紫杉醇对顺铂耐药卵巢癌细胞的影响

目的研究抗癌药物诱导顺铂耐药细胞的调亡的规律,为卵巢癌的化疗提供理论依据。方法紫杉醇作用于体外培养的顺铂耐药的卵巢癌细胞COC1细胞系通过HE染色、电子显微镜、流式细胞术等方法进行检测和观察。结果经紫杉醇处理的卵巢癌COC1细胞出现典型的细胞调亡特征。紫杉醇诱导细胞调亡在一定范围内具有剂量依赖性,最高达到39%,但是浓度加大〉50nmol/ml,调亡率下降。结论紫杉醇能有下得诱导顺铂耐药的肿瘤细胞的调亡。     

灰树花多糖治疗卵巢癌体外实验观察

目的体外实验探讨灰树花多糖治疗卵巢癌的作用。方法以不同浓度灰树花多糖(终浓度为100、250和500μg/ml)处理人SKOV3细胞,台盼蓝染色和MTT检测对细胞增殖的抑制作用,Annexin V/PI双标记流式细胞术检测与荧光显微镜观察检测细胞凋亡。另设阴性对照组,仅用培养液;10μg/ml顺铂(DDP)作为阳性对照。结果台盼蓝排染和MTT检测证实,灰树花多糖明显抑制SKOV3细胞增殖;Annexin V/PI双染流式细胞术检测显示,灰树花多糖100、250、500μg/ml作用细胞24、48、72 h均能诱导细胞凋亡,凋亡率与时间、剂量存在依赖关系;Annexin V/PI双染荧光显微镜观察检查细胞凋亡率显示了与流式细胞术检测类似结果。结论灰树花多糖显著抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

洛铂与顺铂对卵巢癌细胞抑制作用的对照研究

目的研究两种不同的抗癌药物对卵巢癌细胞的抑制作用,为洛铂用于卵巢癌的化疗提供理论依据。方法洛铂与顺铂分别作用于体外培养的卵巢癌SKOV3细胞系,用MTT比色法检测洛铂和顺铂对SKOV3细胞株的增殖抑制作用。结果体外培养的卵巢癌SKOV3细胞经不同浓度的洛泊和顺铂处理后细胞生长明显受到抑制,两种药物对于卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用相比差异无统计学意义。结论洛铂与顺铂均能有效地抑制卵巢癌细胞增殖。     

洛铂诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的研究

目的探讨洛泊对体外培养的浆液性卵巢癌细胞SKOV3凋亡的诱导作用。方法体外培养卵巢癌细胞SKOV3,用MTT比色法检测洛铂对SKOV3细胞株的增殖抑制作用以及流式细胞仪检测洛铂对SKOV3细胞株的凋亡率。结果体外培养的卵巢癌SKOV3细胞经不同浓度的洛泊处理后细胞生长明显受到抑制,洛泊作用于卵巢癌SKOV3细胞可诱导细胞的凋亡。结论卵巢癌SKOV3细胞对洛泊敏感,洛泊对卵巢癌细胞的杀伤作用是通过诱导细胞凋亡途径实现的。     

脂质体莪术醇逆转卵巢癌顺铂耐药作用的机制

目的 研究脂质体莪术醇(LC)对人卵巢癌细胞顺铂耐药的逆转作用及其机制。方法 采用卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP,细胞分为5组：空白对照组、阴性对照组(含12.5μg/ml脂质体)、顺铂组(4μg/ml)、LC组(20μg/ml)、联合组[顺铂(4μg/ml)+LC(20μg/ml)],CCK-8检测各组细胞增殖能力,高效液相色谱-串联质谱法检测细胞内顺铂平均含量,流式细胞术检测细胞凋亡,qRT-PCR检测P糖蛋白(P-gp)的mRNA相对表达量,免疫细胞化学和Western blot检测各组细胞P-gp蛋白的表达情况。结果 联合组细胞增殖能力最低,凋亡率最高(P<0.05);联合组细胞内顺铂平均含量大于顺铂组(P<0.05);联合组细胞的P-gp mRNA和蛋白相对表达量低于单用顺铂组(P<0.05)。结论 LC可通过抑制P-gp的表达,降低人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP对顺铂的耐药性。     

