敲减microRNA-27a通过Wnt/β-catenin信号通路抑制肾细胞癌增殖和转移

目的探究miR-27a在肾细胞癌(RCC)增殖与转移中的作用及其机制。方法RT-qPCR检测RCC癌组织、癌旁组织、RCC细胞(Caki-1、786-O和ACHN)和正常肾小管上皮细胞(HK2)中miR-27a表达。将miR-27a inhibitor转入786-O和ACHN细胞,CCK-8实验检测细胞增殖;集落形成实验检测细胞集落形成;伤口愈合实验和Transwell实验分别检测细胞迁移与侵袭;Western blot和免疫荧光检测β-catenin表达。采用LiCl(Wnt/β-catenin信号激动剂)处理已转染miR-27a inhibitor的ACHN细胞后,检测细胞增殖、侵袭与迁移。结果RCC癌组织中miR-27a表达量明显高于癌旁组织,并随分期进展而增加。与HK2细胞相比,RCC细胞中miR-27a表达均升高。转染miR-27a inhibitor后,786-O和ACHN细胞的集落形成、细胞增殖、侵袭和迁移能力均明显降低。miR-27a inhibitor降低ACHN细胞中β-catenin的表达,LiCl能促进已转染miR-27a inhibitor的ACHN细胞的增殖、迁移与侵袭能力。结论miR-27a在RCC癌组织及RCC细胞中高表达,敲减miR-27a通过Wnt/β-catenin信号通路抑制RCC细胞增殖和转移。     

血管紧张素Ⅱ1型受体在口腔鳞癌中的表达及临床意义

目的研究血管紧张素 Ⅱ1型受体(AT1受体)在口腔鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法收集 2012年 1—12月期间在南京市口腔医院 46例经术后常规病理确诊为口腔鳞癌的病人的石蜡组织切片,其中 20例切片中包含了正常的癌旁组织。采用免疫组织化学方法检测 46例口腔鳞癌组织和 20例相邻癌旁组织中 AT1受体的表达。结果 20例正常癌旁组织中 AT1受体阳性率为 15.0%,低于口腔鳞癌组织中阳性率(89.1%)(χ2＝109.696,P＜0.01)。 AT1受体在口腔鳞癌组织中低表达 14例,高表达 27例,高表达的 AT1受体与病人的性别、年龄无关,与原发肿瘤大小、颈部淋巴组织转移及临床分期密切相关。结论 AT1受体在口腔鳞癌组织中高表达,有可能作为口腔鳞癌的诊断和预后的指标。     

口腔鳞状细胞癌中端粒酶的活性检测

目的 测定口腔鳞状细胞癌组织中端粒酶的活性，了解端粒酶与口腔鳞状细胞癌之间的关系。方法 采用端粒酶PCR，ELISA法对55例口腔鳞癌与20例正常口腔粘膜，18例口腔鳞癌及其癌旁组织中的端粒酶活性进行测定。结果 口腔鳞状细胞癌中端粒酶的活性明显高于正常粘膜组，而自身对照组癌组织的端粒酶活性也明显高于癌旁组织。结论 端粒酶的活性检测可以作为一种有效的口腔恶性肿瘤标记物用于口腔恶性肿瘤的辅助诊断。     

金雀异黄酮调控miR-27a抑制胃癌细胞生长

目的 探讨金雀异黄酮对胃癌细胞SGC7901生长的作用及可能机制.方法 收集16例胃癌及其相应的癌旁正常组织,通过实时定量PCR分别检测miR-27a及其靶基因ZBTB10的表达水平.用金雀异黄酮0、25、50、100、200 μmol/L处理胃癌细胞SGC7901后,采用磺酰罗丹明B染色法检测细胞的生长情况,实时定量PCR检测miR-27a及ZBTB10表达.结果 与癌旁正常组织相比,胃癌组织中miR-27a表达增加(P＜0.05),而ZBTB10表达降低(P＜0.01).金雀异黄酮可呈浓度、时间依赖的方式抑制胃癌细胞SGC7901的生长,下调miR-27a表达,同时上调ZBTB10表达.结论 金雀异黄酮抑制胃癌细胞的生长.其机制可能与下调癌基因miR-27a的表达有关.     

