槐定碱对缺氧复氧星形胶质细胞炎症因子释放和细胞凋亡的影响

摘要：目的:研究槐定碱（sophoridine）对缺氧复氧星形胶质细胞炎症因子释放和细胞凋亡的影响及机制。方法:星形胶质细胞分成对照组、缺氧复氧（H/R）组、sophoridine低、中、高剂量组(10,20,40 mg·L-1)、sophoridine(40 mg·L-1)+pcDNA(阴性对照载体组、sophoridine(40 mg·L-1)+pcDNA-Toll样受体4（TLR4）（TLR4过表达载体）组。CCK-8法检测细胞增殖活性变化,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western blot法检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、TLR4蛋白表达,ELISA法检测细胞分泌的肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）变化。结果:与对照组比较,H/R组星形胶质细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6增多,TLR4蛋白水平升高（P<0.05）。与H/R组比较,sophoridine低、中、高剂量组星形胶质细胞增殖活性逐渐升高,细胞凋亡率逐渐降低,细胞中Bax蛋白表达逐渐减少,Bcl-2蛋白表达逐渐增多,细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6逐渐减少,TLR4蛋白水平逐渐降低（P<0.05）,且呈剂量相关性（P<0.05）。与sophoridine+pcDNA组比较,sophoridine+pcDNA-TLR4组星形胶质细胞中TLR4蛋白表达增多,细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6增多（P<0.05）。结论:槐定碱通过下调TLR4从而抑制缺氧复氧星形胶质细胞炎症因子的释放和细胞凋亡     

卵磷脂型二十碳五烯酸对细菌脂多糖所致急性肾损伤的影响

目的 探讨卵磷脂型二十碳五烯酸（EPA-PC）对细菌脂多糖（LPS）所致小鼠急性肾脏损伤的影响。方法 24只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、LPS染毒组和EPA-PC干预组，以400 mg/（kg·bw）剂量灌胃EPA-PC4周后，经腹腔注射LPS 10 mg/（kg·bw）染毒。称量并记录小鼠体质量和肾脏质量，计算肾系数；检测小鼠血清中血尿素氮（BUN）和肌酐（CRE）水平；观察肾脏组织病理变化、炎性细胞浸润情况以及活性氧水平；测定肾脏中肾损伤分子1（KIM-1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）、白介素6（IL-6）和NADPH氧化酶4（NOX4）mRNA表达水平；测定肾脏丙二醛（MDA）水平；过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）活性；谷胱甘肽（GSH）含量和总抗氧化能力（T-AOC）；检测肾脏NOX4蛋白表达水平。结果 与LPS染毒组相比，EPA-PC干预显著降低小鼠肾质量和肾系数；降低血清BUN和CRE含量，下调肾脏KIM-1、TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平，改善肾脏病理损伤、肾脏巨噬细胞和中性粒细胞浸润；降低肾脏活性氧水平和MDA含量，提高肾脏CAT活性、SOD活性、GSH水平以及总抗氧化能力；下调肾脏NOX4 mRNA和蛋白表达水平。结论 EPA-PC可通过下调NOX4表达改善炎症和氧化应激进而保护LPS所致小鼠急性肾损伤。     

复方积雪草有效组分干预肾小管上皮细胞Toll样受体4表达的实验研究

目的：探讨复方积雪草有效组分-积雪草苷／大黄素干预肿瘤坏死因子α（TNF—α）诱导的小鼠肾小管上皮细胞（mTEC）Toll样受体4（TLR4）mRNA及蛋白的表达水平。方法：采用mTEC,模型组用TNF—α 5ng／mL诱导,治疗组在TNF-α诱导的同时,以不同浓度的积雪草苷合大黄素进行干预,于24h后分别提取细胞RNA及上清,应用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）和流式细胞术（FCM）分别检测mTEC TLR4 mRNA和膜蛋白的表达。结果：正常mTEC具有TLR4 mRNA和蛋白表达,经TNF-α诱导后TLR4表达明显上调,当积雪草苷合大黄素干预浓度达4ug／mL＋0．4ug／mL时,能够抑制TLR4 mRNA及蛋白的表达水平。结论：复方积雪草有效组分能够抑制TNF-α上调所致的肾小管上皮细胞TLR4过度表达,从而缓解肾脏局部失控性炎症反应。     

