川芎与天麻的不同配伍对体外培养大鼠皮层神经元正常和缺氧状态下[Ca~(2+)]i的影响

目的　遵循传统医学的药物配伍理论 ,研究川芎与天麻不同配伍对正常及缺氧情况下神经元胞浆 [Ca2 + ]i的影响 ,寻找中药配伍和创新中药的理论基础。方法　采用体外培养 4～ 6d的大鼠皮层神经元 ,分为生理盐水空白对照 ,95 %乙醇本底对照 ,尼莫地平阳性对照 ,实验组 (1～ 5号药对 ,川芎与天麻的比例分别为 4∶1、1∶4、4∶0、0∶4、1∶1 ,各药对分别配制成 5 0、1 0 0、1 5 0 μg·ml 1 3个浓度 ) ,再分为两部分 ,一部分持续通入 94 .5 %N2 和 5 .5 %CO2 的混合气体 4h制备缺氧模型 ,一部分在正常状态下孵育 4h ,以特异性荧光探针Fluo - 3为胞浆内Ca2 + 指示剂负载神经元 ,用激光扫描共聚焦显微镜动态监测药对对神经元胞浆 [Ca2 + ]的影响。结果　缺氧 4h后神经元胞浆内 [Ca2 + ]较缺氧前明显增加 ,川芎的醇提部分、川芎与天麻以 1∶4配伍作用时 ,较小剂量 (5 0 μg·ml-1 )对正常及缺氧时的神经元均有降低胞浆 [Ca2 + ]的作用 (P <0 .0 5 ) ,川芎的醇提部分 1 0 0 μg·ml-1 作用明显减轻缺氧神经元钙超载的同时不影响正常情况下神经元胞浆内外的钙离子平衡 ,与此同时其它川芎与天麻的配伍或只降低正常情况下的胞浆 [Ca2 + ],或无作用 ,或在大剂量时出现反转作用。结论　川芎醇提物以及川芎与天麻以一定     

川芎醇提取物对马桑内酯致痫神经元胞浆游离钙的影响

目的　研究川芎醇提取物对马桑内酯致痫神经元胞浆内游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)的作用 ,寻找创新中药的理论基础。方法　采用体外培养 4～ 6d的大鼠皮层神经元 ,分为生理盐水空白对照组、乙醇本底对照组、尼莫地平阳性对照组、川芎醇提取物干预组。以胞浆内Ca2 + 特异性荧光探针Fluo 3负载神经元后 ,分别加入马桑内酯 80、12 0 μg·ml-1作用 5min ,用激光扫描共聚焦显微镜动态监测药物对神经元胞浆 [Ca2 + ]的影响。结果　马桑内酯 12 0 μg·ml-1促进神经元 [Ca2 + ]荧光强度增加 ,乙醇抑制马桑内酯所致神经元胞浆内 [Ca2 + ]增加 ,尼莫地平有这种作用趋势却无统计学意义 ,川芎的醇提部分 10 0 μg·ml-1能够抑制马桑内酯导致的神经元胞浆Ca2 + 荧光强度增加 (P <0 .0 5 )。结论　川芎的醇提部分对致痫神经元有钙通道拮抗作用 ,为创新中药的发展提供细胞学基础     

巯亚硝基卡托普利对环匹阿尼酸引起的平滑肌细胞胞浆游离Ca2+浓度升高作用的影响

目的探讨巯亚硝基卡托普利(S-nitrosocaptopril,CapNO)对Ca 2+池操纵性Ca2+内流信号转导过程的影响.方法以Fura-2 荧光探针测定胞浆游离Ca2+ 浓度([Ca2+]i ).结果①CapNO(20～120 μmol·L -1)呈浓度依赖性抑制环匹阿尼酸(cyclopiazonic acid, CPA)引起的 [Ca2+]i升高,80 μmol·L-1 CapNO为最大效应浓度.相同浓度的captopril对CPA升高[Ca2+ ]i无明显抑制作用.②在80 μmol·L-1 CapNO抑制CPA引起[Ca2+]i升高作用的基础上(31%±11%);随后加入1 μmol·L-1硝苯地平不能降低[Ca2+ ]i,再加入20 μmol·L-1SK&F96365(最大效应浓度)可进一步降低 [Ca 2+]i(54%±18%),其中SK&F96365净抑制率为24%±10%,与SK&F96365单独作用抑制率(54%±11%)比较差异有显著性.③不同顺序给予最大效应浓度CapNO(80 μmol·L -1)和tyrphostinAG490(2 μmol·     

