大肠杆菌胞内青霉素酰化酶释放方法的研究

微生物产生的对于制备半合成青霉素具有重要意义的青霉素G酰化酶(E.C.3.5.1.11),至今已在多种菌株中发现,其中除了巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)与淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendula)两种菌产生胞外青霉素酰化酶外,其余均为胞内青霉素酰化酶。有关微生物胞内酶的提取方法,已有多篇综述,这些方法不外乎物理方法与化学方法两大类。然而,许多方法仅限于实验室规模使用,可适于工业规模的、使用较普遍的目前还是采用液体挤压法(Liquid shear),Darbyshire列举了24种胞内酶的提取方法,50％以上都是采用液体挤压法。文献报道的有关青霉素酰化酶产生菌的破碎方法也多用该法。但是液体挤压法破碎效果并不理想,有时需反复数次破碎,耗能也大。我们在研究大肠杆菌D816产生的青霉素酰化酶的固定方法中,首先摸索了胞     

青霉素酰化酶电极

用海藻酸钠-氯化钙包埋法制备青霉素酰化酶电极,电极涂液中海藻酸钠浓度为1％,酶量大于15U/100mg较好。经聚乙烯亚胺处理的电极的抗磷酸盐性能良好,测试在pH 7.05缓冲液中进行,加样搅拌平衡后,取停止搅拌5min后的pH读数,△pH-青霉素G浓度的线性范围为0～1.88mg/ml。温度和pH对pH响应值均有影响。     

聚乙二醇4000-磷酸二氢钠双水相系统萃取头孢羟氨苄的研究

采用聚乙二醇(PEG)-无机盐双水相体系,从药物水溶液中萃取头孢羟氨苄。同时考察PEG4000的浓度、Na H2PO4的浓度、萃取温度对头孢羟氨苄萃取率的影响,并对最佳萃取条件进行预测。结果显示,用PEG4000-Na H2PO4双水相作为萃取体系的最佳条件为:PEG4000质量分数为17%,Na H2PO4质量分数为26%,温度25℃,萃取率约为93.7%。萃取过程重现性较好,快速、高效且未出现乳化现象。     

反胶团酶促水解青霉素G制备6-APA

研究将青霉素酰化酶包埋于ＡＯＴ／异辛烷反胶团中水解青霉素Ｇ制备６－ＡＰＡ的工艺,探讨了各种操作条件对水解过程的影响。结果表明,在反胶团酶反应体系中,底物浓度提高了一倍左右,且在反应过程中不需滴碱调节ｐＨ值。在水相与反胶团体系各自的最适条件下分别进行水解反应实验,结果表明,青霉素酰化酶在反胶团体系中的酶活力高于水相酶活力,水解６ｈ 后其转化率可达７０％ 以上;与相应的水相酶促反应相比,转化率提高了３０％ 。     

青霉素酰化酶活性测定

我国从七十年代开展了青霉素酰化酶的研究和生产。大多数采用NIPABA法(3-苯乙酰胺基-6-硝基苯甲酸法)测定酶活性。目前世界上许多国家在青霉素酰化酶的活性测定中主要使用PDAB法(对-二甲胺基苯甲醛法)。由于测定方法不同。国内外酶活性水平很难比较。本文叙述改进的PDAB法用于大肠杆菌发酵液和湿细胞中青霉素酰化酶活性测定。     

青霉素G酰化酶工程菌培养条件的研究

以产生青霉素G酰化酶的工程菌株LRN075为研究对象,通过正交试验优化了培养条件,研究了不同比例的培养基成分对酶产量的影响.结果显示在最优条件下,进行了2000L发酵罐的发酵试验,该菌株在培养36h酶活最高达到2.28×104U·L-1.细胞破碎实验表明,高压均质法效果最佳,可以使酶达到最大程度的释放.     

固定化酰化酶在青霉素裂解反应中的影响因素分析

在酶促脱酰法裂解青霉素工业钾盐生产药用中间体6-氨基青霉烷酸(即6-APA)的反应杌理中,在不同反应物浓度、pH及温度下将直接影响酰化酶的活性及其使用寿命。本文通过多组实验进行比较分析摸索出酰化酶的最适宜的工艺条件以达到延长酰化酶的使用寿命,降低6-APA的生产成本的目的。     

酶法制备头孢克洛的工艺优化

通过使用合成用固定化青霉素酰化酶对7-ACCA 转化制备头孢克洛的实验研究；在对酶促反应的关键参数：底物质 量浓度、反应温度、反应pH 进行优化后，得出在底物质量浓度175.81g/L、转化温度13.9℃、转化pH6.43 的条件下，合成用固 定化青霉素酰化酶转化7-ACCA 制备头孢克洛效果最佳，转化率可达98% 左右，收率保证在95% 以上，通过HPLC 图谱将头 孢克洛精品与头孢克洛标准品的数据进行了对比，同时对固定化酶的稳定性也进行了检测。     

用CHITOSAN固定化青霉素酰化酶

本文报道以Chitosan为载体制备固定化青霉素酰化酶的研究结果。1.4％ Chitosan醋酸溶液先用12.5％戊二醛交联,洗涤,研磨,得颗粒。再用1.5％pH5.5和1.5％pH8.5多聚磷酸处理,得机械强度良好的载体。此载体先后经0.5％戊二醛和对甲苯磺酰氯双活化后,再与青霉素酰化酶偶联。所得固定化酶的活力达20.8u/g。固定化青霉素酰化酶的反应最适温度略高于游离酶,最适pH略低于游离酶;其Km值基本接近游离酶。固定化酶经反复使用,活力基本不变。     