黄芩苷对大鼠牙周炎牙龈组织中 TNF-αmRNA 和IL-6 mRNA 表达的影响

目的：观察黄芩苷对牙周炎大鼠牙龈组织中肿瘤坏死因子-α（ TNF-α） mRNA、白细胞介素-6（ IL-6） mR-NA表达的影响,探讨黄芩苷治疗牙周炎的治疗机制。方法选用50只8周龄SD大鼠,随机分成5组,每组10只,A组为正常对照组, B组为牙周炎组,C1、C2、C3组为黄芩苷治疗组,B,C1,C2,C3组建立牙周炎模型,治疗1周后处死,采用RT-PCR方法检测TNF-αmRNA、IL-6mRNA在5组大鼠牙龈组织中的表达水平。结果牙周炎组大鼠牙龈组织中TNF-αmRNA、IL-6mRNA表达强度显著高于正常对照组（ P ＜0,．05）,黄芩苷各治疗组大鼠牙龈组织中 TNF-αmRNA、IL-6mRNA表达强度均明显低于牙周炎组（ P ＜0．05）。结论黄芩苷可以降低牙周炎大鼠牙龈组织中TNF-αmRNA、IL-6mRNA的表达含量,并能改善大鼠牙周组织状况。     

消栓通脉颗粒调节Toll受体介导的炎症反应治疗深静脉血栓

目的探讨Toll样受体介导的炎症反应在下肢深静脉血栓(DVT)发病中的作用及消栓通脉颗粒治疗DVT的靶点与机制。方法 60例急性期DVT患者随机分为中西医结合组(结合组)30例和西药组30例。西药组给予尿激酶20万单位静滴,1次.d-1,低分子肝素钙4 100单位皮下注射,1次.d-1,均连续用药14 d。结合组在西药组基础上口服消栓通脉颗粒,每次10 g,2次.d-1,连续用药14 d。30例健康查体者为正常组。RT-PCR法检测治疗前后外周血单核细胞中TLR2、TLR4、IL-6、TNF-α、IFN-γmRNA表达,测量患肢肢围变化,观察静脉再通情况。结果与正常组比较DVT患者外周血TLR2、TLR4与IL-6、TNF-α、IFN-γmRNA表达均升高(P<0.05),且TLR2、TLR4 mRNA水平与IL-6、TNF-α、IFN-γmRNA水平呈正相关(P<0.05);结合组外周血TLR2、TLR4与IL-6、TNF-α、IFN-γmRNA表达较治疗前显著降低(P<0.05)。结论 Toll样受体介导的炎症反应可能在DVT形成中发挥着重要作用,消栓通脉颗粒通过靶向TLR2、TLR4,减少炎性细胞因子产生,保护血管内皮细胞,从而对DVT有治疗作用。     

清火胶囊对发热大鼠的解热作用及其机制研究

摘要：目的:探究清火胶囊对脂多糖所致大鼠发热模型的解热作用,并研究其作用机制。方法:60只SPF级SD健康大鼠按基础体温随机分为6组：正常对照组、模型组、阳性对照组(阿司匹林,0.125 g·kg-1)、清火胶囊高(1 g·kg-1)、中(0.5 g·kg-1)、低(0.25 g·kg-1)剂量组,每组10只。连续给药7 d,末次给药30 min后给予20μg·kg-1脂多糖溶液造模,记录造模后4 h内的大鼠体温变化,取大鼠血清测定血清白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量,取大鼠下丘脑测定环磷酸腺苷（cAMP）、下丘脑前列腺素E2（PGE2）以及下丘脑腹中隔区精氨酸加压素（AVP）水平。结果:造模后,清火胶囊高、中剂量组在造模后3、4 h的体温升高幅度低于模型组,低剂量组在4 h的体温升高幅度低于模型组（P<0.05）;清火胶囊高剂量组TNF-α、IL-6、 IL-1β水平均低于模型组,清火胶囊中剂量组TNF-α、IL-1β水平均低于模型组,清火胶囊低剂量组TNF-α水平均低于模型组（P<0.05）。清火胶囊各剂量组大鼠cAMP、PGE2水平均低于模型组（P<0.05）,AVP水平与模型组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论:清火胶囊能够降低发热大鼠体温,抗炎效果明显,其解热功效可能与降低各种炎症因子水平,抑制下丘脑发热介质PGE2与cAMP有关。     

