得到了提升,自主化标准参考品研究进展迅速。     

菌种筛选对1型肺炎链球菌产糖量的影响

 目的  用无动物源性培养基筛选高产糖1型肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae serotype 1,PN1）。方法  配制无动物源性培养基,并用此培养基进行高产糖PN1单菌落筛选。比较筛选前后PN1在发酵培养中的产糖量。 结果   无动物源性培养基筛选前后PN1在发酵培养中的产糖量分别为420和960 mg/L,筛选后PN1的产糖量明显高于筛选前PN1。 结论   以无动物源性培养基筛选PN1可使PN1的产糖量明显提高。     

植物蛋白胨在肺炎链球菌培养基中的应用

 目的  用植物蛋白胨替代目前肺炎链球菌（pneumococcus,Pn）培养基中的动物蛋白胨,以保证生物制品的安全性。方法   比较大豆蛋白胨与胰蛋白胨的各种成分含量。分别以大豆蛋白胨和胰蛋白胨制备培养基进行9个型Pn大罐培养,比较两种培养基培养对Pn生长和粗制多糖含量的影响。 结果   大豆蛋白胨的总氮含量、氨氮含量和消化系数与胰蛋白胨相近,但大豆蛋白胨的总碳水化合物含量（336.20 μg/g）明显高于胰蛋白胨的总碳水化合物含量（10.56 μg/g）。植物源性培养基培养获得的各型Pn浓度（t＝3.851,P<0.05）和粗制多糖含量（t=3.853,P<0.05）明显高于动物源性培养基培养。 结论   植物蛋白胨可替代动物蛋白胨来制备Pn培养基。     

单克隆抗体在肺炎球菌多糖疫苗多糖含量检测中的应用

 目的  考察能否用单克隆抗体（单抗）替代多克隆抗体（多抗）血清检测23价肺炎球菌多糖疫苗中各型多糖的含量。方法   使用8个血清型（2、3、4、6B、9N、17F、18C、23F）的小鼠抗肺炎球菌荚膜多糖单抗和丹麦国家血清研究所（Statens Serum Institut, SSI）的兔血清多抗,以速率散射免疫浊度法测定23价肺炎球菌多糖疫苗中相应血清型的多糖含量。通过重复性和专属性试验确定单抗的可用性。采用t 检验对单抗和多抗测定结果进行比较。结果   各型单抗与多糖标准品反应标准曲线的相关系数均>0.985 0。用单抗重复检测疫苗多糖3次,质量浓度为40.8～62.1 μg/ml,3次检测结果变异系数均<8.00%。各型多糖回收率为81.6%～124.2%。分别用8个血清型单抗检测其余各型多糖含量,结果均低于或接近于检测下限。单抗与SSI多抗血清的检测结果差异均无统计学意义,t 值为0.210 3～1.926 0,P 值均>0.05。结论   单抗检测重复性好、特异性高,与多抗血清检测结果相仿,因此,单抗可以替代SSI多抗血清用于测定23价肺炎球菌多糖疫苗中的多糖含量。     

以核酸作为青霉素发酵参数的探讨

抗生素发酵生产的提高及其过程的连续化、自动化必须以发酵动力学作为理论根据,而菌体(干重)浓度是发酵动力学的重要参数。在抗生素发酵中,由于复合培养基中往往含有固体物质,菌体干重难以测准,无法了解发酵过程中实际的菌体浓度,妨碍了发酵动力学在抗生素发酵生产中的应用,不利于发酵生产的提高和发展。这是一个长期存在面迄今仍未完全获得解决的问题。 近年来,Aiba,S.等在研究大环内酯类抗生素分批发酵动力学的过程中,通过测定复合培养基发酵中的菌体核酸浓度,再用从合成培养基发酵测得的菌体核酸浓度与菌体(干重)浓度的比值,将前者换算为菌体(干重)浓度,以解决复合培养基发酵中菌体(干重)浓度的测定问题。Martin,J.F.等在多烯类抗生素分批发酵动力学研究中也指出:在营养期,随着菌体生长DNA急剧增加;在生产期,菌体(干重)增加而DNA维持     