热休克蛋白27在食管上皮癌变过程中的表达及其意义

目的 了解热休克蛋白27(HSP27)在食管鳞癌、癌旁组织和切缘正常食管黏膜中的表达,分析其表达差异,并探讨其与食管癌发生发展的关系.方法 应用免疫组化Envision二步法,观察HSP27在食管鳞癌、癌旁组织和切缘正常食管黏膜中的表达,并比较其间是否存在差异.结果 食管鳞癌、癌旁组织和切缘正常食管黏膜中HSP27的阳性表达率分别为73.3％、53.5％和25.3％;HSP27在食管鳞癌中的阳性表达率高于在癌旁组织(P＜0.05),在癌旁组织中的阳性表达率高于在切缘正常食管黏膜(P ＜0.001).随着食管鳞癌高、中、低分化程度的不同,HSP27的阳性表达率逐渐降低,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HSP27可能与食管鳞癌的发生发展有关.     

金雀异黄素对胃癌细胞增殖的影响及对microRNA-27a和FOXO1的调控

目的 探讨人微小RNA-27a(microRNA-27a,miR-27a)及其靶基因FOXO1在胃癌组织、癌旁组织中的变化及其在金雀异黄素抑制胃癌细胞增殖中的作用.方法 利用Real Time PCR方法检测10对胃癌癌旁/癌组织中microRNA-27a及其靶基因FOXO1 mRNA的表达.不同浓度(5、10、20、40 μmol·L-1)的金雀异黄素作用于胃癌细胞SGC 7901 72 h后,用噻唑兰比色法(MTT)检测细胞增殖,并采用Real Time PCR方法检测细胞中miR-27a及其靶基因FOXO1 mRNA的表达.结果 胃癌组织较癌旁组织miR-27a表达升高(1.566±0.206 5),其靶基因FOXO1 mRNA表达降低(0.298±0.156 6).Pearson线性分析表明:miR-27a与FOXO1 mRNA呈负相关(r=-0.701 8).金雀异黄素作用于SGC-7901细胞后,细胞增殖得到了抑制,尤其在20与40μmol·L-1浓度下,细胞抑制率明显降低.不同浓度的金雀异黄素处理72 h后,miR-27a表达与对照组比较明显降低;其靶基因FOXO1mRNA表达水平较对照组增加(均P＜0.05).结论 金雀异黄素可能通过抑制miR-27a表达,促进FOXO1 mR-NA的表达,进而抑制胃癌细胞增殖,发挥抗肿瘤的作用.     

Twist蛋白在喉鳞状细胞癌中的表达及其与预后关系

目的 观察Twist蛋白在喉鳞状细胞癌(喉鳞癌)及其癌旁组织中的表达情况,探讨Twist蛋白在喉鳞癌发生、发展过程中的意义.方法 收集我院病理科2005~2010年喉鳞癌手术标本80例,应用免疫组织化学法检测Twist蛋白,同时从中选择30例检测癌旁组织Twist蛋白作为对照.结果 ①80例喉鳞癌标本中,Twist蛋白...     

鞣花酸通过调控miR-1254表达抑制口腔鳞癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的机制

目的 探讨鞣花酸对口腔鳞癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法 体外培养HSC3细胞，用不同剂量(2、4、8μg/ml)鞣花酸干预24 h后，CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖、划痕实验和Transwell分别检测细胞迁移和侵袭，蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达，qRT-PCR法检测细胞中miR-1254表达。收集39例口腔鳞癌患者癌组织和癌旁组织，RT-PCR法检测组织中miR-1254表达。转染miR-1254模拟物至HSC3细胞，或转染miR-1254抑制剂至HSC3细胞后再用8μg/ml鞣花酸干预24 h,然后采用上述相同方法检测细胞增殖、迁移和侵袭。结果 与对照组比较，不同剂量鞣花酸提高了HSC3细胞增殖抑制率和E-cadherin蛋白表达(P<0.05),降低了细胞克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数及N-cadherin蛋白表达(P<0.05)。同时，与对照组比较，不同剂量鞣花酸促进了HSC3细胞中miR-1254表达(P<0.05)。口腔鳞癌组织中miR-1254表达低于癌旁组织(P<0.05)...     

Fas在口腔鳞癌中表达意义的研究

Fas（又称Apo－1,CD95）是当前广泛研究的一种细胞表面受体。当与其配体FasL结合时,可诱导Fas”细胞发生凋亡。在维持机体的自身稳定中发挥着重要的作用。据Leithanser报道恶性肿瘤细胞通过Fas抗原的下调表达,逃避机体细胞毒T淋巴细胞（CTL）的杀伤,最终导致肿瘤的形成。本研究通过40例口腔鳞癌及7例淋巴结转移癌标本Fas抗原的检测,初步探讨Fas在口腔鳞癌发生中的作用及其与口腔鳞癌预后间的关系。临床资料一、方法我院1990～1998年口腔鳞形细胞癌手术标本存档蜡块40例,复习HE切片,挑选癌与癌旁交界处蜡块。其中高分化鳞癌19…     

