氟伐他汀对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞CTGF mRNA的影响及其作用机制的研究

目的探讨高糖状态下肾小球系膜细胞中结缔组织生长因子（CTGF）mRNA的表达以及HMG-CoA还原酶抑制剂氟伐他汀对其的影响及作用机制。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,实验分为4组：低糖组（LG组,5.5 mmol/L葡萄糖）;低糖＋甘露醇组（LG＋M组,5.5 mmol/L葡萄糖＋24.5 mmol/L甘露醇）;高糖组（HG组,30 mmol/L葡萄糖）;高糖＋氟伐他汀组（HG＋Flu组,30 mmol/L葡萄糖＋10μmol/L氟伐他汀）。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测CTGF和纤维粘连蛋白（FN）mRNA的表达,Western印迹检测磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38 MAPK）及其下游因子cAMP反应元件结合蛋白1（p-CREB1）。结果与LG＋M组相比,HG组系膜细胞增殖明显,p-p38 MAPK、p-CREB1表达明显上调,CTGF和FN mRNA的表达增加。与HG组比较,HG＋Flu组可抑制系膜细胞增殖,p-p38 MAPK、p-CREB1的表达明显下调,CTGF和FN mRNA的表达降低。结论高糖状态下肾小球系膜细胞CTGF mRNA表达增强,p-p38 MAPK和p-CREB1表达明显升高,氟伐他汀抑制肾小球系膜细胞CTGF mRNA和细胞外基质的分泌可能部分是通过影响p38 MAPK及其下游核因子CREB1的激活而实现。     

缬沙坦对高糖培养系膜细胞信号转导和转录活化因子1、3表达的影响

目的探讨高糖状态下肾小球系膜细胞中信号转导和转录活化因子1、3的改变以及血管紧张素受体1拮抗剂(AT1Ra)缬沙坦的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予高糖和缬沙坦干预,采用W estern印迹检测信号转导和转录活化因子1、3(STAT1、STAT3)及其磷酸化蛋白(p-STAT1、p-STAT3)的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)和放免法测定细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白(F ibronectin,FN)和IV型胶原的含量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1mRNA的表达。结果与低糖对照组相比,高糖组系膜细胞p-STAT1和p-STAT3表达明显上调,TGF-β1、FN和IV型胶原含量增加,TGF-β1mRNA的表达增加。缬沙坦组p-STAT1和p-STAT3的表达明显下调,TGF-β1、FN和IV型胶原的含量减少,同时TGF-β1mRNA的表达降低。结论高糖状态下p-STAT1和p-STAT3表达明显升高,缬沙坦抑制肾小球系膜细胞TGF-β1和细胞外基质的分泌可能部分是通过影响STAT1和STAT3的激活而实现。     

氟伐他汀对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞外基质 p38 MAPK表达的影响?

研究HMG-CoA还原酶抑制剂氟伐他汀 (fluvastatin) 对高糖状态下肾小球系膜细胞中p38丝裂原活化蛋白激酶 (p38 mitogen-activated protein kinase, p38 MAPK) 及其下游因子cAMP反应元件结合蛋白1 (cAMP response element-binding protein, CREB₁) 表达的影响。采用体外培养大鼠肾小球系膜细胞, 分别给予高糖和氟伐他汀干预, 应用Western blotting检测p38 MAPK和CREB₁及其磷酸化蛋白 (p-p38 MAPK、p-CREB₁)的表达; 逆转录-聚合酶链反应 (RT-PCR) 检测转化生长因子β₁ (TGF-β₁) 和纤维粘连蛋白 (FN) mRNA的表达; 放射免疫法测定细胞上清液中层连接蛋白 (LN) 和IV型胶原蛋白的含量。结果表明, 与低糖对照组相比, 高糖组的系膜细胞p-p38 MAPK、p-CREB₁表达明显上调, TGF-β₁ mRNA和FN mRNA的表达增加, 细胞上清液中LN和IV型胶原蛋白含量增加。氟伐他汀组的p-p38 MAPK、p-CREB₁表达明显下调, TGF-β₁ mRNA和FN mRNA的表达降低, 同时LN和IV型胶原蛋白的含量减少。因此氟伐他汀抑制肾小球系膜细胞TGF-β₁的表达和细胞外基质的分泌可能部分是通过影响p38 MAPK及其下游因子CREB₁的激活而实现的。     

