中药排气汤对术后肠梗阻小鼠胃肠功能的作用及机制研究

目的:研究中药排气汤对术后肠梗阻小鼠胃肠功能的作用及机制。方法:取7周龄SPF级C57BL/6J小鼠24只,随机分为假手术组、模型组、莫沙必利组、排气汤组,每组6只,采用经典小肠干扰术诱导小鼠术后肠梗阻模型。手术24 h后观测各组小鼠胃肠运动功能、肠道组织结构,ELISA试剂盒检测小鼠血清促炎因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和抗炎因子白细胞介素-10(IL-10)的水平,免疫组织化学法检测小鼠小肠Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达情况,Western Blot检测小鼠小肠中Toll样受体4(TLR4)、活化丝裂原激活的蛋白激酶p38(p38MAPK)和核转录因子-κB p65(NF-κB p65)表达水平。结果:与假手术组相比,模型组小鼠小肠推进率显著下降(P<0.01),血清炎症因子含量明显升高(P<0.05);与模型组相比,排气汤组小鼠小肠推进率明显升高(P<0.05),血清中炎症因子含量明显降低(P<0.05)。Western Blot结果显示,排气汤组能显著降低术后肠梗阻小鼠小肠TLR4、p38MAPK和NF-κB p65蛋白表达(P<0.05)。结论:中药排气汤可以改善术后肠梗阻小鼠胃肠道功能,其作用机制与恢复ICC的功能,抑制TLR4、p38MAPK和NF-κB p65的表达,减轻炎症反应有关。     

苦参碱治疗慢性萎缩性胃炎的实验研究

目的：探讨苦参碱对大鼠慢性萎缩性胃炎（CAG）的影响及其作用机制。方法：采用多因素复合法建立CAG模型,将大鼠分为正常组、模型组、阳性对照组（维酶素300 mg·kg^-1）、苦参碱高剂量组（200 mg·kg^-1）、苦参碱低剂量组（100 mg·kg^-1）,每组10只。灌胃给药,连续治疗8周后,于光镜下观察胃黏膜组织病理学并进行病理程度分级;放射免疫法测定血清胃泌素（GAS）和血浆生长抑素（SS）含量;酶联免疫吸附法测定胃黏膜匀浆液中白细胞介素I β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度,实时定量聚合酶链反应法测定胃黏膜Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）、核因子κB（NF-κB）基因表达。结果：各给药组大鼠胃黏膜病变有显著减轻,炎性细胞浸润程度和固有腺体萎缩程度的组间差异均有统计学意义（P<0.01）;与模型组相比,苦参碱高、低剂量组大鼠血清GAS含量显著升高（P<0.01）,血浆SS含量则出现显著降低（P<0.01）;苦参碱高、低剂量组大鼠胃黏膜IL-1β、IL-6和TNF-α水平均有显著降低,与模型组相比组间差异均有统计学意义（P<0.01）;与模型组相比,苦参碱高剂量组大鼠胃黏膜TLR4、MyD88和NF-κB mRNA相对表达量均有显著降低（P<0.05或P<0.01）,苦参碱低剂量组TLR4和NF-κB mRNA相对表达量均有显著降低（P<0.05或P<0.01）。结论：苦参碱可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路的持续活化及相关炎症细胞因子的高表达,减轻CAG炎症反应,阻止炎症细胞对胃黏膜造成的损伤,发挥对胃黏膜的保护作用。     

狐臭柴茎挥发油体外抗炎活性及基于NF-κB和MAPKs信号通路作用机制的研究

目的:探究狐臭柴茎挥发油的体外抗炎活性及其作用机制。方法:通过水蒸气蒸馏法制备狐臭柴茎挥发油,采用GC-MS对其化学成分进行分析。通过Griess法和ELISA法测定挥发油对LPS诱导RAW264.7细胞上清液中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平的影响;qRT-PCR检测iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA的表达;Western blot测定挥发油对iNOS、COX-2、NF-κB和MAPKs信号通路蛋白的影响。结果:从挥发油中共鉴定出74种化学成分,其中主要的化学成分是茅术醇(13.50%)。挥发油显著抑制NO、TNF-α和IL-6的分泌(P＜0.01),同时降低了促炎因子(TNF-α、IL-6和IL-1β)和促炎酶(iNOS和COX-2)的mRNA表达水平(P＜0.01)。Western blot研究表明挥发油能下调NF-κB信号通路细胞核p65蛋白表达、p65和IκBα磷酸化(P＜0.05或P＜0.01)。此外,还降低了MAPKs信号通路p38、JNK和ERK蛋白的磷酸化(P＜0.01)。结论:狐臭柴茎挥发油对LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型具有较好的抗炎效果,其内在的分子机制与下调NF-κB和MAPKs信号通路有关。     