依托咪酯对神经元缺氧损伤的保护及其作用机制

目的观察依托咪酯对大鼠海马神经元缺氧损伤的保护作用及其机制。方法用原代培养的新生大鼠海马神经细胞建立缺氧模型,用MTT法测定神经元存活率。采用激光扫描共聚焦显微镜动态监测单个海马神经元[Ca2+]i随缺氧或加入谷氨酸、KC l前后的实时变化。结果依托咪酯在1.2~4.8 mg.L-1范围内,可剂量依赖性地降低神经元缺氧损伤时的细胞死亡率(P<0.05)。0.3~4.8 mg.L-1依托咪酯能抑制缺氧及50 mmol.L-1KC l引起的[Ca2+]i升高(P<0.05),仅在4.8 mg.L-1时才抑制1 mmo.lL-1谷氨酸所致的[Ca2+]i升高(P<0.01)。结论依托咪酯对离体大鼠海马神经元缺氧性损伤具有保护作用,其机制可能与依托咪酯抑制缺氧引起[Ca2+]i异常升高有关。     

马齿苋总黄酮对缺血缺氧刺激下血管平滑肌细胞蛋白激酶C活性的影响

目的观测马齿苋总黄酮(PTF)对缺血缺氧刺激下血管平滑肌细胞钙超载及蛋白激酶C(PKC)的影响。方法用Fura-2/AM作Ca2+指示剂,检测PTF对正常培养及缺血缺氧作用下家兔主动脉血管平滑肌细胞Ca2+浓度及PKC的活性的改变。结果 PTF对正常培养家兔主动脉血管平滑肌细胞[Ca2+]i浓度无明显影响;PTF(8,16,32,64 mg·L-1)剂量依赖性抑制缺血缺氧缺氧致血管平滑肌细胞[Ca2+]i升高;PTF对正常培养家兔主动脉血管平滑肌细胞胞浆、胞膜PKC活性均升高;PTF处理后胞浆PKC活性下降,胞膜PKC活性上升。结论PTF可能抑制缺氧致血管平滑肌细胞钙超载,调节缺氧条件下血管平滑肌细胞PKC活性。     

基于抗氧化活性的不同制法当归-川芎药对配伍比例研究

目的：观察不同配比当归-川芎分别经3种制备方法（水提、50%醇提、先水提后醇提）所得药液的抗氧化活性,探讨当归-川芎（归芎）药对优化配伍比例。方法：Fenton法测定OH自由基清除率,MTT法测定H2O2损伤内皮细胞的活力,权重系数法将以上指标转化为单指标,并采用人工神经网络拟和归芎药对不同配比的抗氧化活性曲线。结果：归芎药对各组均显示抗氧化作用。3种不同提取方法中,水提取物对OH自由基清除率活性最强;醇提取物对OH自由基清除率活性最弱,但对内皮细胞保护活性最强。总抗氧化活性的优化比例,水提物为1：1,50%醇提物为1：1.5,先水提后醇提物为2：1。结论：当归-川芎不同配比与不同制法的抗氧化活性作用不同,且存在优化配伍比例。归芎水提液抗氧化活性的优比例与临床汤剂中常用的1：1配比相一致。     