非诺贝特及罗格列酮对高糖培养肾小球系膜细胞p38MAPK信号通路调控影响

目的：探讨非诺贝特及罗格列酮对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞（MC）p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号传导通路的影响。方法：大鼠系膜细胞分别培养在正常糖浓度（5．5mmol／L）、高糖浓度（25mmol／L）、25mmol／L葡萄糖＋非诺贝特（FB）100μmol／L及25mmol／L葡萄糖＋罗格列酮（RG）20μmol／L。ELISA法检测培养细胞上清液Ⅳ型胶原（Col-Ⅳ）、纤维连接蛋白（FN）;Phospho—ELISA法检测胞浆及胞核内p38MAPK和磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）蛋白的表达：以及RT-PCR法检测p38MAPK的mRNA的表达。结果：与正常对照组比较,高糖组MC合成基质蛋白Col-Ⅳ、FN增多;胞浆及胞核内P—p38MAPK的表达增加。非诺贝特及罗格列酮干预能使高糖培养系膜细胞合成Col-Ⅳ、FN显著减少,胞核内p-p38MAPK表达显著下调,但对胞浆内p-p38MAPK的表达则无显著影响。各组总p38MAPK蛋白水平及p38MAPK的mRNA表达则没有明显改变。结论：非诺贝特及罗格列酮能够显著下调高糖培养的Mc核内p38MAPK信号传导通路的活化,进而减少胞外基质合成。     

SRT1720对高糖诱导的小鼠系膜细胞凋亡的影响

目的观察Sirt1激活剂SRT1720对高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡的作用。方法体外培养小鼠肾小球系膜细胞,随机分为正常糖组、正常糖+甘露醇组、高糖组及高糖+SRT1720组。采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)及流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测活性氧簇(ROS)产生;Western blot检测caspase-3、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p38 MAPK、p-p38 MAPK、Sirt1、p53、乙酰化p53及细胞色素C的表达;实时定量PCR检测Bax和Bcl-2 mRNA的表达。结果与正常糖对照组相比,高糖组系膜细胞ROS产生和细胞凋亡明显增加,cleaved caspase-3、p-p38 MAPK和乙酰化p53表达增高、Bax/Bcl-2比率明显升高、Sirt1表达下降以及细胞色素C易位。SRT1720干预能够明显抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡和ROS产生;下调cleaved caspase-3、乙酰化p53和p-p38 MAPK的表达;上调Sirt1的表达;减少Bax/Bcl-2比率和细胞色素C易位。结论SRT1720能够抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡,可能是通过减少ROS产生、保护线粒体功能、抑制p53乙酰化以及p38MAPK信号通路激活而实现的。     

黄连素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞FN及p38MAPK信号通路的影响

目的研究黄连素对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质成分纤维连接蛋白及p38MAPK信号通路的影响,进一步探讨黄连素抗糖尿病肾病的作用机制。方法实验分组:正常对照组、甘露醇组、高糖组、高糖+SB203580组、高糖+黄连素低剂量组、高糖+黄连素高剂量组共6组,观察黄连素对高糖培养下的大鼠肾小球系膜细胞纤维连接蛋白以及p38MAPK信号通路蛋白表达的影响。结果与高糖组相比,黄连素降低系膜细胞纤维连接蛋白的蛋白表达水平,抑制p38MAPK及其下游核转录因子CREB的磷酸化。结论黄连素抗糖尿病肾病的作用可能与其减少细胞外基质成分FN的积聚,抑制p38MAPK信号通路激活密切相关。     

P38 mAPK信号通路在糖尿病肾病中的作用

目的探讨p38 MAPK信号通路在糖尿病肾病中的作用。方法使用不同浓度葡萄糖及p38 mAPK特异性抑制剂SB203580干预肾小球系膜细胞,采用实时荧光定量PCR法检测各组肾小球系膜细胞p38 MAPK、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达。结果高糖组p38 mAPK、TIMP-1 mRNA的表达明显增加,且呈浓度依赖性;而MMP-9 mRNA表达和MMP-9/TIMP-1比值与正常组相比明显下降,同时p38 MAPK抑制剂SB203580能明显逆转以上变化。结论 p38 MAPK信号通路介导了高糖诱导的肾小球系膜细胞MMP-9和TIMP-1 mRNA表达的改变,进而参与了糖尿病肾病的进展。     

