己烯雌酚对人肝微粒体内CYP3A4和CYP2C9酶的抑制作用

目的:体外实验考察己烯雌酚(DES)对细胞色素P450 3A4(CYP3A4)和细胞色素P450 2C9(CYP2C9)活性的抑制作用,以评佑DES通过抑制这两个重要的细胞色素P450(CYP)亚型而引发药物-药物相互作用的可能性.方法:混合人肝微粒体与不同浓度的DES(或阳性抑制剂),CYP3A4或CYP2C9的探针...     

卡瓦胡椒对c-DNA已表达的细胞色素P450酶及低温贮存的人肝细胞的影响

有研究显示卡瓦胡椒Piper methysticum Forster f．中的几种化合物对P450酶显示强抑制作用,并可能通过其活性代谢物的生成产生致死性肝毒性。作者研究了该植物根乙醇提取物及3种卡瓦内酯类成分醉人素（methysticin）、去甲氧基麻醉椒素（desmethoxyyangonin）和麻醉椒素（yangonin）体外对在杆状病毒／昆虫细胞系（重组CYPs）和低温保存的人肝细胞中已表达的P450酶活性的抑制作用。     

人参属植物Panax vietnamensis防止CCl_4引起的小鼠肝毒性而不影响CYP2E1基因的表达

体内、外实验曾证实,人参、三七和竹节参根的皂苷可防止CCl_4引起的肝毒性,这种肝保护活性主要与其抑制细胞色素P450,特别是CYP2E1的催化活性有关。P.vietna-mensis Ha et Grush.是1973年在越南中部发现的一新的人参属植物,在越南民间用于     

RNA干扰抑制CYP3A4基因表达的实验研究

目的 研究质粒表达型短发夹RNA（small hairpin RNA，shRNA）对CHL-3A4转基因细胞的细胞色素P450 3A4（cytochrome P450 3A4，CYP3A4）基因表达的影响。方法设计并构建3条shRNA真核表达载体（CYP3A4Ⅰ、CYP3A4Ⅱ、CYP3A4Ⅲ）．脂质体转染CHL-3A4转基因细胞。转染48h后．TR-PCR和Western Blotting分别观察3条shRNA对CYP3A4mRNA和蛋白表达的影响；噻唑蓝（MTT）观察shRNA抑制环磷酰胺对CHL-3A4转基因细胞毒性作用。结果CYP3A4Ⅲ表达载体的shRNA分别能抑制CHL-3A4细胞的CYP3A4mRNA表达（70％）及蛋白表达（75％），抑制环磷酰胺对CHL-3A4细胞（75％）细胞毒作用。结论RNA干扰能显著抑制CYP3A4基因的表达，RNA干扰技术为肝细胞色素P450的研究提供了新的方法。     

CYP3A4高表达细胞模型及其应用于药物代谢研究进展

细胞色素P450酶3A4(cytochrome P450 3A4,CYP3A4)属于细胞色素P450酶家族,参与多种化合物代谢及相互作用,是药物(尤其是口服药物)筛选和代谢研究的重要对象。该文按年代顺序对国外文献中CYP3A4高表达细胞模型的建立及在药物代谢中的应用进行综述,旨在将这一有价值的模型引入到新药研究中。     

植物成分与细胞色素P450相互作用的研究进展

细胞色素P450（CYP450）是体内参与药物代谢的重要酶系,其活性在受到诱导或抑制后将干扰药物的作用。植物成分普遍存在于食物与药物中,与CYP450的相互作用将产生广泛影响。总结近年来植物成分与细胞色素P450的7个亚型CYP1A2、CYP2A6、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4相互作用的研究结果,为临床上合理用药提供参考。     

植物成分与细胞色素P450相互作用的研究进展

细胞色素P450（CYP450）是体内参与药物代谢的重要酶系,其活性在受到诱导或抑制后将干扰药物的作用。植物成分普遍存在于食物与药物中,与CYP450的相互作用将产生广泛影响。总结近年来植物成分与细胞色素P450的7个亚型CYP1A2、CYP2A6、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4相互作用的研究结果,为临床上合理用药提供参考。     