β-淀粉样蛋白和载脂蛋白E4升高神经元胞内游离钙

目的　研究 β 淀粉样蛋白 (Aβ)和载脂蛋白E4(ApoE4)对神经元胞内游离Ca2 +浓度的影响 ,探索它们对神经元的毒性效应。方法　制备 0～ 3d新生SD大鼠的海马和皮层神经元悬液 ,负载上fura 2 /AM ,实验组分别加入Aβ2 5～ 3 5、ApoE4以及Aβ2 5～ 35+ApoE4孵育液温孵 3min后 ,用荧光双波长分光光度计测定神经元 [Ca2 +]i;采用显微准弹性激光散射技术 (MQLS) ,分析Aβ2 5～ 35及ApoE4对单个神经元散射光强度自相关函数 (ACF)的影响 ,通过公式由ACF拟合出反映细胞膜流动性的频移线宽Г。结果　Aβ2 5～ 35和ApoE4均能升高海马和皮层神经元静息 [Ca2 +]i(P <0 0 5 ) ,其中 5 μmol·L-1Aβ2 5～ 35的作用大于 1μmol·L-1Aβ2 5～ 3 5的作用 (P <0 0 5 ) ;Aβ2 5～ 35和ApoE4也能增强KCl去极化诱导的海马和皮层神经元 [Ca2 +]i 升高 (P <0 0 5 )。Aβ2 5～ 3 5(1μmol·L-1) +ApoE4(0 1μmol·L-1)共同作用也使神经元静息 [Ca2 +]i及KCl去极化诱导的神经元 [Ca2 +]i升高 (P <0 0 5 ) ,但两者共同作用未见其升 [Ca2 +]i 效应进一步增大。Aβ2 5～ 3 5和ApoE4均降低海马和皮层神经元的频移线宽Г。结论　Aβ2 5～ 35和ApoE4均能升高神经元静息[Ca2 +]i 及降低神经元膜流动性 ,但两者共同作用未能显示升 [C     

牛磺酸对H-2O_2引起的大鼠血管平滑肌细胞核[Ca~(2+)]及胞浆[Ca~(2+)]变化的影响

目的　毒性剂量H2 O2 可引起细胞坏死或凋亡 ,此过程是否与H2 O2 引起的核 [Ca2 +]([Ca2 +]n)变化有关未见报导。本文研究牛磺酸对H2 O2 引起的血管平滑肌细胞(VSMC) [Ca2 +]n 与胞浆 [Ca2 +]([Ca2 +]c)的变化影响。方法　应用激光共聚焦显微镜对负载Fluo 3的培养大鼠VSMC的 [Ca2 +]n 及 [Ca2 +]c 变化进行研究。结果　在0 5 %H2 O2 作用下 ,[Ca2 +]n 与 [Ca2 +]c 持续升高 ,用抗氧化细胞保护剂 牛磺酸 2 0mmol·L-1预处理细胞 ,可降低H2 O2 引起的 [Ca2 +]n升幅 (P <0 0 5 ) ,但不影响 [Ca2 +]c 升幅 (P >0 0 5 ) ,表明 [Ca2 +]n 变化与 [Ca2 +]c 变化对牛磺酸反应性存在差异。结论　VSMC的核Ca2 +调控与胞浆Ca2 +调控各自具有一定的独立性。牛磺酸对H2 O2 引起的大鼠VSMC核Ca2 +的变化具有保护作用     

双参通冠方药物血清对缺氧/复氧心肌细胞Ca~(2+)-CaM-CaMPKⅡ信号系统的影响

目的考察双参通冠方(SSTG)药物血清对缺氧/复氧心肌细胞Ca2+-CaM-CaMPKⅡ信号系统的影响。方法培养心肌细胞,建立缺糖缺氧/复氧损伤模型。运用血清药理学方法研究SSTG药物血清对缺糖缺氧/复氧损伤心肌的作用。荧光分光光度法测定心肌细胞胞质[Ca2+]i,RT-PCR法测定CaM、CaMPKⅡδmRNA表达。结果正常心肌细胞[Ca2+]i、CaM、CaMPKⅡδmRNA表达很低。缺氧/复氧后[Ca2+]i较正常组增高,CaM、CaMPKⅡδmRNA表达增高(P<0.05),SSTG提取物大鼠灌胃剂量为22.5、45、90 mg.kg-1所取得的药物血清(体积分数为0.1)处理组[Ca2+]i降低,CaM、CaMPKⅡδmRNA表达降低,与空白血清处理组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧/复氧损伤可导致心肌细胞Ca2+超载,CaM、CaMPKⅡδmRNA表达增高;SSTG药物血清可对抗心肌细胞Ca2+超载,抑制其胞内受体CaM及Ca2+/CaM依赖性蛋白激酶CaMPKⅡδ的活性。     

