miR-206通过钙网蛋白调控乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

目的 探讨miR-206通过钙网蛋白(calreticulin,CALR)调控乳腺癌MDA-MB-231细胞恶性生物学行为的影响及其机制.方法 乳腺癌MDA-MB-231细胞培养培养完成后,MTT法检测乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖能力.将miR-206 mimics和/或Ad-CALR分别转染到乳腺癌MDA-MB-231细胞中,流式细胞术检测乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡情况;Western blotting实验检测乳腺癌MDA-MB-231细胞内CALR、E-cadherin和N-cadherin的表达.结果 作用48 h后,miR-206mimics组乳腺癌MDA-MB-231细胞内CALR的表达被明显抑制(P<0.05);miR-206 mimics+Ad-CALR组和Ad-CALR组乳腺癌MDA-MB-231细胞中CALR的表达则均明显提高(P<0.05),MTT检测结果显示细胞增殖抑制率为(52.96±3.12)％,与空白对照组比较有明显的统计学意义(P<0.05);miR-206 mimics+Ad-CALR和Ad-CALR作用乳腺癌MDA-MB-231细胞48 h后,细胞增殖抑制率分别为(26.64±1.78)％和(24.17±1.56)％,与空白对照组比较差异均有明显统计学意义(P<0.05).miR-206 mimics作用MDA-MB-231细胞48 h后,细胞凋亡率为(21.96±1.72)％,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);miR-206mimics+Ad-CALR和Ad-CALR作用乳腺癌MDA-MB-231干细胞48 h后,细胞凋亡率分别为(6.93±0.41)％和(7.12±0.67)％,与空白对照组比较差异均统计学意义(P<0.05).与空白对照组比较,miR-206 mimics组乳腺癌MDA-MB-231细胞内E-cadherin的表达被增强,而N-cadherin的表达被抑制(P<0.05);miR-206 mimics+Ad-CALR组和Ad-CALR组乳腺癌MDA-MB-231细胞内E-cadherin的表达被明显抑制,而N-cadherin的表达被明显增强(P<0.05).结论 miR-206可以通过降低乳腺癌MDA-MB-231细胞中CALR的表达来抑制乳腺癌干细胞的恶性生物学行为.     

三七花总皂苷抑制人乳腺癌细胞侵袭的体外研究

目的:研究三七花总皂苷对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭能力的影响并探讨其相关机制。方法:MTT实验检测三七花总皂苷对肿瘤细胞增殖的抑制作用;Transwell小室法进行肿瘤细胞侵袭实验;RT-PCR检测β1-integrin、MMP-2、EGFR mRNA表达的变化;Western blotting检测β1-integrin、EGFR蛋白表达的变化。结果:在浓度为50～200μg/ml时,三七花总皂苷对人乳腺癌细胞的增殖具一定的抑制作用。Transwell小室实验显示,三七花总皂苷在浓度为10、50、100μg/ml均表现出侵袭抑制作用,浓度为50μg/ml侵袭抑制效果最佳,达到32.0%。三七花总皂苷对各浓度组对MDA-MB-231细胞β1-integrin、MMP-2和EGFR基因表达有下调作用(P0.01),一些浓度组对β1-integrin和EGFR蛋白的表达也具下调作用。结论:三七花总皂苷通过下调β1-integrin、EGFR mRNA和蛋白的表达,抑制肿瘤细胞与ECM粘附,降低肿瘤细胞运动能力,从而抑制人乳腺癌细胞的侵袭转移。     

选择性Bcl-2抑制剂ABT-199对乳腺癌细胞MDA-MB-231的放疗增敏作用

目的 研究ABT-199 对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的放疗增敏作用,并探讨其作用机制. 方法 取对数期生长的MDA-MB-231细胞分成对照组、药物组、照射组及联合组(照射+ABT-199). 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同剂量单纯照射和ABT-199 分别作用不同时间对MDA-MB-231细胞增殖的影响并计算20%抑制浓度( IC20 );流式细胞术检测 ABT-199 对 MDA-MB-231 细胞周期和凋亡的影响;Caspase活性试剂盒检测细胞 Caspase-3 活性变化;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bcl-xl的表达. 结果ABT-199对MDA-MB-231细胞有增殖抑制作用且有时间和浓度依赖性,随着ABT-199 浓度的升高, MDA-MB-231 细胞发生不同程度的G0/G1 期阻滞. 联合组较照射组细胞凋亡率明显增高(16. 9% vs 84. 5%),Bcl-2表达水平明显下调(P<0. 05),Bcl-xl变化不明显,同时Bax水平和胞内Caspase-3活性增高(P<0. 05). 结论 选择性Bcl-2抑制剂ABT-199可有效抑制人乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖,诱导细胞发生G0/G1 期阻滞及凋亡. IC20浓度的ABT-199 可明显提高MDA-MB-231细胞对放疗的敏感性.     

