异槲皮苷对MC3T3-E1成骨细胞增殖与分化的影响作用

目的研究异槲皮苷对体外培养MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化的影响作用。方法以细胞矿化结节染色鉴定MC3T3-E1成骨细胞株骨矿化功能,以MTT法测定成骨细胞的增殖率,以试剂盒法测定细胞内碱性磷酸酶(ALP)的活性。结果在终浓度为1.08×10-6mol·L-1、1.08×10-7mol·L-1、1.08×10-8mol·L-1时,异槲皮苷能极显著促进MC3T3-E1成骨细胞增殖(P<0.01);终浓度为1.08×10-6mol·L-1时,异槲皮苷作用96h后能极显著提高细胞内ALP的活性(P<0.01)。结论一定浓度的异槲皮苷能够显著促进MC3T3-E1成骨细胞增殖和分化。     

葛根素对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化及TRPM3 mRNA表达的影响

目的观察葛根素对小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化及TRPM3 mRNA表达的影响。方法分别采用CCK-8法、碱性磷酸酶(ALP)活性、茜素红染色测定葛根素对MC3T3-E1细胞增殖、成骨分化、矿化作用的影响。流式细胞术检测葛根素对MC3T3-E1细胞周期及细胞内钙离子浓度的影响。RT-PCR检测葛根素对TRPM3基因m RNA表达的影响。结果 0.1、1、10μmol·L~(-1)葛根素能明显促进MC3T3-E1细胞增殖,使G1期细胞比例减少,G_2+S期细胞比例增加,其中0.1μmol·L~(-1)浓度效果最为明显;与正常对照组相比较,0.1μmol·L~(-1)葛根素组细胞的ALP活性和矿化结节面积均明显提高;0.1μmol·L~(-1)葛根素组细胞的TRPM3 m RNA表达水平和细胞内钙离子浓度明显降低。结论葛根素可促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化和矿化,可降低TRPM3 mRNA表达水平和细胞内钙离子浓度。     

地黄活性成分梓醇对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响

目的检测地黄活性成分梓醇对成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。方法制备不同浓度地黄活性成分梓醇提取液。以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为药物筛选的细胞模型;用MTT法测定不同浓度的梓醇溶液的促细胞增殖作用;采用ALP活性和骨钙素定量检测分别观察不同浓度的梓醇溶液的促细胞分化作用;以Vonkos-sa钙化染色法了解不同浓度的梓醇溶液的促细胞钙化作用。结果梓醇在1×10-7～1×10-9mol·L-1浓度范围内培养24及48h促进成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-148及72h提高成骨细胞株MC3T3-E1细胞内碱性磷酸酶的活性。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-1培养8及12d时能明显促进成骨细胞MC3T3-E1骨钙素合成和分泌。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-1培养19d时成骨细胞株MC3T3-E1细胞的矿化结节(mineralized bone nodular structure,MBNS)数目增多。结论梓醇可以提高成骨细胞株MC3T3-E1增殖和分化能力,梓醇可能是地黄治疗骨质疏松作用的活性成分之一。     

马卡列丙中1,6,8-三羟基-2,7-二甲氧基-3-甲基蒽醌对成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的 探究马卡列丙中蒽醌类成分1,6,8-三羟基-2,7-二甲氧基-3-甲基蒽醌对成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。方法 以MC3T3-E1成骨细胞作为对象研究，设立阴性对照组(二甲基亚砜)、阳性对照组(雌二醇)和药物组，采用四甲基偶氮唑盐比色法检测不同质量浓度1,6,8-三羟基-2,7-二甲氧基-3-甲基蒽醌对MC3T3-E1成骨细胞增殖活性的影响，选出增殖活性最强的浓度进行后续研究，采用碱性磷酸酶染色法测定1,6,8-三羟基-2,7-二甲氧基-3-羟基蒽醌对MC3T3-E1成骨细胞的分化程度，茜素红染色评估1,6,8-三羟基2,7-二甲氧基-3-羟基蒽醌对MC3T3-E1成骨细胞矿化能力的影响。结果 药物组MC3T3-E1成骨细胞在1,6,8-三羟基-2,7-二甲氧基-3-甲基蒽醌质量浓度为100 nmol/L时增殖活性最高，选用质量浓度为100 nmol/L的1,6,8-三羟基-2,7-二甲氧基-3-甲基蒽醌能促进MC3T3-E1成骨细胞的分化和矿化。结论 1,6,8-三羟基-2,7-二甲氧基-3-甲基蒽醌能显著促进成骨细胞增殖、分化和矿化水平，为马卡列丙的促骨折愈合作用提供了理论...     

