铁树提取物对人肺腺癌细胞凋亡的诱导及相关机制的初步研究

目的探讨中药铁树提取物(Cvcas revolute Thunb extracts,CTE)对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其相关机制.方法应用四氮唑盐(MTT)法观察CTE对A549细胞增殖的影响,采用Gimsa染色和吖啶橙(AO)/澳化乙锭(EB)荧光染色观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳方法检测A549细胞凋亡、细胞周期变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测凋亡基因Bcl-2,Bax和Caspase-3 mRNA水平表达的变化.结果CTE可以抑制A549细胞增殖.经CTE作用后,A549细胞出现明显的细胞凋亡形态学变化;细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈现特征性的DNA降解梯形条带;A549细胞被阻滞在G2-M期,细胞凋亡率可达34.37％.CTE可抑制A549细胞Bcl-2和Caspase-3mRNA的表达,促进Bax mRNA的表达.结论CTE能明显诱导A549细胞凋亡,其机制之一可能是改变与凋亡相关基因的表达.     

花旗松素对人肺癌细胞A549增殖的抑制作用及其机制研究

目的研究花旗松素对人肺癌细胞A549增殖的抑制作用,并探讨其诱导细胞凋亡的可能机制。方法 WST-1法检测不同质量浓度(0~200μg/m L)花旗松素对A549细胞增殖的影响;Annexin-V/PI双染法检测花旗松素对A549细胞凋亡的影响;细胞免疫荧光法观察花旗松素处理后A549细胞中凋亡蛋白Bax的表达;Western blotting法检测Bcl-2、Akt、P53蛋白表达的变化。结果 WST-1法检测到花旗松素能有效抑制A549细胞的增殖,呈现时间–剂量–效应关系。通过流式细胞仪分析,花旗松素诱导细胞凋亡,上调了促凋亡蛋白Bax的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制Akt的过表达,并且促进P53的表达。结论花旗松素对A549细胞的增殖具有显著的抑制作用,其诱导的凋亡机制可能与Bcl-2、Akt相关信号通路的激活有关。     

尿多酸肽对人非小细胞肺癌细胞生长与凋亡的影响

目的:初步探讨尿多酸肽(CDA-2)体外诱导非小细胞肺癌细胞凋亡作用及其可能的分子机制。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)试验检测CDA-2对正常人呼吸道上皮细胞HBE细胞及肺癌细胞系A549和H157细胞增殖的抑制效应;采用流式细胞仪检测细胞凋亡;采用Western印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达。结果:CDA-2显著抑制A549和H157细胞增殖,且具有浓度依赖性,其对正常人呼吸道上皮HBE细胞无影响。流式细胞DNA分布宽度检测显示,CDA-2处理组A549细胞亚G1期凋亡峰明显高于对照组(P<0.01);而HBE细胞给药前后比较无统计学意义(P>0.05);流式细胞仪An-nexinV和PI检测结果显示,CDA-2处理组A549细胞凋亡率和死亡率均明显高于对照组(P<0.01),而HBE细胞给药前后比较无统计学意义(P>0.05)。Western印迹分析显示,CDA-2处理组A549细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达强而快速的下调而促凋亡蛋白Bax表达显著上调,Bcl-2/Bax蛋白比率下降。结论:CDA-2可抑制非小细胞肺癌A549和H157细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能是改变Bcl-2/Bax比率,通过线粒体途径诱导肺癌细胞凋亡。     