联合顺铂对卵巢癌细胞内凋亡基因bax和bcl-2的影响

目的:研究卡培他滨联合顺铂对体外培养的卵巢癌细胞SKOV3凋亡作用的影响。方法:体外培养卵巢癌细胞SKOV3,用MTT比色法检测卡培他滨及顺铂对SKOV3细胞株的增殖抑制作用以及RT-PCR检测凋亡相关基因bax、bcl-2的表达。结果:卡培他滨及顺铂对SKOV3细胞体外生长有明显抑制作用,并可诱导细胞的凋亡,二者联合应用作用更明显。结论:巢癌SKOV3细胞对顺泊具有药物敏感性,顺泊可诱导卵巢癌细胞的凋亡。     

2-DG通过内质网应激增强人卵巢癌SKOV3细胞顺铂敏感性的研究

目的:顺铂作为传统的化疗药物被广泛应用于临床,但其较强的副作用限制了顺铂的临床应用。为了提高肿瘤细胞对顺铂的敏感,我们选择2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)进行细胞实验。方法:利用免疫荧光结合免疫印迹技术检测2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)体外抗卵巢癌SKOV3细胞的抗肿瘤作用。结果:2-DG可增强顺铂对卵巢癌SKOV3细胞的抗肿瘤作用,包括抑制SKOV3细胞的增殖、诱导凋亡小体的形成和促进细胞的凋亡。免疫荧光结合免疫印迹技术检测显示,2-DG增强了顺铂诱导的SKOV3细胞内质网应激相关蛋白--葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达;2-DG还上调顺铂诱导的SKOV3细胞内质网应激相关蛋白--凋亡蛋白153/C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达。结论:2-DG通过增强顺铂诱导的内质网应激增加SKOV3细胞对顺铂的敏感性。     

卵巢癌顺铂耐药细胞系的建立

目的 :建立人卵巢癌体外耐药模型 ,研究卵巢癌对顺铂的耐药特征。方法 :模仿临床卵巢癌化疗模型 ,采用中等浓度、间歇作用法 ,从人卵巢癌细胞株SKOV3培养出对顺铂耐药细胞系SKOV3/DDP ;倒置显微镜下观察细胞形态 ;MTT法、单克隆形成法检测耐药细胞的耐药指数 ;流式细胞仪检测两种细胞的细胞周期分布。结果 :SKOV3/DDP细胞形态无明显改变 ;耐药指数用MTT法检测为 1 8,单克隆形成法检测为 8;SKOV3主要分布于G0 -G1期 ,SKOV3/DDP主要分布于S期及G2 -M期。结论 :中等剂量、间歇作用法可以诱导出卵巢癌细胞株SKOV3对顺铂耐药性。此项研究结果可为临床卵巢癌化疗方案的制定、复发癌二线化疗药物的选择提供理论依据     

小檗碱增强卵巢癌细胞顺铂敏感性的实验研究

目的探讨小檗碱对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响.方法 MTT方法检测细胞抑制率.流式细胞术检测细胞凋亡率.Western blot检测PDCD4蛋白表达.结果小檗碱增强顺铂对SKOV3细胞增殖的抑制,增强顺铂诱导的SKOV3细胞凋亡,提高PDCD4在SKOV3细胞的表达.结论小蘖碱能增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,有可能成为一种新的卵巢癌治疗药物.     