芍药内酯苷调控NF-κB抑制卵巢癌转移的作用研究

目的:研究芍药内酯苷(albiflorin,AL)抑制人卵巢癌转移的作用及其潜在机制。方法:卵巢癌耐顺铂SKOV3/DDP细胞分为5组:AL 25,50,100μmol·L^-1组、18μmol·L^-1 NF-κB抑制剂SN50组和空白对照组。采用划痕试验检测AL对迁移的影响,采用流式细胞术检测AL对凋亡的影响,采用RT-qPCR和western blot检测AL对CDH1、CDH2和NF-κB mRNA和蛋白表达的影响。结果:AL各组均可明显抑制SKOV3/DDP细胞迁移,增加细胞凋亡,具有浓度依赖性(P<0.05,P<0.01)。随着AL浓度增加,其对CDH2和NF-κB的抑制作用,及其对CDH1的诱导作用均逐渐增强(P<0.05)。AL 100μmol·L^-1组抑制迁移、诱导凋亡和抑制CDH2和NF-κB mRNA和蛋白表达的作用与SN50组相当(P>0.05),诱导CDH1 mRNA作用弱于SN50组(P<0.05),但诱导CDH1蛋白表达的作用与SN50组相当(P>0.05)。结论:AL抑制SKOV3/DDP迁移作用可能与其诱导凋亡和CDH1表达,抑制CDH2和NF-κB表达有关。     

复方足疡平促进糖尿病大鼠皮肤溃疡创面愈合及对RAGE/NF-κBp65/VEGF表达的影响

目的：探讨复方足疡平对糖尿病大鼠皮肤溃疡创面愈合的作用及其作用机制。方法：将50只SPF级SD大鼠分成正常对照组、皮肤溃疡模型组、凡士林组、足疡平组、rhEGF（重组人表皮生长因子外用溶液）组,每组10只。大鼠糖尿病模型通过高脂高糖饮食结合腹腔注射链脲佐菌素诱导。50只大鼠背部制造皮肤溃疡创面,各组给与相应药物外敷创面。观察创面愈合情况计算创面愈合率;分别在治疗第7,14天时采集创面肉芽组织制作HE染色切片,进行组织病理学观察;Western blot检测创面肉芽组织中晚期糖基化终末产物受体（RAGE）、核转录因子-κB p65（NF-κB p65）、血管内皮生长因子（VEGF）表达水平。结果：干预治疗第7,14天时,与皮肤溃疡模型组比较,足疡平组和rhEGF组能明显提高创面愈合率（P<0.01）,而凡士林组大鼠创面愈合率与皮肤溃疡模型组无显著性差异（P>0.05）;足疡平组和rhEGF组大鼠创面组织胶原纤维沉积、毛细血管、肉芽组织生长均明显增加;足疡平组能显著降低RAGE、NF-κB p65蛋白表达,升高VEGF蛋白表达（P<0.01）,rhEGF组在第7天时NF-κB p65蛋白表达与皮肤溃疡模型组比较差异无显著性（P>0.05）,其余指标均有显著性差异（P<0.01）。结论：复方足疡平可有效促进糖尿病大鼠皮肤溃疡创面愈合,其作用机制与抑制糖尿病大鼠皮肤溃疡创面中RAGE、NF-ΚB p65表达,促进VEGF的表达相关。     