微 RNA-30d-5p通过调控 ABCB5对胰腺癌进程的影响

目的探讨微 RNA(miR)-30d-5p在胰腺癌( PAAD)中的潜在作用和调控机制。方法选择 2016年 12月至 2019年 1月来新疆维吾尔自治区人民医院接受手术治疗的胰腺癌病人 35例,术后即刻获得胰腺肿瘤组织和癌旁非肿瘤组织,采用实时定量 PCR检测 miR-30d-5p在胰腺癌组织和细胞中的表达水平。使用细胞计数试剂盒( CCK-8)、克隆形成、 transwell和流式细胞术检测 miR-30d-5p对细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。通过萤光素酶测定和蛋白质印迹法评估 miR-30d-5p对 ABCB5表达的调控作用。进一步构建裸鼠成瘤模型通过肿瘤质量和体积验证 miR-30d-5p对肿瘤生长的影响。采用苏木精伊红染色验证肿瘤组织增殖情况。结果与癌旁组织( 1.03±0.17)及正常细胞( 0.98±0.18)相比,胰腺癌组织( 0.35±0.08)和细胞( 0.63±0.08,     

Yes相关蛋白在口腔鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨Yes相关蛋白(YAP)在口腔鳞状细胞癌中的表达情况及其与p53表达的关系。方法采用免疫组织化学法对29例高分化、19例中分化、12例低分化口腔鳞状细胞癌组织及10例正常口腔黏膜组织的YAP及p53蛋白表达情况进行检测。结果与正常口腔黏膜组织(20.0%)相比,YAP在口腔鳞状细胞癌(83.3%)中的表达明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。YAP的表达与口腔鳞状细胞癌的年龄、性别、发病部位、淋巴结转移等临床病理特征无关(P>0.05)。p53在口腔鳞状细胞癌组织中阳性率为71.7%(43/60)。口腔鳞癌中YAP与p53的表达呈正相关(r=0.343,P<0.05)。结论 YAP在口腔鳞状细胞癌中表达明显增高,且与p53表达相关,二者共同参与口腔鳞状细胞癌的发生、发展。     

胃癌组织中miR-185检测的临床价值及与Vav3-Rac1通路的关系

目的 探讨胃癌及癌旁正常胃黏膜中微小RNA145(miR-185)、Vav3、Rac1基因的表达情况及关系.方法 荧光实时定量PCR技术检测100例胃癌组织及80例癌旁正常胃黏膜中miR-185、Vav3、Rac1基因mRNA的表达情况.比较胃癌及癌旁正常胃黏膜组织中这3种基因mRNA的表达差异;绘制受试者工作曲线(ROC曲线);分析miR-185、Vav3、Rac1基因mRNA表达与患者生物学特征的关系;分析胃癌组织中miR-185与Vav3、Rac1的关系.结果 胃癌组织中miR-185的表达低于癌旁正常胃黏膜组织,而Vav3、Rac1的mRNA表达则明显高于癌旁正常胃黏膜组织(P<0.05).miR-185、Vav3、Rac1的ROC曲线最佳cut-off值分别为0.3440、0.3346、0.2944.miR-185的表达与胃癌的浸润深度、分化及淋巴结转移有关;Vav3、Rac1的表达与胃癌的分化及淋巴结转移有关(P<0.05).Spearman相关分析显示,在胃癌组织中miR-185与Vav3、Rac1存在负相关,Vav3与Rac1存在正相关(P<0.05).结论 胃癌组织中miR-185表达明显降低且与胃癌的生物学特征有关,miR-185可能通过抑制Vav3-Rac1通路而参与了胃癌进展的调控过程.     

微小 RNA-590对口腔鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制

目的 探讨微小RNA(miR)-590对口腔鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响和分子机制.方法 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测2014年1月至2017年1月菏泽市牡丹人民医院52例口腔鳞癌组织中miR-590的表达.将口腔鳞癌细胞Tca-8113分为miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组、miR-590抑制物(anti-miR-590)组、空载体(pcDNA3.1)组、大肿瘤抑制基因1(LATS1)过表达载体(pcDNA3.1-LATS1)组、anti-miR-590+小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、anti-miR-590+LATS1小干扰RNA组(si-LATS1).四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞活力,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭数.双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法检测验证miR-590和LATS1的靶向调控关系.结果 与癌旁组织比较,口腔鳞癌组织中miR-590的表达水平显著升高[(0.73±0.07)比(0.30±0.03),P<0.05].与anti-miR-NC组比较,anti-miR-590组细胞活力[(0.40±0.04)比(0.78±0.08)]、迁移[(46±5)个比(136±13)个]和侵袭数[(42±4)个比(128±13)个]显著降低(P<0.05);与pcD-NA3.1组比较,pcDNA3.1-LATS1组细胞活力[(0.49±0.05)比(0.78±0.08)]、迁移数[(56±6)个比(136±13)个]和侵袭数[(50±5)个比(128±13)个]显著降低(P<0.05).LATS1靶向负调控LATS1表达.与anti-miR-590+si-NC组比较,anti-miR-590+si-LATS1组细胞活力(0.61±0.06)比(0.40±0.04)、迁移数[(94±9)个比(45±4)个]和侵袭数[(87±9)个比(40±4)个]显著升高(P<0.05).结论 抑制miR-590通过靶向调控LATS1表达从而抑制口腔鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭.     