内质网应激反应与人卵巢癌细胞顺铂耐药性关系的实验研究

目的:探讨顺铂敏感的人卵巢癌SKOV3细胞与顺铂耐药的卵巢癌SKOV3/DDP细胞之间内质网应激的差异及其与顺铂敏感性的关系。方法:采用人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞,给予顺铂进行体外实验。Hochest33342染色,激光共聚焦显微镜观察细胞核形态。免疫荧光结合免疫印迹技术检测内质网应激标志蛋白Grp78和PDI的表达。用钙离子敏感的荧光探针Flour-4/AM和Rhod-2/AM分别检测人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞浆和线粒体钙离子含量变化。结果:MTT法检测人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞生存率,两种细胞对顺铂的敏感性存在明显差异,SKOV3细胞对顺铂敏感性显著高于SKOV3/DDP细胞;Hochest33342染色结果显示顺铂(6μg/ml)作用24h,可以引起SKOV3细胞发生明显的凋亡,而SKOV3/DDP细胞无明显变化;顺铂作用SKOV3细胞,导致Grp78和PDI的表达明显增加,内质网应激介导的凋亡信号分子CHOP、Caspase-4表达增加,线粒体Cyt C的释放以及Caspase-3的活化增加,而SKOV3/DDP细胞无明显变化;顺铂作用于SKOV3细胞,引起胞浆和线粒体钙离子含量的显著增加,而SKOV3/DDP细胞无显著变化。结论:顺铂敏感性不同的人卵巢癌细胞,其在顺铂作用下的内质网应激反应存在显著差异,顺铂敏感的细胞其内质网应激强度高,并且其在顺铂作用后的胞浆和线粒体钙离子明显升高,内质网应激途径和线粒体途径凋亡被激活,这些结果表明卵巢癌顺铂耐药可能与内质网应激耐受有关。     

ROLE OF ERK1／2 KINASE IN CISPLATIN-INDUCED APOPTOSIS IN HUMAN OVARIAN CARCINOMA CELLS

Objective To investigate the role of extracellular regulated kinase (ERK1/2) pathway in cisplatin-induced apoptosis in human ovarian carcinoma cells.Methods Cisplatin-induced apoptosis were stained with DAPI and was assessed microscopically in human epithelial adenocarcinoma ovarian cell line SKOV3 cells. ERK activation was determined by Western blotting using an anti-phosphoERK antibody to detect ERK activity. The effect of PD98059 on ERK activity induced by cisplatin was detected by MTT assay.Results Marked apoptosis of SKOV3 cells resulted from 48 hours treatment with 20 μg/mL cisplatin. Strong activation of ERK was led to by 15 μg/mL cisplatin. Dose response and time course of cisplatin induced apoptosis in SKOV3 cells.Cisplatin-induced ERK activation occurred at 12 hours and increased to highest induction at 24 hours by Western blotting.The effect of PD 98059 on ERK activity induced by cisplatin at the concentration of 100 μmol/L PD 98059. Statistically significant decreased in cell survival were observed with 100 μmol/L PD 98059 at 15 and 20 μg/mL cisplatin (P＜ 0.05).Conclusions Cisplatin activates the ERK signaling pathway in ovarian cancer cell line SKOV3. Inhibition of ERK activity enhances sensitivity to cisplatin cytotoxity in ovarian cancer cell line SKOV3. Evaluation of ERK activity could be useful in predicting which ovarian cancer will response most favorably to cisplatin therapy.     

人绒毛膜促性腺激素对顺铂介导的卵巢癌3AO细胞凋亡的影响

目的 分析HCG对卵巢癌细胞株3AO凋亡的影响，探讨HCG在卵巢癌发生发展中的作用。方法 首先用顺铂诱导3AO细胞凋亡，然后在顺铂处理前后用不同浓度的HCG作用48h，采用丫啶橙(AO)和溴化乙锭(EB)荧光双染色法对凋亡细胞计数。结果 HCG能抑制3AO细胞凋亡，而且这种抑制作用具有浓度依赖性，随着HCG浓度的增加抑制作用加强。结论 HCG可以通过抑制顺铂介导的凋亡而影响卵巢癌细胞的化疗敏感性。     

雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞株凋亡和周期的影响

目的:探讨雷帕霉素单独及联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞凋亡、周期的影响及可能的分子机制。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞,流式细胞术检测雷帕霉素单独及联合顺铂对细胞凋亡及周期分布的影响;实时RT-PCR检测对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA表达的影响。结果:雷帕霉素单独作用可抑制细胞生长增殖,引起G1期阻滞,S期及G2-M期细胞明显减少,使得大部分细胞处于有丝分裂间期,进而促进细胞凋亡,呈现明显的时间依从性,72 h效果最明显;联合顺铂凋亡率明显高于单独用药组(P0.01)。实时RT-PCR结果显示,雷帕霉素作用24 h可引起mTOR mRNA表达下调,72 h抑制表达低于24 h(P0.05)。结论:雷帕霉素作用于PI3K/AKT/mTOR信号传导通路的mTOR位点,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,与传统化疗药顺铂有协同效应,可增强肿瘤细胞对于顺铂的化疗敏感性。     