金合欢素对糖尿病肾病大鼠肾损伤及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨金合欢素对糖尿病肾病（DN）大鼠肾损伤及Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）信号通路的影响。方法 通过高脂高糖饲料喂养及ip链脲佐菌素（STZ）建立DN大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组,金合欢素低、高剂量（40、80 mg ·kg^-1）组,金合欢素（80 mg ·kg^-1）＋脂多糖（LPS,0.1 mg ·kg^-1）组,缬沙坦（20 mg ·kg^-1）组,每组10只,并以正常喂养且不ip STZ的10只大鼠作为对照组。干预结束后,尾静脉取血,检测大鼠空腹血糖含量;收集大鼠24 h尿液,分析尿蛋白含量;腹部主动脉取血,ELISA法检测血清中血肌酐、血尿素氮水平及肿瘤坏死因子-α （TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平;分离双肾组织,透射电镜及HE染色检测肾组织损伤情况;Western blotting检测Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组肾组织严重受损,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著增加（P<0.05）;与模型组比较,缬沙坦和金合欢素低、高剂量组肾组织损伤得到缓解,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著降低（P<0.05）;与金合欢素高剂量组相比,金合欢素＋LPS组肾组织损伤加剧,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著增加（P<0.05）。结论 金合欢素通过抑制TLR4/NF-κB信号通路改善DN大鼠肾损伤。     

柴芩承气汤通过抑制TLR4/NF-κB p65通路减轻小鼠重症急性胰腺炎并发肝损伤

目的基于TLR4/NF-κB p65信号通路探讨柴芩承气汤(chaiqinchengqi decoction,CQCQD)对小鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)并发肝损伤的保护机制。方法昆明小鼠36只,随机分为3组(n=12),即对照组(Control),重症急性胰腺炎模型组(SAP)和柴芩承气汤治疗组(SAP+CQCQD)。腹腔注射20%L-精氨酸(3.3 g·kg-1,2次,间隔1 h)建立SAP模型,治疗组给予柴芩承气汤灌胃(19 g·kg-1·d-1)。造模后72 h观察胰腺、肝脏组织病理变化,检测血清内毒素含量,肝组织TLR4、p-NF-κB p65蛋白表达,及肝内炎性因子水平。结果与Control组相比,SAP组胰腺和肝脏可见明显的病理损伤,血清内毒素含量增多,肝组织TLR4、p-NF-κB p65表达增加,IL-6、TNF-α、MIP-1αmRNA水平升高。与SAP组相比,柴芩承气汤组胰腺和肝脏组织病理损伤减轻,血清内毒素含量降低,肝组织TLR4、p-NF-κB p65表达和IL-6、TNF-α、MIP-1α mRNA水平减少。 结论 柴芩承气汤可能通过抑制肝组织TLR4/NF-κB p65通路活化,降低促炎因子水平,从而减轻小鼠SAP并发肝损伤。     

依普利酮对糖尿病肾病大鼠的保护机制研究

目的 探讨依普利酮对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）大鼠的保护机制。方法 DN模型大鼠随机分成模型组、依普利酮组（40 mg·kg^-1）、阳性对照组（缬沙坦,20 mg·kg^-1）,另设正常组。灌胃给药8周。全自动生化分析仪检测24 h尿蛋白、血肌酐及血糖化血红蛋白水平;HE染色行肾组织病理形态学观察;ELISA检测肾组织IL-6、TNF-α和MCP-1水平;qPCR检测TLR4、NF-κB p65 mRNA水平,Western blot法检测肾组织TLR4、NF-κB p65蛋白水平。结果 与模型组比较,依普利酮组大鼠24 h尿蛋白、血肌酐及血糖化血红蛋白水平均明显下降（P<0.05或P<0.01）;肾组织病理变化有不同程度的改善;肾组织IL-6、TNF-α和MCP-1水平均明显下降（P<0.05或P<0.01）,TLR4、NF-κB p65 mRNA水平和TLR4、NF-κB p65蛋白水平明显下降（P<0.01）。结论 依普利酮能有效地改善DN大鼠的炎症水平,机制可能与下调IL-6、TNF-α、MCP-1、TLR4、NF-κB p65水平有关。     