对乙酰氨基酚SD大鼠毒代动力学研究及P450的影响

<正>药物性肝损伤(drug induced liver injury,DILI)对患者的健康具有重要影响,DILI会影响药物在临床的使用,甚至药物撤市。对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)是临床常用药物,其肝毒性已有大量的报道[1-3],APAP常用剂量小于2g·d-1,若大于4 g·d-1,可致肝损害,大于10 g·d-1可致死亡。因此,美国食品药品管理局(FDA)要求生产厂家修改药品说明书,标明过量应用APAP可导致肝脏毒性反应。肝细胞色素P450在药物代谢中起着重要的作用。细胞色素酶P450广泛分布于哺乳动物的组织器官中,其中,肝脏和肠管含量最高[4]。约有20种细胞色素酶P450参与药物的代谢,如果代谢某种药物的酶缺乏或受抑制时,可表现为该药物的血药浓度升高,半衰期延长,导致毒性反应增加[5]。     

黄芩苷对小鼠肝细胞色素P450的选择性诱导

目的　观察黄芩苷对小鼠肝细胞色素P450及其亚家族的影响。方法　用紫外分光光度法分别测定小鼠肝微粒体细胞色素P450与b5含量及氨基比林N-脱甲基酶(ADM)、7-乙氧基香豆素O-脱乙基酶(ECD)、苯并芘羟化酶(AHH)活性。用蛋白印迹杂交技术鉴定细胞色素P450同功酶。结果　黄芩苷可使小鼠肝微粒体细胞色素P450含量显著增加,并使ADM,ECD及AHH 3种酶活力显著增强。对6种P450同功酶的鉴定结果显示,黄芩苷可选择性诱导1A1,2B1及2C11 3种同功酶,对细胞色素b5含量及3A2,2D1和2E1 3种同功酶无诱导作用。结论　黄芩苷对小鼠肝细胞色素P450有选择性诱导作用。     

阿魏酸钠对异烟肼和利福平肝损害小鼠的保护作用

目的：观察阿魏酸钠对异烟肼(INH)和利福平(RFP)肝毒性的保护作用。方法：分别测定血清谷丙转氨酶(ALT)的活性，肝匀浆中谷胱甘肽(GSH)及脂质过氧化物丙二醛(MDA)的含量，肝微粒体中细胞色素P450及其亚型2E1的活性。结果：阿魏酸钠可对抗INH和RFP合用引起的肝指数、血清ALT水平、肝匀浆中的MDA含量，以及细胞色素P450与亚型P450 2E1活性的升高，增加肝匀浆中GSH含量。病理学检查，阿魏酸钠明显减轻肝细胞的变性和坏死。结论：阿魏酸钠时INH和RFP肝毒性的保护作用与保护肝细胞膜、抑制脂质过氧化反应、清除自由基、降低RFP诱导的细胞色素P450酶系统有关。     

吡喹酮在大环内酯类抗生素和糖皮质激素诱导的大鼠肝微粒体中的代谢

我们的结果表明，只有经细胞色素P－450ⅢA1同功酶特异的诱导剂（红霉素和地塞米松）处置过的大鼠肝微粒体能显著地代谢吡喹酮（PQT），高铁氧化钾能破坏细胞色素P－450Fe(Ⅱ）－代谢物的复合物，使细胞色素P－450ⅢA1同功酶的活性恢复。因此，当微粒体和PQT的温孵体系中加入高铁氰化钾时，PQT在经多剂红霉素处置后的微粒体中的代谢速率进一步增加，而乙酰螺旋霉素诱导的细胞色素P－450并不形成复合物，因此，高铁氰化钾不影响PQT在经乙酰螺旋霉素处置后的微粒体中的代谢。三乙酰竹桃霉素作为细胞色素P－450ⅢA1的特异抑制剂，能抑制PQT在地塞米松处置过的肝微粒体内的代谢速率53％，以上结果表明，大鼠肝细胞色素P－450ⅢA1同功酶参与PQT在大鼠肝微粒体内的代谢。     

TM208在大鼠肝微粒体中代谢产物与细胞色素P450亚型代谢酶鉴别研究

在大鼠肝微粒体的体外代谢中研究作用于TM208的细胞色素P450亚型代谢酶。以不含细胞色素P450化学抑制剂的样品为对照，研究不同细胞色素P450亚型选择性化学抑制剂对TM208代谢转化率的影响。CYP2D和CYP2B的选择性抑制剂对TM208的代谢表现出浓度依赖性较强抑制作用，CYP1A的选择性抑制剂对TM208的代谢表现出一定抑制作用。CYP3A的选择性抑制剂对TM208的代谢没有表现出明显的抑制作用。TM208在人鼠肝微粒体体外代谢中主要通过CYP2D和CYP2B两种细胞色素P450亚型代谢酶参与代谢。     