内皮细胞乙酰胆碱作用靶标对胞内钙信号的调节

目的研究激活血管内皮细胞乙酰胆碱作用靶标(ETA)对不同类型血管内皮细胞[Ca2+]i水平的影响;以[Ca2+]i水平作为鉴定ETA功能的指标之一,观察其在传代过程中的改变,为研究ETA的分子结构及其信号转导途径提供实验依据.方法采用激光共聚焦技术,以荧光指示剂Fluo-3为探针,观察乙酰胆碱(ACh)和氨甲酰胆碱(carbachol,Car)对内皮细胞[Ca2+]i水平的影响.结果ACh和Car在10-5～10-2 mol*L-1可使3～10代牛主动脉内皮细胞标本的[Ca2+]i水平显著升高,ACh在 10-8～10-2 mol*L-1可使8代人冠脉内皮细胞标本的[Ca2+]i水平显著升高.结论内皮细胞在10代培养过程中外源性激动剂ACh和Car均可诱导胞内[Ca2+]i水平升高,ETA的功能与[Ca2+]i水平升高有关.     

成骨细胞的功能与损伤和骨质疏松的防治

骨质疏松是一种全身性骨骼疾病,导致骨折风险增加。成人的骨量通过破骨细胞的骨吸收和成骨细胞的骨形成作用来维持动态平衡,治疗骨质疏松症的理想策略是抑制破骨细胞的骨吸收和/或增强成骨细胞的骨形成功能。目前针对保护成骨细胞及增强其功能的骨质疏松疗法相对较少。因此,本文针对成骨细胞相关功能蛋白、各种细胞损伤机制（内质网应激、氧化应激、机械过载、微小RNA和长链非编码RNA的影响等）及骨质疏松的治疗与预防作一综述,以期为针对增强成骨细胞功能的骨质疏松治疗策略提供新思路。     

Seasonal variation of alkaloids of Adhatoda vasica and detection of glycosides and N-Oxides of vasicine and vasicinone

The distribution pattern of the alkaloids of A. Vasica has been studied with change of season. The study also resulted in the detection of glycosides and N-oxides of vasicine and vasicinone.     

CD44与肿瘤侵袭、转移及预后的关系

CD44是一种跨膜受体蛋白 ,属于黏附分子家族 ,可与透明质酸等配体结合 ,介导细胞与细胞、细胞与基质之间的黏附。近年来发现CD44及其变异体在许多肿瘤细胞中异常表达 ,且与肿瘤的发生发展及患者的预后存在着一定的关系 ,因此 ,可作为一个辅助性指标预测肿瘤的发展情况     

Formulation and evaluation of co-prodrug of flurbiprofen and methocarbamol

The current work envisages synthesis of an ester prodrug of flurbiprofen whereby its carboxylic group was condensed with a skeletal muscle relaxant methocarbamol, with the aim of synergistic activity of two drugs, avoid flurbiprofen mediated gastro-intestinal damage and minimize the ulceration tendency of flurbiprofen. The synthesized prodrug was characterized and confirmed by physicochemical and spectroscopic studies. Solubility and partition coefficient studies indicated an increased lipophilicity and thus better suitability for oral administration than the parent drugs and the protein binding studies revealed a low protein binding capacity of the mutual prodrug. Subsequently, in-vitro hydrolysis was studied in different pH, simulated gastric fluid, simulated intestinal fluid and plasma and quantitative evaluation was performed by high performance liquid chromatography. It was found that the prodrug remained unhydrolyzed in the stomach after absorption however, underwent rapid cleavage by the esterases in blood to give the parent drug. Furthermore, the mutual ester prodrug was evaluated for its anti-inflammatory, analgesic, skeletal muscle relaxation, ulcerogenic and total acid content activity and was found to possess comparable activity with that of the parent drugs. Microscopic structures of the stomach tissues revealed significant reduction in gastric ulcer formation of mice gastric mucosa as compared to parent carboxylic acid drug.