普伐他汀对高糖培养肾小球系膜细胞P38促分裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的探讨普伐他汀对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞(MC)p38促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号传导通路的影响。方法大鼠MC分别培养在正常糖5.5mmol·L-1(正常对照组),高糖25mmol·L-1(高糖组),葡萄糖25mmo.lL-1+p38MAPK特异性抑制剂SB203580(SB)10μmol.L-1,及葡萄糖25mmol·L-1+普伐他汀(PV)100μmol·L-1。ELISA法检测培养上清液Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)、纤连蛋白(FN)含量;Phospho-ELISA法检测胞浆及胞核内p38MAPK和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白的表达;以及RT-PCR法检测p38MAPK mRNA的表达。结果与正常对照组比较,高糖组MC合成基质蛋白Col-Ⅳ,FN增多;胞浆及胞核内p-p38MAPK的表达增加。SB或PV干预能部分或完全逆转这一变化。与高糖组比较,SB干预后,上清液中Col-Ⅳ含量下降〔48h:(21.19±3.21)vs(16.75±1.93)μg·L-1,n=6,P<0.05〕、FN减少〔48h:(13.47±1.27)vs(12.01±0.85)μg·L-1,n=6,P<0.05〕;胞浆及胞核内p-p38MAPK表达显著下调。PV干预后,上清液中Col-Ⅳ含量下降〔48h:(21.19±3.21)vs(14.97±3.04)μg·L-1,n=6,P<0.05〕、FN减少〔48h:(13.57±1.27)vs(11.99±0.98)μg·L-1,n=6,P<0.05〕;胞核内p-p38MAPK表达显著下调,但对胞浆内p-p38MAPK的表达则无显著影响。各组总p38MAPK蛋白水平及p38MAPK mRNA表达则没有明显改变。结论PV能够显著下调高糖培养的MC胞核内p38MAPK信号传导通路的活化,进而减少胞外基质合成,达到对糖尿病肾病的治疗作用。     

大黄素对高糖培养的GMC增殖、FN表达及p38MAPK的影响

目的本研究旨在观察大黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)的增殖与细胞外基质的主要成分——纤维连接蛋白(FN)表达的影响,观察大黄素对高糖培养的p38MAPK信号转导通路的影响,以探讨大黄素调节p38MAPK信号通路抗糖尿病肾脏纤维化的分子作用机制。方法 MTT比色法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞周期分布;Western blot方法检测FN、p-p38MAPK蛋白表达情况。结果高糖能够诱导大鼠GMC增殖、上调FN的表达以及促进p38MAPK活化,与正常培养组相比差异有统计学意义(P<0.05);大黄素可以抑制高糖诱导的大鼠GMC增殖、FN表达与p38MAPK活化,与高糖组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论大黄素抗糖尿病肾脏纤维化的作用可能与大黄素抑制p38MAPK信号通路密切相关。     

大黄酸对人肾小球系膜细胞功能的影响

目的探讨大黄酸防治糖尿病肾病的作用机制。方法用细胞培养、ELISA、明胶酶谱及免疫沉淀、Western blot等技术,研究了大黄酸对肾小球系膜细胞转化生长因子(TGFβ₁)、基质金属蛋白酶-2,-9(MMP-2和MMP-9)及p38活化丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)活性的作用。结果大黄酸可显著抑制肾小球系膜细胞的增殖,对抗高糖诱导肾小球系膜细胞TGFβ₁活性升高的作用;对高糖诱导肾小球系膜细胞MMP-2,MMP-9,pro-MMP-2及pro-MMP-9的活性增加无明显影响,但可明显对抗高糖引起的肾小球系膜细胞p38MAPK活性增加。结论大黄酸减少FN的分泌可能与其降低p38MAPK及TGFβ₁活性有关。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏结构、功能及肾组织p38MAPK的影响