姜黄素对亚急性肝内胆汁淤积大鼠肠内菌群变化的影响及其机制研究

目的： 研究姜黄素对亚急性肝内胆汁淤积（intrahepatic cholestasis,IHC）大鼠肠内菌群变化的影响,并分析相关机制。方法： 38只IHC大鼠随机分为模型组（9只）、姜黄素低剂量组（9只）、姜黄素高剂量组（10只）、阳性药物组（10只）,9只健康大鼠设置为对照组。姜黄素低、高剂量组姜黄素200、400 mg·kg^-1灌胃;阳性药物组熊去氧胆酸60 mg·kg^-1灌胃;对照组与疾病组等量生理盐水灌胃。均为每天一次;干预14 d。检测肝功能指标、胆红素代谢指标、炎症指标;qRT-PCR反应定量检测肠内菌群;Western blot检测肝组织核转录因子-κB（NF-κB）p65、p-NF-κB p65、核因子抑制蛋白（IκBα）、p-IκBα蛋白相对表达量。结果： 与疾病组比较,姜黄素低、高剂量组、阳性药物组碱性磷酸酶（ALP）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、γ-谷氨酰转肽酶（GGT）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、总胆汁酸（TBA）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）均降低,白介素-10（IL-10）均升高,乳酸杆菌、双歧杆菌均增加,大肠杆菌均减少（P<0.05）;与姜黄素低剂量组比较,姜黄素高剂量组、阳性药物组ALP、ALT、AST、GGT、TBIL、DBIL、TBA、IL-1β、IL-6、TGF-β₁均降低,IL-10均升高,乳酸杆菌、双歧杆菌均增加,大肠杆菌均减少（P<0.05）。与疾病组比较,姜黄素低、高剂量组、阳性药物组p-NF-κB p65/NF-κB p65,p-IκBα/IκBα均降低（P<0.05）;与姜黄素低剂量组比较,姜黄素高剂量组、阳性药物组p-NF-κB p65/NF-κB p65,p-IκBα/IκBα均降低（P<0.05）。结论： 姜黄素可改善亚急性IHC模型大鼠肝功能、胆红素代谢、肠道菌群,减轻炎症反应及肝脏组织病理变化,且具有剂量依赖性,推测其作用机制与抑制NF-κB信号通路有关。     

熵权法结合星点设计-效应面法优化祛湿清肺方提取工艺及体外抗炎活性评价

目的:优化祛湿清肺方提取工艺,并对祛湿清肺方提取液进行体外抗炎活性评价。方法:以绿原酸、虎杖苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、汉黄芩素、大黄素成分含量及得膏率为指标,加水量及提取时间为考察因素,采用熵权法结合星点设计-效应面法对祛湿清肺方提取工艺进行优化。以脂多糖(LPS)诱导大鼠腹腔巨噬细胞(RAW_264.7)为炎症模型,酶联免疫吸附法测定白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、一氧化氮(NO)的含量,蛋白质印迹法检测磷酸化NF-κB抑制蛋白激酶(phosphorylated inhibitor of NF-κB kinase,p-IKK)、磷酸化NF-κB p65(phosphorylated NF-κB p65,p-NF-κB p65)、NF-κB抑制蛋白α(inhibitor of NF-κBα,IκBα)蛋白表达水平变化,评价祛湿清肺方提取液抗炎活性。结果:星点设计-效应面法优化所得的最佳提取工艺为加水量13倍,提取2次,每次提取时间105 min。祛湿清肺方提取液能降低IL-6、IL-1β、TNF-α、NO的含量,抑制p-IKK、p-NF-κB p65蛋白表达,促进IκBα蛋白表达,具有较好的体外抗炎活性。结论:熵权法结合星点设计-效应面法优选的祛湿清肺方提取工艺稳定可行,所得提取液具有较好的抗炎活性,为祛湿清肺方开发和现代化研究提供参考奠定基础。     

杨桃根中2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮抗肝癌作用及机制的研究

目的：探讨杨桃根中2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮（DMDD）对裸鼠肝癌的抑瘤作用,并研究其机制。方法：建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,48只裸鼠随机分为6个组：DMDD高剂量组,DMDD中剂量组,DMDD低剂量组,多柔比星组,模型组,空白组,每组8只。记录裸鼠体质量和肿瘤大小变化,计算瘤重,抑瘤率,肿瘤指数及脏器指数;检测血常规指标：白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）和血小板（PLT）;采用酶联免疫法检测裸鼠血清中白介素2（IL-2）和白介素10（IL-10）的含量;免疫组化法检测TLR4,MyD88和NF-κB的蛋白表达水平。结果：DMDD各剂量组及多柔比星组的瘤体质量均小于模型组（P<0.01）,DMDD高、中、低剂量组及多柔比星组的抑瘤率分别：66.39%,63.11%,47.33%,49.38%,DMDD各剂量组和多柔比星组的肿瘤指数低于模型组（P<0.01）,DMDD各剂量组的脾脏指数低于模型组（P<0.01）;DMDD各剂量组均能升高WBC、HGB和PLT的数量（P<0.01或P<0.05）;DMDD各剂量组能降低的血清中IL-2和IL-10的表达水平（P<0.01或P<0.05）;免疫组化结果显示,DMDD各剂量组均能下调TLR4,MyD88和NF-κB的蛋白表达水平。结论：DMDD具有良好的抗肝癌作用,该作用可能与其能改善裸鼠免疫器官的功能和血常规指标,下调IL-2和IL-10的水平,调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。     

IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α基因多态性与药物性肝损伤相关性的Meta分析

目的：探讨IL-4、IL-6、IL-10和TNF-α基因多态性与药物性肝损伤（drug-induced liver injury，DILI） 易感性关系。方法：检索Pubmed、Web of Science、Cochrane Library、EMBASE、知网与万方数据库，查找建库有关IL-4、IL-6、IL-10和TNF-α基因多态性与DILI发病风险的文献。应用STATA12.0对数据进行Meta分析。结果：共纳入10篇文献，共包括717例DILI患者和1 674例正常对照。所有研究都纳入Meta分析发现IL-6 rs1800796G>C中G等位基因携带者（OR=2.507，95% CI[1.542，4.074]，P=0.000）患DILI的风险显著升高，而TNF-α rs1800629G>A中G等位基因携带者（OR=0.715，95% CI[0.524，0.976]，P=0.035）患DILI的风险显著降低。在剔除一项显著的异质性研究后，携带IL-6 rs2066992G>T中G等位基因人群（OR=2.465，95% CI[1.506，4.036]，P=0.000）人群患DILI风险显著增加，而携带IL-10 rs1800872A>C中C等位基因（OR=0.818，95% CI[0.679，0.985]，P=0.034）人群患DILI风险则显著降低。本研究暂未发现IL-4各基因位点基因型与DILI有明显关联性。结论：TNF-α（rs1800629G>A）、IL-6（rs1800796G>C、rs2066992G>T）与IL-10（rs1800872A>C）与DILI发生有一定的关联性。     

百秋李醇对幽门螺杆菌致小鼠胃炎的保护作用

目的: 探讨百秋李醇对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)感染小鼠胃炎的保护作用及其作用机制。方法: 采用化学致癌剂和幽门螺杆菌联合诱导法建立胃炎模型, 将C57BL/6小鼠分为正常组、模型组、阳性对照组(铋剂四联疗法)、百秋李醇高剂量组(40 mg·kg^-1)、百秋李醇低剂量组(20 mg·kg^-1)。灌胃给药, 连续治疗4周后, 行快速尿素酶试验, 评价胃组织中幽门螺杆菌的定植程度; 酶联免疫吸附法测定血清中白细胞介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度, 免疫组织化学法和实时定量聚合酶链反应法测定胃黏膜Wnt2、β联蛋白(β-catenin)及核因子κB(NF-κB)的蛋白及基因表达。结果: 各给药组小鼠胃黏膜的腺体排列、炎性细胞浸润及不典型增生等病变现象均有显著减轻, 百秋李醇高、低剂量组对幽门螺杆菌根除率分别为78%、70%, 与模型组相比组间差异均有统计学意义(P＜0.01);与模型组相比, 百秋李醇高、低剂量组小鼠血清IL-8和TNF-α水平均有显著降低(P＜0.01);与模型组相比, 百秋李醇高、低剂量组小鼠胃黏膜Wnt2、β-catenin和NF-κB蛋白及基因表达均有显著降低(P＜0.05或P＜0.01)。结论: 百秋李醇可通过抑制NF-κB信号转导通路及Wnt/β-catenin信号转导通路的持续活化及相关炎性细胞因子的高表达, 减轻胃黏膜炎症反应, 防止胃黏膜细胞上皮-间质样转化的发生, 从而阻止或延缓胃肠癌前病变的进程。     

异甘草酸镁对四氯化碳诱导肝损伤大鼠肝组织Bax、Bcl-2蛋白表达及肝纤维化指标影响

目的： 观察异甘草酸镁注射液对四氯化碳诱导肝损伤大鼠肝组织Bax、Bcl-2蛋白表达及纤维化指标的影响。方法： 50只大鼠随机分成正常对照组（NS组）、肝损伤模型组（MO组）、异甘草酸镁注射液高剂量组（H组）、异甘草酸镁注射液中剂量组（M组）、异甘草酸镁注射液低剂量组（L组）,每组10只。MO组和各给药组大鼠将50% CCl₄花生油溶液按照1 mL·kg^-1,每周灌胃2次。同时,H组、M组和L组每日一次,分别腹腔注射异甘草酸镁注射液100 mg·kg^-1、50 mg·kg^-1和25 mg·kg^-1。6周后处死,取大鼠肝脏,观察大体形态,称重留样;取大鼠血清,测总胆红素（TBIL）、谷草转氨酶（AST）及谷丙转氨酶（ALT）水平,测透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（CⅣ）和Ⅲ型前胶原肽（PC-Ⅲ）。Western blot测肝脏组织Bcl-2和Bax蛋白表达。结果： 与MO组相比,异甘草酸镁注射液能够升高H组、M组大鼠体质量（P<0.01、P<0.05）;降低H组肝脏指数（P<0.05）;降低H组谷丙转氨酶、谷草转氨酶（P<0.05、P<0.01）;降低H组LN、CIV和PC-Ⅲ（P<0.01、P<0.01、P<0.01）,降低M组LN和PC-Ⅲ（P<0.01、P<0.05）;下调H组Bax表达（P<0.01）;上调H组Bcl-2的表达（P<0.01）。结论： 对四氯化碳诱导肝损伤大鼠,异甘草酸镁注射液可下调其Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,改善肝纤维化指标。     