氯美昔布诱导肺癌细胞凋亡的作用机制

目的:探讨氯美昔布诱导肺癌细胞凋亡的可能作用机制。方法:人肺癌细胞株A549和NCI-H460细胞先加入终浓度IL-1β11μg/L刺激24h,再加入不同浓度氯美昔布继续培养24h,采用Western blot法检测ERK2、p-ERK及Bcl-2表达水平。氯美昔布体外处理A549、NCI-H460后,采用Western blot法检测Bcl-2、Bax表达水平。结果:氯美昔布作用后肺癌细胞中ERK2及p-ERK的磷酸化水平均下降,并伴有Bcl-2水平的下降,差异有统计学意义(P<0.01)。并且随着氯美昔布浓度的增大,Bcl-2蛋白表达量逐渐下降,而Bax蛋白表达在A549细胞中增强,在NCI-H460细胞中不变,Bcl-2/Bax的比值下降。结论:氯美昔布诱导肺癌细胞凋亡的机制可能与通过ERK信号转导途径调节肺癌细胞产生Bcl-2,进而诱导Bcl-2/Bax的比值下降有关。     

丙酮酸钠对小鼠海马神经HT22细胞神经保护作用北大核心CSCD

目的研究丙酮酸钠(sodium pyruvate,SP)在低氧条件下对小鼠海马神经细胞HT22的神经保护作用。方法在低氧条件下,用MTS检测不同浓度SP孵育HT22细胞的活性变化;从形态学上,采用铁染色观察SP对HT22细胞的影响;应用溶酶体染色检测SP对HT22细胞的溶酶体变化;采用Western blot检测Bcl-2、Bax和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白的表达。结果5 mmol·L^(-1)的SP能提高HT22细胞活力以及减少HT22细胞损伤;SP提高Bcl-2的表达,降低Bax的表达,使LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加。结论在低氧的条件下给予SP可能通过减少HT22细胞凋亡,激活自噬发挥神经保护作用,从而降低低氧损伤。     

注射用胸腺法新对人肺癌A549细胞凋亡的影响

目的:研究注射用胸腺法新对人肺癌A549细胞凋亡的影响。方法:以0(空白对照)、25、50、100、200、400 mg/L注射用胸腺法新作用于肺癌A549细胞24、48、72 h后,用MTT法检测并计算细胞增殖抑制率。以0(空白对照)、50、100 mg/L注射用胸腺法新作用于肺癌A549细胞48 h后,用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,用Western blot法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达和蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平。结果:与空白对照比较,注射用胸腺法新作用后A549细胞的增殖抑制率增加,与浓度和作用时间呈正相关(P<0.05);50、100 mg/L的注射用胸腺法新作用48 h后A549细胞的凋亡率增加(P<0.05);100 mg/L的注射用胸腺法新作用48 h后A549细胞中Caspase-3表达增强、Bcl-2/Bax和Akt磷酸化水平降低(P<0.05)。结论:注射用胸腺法新可通过激活Caspase-3、下调Bcl-2/Bax比例、抑制Akt信号通路来抑制A549细胞增殖,并促进其凋亡。     

7- 二氟甲氧基-5, 4′- 二- 正辛烷氧基金雀异黄素诱导肺癌A549 细胞凋亡

目的研究7二氟甲氧基-5,4＇二正辛烷氧基金雀异黄素（7-difluorom＋hoxyl-5,4＇-di-n-octylgenistein,DFOG）诱导人肺癌A549细胞凋亡作用。方法体外培养A549细胞。二氟甲基化或烷基化得到一系列金雀异黄素衍生物。MTT法测定细胞活力;碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带;Western blot分析Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 9个金雀异黄素衍生物较先导化合物GEN具有更强的抗肿瘤活性。其中DFOG对A549细胞活性显示最强的抑制作用,IC50为3.9μmol·L^-1。DFOG（2.0、4.0和8.0μmol·L^-1）作用48h的细胞凋亡率依次增高。8.0μmol·L^-1DFOG处理A549细胞48h导致典型DNA梯形条带形成。8.0μmol·L1DFOG处理A549细胞6h、12h和24h,Bcl-2蛋白表达水平下降,而Bax蛋白表达上升。结论 DFOG诱导A549细胞凋亡作用与其增高Bax/Bcl-2比值有关。     