细胞色素P450 CYP4A的组织和细胞表达特异性

目的确定细胞色素P450 CYP4A在组织和细胞水平表达是否具有特异性。方法采用Western印迹法分析细胞色素P450 CYP4A蛋白在培养的牛肺动脉内皮细胞、平滑肌细胞及牛肾动脉内皮细胞的表达;采用原位杂交法检测细胞色素P450 CYP4A mRNA在大鼠肺支气管内皮和血管内皮细胞的表达;以14C标记的花生四烯酸(AA)作为反应底物,用荧光高效液相色谱法(HPLC)通过检测牛肺动脉内皮细胞催化外源性AA生成20-羟基廿碳四烯酸(20-HETE)的反应,确定肺动脉内皮细胞是否存在细胞色素P450 CYP4A;将肺动脉内皮细胞破碎并用乙酸乙酯萃取,用荧光物质标记萃取物,用荧光HPLC检测内源性20-HETE,从代谢产物水平确定细胞色素P450 CYP4A的功能蛋白质表达。结果①Western印迹法分析结果表明,细胞色素P450 CYP4A蛋白在牛肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞中均有表达,在肺动脉内皮细胞中的表达明显高于平滑肌细胞(积分吸光度值分别为10182±279,5249±167);在牛肾动脉内皮细胞中也有表达,但明显低于肺动脉内皮细胞的表达(积分吸光度值分别为12173±171,17863±207)。②原位杂交结果显示,细胞色素P450 CYP4A mRNA可在大鼠肺支气管内皮细胞和大鼠肺血管内皮均有表达。③用HPLC在牛肺动脉内皮细胞中检测到20-HETE,表明细胞色素P450 CYP4A在肺动脉内皮细胞存在。结论细胞色素P450 CYP4A有其特定的组织和细胞分布,在牛和大鼠肺脏动脉内皮细胞有高表达。     

地非三唑对大鼠肝细胞细胞色素P450 CYP1A1/2的诱导作用

目的试从mRNA表达水平阐明地非三唑对鼠肝微粒体中细胞色素P450 CYP1A1/2的诱导机制。方法给SD大鼠腹腔注射地非三唑,采用Tr-izol法提取大鼠肝脏RNA,用RT-PCR测定经地非三唑处理1,2及4d的鼠肝中细胞色素P450 CYP1A1,CYP1A2 mRNA的表达水平。结果地非三唑处理不同时间的鼠肝细胞中细胞色素P450CYP1A1,CYP1A2 mRNA的表达水平比空白对照组明显增加,空白对照组CYP1A1吸光度比值为0.270±0.040,诱导1,2及4d的吸光度比值分别为0.343±0.055,0.417±0.045及0.603±0.083;空白对照组的CYP1A2吸光度比值为0.613±0.189,而诱导1,2及4d的吸光度比值分别为1.510±0.226,3.057±0.518及4.120±0.458。随着诱导时间的增加,细胞色素P450 CYP1A1及CYP1A2 mRNA的表达也逐步增加,诱导时间与表达水平之间存在一定的线性关系,相关系数分别为0.9984和0.9563。结论地非三唑对细胞色素P450 CYP1A1/2 mRNA表达具有诱导作用。     

丙戊酸钠毒性代谢产物2-丙基-4-戊烯酸研究进展

丙戊酸钠为常用广普抗癫痫药物,在临床上广泛应用于治疗神经性疾病,但是其可引起严重的肝毒性。尤其2岁以下儿童发生致死性肝毒性的风险显著增加,严重时甚至发生致死性、急性肝坏死。2-丙基-4-戊烯酸(2-propyl-4-pentanoic acid, 4-ene-VPA)为丙戊酸在体内经细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)代谢产生的代谢产物,研究证实其和丙戊酸导致的严重肝毒性有着密切的关系。本文就丙戊酸代谢产物4-ene-VPA近年的研究进展做一综述,为临床安全用药提供参考依据。     

细胞色素P450 3A5基因多态性及其对药物代谢影响的研究进展

细胞色素P450 3A5是细胞色素P450亚家族CYP3A的成员之一,对CYP3A底物的代谢清除率有明显的作用,与CYIY3A4等共同或独立催化或影响药物代谢,具有种族差异的遗传多态性.研究CYP3A5多态性及其对药物代谢的影响,对于临床上个体化用药具有积极的意义.     