23价肺炎球菌多糖疫苗定量检定质量趋势分析

目的:统计分析2006-2011年生产的140批23价肺炎球菌多糖疫苗的5项定量检定指标,为疫苗的质量评价和质量监督提供依据。方法:对2006-2011年生产的140批23价肺炎球菌多糖疫苗的多糖含量、苯酚含量、氯化钠含量、pH值、细菌内毒素检查等5项指标的检定结果进行统计分析;对各单型多糖的含量进行移动标准偏差分析;对苯酚含量、氯化钠含量、pH值测定、细菌内毒素检查指标进行移动平均值总体趋势分析。结果:6年来,23价肺炎球菌多糖疫苗的多糖含量批间差异逐渐缩小;苯酚含量、氯化钠含量、细菌内毒素检查均值逐渐下降并趋于稳定;pH值一直较为稳定。结论:2006-2011年生产的23价肺炎球菌多糖疫苗质量逐步提高并保持稳定。     

23价肺炎球菌多糖疫苗研究进展

肺炎球菌是导致成人和儿童罹患肺炎疾病住院甚至死亡的重要原因。肺炎球菌的91个血清型中有20种血清型与各年龄组超过85%的侵袭性肺炎球菌感染有关。根据23种引起85%～90%的引起肺炎球菌感染疾病的血清型研制而成的23价肺炎球菌多糖疫苗,具有很好的安全性,成人和>2岁儿童接种后会产生可靠的免疫力,在人群中保护率达50%～80%,具有较好的成本效益比,是儿童和成人预防肺炎球菌感染的有效措施,推荐用于60岁以上老年人和2岁以上体弱儿童和慢性疾病患者。本文主要对23价肺炎球菌多糖疫苗的安全性、免疫反应、保护率及成本效益、对特殊健康状况人群的保护效果和免疫策略作一综述。     

23价肺炎球菌多糖疫苗预防老年人肺炎80例

目的探讨23价肺炎球菌多糖疫苗预防老年人肺炎的临床疗效。方法对我院2011年2月至2012年1月收治的老年肺炎患者临床治疗病例进行抽样,将80例老年肺炎患者病例按照抽签法随机分为对照组与治疗组,每组40例。对照组采用常规抗感染治疗,治疗组患者接种23价肺炎球菌多糖疫苗治疗。观察两组患者疗效。结果两组老年肺炎患者经过治疗之后,对照组患者发病26例,复病率为65.00%;治疗组发病14例,复发率为35.00%。两组老年肺炎患者临床治疗效果具有显著差异性,具备统计学意义(P<0.05)。结论老年肺炎患者接种23价肺炎球菌多糖疫苗治疗的临床疗效明显常规抗感染治疗的临床疗效,明显控制了患者肺炎发作频率与持续时间,显著的提升了患者的生活质量,值得进行临床推广应用。     

23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗的研制

目的 研制23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗.方法 大罐培养1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F、和33F型肺炎链球菌并进行各型荚膜多糖的纯化,制备23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗.结果 经检定各型精制多糖主要质量指标均符合<欧洲药典>(2005年版)要求.结论 已建立起成熟的细菌培养和多糖纯化工艺.     

23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗的研制

目的 研制23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗.方法 大罐培养1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F、和33F型肺炎链球菌并进行各型荚膜多糖的纯化,制备23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗.结果 经检定各型精制多糖主要质量指标均符合<欧洲药典>(2005年版)要求.结论 已建立起成熟的细菌培养和多糖纯化工艺.     

23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗的研制

目的  研制23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗。方法  大罐培养1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F、和33F型肺炎链球菌并进行各型荚膜多糖的纯化,制备23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗。 结果  经检定各型精制多糖主要质量指标均符合《欧洲药典》（2005 年版）要求。 结论  已建立起成熟的细菌培养和多糖纯化工艺。     