目的　探讨特异性血管紧张素ⅡⅠ型受体拮抗剂氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏结构、功能的保护机制及p38MAPK信号转导通路对此过程的作用。方法　♂Wister大鼠行右肾切除术 2wk后 ,随机分为 3组 ,右肾切除对照组、糖尿病组 ,氯沙坦治疗组。腹腔注射链脲佐菌素 (STZ ,6 5mg·kg-1)诱发糖尿病模型 ,氯沙坦 4 0mg·kg-1·d-1灌胃。分别于注射STZ后 4wk后各组选取 6只大鼠 ,收集尿液 ,测定尿蛋白(Upro) ,尿肌酐 (Ucr) ;股动脉放血分离血清 ,测定血糖(Glu)、血尿素氮 (BUN) ,血肌酐 (Scr)并计算肌酐清除率(Ccr)。免疫组化检测肾皮质磷酸化p38蛋白激酶 (p p38MAPK)及磷酸化cAMP反应元件结合蛋白 (p CREB)的表达特征 ,纤维粘连蛋白 (fibronectin ,FN )及层粘连蛋白(laminin ,LN)的表达 ,应用图像分析系统进行半定量分析。Westernblot及流式细胞术定量检测 p p38MAPK和 p CREB蛋白的表达。结果　与对照组相比 ,4wk时糖尿病模型组肾小球基底膜轻度增厚 ,细胞外基质 (ECM )增多 ,系膜区扩大 ,肾脏肥大指数升高 ,肾功能轻度受损 ,p p38MAPK、p CREB、FN及LN表达明显升高 ;而与糖尿病模型组相比 ,氯沙坦组肾脏结构 ,功能及各指标的表达有不同程度的降低。结论　氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏结构和功能具有保护作用 ,可能是通过调     

缬沙坦对人肾近端小管上皮细胞TGF-β/Smad信号途径的影响

目的观察缬沙坦对TGF-β刺激人肾近端小管上皮细胞表达Smad的影响。方法以人肾小管上皮细胞(HKC)为对象,分为正常对照组;TGF-β1刺激组;缬沙坦组。Western blot检测p-Smad2/3、smad2/3、Smad7以及细胞上清ColⅠ蛋白含量;RT-PCR检测Smad2 mRNA和Smad7 mRNA水平。MTT法检测刺激组及缬沙坦组在不同时间、不同药物浓度对细胞增殖状态的影响。结果①Western blot显示,与TGF-β1刺激组相比,缬沙坦使Smad2/3、p-Smad2/3蛋白的表达下降,ColⅠ分泌显示相同趋势,而Smad7蛋白的表达没有变化。②半定量RT-PCR显示,与TGF-β1刺激组相比,缬沙坦组Smad2 mRNA降低,Smad7 mRNA无变化。③MTT法检测显示不同浓度缬沙坦对TGF-β1刺激所引起的细胞增殖受抑制现象均有改善,并且随药物浓度的增加该作用增强。结论提示缬沙坦的肾脏保护作用可能部分是通过抑制TGF-β/Smads信号途径实现的。     

代文、阿托伐他汀和匹格列酮对高糖培养的大鼠肾脏系膜细胞肾上腺髓质素和补体因子H的表达的影响

目的：观察代文、阿托伐他汀和匹格列酮对高糖培养的HBZY-1大鼠肾脏系膜细胞转化生长因子β1 （TGF-β1）、细胞外基质（ECM）以及肾上腺髓质素（AM）和补体因子H（Cfh）表达的影响,并探讨其作用机制。方法：实验分为低糖对照（LG）、高糖对照（HG）、高糖+代文（HD）、高糖+阿托伐他汀（HL）、高糖+匹格列酮（HP）5组,分别用酶联免疫吸附测定（ELISA）和放射免疫法（RIA）测定细胞上清TGF-β1、层粘连蛋白（LN）和Ⅳ型胶原的含量,用RT-PCR方法测定TGF-β1mRNA、CfhmRNA以及AMmRNA的表达情况。结果：高糖状态下培养的肾脏系膜细胞应用代文、阿托伐他汀和匹格列酮干预后细胞上清TGF-β1、LN和Ⅳ型胶原的含量较高糖对照组显著减低（P<0.01）,TGF-β1mRNA,AMmRNA和CfhmRNA的表达亦较高糖对照组显著减低（P<0.01）。结论：代文、阿托伐他汀和匹格列酮具有一定的肾脏保护作用,其作用机制可能与其抑制TGF-β1的表达有关。药物干预后Cfh和AM的表达也减低,可能与TGF-β1的变化有关。     