Sirt1激动药白藜芦醇对低氧诱导视网膜病变小鼠Notch1通路的影响

摘要：目的:探讨沉默信息调节因子（Sirt1）激动药白藜芦醇对低氧诱导视网膜病变小鼠Notch1通路的影响。方法:120只BALB/cJ小鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、阳性对照组(羟苯磺酸钙,20 mg·kg-1)、白藜芦醇低(20 mg·kg-1)、中(40 mg·kg-1)、高(80 mg·kg-1)剂量组,每组20只。除正常对照组外其余各组小鼠置于低压舱,其大气压为406 mmHg,氧分压为85 mmHg,连续7 d期间阳性对照组和白藜芦醇各剂量组灌胃给予相应药物,模型组给予相同体积的生理盐水;正常对照组无任何处理措施。实验结束后,RETI-port视觉生理系统记录振荡电位（OPs）潜伏期、幅值,FACSCalibur检测小鼠视网膜细胞凋亡水平,RT-PCR法检测小鼠视网膜Sirt1、信号转导及转录激活蛋白3（STAT3）、Notch1 mRNA表达水平,ELISA法检测小鼠视网膜Sirt1、STAT3、Notch1蛋白表达水平及血管内皮生长因子（VEGF）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结果:与模型组比较,阳性对照组及白藜芦醇组各剂量组小鼠网膜OPs幅值、Sirt1 mRNA及蛋白表达水平显著升高,网膜细胞凋亡数目、OPs潜伏期、STAT3、Notch1 mRNA及蛋白表达水平,VEGF、IL-6、TNF-α水平显著降低（P<0.05）,且白蔾芦醇组各组呈剂量相关性（P<0.05）。白藜芦醇低、中剂量组与阳性对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。Sirt1 mRNA及蛋白与STAT3 mRNA及蛋白、Notch1 mRNA及蛋白、VEGF、IL-6、TNF-α的负相关关系明显（P<0.05）。模型组视网膜各层细胞排列紊乱,结构不清晰,可见炎症细胞浸润,外核层细胞脱落神经节细胞紊乱,血管内皮细胞增生;阳性对照组及白藜芦醇高剂量组小鼠视网膜结构有明显改善。结论:白藜芦醇能减轻低氧诱导视网膜病理损伤,其机制与白藜芦醇通过Sirt1依赖性方式抑制STAT3、Notch1诱导的细胞因子VEGF、IL-6、TNF-α的过度表达有关。     

天麻多糖对脂多糖诱导抑郁小鼠的作用及机制研究

摘要：目的:探究天麻多糖（GEPs）对脂多糖（LPS）诱导抑郁小鼠的作用及机制。方法:将56只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型组、GEPs低、中、高剂量组(50, 100, 200 mg·kg-1)、氟西汀对照组(2.6 mg·kg-1)及圣·约翰草对照组(145.6 mg·kg-1),每组8只。各组预给药2周,第15天除正常对照组腹腔注射生理盐水外,其余各组腹腔注射LPS(1 mg·kg-1)建立抑郁模型。24 h后采用行为学实验评价GEPs对LPS诱导抑郁小鼠的改善作用,尼氏染色观察海马CA3区神经元变化,RT-PCR检测海马中细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β） mRNA水平。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠水平运动得分降低（P<0.01）,游泳不动时间增加（P<0.05）,海马中TNF-α和IL-1βmRNA水平升高（P<0.01）,海马CA3区尼氏体变小且数量减少,染色变浅。与模型组比较,GEPs低、中剂量组、氟西汀组以及圣·约翰草组水平运动得分增加（P<0.05或P<0.01）;GEPs 3个剂量组、氟西汀组以及圣·约翰草组游泳不动时间缩短（P<0.05或P<0.01）;GEPs 3个剂量组、圣·约翰草组TNF-α和IL-1βmRNA水平下降（P<0.01）;各给药组尼氏体数量均有所增加,体积变大,染色变深。结论:GEPs可以改善LPS诱导的小鼠抑郁样行为,其潜在作用机制可能与降低海马中细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达、改善海马神经元功能有关。     