小分子肽(KP)对小鼠成骨前体细胞MC3T3-E1增殖分化及NF-κB表达的影响

目的研究小分子肽(KP)对小鼠成骨前体细胞MC3T3-E1增殖分化及NF-κB p50、p65表达的影响。方法 MTT法检测不同深度KP(0.01、0.1、1.0、10.0、25.0、50.0、100 mg.L-1)对MC3T3-E1生长的影响:PNPP法检测KP作用9、12、15 d后碱性磷酸酶活性:紫外分光光度法检测KP作用12、24 d后细胞中羟脯氨酸的含量;茜素红染色检测矿化结节;Western blot检测成骨矿化过程中细胞不同阶段NF-κB亚基p65和p50的表达。结果浓度为25.0、50.0、100mg.L-1的KP能促进MC3T3-E1细胞增殖生长;50、100 mg.L-1的KP作用细胞9、12、15 d和12、24 d后能分别使细胞中的碱性磷酸酶活性及羟脯氨酸含量高于对照组;30 d后KP组出现典型的矿化骨结节;作用3、12、24、30 d后细胞中p65及p50表达均出现不同程度下降。结论小分子肽(KP)可能是通过抑制NF-κB活性来促进MC3T3-E1细胞增殖分化。     

成骨生长肽对MC3T3-E1成骨细胞增殖的影响及其可能机制

目的探讨成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)对MC3T3-E1成骨细胞的增殖的影响及其机制。方法常规培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,分为OGP高、中、低剂量组(1×10-8、1×10-10、1×10-12mol/L)以及对照组,利用MTT法检测OGP作用24 h、48 h以及72 h对MC3T3-E1成骨细胞增殖作用,利用免疫化学染色法检测成骨细胞I型胶原蛋白水平,ELISA法检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)含量。结果在24 h时,各剂量OGP对MC3T3-E1的增殖无影响;作用48、72 h,OGP 10-10mol/L以及OGP 1×10-8mol/L显著促进MC3T3-E1细胞增殖(P<0.05),其中OGP 1×10-8mol/L 48 h促进MC3T3-E1细胞增殖作用最强。作用24 h,各组成骨细胞I型胶原蛋白IOD值差异均无统计学意义;作用48 h,OGP 1×10-8mol/L组细胞I型胶原蛋白IOD值显著高于对照组(P<0.05);作用72 h,OGP 1×10-10mol/L组以及OGP 1×10-8mol/L组细胞I型胶原蛋白IOD值均显著高于对照组(P<0.05)。作用24 h,各组成骨细胞OPN OD值差异均无统计学意义;作用48 h、72 h,OGP 1×10-10mol/L组以及OGP1×10-8mol/L组细胞OPN OD值显著高于对照组(P<0.05)。结论 OGP能够明显促进MC3T3-E1成骨细胞的增殖,其可能的作用机制是增加成骨细胞I型胶原蛋白的表达以及OPN的表达,且其作用与浓度密切相关,在1×10-8mol/L时,其促成骨细胞增殖作用最强。     