生松素对AngⅡ诱导的大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质合成的影响及其机制研究

目的 探讨生松素（Pb）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质（ECM）合成的影响及其机制。方法 以大鼠肾小球系膜细胞为研究对象,将实验分为以下5组：正常对照（NC）组、1×10-6mol/L AngⅡ（Ng）组、1×10-6 mol/L AngⅡ+1‰ DMSO（Ng-D）组、 1×10-6 mol/L AngⅡ+30 μmol/L Pb（Ng-Pb）组、1×10-6 mol/L AngⅡ+10 μmol/L缬沙坦（Ng-Val）组。分别在干预12、24、48 h搜集细胞和上清液,采用Western blot检测Ⅳ型胶原（ColⅣ）、纤连蛋白（FN）、转化生长因子-β（ 1 TGF-β1 ）、Smad3、磷酸化Smad3（p-Smad3）、核因子κB（NF-κB）、磷酸化NF-κB（pNF-κB）的蛋白水平,酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平,实时荧光定量PCR（qPCR）检测细胞中ColⅣ、FN、TGF-β1、TNF-α、IL-6的mRNA水平。结果 （1）Pb对 AngⅡ诱导的系膜细胞合成ECM的影响：与NC组相比,Ng组细胞内ColⅣ和FN的蛋白质和mRNA 水平升高（P＜0.05）,而Ng-Pb组和Ng-Val组细胞内ColⅣ和FN的蛋白质和mRNA水平均较Ng组降低（P＜0.05）。（2）Pb对TGF-β1/Smad3通路的 影响：与NC组相比,Ng组细胞内TGF-β1的蛋白质和mRNA水平增加,p-Smad3/Smad3水平增加（ P＜0.05）,而Ng-Pb组和Ng-Val组细胞内TGF-β1的蛋白质和mRNA水平以及p-Smad3/Smad3水平均较Ng组降低（P＜0.05）。（3）Pb对NF-κb介导的促炎症因子产生的影响：与NC组相比,Ng组 p-NF-κb/NF-κb水平增加,IL-6和TNF-α的蛋白质和mRNA水平增加（P＜0.05）,而Ng-Pb组和 Ng-Val组p-NF-κb/NF-κb水平以及IL-6和TNF- α的蛋白质和mRNA水平均较Ng组降低（P＜0.05）。结论 Pb可能通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路和NF-κb介导的促炎症因子的产生, 从而抑制AngⅡ诱导的大鼠系膜细胞合成ECM。     

Effects of sodium ferulate on amyloid-beta-induced MKK3/MKK6-p38 MAPK-Hsp27 signal pathway and apoptosis in rat hippocampus

AIM: To observe the effects of sodium ferulate (SF) on amyloid beta (Abeta)1-40-induced p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) signal transduction pathway and the neuroprotective effects of SF. METHODS: Rats were injected intracerebroventricularly with Abeta1-40. Six hours after injection, Western blotting was used to determine the expressions of phosphorylated mitogen-activated protein kinase kinase (MKK) 3/MKK6, phospho-p38 MAPK, interleukin (IL)-1beta, phospho-MAPK activating protein kinase 2 (MAPKAPK-2), the 27 kDa heat shock protein (Hsp27), procaspase-9, -3, and -7 cleavage, and poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) cleavage. Seven days after injection, Nissl staining was used to observe the morphological change in hippocampal CA1 regions. RESULTS: Intracerebroventricular injection of Abeta1-40 induced an increase in phosphorylated MKK3/MKK6 and p38 MAPK expressions in hippocampal tissue. These increases, in combination with enhanced interleukin (IL)-1beta protein expression and reduced phospho-MAPKAPK2 and phospho-Hsp27 expression, mediate the Abeta-induced activation of cell death events as assessed by cleavage of procaspase-9, -3, and -7 and caspase-3 substrate PARP cleavage. Pretreatment with SF (100 mg/kg and 200 mg/kg daily, 3 weeks) significantly prevented Abeta1-40-induced increases in phosphorylated MKK3/MKK6 and p38 MAPK expression. The Abeta1-40-induced increase in IL-1beta protein level was attenuated by pretreatment with SF. In addition, Abeta1-40-induced decreases in phosphorylated MAPKAPK2 and Hsp27 expression were abrogated by administration of SF. In parallel with these findings, Abeta1-40-induced changes in activation of caspase-9, caspase-7, and caspase-3 were inhibited by pretreatment with SF. CONCLUSION: SF prevents Abeta1-40-induced neurotoxicity through suppression of MKK3/MKK6-p38 MAPK activity and IL-1beta expression and upregulation of phospho-Hsp27 expression.