甜菜碱对复合致病因素诱导肝硬化大鼠的作用及机制研究

目的:探讨甜菜碱对复合致病因素诱导肝硬化大鼠的保护作用及可能的机制。方法:72只雄性SD大鼠随机分为空白对照组,甜菜碱干预的对照组,肝硬化模型组和肝硬化模型甜菜碱干预组。各组动物分别于造模第4周末、6周末和8周末处死取材。Elisa法检测大鼠血浆中ALT、内毒素和肝组织匀浆中TNF-α、IL-6水平;肝组织切片行HE染色,NF-κB p65免疫组化染色;实时荧光定量PCR法和Western blot法分别检测肝组织中Toll样受体4(TLR4)mRNA、NF-κB mRNA和TLR4蛋白的表达。结果:与相应的空白对照组相比,肝硬化模型组:血浆中ALT、内毒素水平均随病程进展逐渐显著升高(P<0.05);肝组织中TNF-α、IL-6水平均显著升高(P<0.05),TLR4mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.05),NF-κB mRNA的表达显著升高(P<0.05),NF-κB p65核转位也显著增多(P<0.05),它们的变化趋势为6周水平最高,4周次之,8周最低。与相应的肝硬化模型组相比,肝硬化模型甜菜碱干预组:血浆中ALT、内毒素水平均显著降低(P<0.05);4周和6周组肝组织中TNF-α、IL-6水平均显著降低(P<0.05);肝组织中TLR4 mRNA和蛋白均显著降低(P<0.05),NF-κB mRNA的表达显著降低(P<0.05),NF-κB p65核转位显著降低(P<0.05)。结论:甜菜碱可能通过抑制TLR4/NF-κB信号途径,有效减轻肝脏炎症和纤维化程度,发挥保护肝脏的作用。     

金茵清热口服液对人PBMC中TLR2信号通路的调节机制研究

目的：研究金茵清热口服液（JYQR）对人外周血单个核细胞（PBMC）中Toll样2受体（TLR2）信号通路免疫调节作用机制。方法：体外分离、培养人PBMC,设空白对照组和JYQR组,JYQR组加入JYQR刺激PBMC,与空白组经37℃,5% CO₂培养24 h后,分别提取各组PBMC中总RNA、总蛋白、细胞上清液,RT-PCR和Western Blot法检测空白对照组和JYQR组PBMC中相关信号分子TLR2、MyD88、IRAK4、TRAF6、IRF3 mRNA和蛋白的表达情况,ELISA法检测细胞因子IL-1α、IL-6、TNF-α、IFN-α的分泌水平;分别设空白对照组：不作处理;JYQR组：JYQR 2.015 mg·mL^-1;TLR2激动剂组：Pam3CSK4 300 ng·mL^-1;TLR2抑制剂组：OxPAPC 30 μg·mL^-1+JYQR 2.015 mg·mL^-14组,提取核蛋白和浆蛋白,Western Blot法检测IRF3和NF-κB p65的核转位情况。结果：与空白对照组相比,JYQR组中TLR2、IRAK4、TRAF6、IRF3 mRNA表达水平分别上调5.93倍、1.77倍、2.95倍、1.43倍（^*P<0.05,^**P<0.01）;MyD88、TRAF6蛋白的表达分别上调1.26倍、1.24倍（^*P<0.05）,IRAK4和IRF3的相对表达水平差异无统计学意义;细胞因子IL-1α、IL-6的表达下调55%、61%,TNF-α、IFN-α的分泌水平上调4.3倍、2.9倍（^*P<0.05,^**P<0.01）。JYQR预处理PBMC后,IRF3及NF-κB核转位增加,但是经过TLR2抑制剂预处理后,IRF3和NF-κB的核转位减弱;相反,TLR2激动剂预处理可以进一步上调IRF3和NF-κB的核转位。结论：金茵清热口服液对人PBMC中TLR2信号通路的作用机制可能是通过MyD88依赖型信号通路激活中、下游的IRAK4、TRAF6、IRF3以及NF-κB调控终端效应因子发挥免疫调节作用。     