CacyBP/SIP基因沉默对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的 观察干扰小RNA(siRNA)介导的Cacy BP/SIP基因沉默对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响。方法 化学合成Cacy BP/SIP基因序列特异性siRNA(Cacy BP/SIP siRNA),采用脂质体法转染siRNA至MDA-MB-231细胞(Cacy BP/SIP siRNA组),MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率。Realtime PCR和Western blotting检测MDA-MB-231细胞内Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白的表达。另设阴性对照组和空白对照组。结果 与阴性对照组和空白对照组比较,Cacy BP/SIP siRNA组MDA-MB-231细胞增殖能力显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.05)。Caspase-3和Bax mRNA及蛋白表达上调(P<0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白表达下调(P<0.05)。结论 靶向沉默乳腺癌MDA-MB-231细胞中Cacy BP/SIP基因表达后,可以抑制乳腺癌细胞增殖并诱导凋亡,其作用可能通过下调Bcl-2表达,上调Caspase-3和Bax表达发挥诱导细胞凋亡的作用。     

丹参酮ⅡA对人乳腺癌细胞MDA-MB-231作用的实验研究

目的 研究丹参酮ⅡA(tanshinone ⅡA)对雌激素受体阴性人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)的生长抑制作用及机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT法)、克隆形成试验检测丹参酮ⅡA对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜观察细胞形态;流式细胞术检测丹参酮ⅡA对MDA-MB-231细胞周期的影响.结果 丹参酮ⅡA处理后,肿瘤细胞增殖活性降低(P<0.05),半效抑制浓度(IC50)为0.125μg/ml,克隆形成率下降(P<0.05),均呈时间-剂量-效应关系;倒置显微镜观察到典型的细胞凋亡形态学特征性改变;细胞周期各相发生变化,G0/G1期细胞数增加(P<0.05),S期和G2/M期细胞数减少(P<0.05);并能诱导其凋亡.结论 丹参酮ⅡA使人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖受到抑制,促进肿瘤细胞凋亡,具有抗肿瘤作用.     

龙贝逍遥散冻干粉对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、迁移及对P53、BCL-2表达的影响

目的观察龙贝逍遥散冻干粉对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、迁移的作用及对凋亡通路相关蛋白的影响。方法 CCK8法检测人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制率,划痕实验检测人乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移,q PCR测定细胞P53、BCL-2的表达。结果与对照组相比,龙贝逍遥散冻干粉处理48 h和72 h时能够浓度依赖性的抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长,表现为OD值逐步降低(P 0. 05),龙贝逍遥散冻干粉半数抑制乳腺癌细胞增殖的浓度(IC50),48 h为0. 761 3 mg/ml,72 h为0. 766 4 mg/ml;相同条件培养48 h后,0 mg/ml(对照组)、0. 7 mg/ml、0. 8 mg/ml的龙贝逍遥散冻干粉培养后MDA-MB-231细胞覆盖区域占起始划痕面积的百分比分别为76. 38%、64. 87%、66. 52%,加入龙贝逍遥散冻干粉后,MDA-MB-231的迁移能力明显减弱(P 0. 05),差异均有统计学意义。与未经龙贝逍遥散冻干粉处理的MDA-MB-231细胞相比,经龙贝逍遥散冻干粉处理的MDA-MB-231细胞P53表达较高,BCL-2表达较低(P 0. 05)。结论龙贝逍遥散能抑制乳腺癌细胞的增殖与迁移,其机制与调节P53/BCL-2凋亡信号通路有关。     

阿霉素对二氢卟吩e6声动力抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231生长体外增敏作用

目的 声动力治疗(SDT)是通过超声波激活聚集在肿瘤细胞内声敏剂治疗肿瘤的一种新方法.本文研究观测阿霉素对二氢卟吩e6为声敏剂声动力抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231生长的作用,旨在探讨阿霉素对二氢卟吩e6声动力是否具增敏作用.方法 二氢卟吩e6声动力单独及联合阿霉素处理MDA-MB-231细胞,45 min后四甲基偶氮唑盐(MTT)显色分光光度法检测细胞增殖.结果 1.1.0 MHz频率超声强度0.5～2.0 W/cm2范围作用60 s呈强度依赖性抑制MDA-MB-231细胞生长;二氢卟吩e6和阿霉素分别在0.05及0.1μg/ml～0.4μg/ml范围内浓度依赖性抑制MDA-MB-231细胞生长.2.与超声(0.5W/cm2×1.0MHz×60 s)和二氨卟吩e6(0.05～0.2mg/ml)单独作用相比,超声和二氢卟吩e6两者联合作用抑制MDA-MB-231细胞生长作用显著增强(P＜0.05).3.与二氢卟吩e6声动力(超声:0.5W/cm2×1.0 MHz×60 s;二氢卟吩e6:0.1 mg/ml)和阿霉素(0.1～0.4 g/ml)单独作用相比,声动力联合阿霉素抑制MDA-MB-231细胞生长作用显著增强(P＜0.05),其抑制作用与联合时序相关,声动力作用后用阿霉素比先用阿霉素后进行声动力更显著抑制乳腺癌细胞的生长(P＜0.05).结论 阿霉素对二氢卟吩e6声动力抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231生长具增敏作用.     