低分子量可溶性壳寡糖对MC3T3-E1成骨细胞增殖和分化的影响

目的探讨低分子可溶性壳寡糖对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖和分化作用的影响及机制。方法培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,将细胞分为高、中、低浓度壳寡糖组(1 000、500和250μg.mL-1)、过氧化氢(H2O2)模型组、壳寡糖预处理过氧化氢组和对照组(只加同体积的培养液);采用MTT法、流式细胞术和碱性磷酸酶(ALP)的测定观察不同浓度的壳寡糖对成骨细胞的增殖和分化作用,观察壳寡糖对氧化损伤成骨细胞模型的作用.结果与结论低分子可溶性壳寡糖能显著提高小鼠成骨细胞MC3T3-E1的增殖和分化;降低细胞的凋亡率,使细胞ALP的活性提高;能减轻过氧化氢对细胞的损伤,提高细胞的增殖和分化。其作用机制可能与壳寡糖的抗氧化作用有关。     

仙茅提取物对小鼠成骨细胞增殖的影响

目的观察仙茅对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖的影响。方法将稀释成不同梯度浓度的仙茅提取物与成骨样细胞MC3T3-E1共同体外培养,以四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测细胞的增殖。结果仙茅低浓度组(1∶1500)增殖率为6.0%,对MC3T3-E1细胞增殖没有影响;中浓度组(1∶1000)增殖率21.7%,对细胞增殖影响明显(P<0.05);高浓度组(1∶500)增殖率是51.9%(P<0.05);极高浓度组(1∶250)增殖率是66.3%(P<0.01)。结论在体外,仙茅提取物能明显促进MC3T3-E1细胞的增殖。     

重组成骨蛋白-1在钛合金微粒环境下对MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化、矿化的影响

目的在钛-6铝-4钒(Ti-6Al-4V)合金微粒环境下观察重组成骨蛋白-1(recombinant OP-1,r OP-1)对成骨细胞的影响,为防治关节假体无菌性松动提供新的治疗途径。方法根据小鼠颅顶骨前成骨细胞亚克隆14(MC3T3-E1)中是否加入Ti-6Al-4V微粒和r OP-1,分为微粒组(5、10、15μg/m L Ti-6Al-4V)、处理组(微粒组加入200 ng/m L r OP-1)、阳性组(加入200ng/m L r OP-1)和对照组,检测各组24、72、120 h MC3T3-E1细胞增殖能力、72 h碱性磷酸酶(akaline phosphatase,AKP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)mRNA的表达,及120 h成骨细胞的矿化能力。结果 1r OP-1无促进Ti-6Al-4V微粒环境下成骨细胞增殖能力,与微粒组比较,差异无统计学意义(P>0.05);2r OP-1可提高成骨细胞分化,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);同时逆转Ti-6Al-4V微粒抑制成骨细胞分化,与微粒组比较差异有统计学意义(P<0.05);3茜素红S染色后Ti-6Al-4V微粒钙结节数量随着浓度增加逐渐降低,和微粒组比较,加入r OP-1后钙结节数量呈增多趋势。结论 Ti-6Al-4V微粒环境下,r OP-1无提高成骨细胞增殖能力,能提高细胞分化矿化能力,r OP-1可以作为潜在治疗关节假体无菌性松动一种方法。     