紫杉醇对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的:探讨紫杉醇在体外对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法测定紫杉醇对A549细胞增殖的影响;Hoechst33258检测紫杉醇作用48h后细胞凋亡情况;流式细胞仪检测药物作用48h后的细胞周期和凋亡率;Western Blot检测的Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果:紫杉醇抑制A549细胞增殖呈时效和量效关系;Hoechst33258检测紫杉醇作用48h后可见凋亡细胞;紫杉醇作用48h后药物组G2～M期细胞百分比均高于对照组(均P<0.01),药物组细胞凋亡率高于对照组(均P<0.01),且凋亡率随药物浓度增加而增加;Western Blot显示,不同浓度紫杉醇作用于A549细胞48h,Bax的表达随药物浓度增加而增加,Bcl-2的表达随药物浓度增加而减低。结论:紫杉醇能抑制肺腺癌A549细胞株的增殖,其抑制作用可能通过将细胞周期阻滞于G2～M期和通过上调Bax、下调Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡来实现的,并且紫杉醇抑制A549细胞增殖和诱导凋亡作用随药物浓度增加而增加。     

阿魏酸钠对脓毒症大鼠肾组织Bcl-2和Bax表达的影响

目的观察阿魏酸钠(活血化瘀中成药)对脓毒症大鼠肾脏细胞凋亡及Bcl-2、Bax的影响。方法用盲肠穿孔结扎术制作脓毒症模型;24只SD大鼠随机分为模型组、实验组、假手术组和正常组(均n=6);术后6 h处死大鼠;用光镜观察肾脏病理改变,用免疫组化法检测Bcl-2及Bax的表达。结果模型组Bax表达明显升高(P<0.01),见细胞凋亡;实验组Bax表达明显降低而Bcl-2表达明显升高(P<0.01),病理损伤有改善。结论阿魏酸钠通过下调Bax、上调Bcl-2的表达,提高Bcl-2/Bax比值,抑制肾小管上皮细胞凋亡。     

尾加压素Ⅱ对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及相关机制研究

目的：探讨尾加压素Ⅱ（U-Ⅱ）对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及相关机制。方法：将体外培养A549细胞分为正常对照组、顺铂组（25μg/mL）及U-Ⅱ＋顺铂组（10-7mol/L U-Ⅱ＋25μg/mL顺铂）,TUNEL法测定A549细胞凋亡,免疫细胞化学方法检测A549细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果：与正常对照组相比,顺铂组肺腺癌A549细胞的凋亡率明显增加,Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax表达明显升高（P〈0.01）;与顺铂组相比,U-Ⅱ则能够抑制A549细胞的凋亡,上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达（P〈0.01）。结论：U-Ⅱ可通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达从而抑制肺腺癌A549细胞凋亡。     

全反式维甲酸联合阿司匹林对体外抑制肺腺癌细胞株A549增殖和促凋亡的作用及其机制

目的：观察全反式维甲酸（ATRA）联合阿司匹林（ASA）体外抑制肺癌A549细胞增殖,促凋亡作用和机制。方法：体外培养人肺腺癌A549细胞,5,10 μmol·L^-1的ATRA单独及分别联合5,10 μmol·L^-1的ASA进行干预48 h、72 h后,MTT法检测细胞增殖抑制率;TUNEL法观测药物作用48 h后细胞凋亡状态;RT-PCR法检测药物作用后肺腺癌A549细胞COX-2 mRNA的表达;Western blot法检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2、COX-2和caspase-3蛋白的表达。结果： ATRA与ASA联用对A549增殖具有协同作用;TUNEL法结果显示ATRA可诱导A549细胞凋亡,与ASA联用凋亡率显著升高（P<0.05）;RT-PCR显示A579细胞中COX-2 mRNA呈现高表达状态,ASA可下调COX-2表达,ATRA无此作用;Western blot结果显示ATRA和ASA协同作用使A549细胞中Bcl-2、COX-2蛋白表达受到抑制,Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax值降低,对凋亡通路的影响大于单药作用（P<0.05）。结论： ASA联合ATRA可协同抑制肺腺癌细胞A549的增殖及以及促进其发生凋亡,其作用机制可能是ASA通过抑制COX-2蛋白表达,与ATRA共同通过Bcl/caspase通路诱导肿瘤凋亡实现的。     