二氢杨梅素对异丙肾上腺素诱导小鼠心肌纤维化的影响及机制研究

目的：初探二氢杨梅素（DMY）对异丙肾上腺素（ISO）诱导的小鼠心肌纤维化的作用及机制。方法：将C57BL/6小鼠随机分成正常对照组、模型组、DMY高、低剂量组、阳性对照药美托洛尔组。模型组小鼠背部皮下注射ISO,首次剂量为5 mg·kg-1·d-1,之后以2.5 mg·kg-1·d-1维持至30天,诱导心肌纤维化模型。给药组造模同时给与药物灌胃治疗。30天后,小鼠处死取心脏;检测血清中LDH、CK、TNF-α、IL-6含量;心室肌组织行Masson染色;检测心肌组织羟脯氨酸、丙二醛（MDA）含量、抗氧化物酶SOD和GSH-Px活性。检测心肌组织中TNF-α和IL-6 mRNA表达,Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA、Nrf2、p65-NF-κB及TGF-β1信号通路蛋白表达。结果：与正常组相比,模型组小鼠血清LDH和CK含量、心重指数均显著增加,心肌出现明显纤维化,心肌组织中羟脯氨酸含量显著增加;Ⅰ、Ⅲ型胶原和α-SMA蛋白表达显著增高。与模型组相比,DMY能减轻心肌损伤及纤维化程度。同时,DMY降低心肌组织中TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达,减少心肌中MDA含量,增强抗氧化物酶SOD和GSH-Px活性,增加Nrf2的入核。此外,DMY减少TNF-α、IL-6在血清中含量和在心肌中mRNA表达,减少p65-NF-κB入核。结论：本研究表明,二氢杨梅素能显著减轻ISO诱导的小鼠心肌纤维化,其机制可能与其干预TGF-β1信号通路、抗氧化及抗炎作用有关。     

抑制NF-κB信号通路对顺铂致肺癌大鼠肾损伤的保护作用及其分子机制研究

摘要：目的:探索抑制核转录因子（NF）-κB信号通路对顺铂致肺癌大鼠肾损伤的保护作用及其分子机制研究。方法:将50只大鼠随机分为5组:正常对照组、肺癌组（Lewis细胞）、顺铂组(Lewis细胞+腹腔注射顺铂溶液5 mg·kg-1)、吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）组(Lewis细胞+腹腔注射PDTC 25 mg·kg-1)、PDTC+顺铂组（Lewis细胞+腹腔注射顺铂和PDTC）,每组10只。末次给药后,生化分析仪检测血清肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、胱抑素C（Cys C）、尿液肾损伤分子-1（Kim-1）水平,ELISA法测定肾组织中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平,RT-PCR检测肾组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6水平,Western Blotting检测核因子2相关因子2（Nrf2）、血红素氧合酶-1（HO-1）、NF-κB p65、p-IκBα/IκBα的表达,HE染色检测肾组织损伤。结果:与肺癌组相比,顺铂组大鼠血SCr、BUN、Cys C、尿Kim-1水平及肾组织MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA、Nrf2、HO-1、NF-κB p65和p-IκBα/IκBα的表达明显升高（P<0.05）,肾组织SOD活性和GSH-Px活性明显降低（P<0.05）;与顺铂组相比,PDTC+顺铂组大鼠血SCr、BUN、Cys C、尿Kim-1水平及肾组织MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA、NF-κB p65和p-IκBα/IκBα的表达明显明显降低（P<0.05）,肾组织SOD、GSH-Px、Nrf2和HO-1的表达明显升高（P<0.05）。结论:抑制NF-κB信号通路可以降低炎症因子水平,还可以激活Nrf2的表达,降低氧化应激水平,保护顺铂致肺癌大鼠的肾组织损伤。     