白藜芦醇对LPS诱导的MC3T3-E1成骨细胞的骨保护作用

目的 探讨白藜芦醇对脂多糖(LPS)诱导的MC3T3-E1成骨细胞的骨保护作用.方法 采用CCK-8法检测白藜芦醇不同浓度下MC3T3-E1成骨细胞的细胞增殖活性,对硝基苯磷酸盐法检测白藜芦醇不同浓度下MC3T3-E1成骨细胞ALP活性.将MC3T3-E1成骨细胞分为空白组(基础培养基)、对照组(LPS 2 μg/mL)和实验组(LPS 2μg/mL+白藜芦醇20 μmol/L).采用qRT-PCR检测三组成骨相关基因Runx2、ALP、骨钙素(OCN)和骨桥蛋白(OPN)mRNA表达,Western blot法检测三组细胞沉默调节蛋白1(SIRT1)蛋白表达.结果 白藜芦醇20 μmol/L是MC3T3-E1成骨细胞最适成骨浓度(P＜0.05).与空白组比较,实验组成骨相关基因Runx2、ALP、OCN和OPN mRNA表达水平和SIRT1蛋白表达水平均降低(P＜0.05);与对照组相比,实验组成骨相关基因Runx2、ALP、OCN和OPN mRNA表达水平和SIRT1蛋白表达水平升高(P＜0.05).结论 白藜芦醇能够通过提高Runx2、ALP、OCN、OPN和SIRT1相关成骨因子的表达对LPS诱导的MC3T3-E1成骨细胞发挥骨保护作用.     

多巴胺毒性代谢产物对前成骨细胞的增殖、分化、矿化及凋亡的影响

摘要：目的:探究多巴胺的毒性代谢产物3,4-二羟基苯乙醛（DOPAL）对前成骨细胞增殖、分化、矿化及凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:培养MC3T3-E1前成骨细胞,将细胞分为对照组及不同浓度的DOPAL加药组,采用CCK-8检测DOPAL对前成骨细胞增殖的影响;qRT-PCR检测成骨细胞标志因子mRNA相对表达;茜素红染色检测其对成骨细胞骨矿化结节的影响;Tunel及Western Blot检测DOPAL对前成骨细胞凋亡的影响;Western Blot检测α-突触核蛋白（α-S）蛋白相对表达。结果:当DOPAL的加药浓度≥0.1μmol·L-1时,对MC3T3-E1前成骨细胞增殖有显著的抑制作用,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。与对照组相比,DOPAL各浓度组的成骨细胞标志因子mRNA相对表达显著下调（P<0.05或P<0.01）,细胞凋亡标志因子cleaved-caspase-3蛋白相对表达、细胞凋亡率、α-S蛋白相对表达显著升高（P<0.01）;DOPAL 0.1μmol·L-1和0.5μmol·L-1两个浓度组以上各指标差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。未加入骨诱导剂的对照组,并未出现矿化结节;与骨诱导组相比,DOPAL 0.1μmol·L-1和0.5μmol·L-1组抑制MC3T3-E1细胞分化成熟。结论:DOPAL抑制前成骨细胞的增殖、分化及矿化作用,且促进前成骨细胞的凋亡,可能与前成骨细胞中α-S蛋白相对表达增加从而聚集形成有神经毒性的寡聚体有关,该实验为在体研究奠定基础。     

卡托普利对MC3T3-E1细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的观察卡托普利对MC3T3-E1细胞增殖、分化和Ⅰ型胶原基因表达水平影响。方法在MC3T3-E1细胞中加入不同浓度的卡托普利,应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、RT-PCR的方法观察卡托普利对MC3T3-E1细胞的增殖、碱性磷酸酶活性和Ⅰ型胶原mRNA表达的影响。结果 10-11 mol.L-1浓度的卡托普利作用24 h能明显促进MC3T3-E1细胞增殖,作用3 d能明显促进MC3T3-E1细胞表达碱性磷酸酶。卡托普利可刺激MC3T3-E1细胞表达Ⅰ型胶原,以10-11 mol.L-1作用最强。结论卡托普利有促进MC3T3-E1细胞增殖、促进碱性磷酸酶表达和增加Ⅰ型胶原mRNA表达的作用。     