Bcl-2抑制剂S1诱导人卵巢癌细胞凋亡及其机制的研究

目的:以人卵巢癌细胞SKOV3为研究对象,探讨Bcl-2抑制剂S1诱导人卵巢癌细胞凋亡的机制。方法:通过MTT法检测S1作用下卵巢癌细胞的生存率;S1 10μmol/L作用不同时间,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot检测凋亡相关蛋白Mcl-1的变化。结果:与对照组相比S1能明显抑制SKOV3的生存率;流式细胞术结果显示,S1引起SKOV3细胞凋亡明显升高;蛋白水平检测S1作用8 h能明显抑制SKOV3细胞Mcl-1蛋白表达。结论:S1可能通过抑制Mcl-1蛋白诱导人卵巢癌细胞凋亡。     

Smac小分子compound3调节顺铂诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的研究

目的探讨Smac小分子compound 3调节顺铂对卵巢癌细胞SKOV3凋亡及生长抑制作用。方法噻唑蓝法检测Smac小分子compound 3单独应用组、顺铂单独应用组及二者联合应用组对卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制率、存活率的影响;并绘制生长曲线。Annexin V/PI双标流式细胞术检测Smac小分子compound 3单独应用组、顺铂单独应用组及二者联合应用组对SKOV3凋亡率的影响。Western印迹检测Smac小分子compound 3单独应用组、顺铂单独应用组及二者联合应用组对SKOV3的X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosisprotein,XIAP)、半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达影响。结果 Smac小分子compound 3单独应用组、顺铂单独应用组及二者联合应用组12、24、48 h SKOV3生长受到抑制,且呈时间依赖性。二者联合应用组与顺铂单独应用组比较生长抑制率明显升高。二者联合应用组的凋亡率高于顺铂单独应用组及Smac小分子compound 3单独应用组。Smac小分子compound 3单独应用组及二者联合应用组SKOV3的XIAP表达降低,二者联合应用组的caspase-3的激活片段表达明显高于其他两组。结论 Smac小分子compound 3能够调节顺铂对SKOV3生长抑制作用,促进顺铂对卵巢癌细胞SKOV3凋亡作用。Smac小分子compound 3通过影响XIAP的表达来实现其促凋亡及生长抑制作用。     

索拉非尼联合顺铂抑制卵巢癌H08910细胞生长的体外研究

目的对索拉非尼联合顺铂抑制卵巢癌H08910细胞生长进行体外研究。方法探讨索拉非尼、顺铂单用以及索拉非尼与顺铂联合应用对卵巢癌H08910细胞增殖的抑制率、细胞凋亡率、细胞周期影响。检测细胞增殖的抑制率采用四甲基偶氮唑蓝方法,检测细胞凋亡率、细胞周期应用流式细胞仪。结果联合用药组对卵巢癌H0-8910细胞增殖抑制率明显高于单独用药组,两者能够诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期,在联合应用时表现出协同作用趋势。结论索拉非尼能够将患者对化疗药物的敏感性提高,降低化疗药物应用剂量及毒副作用,可能成为化疗药物良好辅助用药。     

Hyperthermia enhances the anticancer-drug induced cytotoxicity in hepatocellular carcinoma cell line SMMC-7721