山奈酚通过抑制NLRP3炎症小体介导的脂肪组织炎症 改善db/db小鼠胰岛素抵抗发生

目的： 探讨山奈酚能否通过调控肥胖小鼠脂肪组织炎症改善胰岛素抵抗发生并研究作用机制。方法：db/m小鼠作为对照组，db/db雄性小鼠随机分为模型组、二甲双胍组（0.15 g·kg-1·d-1）和山奈酚组（50 mg·kg-1·d-1）。连续灌胃给药6周，每周记录小鼠体重，6周后进行葡萄糖耐量试验、胰岛素耐量试验、皮下和附睾白色脂肪组织质量测定；HE染色观察脂肪组织形态学变化，免疫组化法观察巨噬细胞向脂肪组织的浸润程度及巨噬细胞标志物F4/80的表达，实时荧光定量PCR检测TNF-α和IL-18以及Arg-1和IL-10的mRNA表达，蛋白质免疫印迹试验检测NLRP3、pro-caspase1、cle-caspase1和IL-1β表达。结果：与模型组相比，山奈酚能够显著抑制db/db小鼠脂肪质量增加，抑制脂肪细胞肥大。山奈酚组小鼠脂肪组织巨噬细胞浸润减少，TNF-α和IL-18 mRNA表达减少，Arg-1和IL-10 mRNA表达增加；山奈酚治疗能够抑制小鼠附睾脂肪组织NLRP3、caspase1以及IL-1β表达，抑制NLRP3炎症小体激活。结论：山奈酚可以通过抑制NLPR3炎症小体介导的脂肪组织炎症改善db/db小鼠胰岛素抵抗的发生。     

TNF-αsiRNA表达载体的构建及其对胶原性关节炎大鼠TNF-α及IL-1的影响

目的观察肿瘤坏死因子（TNF）-α的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体对胶原性关节炎（CIA）大鼠的治疗作用。方法构建TNF-α的siRNA真核表达载体并注射CIA大鼠,随机分为模型组、空载体组、TNF-α-siRNA1组和TNF-α-siRNA2组,每组6只,各组分别尾静脉注射磷酸盐缓冲液（PBS）、pGFP-V-RS空载体、TNF-α-siRNA1真核表达载体和TNF-α-siRNA2真核表达载体。另设6只未造CIA模型只注射PBS的大鼠为空白组。于注射后1、5、9和13 d采血,ELISA检测血清中IL-1的变化;注射后13 d处死大鼠,RT-PCR检测TNF-αmRNA的表达水平。结果注射第1、5、9和13天模型组大鼠血清中IL-1的表达水平高于空白组（P<0.05）,注射第1、5和9天TNF-α-siRNA1组和TNF-α-siRNA2组IL-1的表达水平低于模型组和空载体组（P<0.05）;注射后第13天模型组大鼠全血中TNF-αmRNA的表达水平明显高于空白组（P<0.05）,TNF-α-siRNA1组和TNF-α-siRNA2组mRNA表达水平低于模型组和空载体组（P<0.05）。结论 TNF-α的特异性siRNA能抑制TNF-αmRNA和IL-1的表达水平,从而为类风湿关节炎的基因治疗提供实验依据。     