miR-509-3p与Rab11a在喉鳞状细胞癌中的表达及其意义

目的:探讨miR-509-3p和预测靶基因Rab11a在喉癌发病中的作用.方法:通过实时荧光定量逆转录PCR检测15例喉癌组织及癌旁正常组织中miR-509-3p和预测靶基因Rab11a的表达情况.用miR-509-3p mimics转染喉癌Hep-2细胞株后,检测预测靶基因Rab11a的表达情况,并分析其相关性.结果:①实时荧光定量逆转录PCR检测结果显示,在喉癌组织中miR-509-3p表达低于癌旁正常组织;而Rab11a的表达明显高于癌旁正常组织(P＜0.05).②经转染miR-509-3p mimics喉癌Hep-2细胞株实验组中Rab11a的表达较阴性对照组下调,差异有统计学意义(P＜0.05).miR-509-3p作为抑癌因子在喉癌组织表达水平低于正常组;预测靶基因Rab11a在喉癌组织表达水平高于正常组;经转染miR-509-3p的喉癌Hep-2细胞株Rab11a表达明显高于对照组.结论:miR-509-3p可能靶基因之一为Rab11a,通过下调预测靶基因Rab11a表达的负向调控机制,发挥抑癌作用.揭示miR-509-3p在喉癌中可能通过减少致癌基因Rab11a表达发挥抑癌作用.     

乳腺癌组织miR-20a的表达及其对乳腺癌细胞自噬的影响

目的 探究乳腺癌患者肿瘤组织中miR-20a的表达情况及其对乳腺癌细胞自噬功能的作用。 方法 收集芜湖市第一人民医院2016年1月至2017年12月间收治的接受手术治疗的乳腺癌患者56例,逆转录实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肿瘤组织与癌旁组织miR-20a与自噬相关基因Beclin1、LC3、ATG5及ATG7 mRNA的表达水平。脂质体法转染pcDNA3/pri-miR-20a质粒至MCF7细胞,免疫蛋白印记实验检测Beclin 1与饥饿条件下LC3Ⅱ表达水平,免疫荧光实验检测自噬斑点。 结果 肿瘤组织miR-20a的平均表达水平为211.35±67.43,癌旁组织miR-20a的平均表达水平为126.72±24.37,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,肿瘤组织较癌旁组织Beclin1 mRNA表达量降低(P<0.05),ATG5、ATG7与ATG12 mRNA的表达量差异无统计学意义 (P>0.05)。过表达miR-20a后MCF7细胞Beclin1蛋白表达量降低,饥饿刺激下LC3Ⅱ表达水平降低且自噬斑点减少。 结论 乳腺癌组织中miR-20a呈高表达,并且降低自噬调节蛋白Beclin1的表达以抑制自噬活化。     

HPV-16感染对喉咽鳞癌组织及FaDu细胞miRNA表达的影响

目的探讨HPV-16感染对喉咽鳞癌组织及Fa Fu细胞miRNA表达的调控。方法收集28例人喉咽鳞癌新鲜组织标本,PCR-反向点杂交法检测标本中HPV DNA的存在情况并进行分型。稳定培养整合HPV-16 E6-E7D的人喉咽鳞癌FaDu细胞,利用q RT-PCR对各组标本及细胞中的miR-363、miR-15a及iR-155的表达水平进行检测。结果 28例喉咽鳞癌标本中HPV阳性者检出7例,其中HPV-18型1例,HPV-52型1例,HPV-16,33混合型1例,HPV-16,52混合型1例。q RT-PCR检测结果显示:HPV-16阳性喉咽鳞癌组织和细胞miR-363和miR-15a表达均显著上调,而miR-155表达水平均则没有显著变化。结论 HPV-16感染能够影响人喉咽鳞癌组织及Fa Du细胞miRNA表达水平。     