伊托必利对氯吡格雷所致胃黏膜损伤动物模型的保护作用及机制

目的： 探讨伊托必利对氯吡格雷所致胃黏膜损伤大鼠模型的保护作用及可能的分子机制。方法： 采用乙酸浆膜下注射法建立胃溃疡大鼠模型;60只胃溃疡愈合大鼠随机分成对照组、氯吡格雷组、0.5 mg·kg^-1伊托必利组、1.0 mg·kg^-1伊托必利组。伊托必利组大鼠分别给予0.5、1.0 mg·kg^-1·d^-1伊托必利灌胃,1 h后与氯吡格雷组大鼠同时再予8.0 mg·kg^-1·d^-1氯吡格雷灌胃,之后禁食6 h,其余组别均给予等体积0.5%羧甲基纤维素钠灌胃,连续灌胃30 d。观察胃黏膜组织病理变化,计算溃疡复发率、胃黏膜损伤指数和上皮细胞凋亡指数;Western-blot检测胃黏膜组织cleaved Caspase-3、NF-κB、Occludin、ZO-1、p-p38、p-ERK、p-JNK蛋白表达。结果： 与对照组比较,氯吡格雷组大鼠溃疡复发率、胃黏膜损伤指数和上皮细胞凋亡指数明显增大,cleaved Caspase-3、NF-κB、p-p38、p-ERK蛋白表达水平明显升高,Occludin、ZO-1表达水平显著下降,差异比较均具有显著性（P<0.05）;与氯吡格雷组比较,伊托必利两组大鼠的溃疡复发率、胃黏膜损伤指数和上皮细胞凋亡指数则显著减小,cleaved Caspase-3、NF-κB、p-p38、p-ERK蛋白表达水平显著降低,Occludin、ZO-1表达则显著增多,差异比较均具有显著性（P<0.05）。结论： 伊托必利对氯吡格雷所致大鼠胃黏膜损伤具有一定的抵抗作用,机制可能与紧密连接蛋白表达上调及MAPK信号通路有关。     

大承气汤调控Nrf2/TGF-β1/ERK通路来减轻脂多糖诱导的急性肺损伤

目的：研究大承气汤（Dachengqi Decoction,DCQD）减轻脂多糖诱导的急性肺损伤模型的作用及机制。方法：选择无特定病原体（specific pathogen free,SPF）级8周龄SD雄性大鼠,采用脂多糖腹腔注射诱导急性肺损伤模型。将48只大鼠随机分为空白组（blank group）、模型组（model group）、大承气汤低浓度组（L-DCQD group,2.5 g·kg^-1）、中浓度组（M-DCQD group,5 g·kg^-1）、高浓度组（H-DCQD group,10 g·kg^-1）和大承气汤高浓度合Nrf2抑制剂组（H-DCQD＋ML385 group）,每组8只。采用脂多糖10 ml·kg^-1腹腔注射造模,每天灌胃给药1次,连用5 d,并于造模后2 h给予不同浓度的大承气汤灌胃,6 h后收集标本。ELISA检测肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、髓过氧化物酶（MPO）、丙二醛（MDA）、转化生长因子-β（TGF-β1）表达量,HE染色观察各组大鼠肺脏的病理变化,Western blot检测肺组织核因子E2相关因子2（Nrf2）、p-Nrf2、血红素氧合酶1（HO-1）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）、p-ERK的表达,免疫荧光检测Nrf2核转位情况。结果：与blank组相比,model组出现严重的炎症反应,肺泡损伤,肺水肿形成,大量炎症细胞浸润;相关促炎因子TNF-α、IL-1β及氧化指标MPO、MDA明显升高（P<0.05）;大鼠肺组织p-Nrf2及HO-1、p-ERK蛋白表达均上调（P<0.05）。与model组相比,DCQD组炎症反应减轻,肺组织损伤改善,TNF-α、IL-1β及氧化指标MPO、MDA下降,p-Nrf2及HO-1蛋白表达均上调（P<0.05）,p-ERK蛋白表达下调（P<0.05）,且DCQD高浓度组变化趋势更明显（P<0.05）。结论：大承气汤可减轻脂多糖引起的急性肺损伤,其机制与激活Nrf2/TGF-β1/ERK信号通路及抑制炎症反应、氧化应激、上皮间质转化有关。