虫草菌丝对慢性肾功能衰竭大鼠微炎症反应的影响

目的考察慢性肾功能衰竭(CRF)模型大鼠肾脏组织NF-κB-p65与血清C反应蛋白(CRP)和白细胞介素6(IL-6)浓度的关系,并探讨虫草菌丝对NF-κB表达的抑制作用及其用于治疗微炎症反应的可能性。方法 50只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)阳性对照组、虫草菌丝3和6g·kg-1治疗组。建模前1d各组大鼠尾静脉抽血,并留取24h尿液,第2天假手术组行假手术,其余4组切除右肾上、下两极约70%肾脏;10d后假手术组再次进行"假手术",其余4组再经左腹壁切除左肾,制备5/6肾切除CRF大鼠模型。建模2周后,PDTC组隔日ip给予PDTC0.01g·kg-1,虫草菌丝治疗组分别ig给予虫草菌丝3和6g·kg-1,每天1次,共12周;假手术组和模型组ig给予等体积生理盐水;给药12周后各组留取血样和24h尿液,处死大鼠取肾。ELISA法检测血清CRP和IL-6浓度,全自动生化仪检测血清肌酐浓度,考马斯亮蓝法测定24h尿蛋白,实时荧光定量RT-PCR法和免疫组织化学法检测肾组织NF-κB-p65mRNA和蛋白表达。结果①建模前,各组大鼠24h尿蛋白和血清肌酐浓度无明显差异;建模14周后,模型组、PDTC组、虫草菌丝3和6g·kg-1组24h尿蛋白和血清肌酐浓度较建模前均明显升高(P<0.01),模型组较假手术组亦明显升高(P<0.01);模型组大鼠肾组织均出现肾小球球囊粘连、局灶节段性硬化及肾小管灶状萎缩和代偿性肥大等CRF病理改变;给药12周后,PDTC组、虫草菌丝3和6g·kg-1组大鼠肾组织病理变化与模型组比较无明显改善,虫草菌丝3和6g·kg-1组24h尿蛋白和血清肌酐浓度明显降低(P<0.01)。②给药12周后,模型组与假手术组比较,血清CRP和IL-6浓度及肾组织NF-κB-p65mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.01),PDTC组、虫草菌丝3和6g·kg-1组与模型组比较均明显降低(P<0.01),虫草菌丝6g·kg-1组比3g·kg-1组降低更为明显(P<0.05)。③各组肾组织NF-κB-p65mRNA表达与血清CRP和IL-6浓度进行直线相关分析结果表明,假手术组肾脏NF-κB-p65mRNA表达与血清CRP和IL-6浓度之间无相关性,其余4组肾组织NF-κB-p65mRNA表达与血清CRP和IL-6浓度明显正相关(P<0.05,P<0.01)。结论 CRF大鼠肾脏NF-κB-p65表达与血清CRP和IL-6浓度正相关;虫草菌丝可抑制CRF大鼠肾脏NF-κB-p65mRNA和蛋白表达,对CRF大鼠微炎症反应具有一定的治疗作用。     

桂芍子喘颗粒对卵蛋白所致支气管哮喘小鼠的药效学研究

摘要：目的:研究桂芍子喘颗粒对卵蛋白（OVA）所致支气管哮喘小鼠药效学的影响。方法:84只SPF级BALB/c小鼠随机分为7组:正常对照组、模型组、桂芍子喘颗粒低(0.93 g·kg-1)、中(1.86 g·kg-1)、高(3.72 g·kg-1)剂量组、醋酸地塞米松组(0.63 mg·kg-1)、六君子丸+玉屏风颗粒组(2.5 g·kg-1+2.1 g·kg-1),每组12只。除正常对照组外,其余各组小鼠采用OVA建立支气管哮喘模型。建模第22天各组灌胃给药,正常对照组和模型组给予等量蒸馏水,1次/d,连续给药7 d,同时给予OVA溶液雾化刺激。第28天雾化刺激后,采用肺功能仪检测气道反应性; ELISA法检测血清免疫球蛋白E（IgE）、肺组织白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-5（IL-5）、白细胞介素-17（IL-17）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（ECP）水平;并进行肺泡灌洗液（BALF）中白细胞（WBC）和嗜酸性粒细胞（EOS）计数及肺组织病理学观察。结果:与正常对照组相比,模型组气道阻力升高,顺应性降低,IgE、IL-4、IL-17、TNF-α、ECP水平升高,病理损害明显,病理评分升高（P<0.05或P<0.01）。桂芍子喘颗粒可降低OVA所致支气管哮喘小鼠的气道阻力,提高气道顺应性;降低IgE、IL-4、IL-5、IL-17、TNF-α、ECP水平;减少肺泡灌洗液WBC和EOS的数量,减轻肺组织病理损伤（P<0.05或P<0.01）。结论:桂芍子喘颗粒对OVA所致支气管哮喘小鼠气道反应性、炎症反应及肺组织病理学损害具有改善作用。     

口腔扁平苔藓病灶中Toll样受体4与TNF-α的表达

目的探讨TLR4、TNF-α在口腔扁平苔藓(OLP)发病中的可能作用。方法采用免疫组化法检测OLP组与正常对照组口腔黏膜蜡块标本中TLR4、TNF-a的表达;采用q RT-PCR法检测TLR4的基因表达。结果OLP组中的TLR4、TNF-α蛋白及TLR4 mRNA表达均显著高于对照组(P<0.05);TNF-α蛋白与TLR4蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论 OLP病灶部位TLR4 mRNA表达激活,TLR4、TNF-α表达增多,与OLP局部炎症和破坏的迁延不愈有关。