附加剂对水溶性薄膜包衣的影响

本文研究了两类普通附加剂——增塑剂和着色剂对水溶性的羟丙基甲基纤维素薄膜包衣性质的影响。实验中的增塑剂分别是甘油、丙二醇、聚乙二醇4000和聚乙二醇400;着色剂为二氧化钛,铝色淀、柠檬黄和二者各50％(w/w)的混合物,分别以35％(w/w)的量分散在水中备用。包衣水溶液中含固体总浓度为10％(w/w),然后进行包衣工艺。附加剂对薄膜包衣性质的影响主要包括如下。对片剂径向挤压强度的影响在衣膜中不含任何附加剂时,衣膜的量显著增加片剂的径向挤压强度,因而不易破碎。随着附加剂用量增加,衣膜的这种作用逐     

电渗作用对甲硝唑经皮渗透的影响

在Ａｇ／ＡｇＣｌ电极的双室扩散池中测定不同电场对模型药物甲硝唑（１）通过离体大鼠皮肤渗透速率的影响。结果表明，１生理盐水饱和液阳极导入时的透皮速率是被动扩散的２．３倍，阴极导入时药物的透皮速率是其被动扩散的４５％，说明电渗作用明显促进了分子型药物１的经皮渗透；与药物渗透方向相反的电渗流则明显阻碍其经皮渗透     

磷酸丙吡胺缓释片的生物利用度研究

比较了每１２ｈ口服自制磷酸丙吡胺缓释片和对照胶囊各２００ｍｇ后的稳态血药浓度及波动系数（ＦＩ％）。测求稳态时Ｃｍａｘ：ＣｍｉｎＴｍａｘ和血药浓度时间曲线下面积（ＡＵＣ０－１２），结果显示两制剂Ｔｍａｘ、ＦＩ％有极显著差异，Ｃｍｉｎ有显著差异而Ｃｍａｘ、ＡＵＣ０－１２并无显著差异。缓释片具明显的缓释效果，然而生物利用度与胶囊剂相当。     

黄瓜花叶病介体蚜虫种群空间格局动态分析

本文采用聚集指标、聚集指标的模糊聚类分析和空间格局的回归分析等方法,对黄瓜花叶病传毒介体——瓜蚜自然种群动态进行分析,春秋两季瓜蚜种群均为聚集分布;秋季瓜蚜种群空间格局聚集性可划分为前、中、后三种类型;春季瓜蚜分为前、后两种类型。     

MECHANISM OF ACTION OF NATRIURETIC FRACTION OF URINE

The nature of calcium dependence of natriuretic fraction (NF)-induced contractions in the rat smooth muscle anococcygeus and a possible correlation between the effect of NF on sodium transport and its natriuretic potency was investigated. NF and noradrenaline-induced contractions were partially dependent on external calcium concentration. Ouabain and potassium (K) free solution (KoPSS)-induced contractions were totally dependent on external calcium and were more effectively inhibited by calcium antagonists than those of NF and noradrenaline suggesting pharmacomechanical coupling as the mode of calcium dependence of NF. Like other agonists which contract by pharmacomechanical coupling, NF stimulated sodium transport (86rubidium uptake) in dog saphenous vein. Such stimulation correlated positively (r = 0.495, n = 17, P less than 0.05) with the natriuretic potency of NF. NF, like noradrenaline, contracts smooth muscle by pharmacomechanical coupling and NF-induced natriuresis is associated with stimulation of the sodium pump.     

合浦珠母贝珍珠细胞相容性的初步评价

本文报道了合浦珠母贝珍珠的体外细胞毒性试验结果。将珍珠粉的浸提液加L_(929)细胞培养瓶中,通过细胞相对增殖率(RGR)及细胞形态观察表明,合浦珠母贝珍珠具有较好的细胞相容性,对L_(929)细胞形态无明显影响,但细胞相对增殖率略低于羟基磷灰石陶瓷。     

绞股蓝总甙微丸溶出度及稳定性研究

采用包衣造粒工艺制成绞股蓝总甙微丸，并将此微丸装入硬胶囊制成胶囊剂。用不同的溶出介质对其体外溶出进行了研究，并对其稳定性进行了考察。     

卡马西平多晶型的研究

红外吸收图谱与中国药典图谱不符合的卡马西平（Ａ晶），可通过用较高浓度乙醇使其转为Ｂ晶而符合规定，经￣（１３）ＣＮＭＲ、ＭＳ、Ｘ线衍射分拆，证实该两种晶体为同质异晶。     

抗血吸虫病药鹤草酚类似物的合成

鹤草酚(Agrimophol)(Ⅰ)是从植物仙鹤草(Agrimonia pilosa Ledeb)根芽中分离出来的一种驱绦虫有效成分,王根法等发现它有抗血吸虫作用,但减虫率不高,胃肠道反应也较重。鹤草酚是间苯三酚的衍生物,分子中有角甲基,人工合成较复杂。我们企图改变其化学结构,使成为结构简单而又易于制备并有抗血吸虫活性而毒性低于鹤草酚的类似物。文     

中国人参茎叶皂甙对大鼠行为的影响

人参茎叶皂甙５０ｍｇ／ｋｇ灌胃给大白鼠，每天１次，连续７天，于末次给药后１ｈ，采用主动回避反应；被动回避反应；分辨学习等训练方法对受试物进行研究，结果表明人参茎叶皂甙对正常大鼠学习、记忆过程仅有微弱易化作用。通过探索行为研究表明，人参茎叶皂甙明显增加每个训练日大白鼠第１分钟探索活动次数并加速探索活动的适应。对电休克大鼠短期记忆障碍有明显改善作用。     

人工合成麝香酮进展

本文综述近年来采用的麝香酮合成路线、一些重要中间体的合成方法以及光学活性麝香酮合成的研究进展。