长链非编码 RNA淋巴细胞白血病缺失基因 2对舌鳞癌细胞增殖和侵袭的调控作用

目的探讨长链非编码 RNA(lncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因 2(DLEU2)在舌鳞癌中的表达及其对癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 2018年 5月至 2019年 7月收集在邯郸市第三医院进行手术治疗并经病理确诊的 22例舌鳞癌组织及对应的癌旁组织标本。采用实时荧光定量 PCR检测 DLEU2在舌鳞癌组织和细胞中的表达情况。将体外培养的舌鳞癌细胞株 CAL27细胞分为对照组(未转染)、空载体组(空载体)和 DLEU2组(转染 DLEU2)采用实时荧光定量 PCR检测细胞中 DLEU2表达, MTT法检测细胞增殖, Transwell检测细胞侵袭。结果与癌旁组织( 1.00±0.0,0)相比,舌鳞癌组织中 DLEU2表达水平( 0.30±     

p27、JAB1在肝细胞肝癌的表达及意义

目的 研究细胞调控蛋白p27及其相关分子JAB1在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及意义.方法 选取60例HCC及癌旁组织,10例肝血管瘤旁肝组织病例,采用免疫组化检测p27及JAB1的表达.结果 p27主要在癌旁高表达,而JAB1蛋白在大部分HCA3组织中的表达高于对应癌旁组织.JAB1在HCC中表达高于癌旁和血管瘤旁肝组织.p27在正常组织和癌旁组织的表达高于HCC组织.结论 JAB1蛋白表达与p27呈负相关;JAB1可能是通过作用于p27,使其表达及代谢发生异常,导致细胞周期失控参与了HCA:的发生和发展.     

裸鼠人小细胞肺癌原位移植瘤的生物学特性

目的：研究裸鼠人小细胞肺癌原位移植瘤的生物学特性。方法建立裸鼠人小细胞肺癌原位移植瘤模型。采用Western blot和免疫荧光法检测肿瘤组织、癌旁组织及正常肺组织中肿瘤干细胞标志跨膜蛋白CD133、血管内皮生长因子（VEGF）和黑色素瘤抗原（MAGE）的蛋白表达和分布。结果 CD133在癌旁组织、肿瘤组织、正常肺组织的蛋白表达依次降低（P＜0．05）;VEGF在肿瘤组织、癌旁组织、正常肺组织的蛋白表达依次降低（P＜0．05）;MAGE在癌旁组织、肿瘤组织的蛋白表达高于正常肺组织（P＜0．05）,但在肿瘤组织和癌旁组织均呈阳性表达（P＞0．05）。结论CD133及M AGE阳性表达的肿瘤细胞可能是介导人小细胞肺癌恶性生物学行为的始动因素。     

微小 RNA-7-5p靶向调节锌指蛋白核转录因子 4基因抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的 探讨微小RNA(miR)-7-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及锌指蛋白核转录因子4(KLF4)基因表达调控的影响.方法 研究起止时间为2018年3—10月.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-7-5p在人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF及口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量.将miR-7-5p模拟物(miR-7-5p mimics)及阴性对照序列(mimics Control)分别转染至SCC25细胞,分为三组:Control组(未转染的SCC25细胞)、NC组(转染mimics Con-trol的SCC25细胞)、miR-7-5p组(转染miR-7-5p mimics的SCC25细胞).以qRT-PCR检测miR-7-5p在SCC25细胞中的转染效果;MTT法检测miR-7-5p对SCC25细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-7-5p对SCC25细胞凋亡的影响;通过双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测miR-7-5p对KLF4的靶向关系.结果 miR-7-5p在3种口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量[(0.21±0.02)、(0.43±0.04)、(0.48±0.05)]明显低于人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF(1.00±0.09)(P<0.05);转染miR-7-5p mimics能够上调SCC25细胞中miR-7-5p的表达(P<0.05);miR-7-5p过表达能够明显抑制SCC25细胞增殖能力[Control组、NC组72 h吸光度(1.43±0.13)、(1.46±0.15)比miR-7-5p组(0.81±0.09)](P<0.05),并诱导细胞凋亡[Control组、NC组凋亡率(9.48±2.65)％、(10.21±3.02)％比miR-7-5p组(24.41±8.15)％](P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果表明miR-7-5p过表达可抑制KLF4-Wt报告基因载体细胞相对荧光活性;qRT-PCR和Western blotting进一步证实了miR-7-5p能够靶向调节KLF4 mRNA和蛋白表达.结论 miR-7-5p直接靶向调控KLF4基因的表达来抑制口腔鳞状细胞癌SCC25细胞增殖,诱导细胞凋亡.