α-玉米赤霉醇对成骨细胞增殖、分化以及OPG和RANKL mRNA表达的影响

目的:探讨α-玉米赤霉醇(α-zearalanol,α-ZAL)对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1增殖、分化及护骨素(osteoprotegerin,OPG)和NF-кB受体活化配体(receptor activator of nuclear factor-кB ligand,RANKL)mRNA表达的影响。方法:传代培养小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1,采用不同浓度的α-ZAL作用于细胞72 h后,MTT法检测细胞增殖活性,PNPP法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,RT-PCR法检测ALP,OPG及RANKL mRNA的表达水平。结果:10-6～10-12mol·L-1的α-ZAL可显著抑制成骨细胞的增殖(P<0.05);显著增加ALP活性(P<0.05),但不同剂量间存在作用时间差异;并且可显著上调成骨细胞内OPG/RANKL mRNA的比值(P<0.05)。结论:α-ZAL可抑制成骨细胞的增殖、促进其分化,并可通过上调OPG/RANKL mRNA表达比值抑制破骨细胞的形成,有望作为骨质疏松症的治疗药物。     

左归丸含药血清通过ERK/Smads信号通路干预MC3T3-E1细胞的功能基因表达

目的研究ERK1/2信号通路在左归丸含药血清调控MC3T3-E1细胞基因表达中的作用。方法以倍美力为阳性对照药,对SD♀大鼠灌服高、中、低剂量的左归丸混悬液,d7腹主动脉取血分离含药血清。采用MTT法检测左归丸含药血清和PD98059对MC3T3-E1细胞增殖作用的影响,采用Western blot法检测ERK1/2蛋白的磷酸化水平及TGF-β1、Smad4蛋白表达,采用Real Time RT-PCR法检测Cbfα1、COLⅠmRNA表达。结果左归丸含药血清和倍美力能促进MC3T3-E1细胞增殖,诱导ERK1/2蛋白的磷酸化,促进TGF-β1、Smad4蛋白分泌,上调其Cbfα1、COLⅠmRNA表达;加入PD98059后MC3T3-E1细胞增殖下降、ERK1/2蛋白的磷酸化水平降低、TGF-β1蛋白表达进一步升高、Smad4蛋白表达降低、Cbfα1、COLⅠmRNA表达下调。结论左归丸能有效促进成骨细胞增殖和分化;左归丸可能是通过发挥雌激素样作用调控了ERK/Smads信号通路,从而达到防治骨质疏松的目的。     

左旋肉毒碱对MC3T3-E1成骨细胞及OPG表达的作用

目的探讨左旋肉毒碱对MC3T3-E1成骨细胞及OPG的表达作用,为临床预防骨质疏松提供参考。方法以小鼠骨细胞MC3T3-E1成骨细胞为研究对象,用左旋肉毒碱对其表达进行干预,最后,以免疫组化法检测左旋肉毒碱干预前后OPG蛋白质表达水平的改变,分析左旋肉毒碱对MC3T3-E1成骨细胞OPG的表达作用。结果 1 mmol/L左旋肉毒碱对小鼠成骨细胞无明显作用,10~100 mmol/L左旋肉毒碱能促进小鼠成骨细胞增殖,显著抑制人成骨细胞凋亡,增加小鼠骨密度。结论左旋肉毒碱可通过促进MC3T3-E1成骨细胞OPG的表达,促进成骨细胞增殖,呈剂量依赖性和时间依赖性,并且左旋肉毒碱可抑制人成骨细胞凋亡,延长其存活时间。     

骨新康对大鼠成骨细胞及破骨细胞活性的研究

目的:观察骨新康对新生大鼠成骨细胞及破骨细胞活性影响。方法:SD大鼠灌胃给药3 d取得含药血清。分离成骨细胞及破骨细胞体外培养,MTT法检细胞活性,AKP检测成骨细胞分化程度,用骨吸收陷窝数量评价破骨细胞活性。结果:与对照组相比,含骨新康血清剂量依赖性地促进成骨细胞增殖;与生理盐水组相比,10%,20%骨新康组含药血清显著促进成骨细胞分泌碱性磷酸酶(P<0.01),抑制骨陷窝的生成。结论:骨新康通过促进成骨细胞的增殖和分化,抑制破骨细胞的活性,对临床骨质疏松的防治具有积极意义。     