微RNA-24对过氧化氢诱导的人脐静脉血管内皮细胞凋亡的影响及作用机制

目的探讨微RNA-24(miR-24)对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)存活、迁移和凋亡的影响及作用机制。方法通过转染miR-24高表达、miR-24抑制物(anti-miR-24)及其阴性对照慢病毒质粒(miR-24 NC)构建稳转细胞,3种细胞用H2O2500μmol·L^-1处理12 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,划痕实验检测细胞迁移率,Hoechst33258染色及流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-24,Bax,Bcl-2和胱天蛋白酶3 mRNA表达水平,Western印迹法和免疫细胞化学法检测Bax、Bcl-2和胱天蛋白酶3蛋白表达水平。结果与miR-24 NC组比,miR-24高表达组miR-24表达升高(P<0.05),而anti-miR-24组降低(P<0.05)。与正常对照组比,H2O2组细胞凋亡率增加(P<0.05)、细胞存活和迁移率降低(P<0.05),表明氧化损伤模型构建成功。与H2O2+miR-24 NC组比,H2O2+miR-24高表达组上述指标较H2O2+miR-24 NC组升高(P<0.05),促凋亡蛋白Bax和胱天蛋白酶3 mRNA与蛋白表达量增加,抑凋亡蛋白Bcl-2 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.05),而H2O2+anti-miR-24组可降低细胞凋亡率、增加细胞存活和迁移率,降低Bax和胱天蛋白酶3 mRNA与蛋白表达水平,增加Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论氧化应激状态下,miR-24可通过上调Bax、胱天蛋白3表达和下调Bcl-2蛋白表达,促进HUVEC凋亡和抑制其存活和迁移能力。     

牡丹苷A诱导人肺癌A549细胞凋亡的作用和机制

目的:研究牡丹苷A对人肺癌A549细胞株的作用以及其诱导人肺癌A549细胞株凋亡机制。方法:本研究采用MTT法检测牡丹苷A对体外人肺癌细胞株A549增殖率的影响。Annexin V/PI双标法检测牡丹苷A对A549凋亡率,蛋白免疫印迹法和细胞免疫细胞化学法分别检测牡丹苷A对A549细胞株PI3K,Akt,NF-κBp65,Bax,Bcl-2的表达,并采用PI3K/Akt/NF-κB通路的激动剂IGF-1和抑制剂wortmannin进一步探讨牡丹苷A对PI3K/Akt/NF-κB信号通路的作用。结果:牡丹苷A能够抑制A549的增殖,上调Bax蛋白的表达量,下调Bcl-2蛋白的表达量,Bcl-2/Bax比值显著降低,同时降低PI3K, NF-κBp65的蛋白表达,抑制Akt磷酸化。结论:牡丹苷A能够阻碍A549增殖,并促进其凋亡,其诱导凋亡的机制可能与抑制PI3K/Akt/NF-κB通路有关。     

珠子参总皂苷对H2O2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用

目的:观察珠子参总皂苷对H2O2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用,并探讨其作用机制.方法:Wistar乳鼠心肌细胞原代培养,用H2O2建立氧化应激损伤模型,然后用珠子参总皂苷(100,200 μg/mL)孵育24 h后,MTT法检测珠子参总皂苷对细胞活力的影响,流式细胞仪和Hoechst33258染色检测珠子参总皂苷对氧化应激诱导细胞凋亡及胞内ROS含量的影响,比色法测定心肌细胞Caspase-3、Caspase-9的活性,荧光定量PCR测定心肌细胞Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值.结果:珠子参总皂苷(100,200 μg/mL)能显著改善心肌细胞活性,有效保护线粒体膜电位的稳定,抑制心肌细胞凋亡和改善细胞形态,降低细胞内活性氧(ROS)含量;下调Bax mRNA表达,上调Bcl-2mRNA表达及Bcl-2与Bax的比值;降低H2O2所致新生大鼠心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的活性.结论:珠子参总皂苷对H2O2诱导心肌细胞凋亡有显著的抑制作用,其机制可能与其稳定心肌细胞膜、清除ROS及调节心肌细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3、Caspase 9表达有关.     