竞争ELISA法测定19A型肺炎链球菌发酵物中的多糖含量

 目的  建立检测19A型肺炎链球菌荚膜多糖的竞争ELISA方法,检测细菌发酵过程中多糖的表达量。方法   以19A型肺炎链球菌多糖为包被物,待测多糖为竞争物,建立间接竞争ELISA方法,并验证该方法的准确性和精密度。用建立的方法检测不同培养条件下发酵物中的多糖表达量。 结果   最佳多糖包被质量浓度为10 mg/L,多糖抗血清稀释度为1：4×104。当检测范围为39.06~5 000.00 μg/L时,决定系数为0.995。批内和批间相对标准差分别为5.08%~9.58%和5.28%~12.93%。培养物样品加标回收率为95.84%~110.07%。两种不同培养条件下培养物中的多糖表达量分别为312.17 mg/L和1 056.42 mg/L。 结论  新建的方法能用于19A型肺炎链球菌发酵物中多糖表达量的检测,对于优化培养条件及掌握培养物收获时间具有指导意义。     

Pneumococcal vaccines: mechanism of action, impact on epidemiology and adaption of the species

Pneumococcal infections elicited by Streptococcus pneumoniae (pneumococcus) (pneumonia, otitis media, sinusitis, meningitis) are frequently occurring diseases that are associated with considerable morbidity and mortality even in developed countries. Pneumococci colonise the nasopharynx of up to 50% of children, and up to 5% of adults are pneumococcal carriers. Two pneumococcal vaccines are currently in clinical use. One of them contains 23 capsular polysaccharides of the as yet known 91 different pneumococcal serotypes. Because polysaccharide vaccines primarily induce a B-cell-dependent immune response, this type of vaccine prevents bacteraemia but does not efficiently protect the host against pneumococcal infection. In 2000, a vaccination programme was launched in the USA making use of a novel pneumococcal conjugate vaccine containing capsular polysaccharides derived from the seven most frequent pneumococcal serotypes causing pneumococcal disease in children <2 years of age. Conjugation of capsular polysaccharides with a highly immunogenic protein, i.e. a non-toxic diphtheria toxoid, induces a B- and T-cell response resulting in mucosal immunity and thus effectively protects against vaccine serotypes that induce invasive pneumococcal disease, thereby at the same time reducing vaccine serotype carrier rates. Pronounced herd immunity resulted in a decrease in invasive pneumococcal diseases in vaccinees and non-vaccinees as well as reduced antibiotic resistance rates. However, recent studies report that serotypes eradicated by the vaccine are being replaced by non-vaccine pneumococcal serotypes. This so-called 'replacement' might soon threaten the success of vaccine use.     

B群链球菌荚膜多糖抗原的分离纯化工艺研究

目的为提高荚膜多糖抗原得率,降低荚膜多糖中残余蛋白质含量和核酸含量,提高荚膜多糖抗原纯度,优化B群链球菌荚膜多糖的提取纯化工艺条件。方法研究pH值,沉淀核酸和荚膜多糖的乙醇浓度,乙醇沉淀多糖所需的温度和时间;比较蛋白酶K法、Sevag法和冷酚抽提法去除荚膜多糖中杂蛋白质的效果。结果建立起25%乙醇沉淀去核酸,冷酚抽提法去蛋白质分离纯化荚膜多糖,55%乙醇沉淀多糖的方法。3批GBSⅢ发酵液中获得的荚膜多糖的唾液酸含量为12.4%~14.8%;分配系数(Kav)≤0.5的多糖回收率达90%以上;荚膜多糖得率为0.021~0.027 g/L,抗原纯度较高。结论从发酵液中提取纯化荚膜多糖抗原的工艺是可行有效的。     

14型肺炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合物中游离多糖的测定方法

目的:建立一种简单有效的测定肺炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合物中游离多糖的方法。方法:根据脱氧胆酸(DOC)在酸性条件下可快速将蛋白质沉淀的原理,采用不同pH值的1%DOC溶液分别对14型肺炎球菌荚膜多糖(Ps14)、破伤风类毒素(TT)及Ps14-TT结合物进行处理,观察不同pH值1%DOC溶液对它们的影响,来确定最佳反应pH值。随后采用精密度试验和准确度试验对该方法进行验证。结果:Ps14-TT结合物经1%DOC处理后,在酸性条件下(1 mol.L-1HCl),结合物及蛋白质被完全沉淀,而未结合的Ps14存在于上清液中,采用蒽酮法测定结合物当中的游离多糖含量。结论:该方法重复性,稳定性,精密度,准确度均达到检测要求,适用于检测Ps14-TT结合物中游离多糖的测定。