镁锌合金对成骨细胞增殖的影响

目的研究镁锌合金对前成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖的影响,探讨镁锌合金成为一种新型骨科内植物材料的可行性。方法在镁锌合金金属片上接种前成骨细胞MC3T3-E1,采用MTT法及碱性磷酸酶（ALP）检测试剂盒等方法检测MC3T3-E1细胞在材料表面的增殖活性,用左旋聚乳酸对照组。结果培养第1,3天后,镁锌合金表面成骨细胞增殖与对照组没有差异（P〉0.05）,第5、7、9后,镁锌合金表面成骨细胞增殖明显高于对照组（P〈0.01）。结论镁锌合金能够促进MC3T3-E1细胞的增殖,可以初步认为具有良好的生物相容性。     

杜仲中槲皮素、京尼平苷及桃叶珊瑚苷对小鼠成骨样细胞系MC3T3-E1增殖和分化的影响

目的 对杜仲抗骨质疏松的药效成分进行初步筛选。方法 采用小鼠成骨细胞MC3T3-E1体外培养模型, 通过MTT法测定细胞增殖, ELISA方法测定碱性磷酸酶(ALP)活性, 观察杜仲中槲皮素、京尼平苷及桃叶珊瑚苷对成骨细胞增殖和分化的影响。结果 槲皮素促MC3T3-E1细胞增殖的有效浓度为10^-6 mmol/L, 桃叶珊瑚苷则为10^-5 mmol/L;10^-4 μmol/L京尼平苷在干预后4 d, 才逐渐显现出促进MC3T3-E1增殖作用。槲皮素(10^-5、10^-3 mmol/L)、京尼平苷(10^-3 mmol/L)和桃叶珊瑚苷(10^-3 mmol/L)可增加MC3T3-E1 ALP活性。结论 槲皮素、京尼平苷和桃叶珊瑚苷可促进成骨细胞的增殖和分化, 且作用强度具有浓度相关性和时间相关性, 可能为杜仲抗骨质疏松的药效物质基础。     

染料木素促成骨样细胞增殖作用及其机制研究

目的观察染料木素(genistein)对成骨样细胞MC3T3-E1细胞增殖及骨形成蛋白-2(BMP-2)、β-连环素(β-catenin)表达的影响。方法培养成骨样细胞MC3T3-E1,加入不同浓度的染料木素(1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6和1×10-5mol·L-1),以1×10-9mol·L-1雌激素(β-estradiol,E2)作为阳性对照组,采用MTT比色试验法和碱性磷酸酶(ALP)活性检测法,观察染料木素作用后MC3T3-E1的增殖及分化情况,以Westernblot方法检测成骨样细胞中BMP-2和β-catenin蛋白的表达。结果染料木素可促进MC3T3-E1细胞增殖,染料木素作用后细胞的ALP值也明显升高,呈浓度依赖性;染料木素可增加BMP-2和β-catenin表达,且呈浓度依赖性。结论染料木素促进MC3T3-E1细胞增殖与分化,可通过调节BMP-2和Wnt/β-catenin信号通路而影响成骨样细胞的活性。     

芫花素对于MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化的影响

目的探索芫花素对于MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化的影响。方法采用芫花素1、5、10、15μmol/L处理MC3T3-E1细胞14 d,采用MTS法检测芫花素对MC3T3-E1细胞增殖的抑制作用;实时定量PCR和Western blotting法检测测芫花素对MC3T3-E1细胞中ALP、HDAC1和Runx2 m RNA和蛋白表达的影响。结果芫花素5、10、15μmol/L可以显著促进MC3T3-E1细胞中ALP、Runx2 m RNA和蛋白表达水平的提高(P0.05),HDAC1 m RNA和蛋白表达水平的下调(P0.05),表明芫花素可以促进MC3T3-E1向成骨细胞分化。结论芫花素具有促进MC3T3-E1细胞可以促进成骨细胞分化,对成骨细胞的分化过程有一定的调节作用。