基于PI3K-Akt信号通路研究罗哌卡因对肺癌细胞A549细胞生物学功能的影响

目的探讨罗哌卡因(Ropivacaine)通过磷脂酰肌醇-3激酶(Phospoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,Akt)信号通路影响肺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭和凋亡。方法采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测(0、100、200和400μg/ml)罗哌卡因组肺癌细胞A549的增殖。将A549细胞分为对照组(未给药)和罗哌卡因组(400μg/ml),采用Transwell小室法分析细胞迁移和侵袭,流式细胞术评估细胞凋亡,免疫印迹实验(Western blot)测定周期蛋白依赖性激酶4(Cyclin-dependent kinases4,CDK4)、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloprotease 2,MMP-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated x protein,Bax)、PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。结果CCK-8结果显示,与0μg/ml罗哌卡因组比较,100、200和400μg/ml罗哌卡因组肺癌细胞A549的细胞存活率明显减少(P<0.05)。Transwell小室法结果表明,罗哌卡因组A549细胞的细胞迁移数和细胞侵袭数明显低于对照组(P<0.05)。流式细胞术结果发现,罗哌卡因组A549细胞的凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与对照组比较,罗哌卡因组A549细胞中CDK4、MMP-2、Bcl-2、p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平明显降低,Bax蛋白表达水平明显提高(P<0.05),而PI3K和Akt蛋白表达水平无明显变化。结论罗哌卡因可能通过抑制PI3K/Akt信号通路,进而抑制肺癌细胞A549的增殖、迁移和侵袭并促进其凋亡。     

Octylphenol induces apoptosis in cultured rat Sertoli cells

In this study, the effects of 4-tert-octylphenol (OP) were examined on the viability of rat cultured Sertoli cells using the MTT assay and OP-induced apoptosis was detected by transmission electron microscope (TEM), flow cytometric analysis and Hoechst staining. In addition, RT-PCR was used to analyze the levels of Bcl-2 and Bax mRNA. Bcl-2, Bax and caspase-3 protein expressions were determined by Western blot analysis. Sertoli cells were treated with OP from 30 to 60microM for 6-24h. Decreased viability of Sertoli cells and increased apoptosis occurred in a concentration- and a time-dependent manner. The expression of Bcl-2 was down-regulated, while the expression of Bax up-regulated. OP also down-regulated the expression of 32kDa procaspase-3, which was cleaved to generate active subunit (17kDa). These results suggest that OP may induce Sertoli cell apoptosis by regulation of Bcl-2/Bax and caspase-3 activation.     

重组人血管内皮抑制素促进肺癌细胞共培养体系中血管内皮细胞的凋亡机制研究

目的研究重组人血管内皮抑制素注射液(Endostar,恩度)促进与肺癌细胞A549共培养体系中的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡及其机制研究。方法通过四甲基偶氮唑蓝(MTT),评价恩度对HUVECs增殖抑制作用;以流式细胞术Annexin V-FITC测定细胞凋亡率;以免疫细胞化学法测定恩度对抑凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的影响;以Western blotting检测恩度对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。结果恩度能显著抑制肺癌细胞A549/HUVEC共培养体系中HUVEC的增殖;促进HUVECs凋亡;Annexin V-FITC测定显示10、20、40、80、100μg/mL浓度的恩度的凋亡率分别为(5.29±1.21)%、(8.33±0.62)%、(14.81±0.77)%、(21.87±0.96)%、(26.15±1.06)%;免疫细胞化学法和Western blotting检测显示恩度显著下调Bcl-2和上调Bax蛋白的表达。结论结果表明恩度能通过调控Bcl-2家族蛋白促进肺癌细胞与HUVEC共培养中血管内皮细胞的凋亡。