地非三唑对大鼠肝细胞细胞色素P450 CYP1A1/2的诱导作用

目的 试从mRNA表达水平阐明地非三唑对鼠肝微粒体中细胞色素P450 CYP1A1/2的诱导机制。方法 给SD大鼠腹腔注射地非三唑，采用Trizol法提取大鼠肝脏RNA,用RT-PCR测定经地非三唑处理1, 2及4 d的鼠肝中细胞色素P450 CYP1A1, CYP1A2 mRNA的表达水平。结果 地非三唑处理不同时间的鼠肝细胞中细胞色素P450 CYP1A1, CYP1A2 mRNA的表达水平比空白对照组明显增加，空白对照组CYP1A1吸光度比值为0.270±0.040, 诱导1, 2及4 d的吸光度比值分别为0.343±0.055, 0.417±0.045及0.603±0.083；空白对照组的CYP1A2吸光度比值为0.613±0.189, 而诱导1，2及4 d的吸光度比值分别为1.510±0.226, 3.057±0.518及4.120±0.458。随着诱导时间的增加，细胞色素P450 CYP1A1及CYP1A2 mRNA的表达也逐步增加，诱导时间与表达水平之间存在一定的线性关系,相关系数分别为0.9984和0.9563。结论 地非三唑对细胞色素P450 CYP1A1/2 mRNA表达具有诱导作用。     

细胞色素P450酶系对喹乙醇诱导的肾细胞凋亡的影响

目的采用体外细胞培养系统,研究肝脏微粒体细胞色素P450同工酶对喹乙醇(OLA)毒性的影响,筛选和确定影响喹乙醇毒性的主要细胞色素P450同工酶,探索CYP450酶系选择性介导OLA-ROS-细胞凋亡途径。方法(1)以体外培养的人类肾小管上皮细胞(HK-2)作为检测OLA致肾小管毒性的细胞模型,以脏微粒体混合酶系(S9)加入到HK-2细胞培养中模拟体内代谢环境,将CYP450同工酶(CYP2D6、NADPH:P450还原酶、CYP2A、CYP3A、CYP2C、CYP2E1和CYP1A1/CYP1A2)的化学抑制剂分别加入培养体系中,造成不同P450同工酶活性抑制状况,通过细胞增殖抑制率(MTT)试验来检测OLA单独染毒或OLA与抑制剂联合染毒情况下的细胞毒性。(2)通过流式细胞仪DCF法检测各CYP450同工酶抑制剂对OLA所致HK-2细胞ROS产生情况的影响,筛选HK-2细胞内影响OLA作用的主要CYP450同工酶,推测其代谢路径。结果 (1)MTT检测发现,OLA+S9+α-萘黄酮组与OLA+S9组之间以及OLA+4-甲基吡唑+S9组与OLA+S9组之间细胞活性差异有统计学意义(P0.05),表明通过抑制CYP4501A酶以及CPY2E1活性可以使OLA的细胞毒性减轻。(2)OLA能够呈剂量依赖性的诱发细胞内ROS含量升高,且加入CYP1A抑制剂以及CPY2E1抑制剂后,可显著减少HK-2细胞ROS的产生量。结论 OLA通过CYP1A和CYP2E1的代谢诱导HK-2细胞生成ROS,进而可能诱发HK-2细胞的凋亡产生细胞毒性和肾毒性。     

细胞色素P450酶系与药物代谢的相互作用

药物在体内代谢,不论是哪一种方式,都有酶的参与.与药物代谢关系最大的是细胞色素P450酶系,它主要存在于人体肝脏的微粒体中,故也称为肝微粒体酶,细胞色素酶是一种以铁卟啉为辅基的蛋白质(cytochrome protein),属于b族细胞色素,因还原型P450与一氧化碳的复合物P450-CO在450 nm处有一强吸收峰,故而得名细胞色素P450[1].该酶有许多同工酶,故称细胞色素P450酶系,简称为CYP450S.     

HPLC测定大鼠肝微粒体P450活性方法学研究进展

近年来，越来越多的研究者意识到使用肝微粒体进行细胞色素P450活性测定的重要性。本文综述了应用高效液相色谱进行大鼠肝微粒体P450活性测定的方法学研究进展，内容包括肝微粒体的制备方法，细胞色素P450代谢酶系的特异性底物及其代谢产物和使用高效液相色谱进行细胞色素P450活性测定的应用条件。