Objective： Hyperthermia is an attractive addition to multidisciplinary approaches to clinical cancer treatment. The efficiency of hyperthermia depends on the elevation of the temperature and the duration of treatment. It has been reported that in vitro and in vivo hyperthermia enhanced the cytotoxic effect of certain anticancer drugs. However, this enhancement varies, depending on the drug used and the scheduling of treatments. Thus, the combination effect of chemotherapy and hyperthermia remains unclear. In this study, we aimed to investigate whether concurrent exposure of human hepatocellular carcinoma cells SMMC-7721 to chemotherapeutic agents andhyperthermia could increase anticancer effects. Methods ： Two chemotherapeutic agents, cisplatin and hydroxycamptothecin, were applied. The MTT assay was performed to evaluate the growth inhibition of SMMC-7721 induced by anticancer drugs with and without hyperthermia. Flow cytometric analysis was used for the assessment of apoptosis after treatments. Results： The percentages of growth inhibition of SMMC-7721 induced by cisplatin （10μg/ml） alone, hydroxycamptothecin （1μg/ml）alone, hyperthermia alone, cisplatin and hyperthermia, hydroxycamptothecin and hyperthermia, were 20.77%, 13.65%, 32.46%, 62.76%, 71.89%, respectively. The percentages of apoptosis of five treatments are 5.56%, 3.96%, 10.16%, 24.32%, 20.42%, respectively. Conclusion： While both hyperthermia and anticancer drugs can individually induce apoptosis and anti-proliferation effect, the combination of the two treatments induce significantly higher apoptosis and cytotoxicity than hyperthermia or anticancer drugs treatment alone. These data suggest a synergistic benefit when hyperthermia and anticancer drugs used concurrently.     

沉默ADRB2基因对卵巢上皮性癌细胞生物学特性及顺铂敏感性的影响

目的 探讨下调β2型肾上腺素受体(beta-2 adrenergic receptor,ADRB2)基因表达对卵巢上皮性癌细胞顺铂敏感性以及细胞增殖、凋亡的影响及机制。 方法 以人卵巢癌细胞株SKOV3/DDP为研究对象,采用小RNA干扰技术沉默ADRB2的表达,实验分为4组:ADRB2 shRNA1感染组、ADRB2 shRNA2感染组、阴性对照shRNA感染组、未感染的SKOV3/DDP细胞作为空白对照组。采用不同浓度(0、2.5、5、10、20、40 μmol/L)顺铂作用后,采用CCK-8法检测4组卵巢癌细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测4组细胞的凋亡率,Western blot法检测4组卵巢癌细胞中caspase-9、Bcl-2及Bax蛋白的表达,采用单因素方差分析进行比较。 结果 不同浓度的顺铂处理后,4组细胞的生长抑制率均逐渐升高,且呈剂量依赖性。2组ADRB2 shRNA感染细胞的顺铂耐药IC50分别为(29±8)μmol/L和(32±11)μmol/L,明显低于阴性对照组[(104±15)μmol/L,P<0.01]和空白对照组[(112±10)μmol/L,P<0.01];4组细胞的凋亡率逐渐增加,且呈剂量依赖性。2组ADRB2 shRNA感染细胞的凋亡率均明显高于阴性对照组(P<0.01)。4组细胞的caspase-9、Bax蛋白的表达水平逐渐增加,且呈浓度依赖性,2组ADRB2 shRNA感染细胞的caspase-9、Bax蛋白水平均明显高于阴性对照组(均P<0.05)。4组细胞的Bcl-2蛋白的表达水平逐渐降低,且呈浓度依赖性,2组ADRB2 shRNA感染细胞的Bcl-2蛋白水平均明显低于阴性对照组(均P<0.05)。 结论 顺铂诱导可使ADRB2基因下调的顺铂耐药卵巢癌细胞的增殖减少、凋亡增加,其可能机制为通过调节caspase-9、Bcl-2和Bax凋亡家族蛋白的表达,从而增加细胞对顺铂的敏感性。      

促卵泡激素对顺铂诱导卵巢癌细胞株凋亡的保护作用

目的 探讨促卵泡激素(FSH)对顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡的保护作用。方法 MTT比色法检测人卵巢上皮性癌细胞系OVCAR3转染FSH受体(OVCAR3-FSHR)细胞活性,流式细胞术分析细胞周期变化及细胞凋亡率。结果 促卵泡激素能降低顺铂对细胞生长的抑制作用,同时降低S期的比例和凋亡率。结论 促卵泡激素对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡有保护作用。