桔梗皂苷D体外对人乳腺癌细胞的杀伤效应及机制

目的：探讨桔梗皂苷D体外对人乳腺癌细胞的杀伤效应及机制。方法：将人乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231用桔梗皂苷D治疗后,采用MTT法检测桔梗皂苷D对这两种乳腺癌细胞系的抑制率;采用流式细胞术检测桔梗皂苷D对MCF-7细胞凋亡的影响;western blot法检测桔梗皂苷D对MCF-7细胞caspase-3,Bcl-2和Bax的表达。结果：MCF-7细胞的抑制率如下：2.5μg/ml桔梗皂苷D组(8.9±2.4),5μg/ml桔梗皂苷D组(24.6±3.6),10μg/ml桔梗皂苷D组(39.7±4.1),20μg/ml桔梗皂苷D组(64.8±5.2),40μg/ml桔梗皂苷D组(82.4±6.5),MDA-MB-231细胞的抑制率如下：2.5μg/ml桔梗皂苷D组(5.3±1.7),5μg/ml桔梗皂苷D组(17.3±2.9),10μg/ml桔梗皂苷D组(28.4±3.5),20μg/ml桔梗皂苷D组(50.5±4.0),40μg/ml桔梗皂苷D组(71.3±6.1);5μg/ml桔梗皂苷D组对MCF-7细胞的凋亡诱导率为9.7±1.6,20μg/ml桔梗皂苷D组对MCF-7细胞的凋亡诱导率为29.8±3.1;zVAD-fmk可有效抑制桔梗皂苷D对MCF-7细胞的凋亡诱导效应;桔梗皂苷D能显著降低MCF-7细胞Bcl-2的表达水平,但对Bax表达无影响。结论：桔梗皂苷D诱导乳腺癌细胞进入caspase-3依赖的凋亡过程,其机制可能为桔梗皂苷D可显著降低Bcl-2表达,降低Bcl-2/Bax比例。     

骨形态发生蛋白9对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖与凋亡的作用研究

目的:研究骨形态发生蛋白9(Bone morphogenetic protein9,BMP9)对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、周期及凋亡的影响.方法:半定量RT-PCR法检测高转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231和低转移性乳腺癌细胞MCF-7中BMP9的表达,用人BMP9重组腺病毒(AdBMP9)感染MDA-MB-231细胞作为实验组,含GFP的空载腺病毒(AdGFP)感染MDA-MB-231细胞作为对照组,MIT法观察细胞增殖的变化,流式细胞仪分析周期及凋亡的变化.结果:半定量RT-PCR显示,乳腺癌细胞MDA-MB-231中未检测到BMP9mRNA的表达;MTT结果显示,AdBMP9处理可引起MDA-MB-231细胞增殖抑制,第5 dMDA-MB-231/BMP9组的细胞增殖率(0.8860±0.0532)显著低于MDA-MB-231/GFP组(1.2240±0.1031)(P＜0.05);流式细胞仪分析结果显示,腺病毒感染后第2d和第3d,MDA-MB-231/BMP9组细胞周期各相发生变化,G2/M期细胞明显增加,分别为MDA-MB-231/GFP组的3.2倍和2.4倍(P＜0.05);同时BMP9可诱发细胞凋亡,腺病毒感染后第3dMDA-MB-231/BMP9组细胞凋亡百分率(31.55%±8.26%)明显高于MDA-MB-231/GFP组(3.80%±0.46%)(P＜0.05).结论:提示BMP9可通过阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡来抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖.     

人参皂甙Rg3对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长的抑制作用及其机制

[目的]研究人参皂甙Rg3对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长的抑制作用及其机制.[方法]采用MTT比色法检测人参皂甙Rg3对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长的抑制作用.利用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化.建立人乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤模型,观察不同浓度的人参皂甙Rg3对裸鼠的体质量及肿瘤增殖抑制率的影响.采用Western blot方法检测肿瘤组织中procaspase-3和procaspase-9蛋白表达水平.[结果]人参皂甙Rg3可明显抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长(P<0.05),且抑制作用呈剂量和时间依赖性;明显促进MDA-MB-231细胞凋亡(P<0.05),可将细胞周期阻滞于G0/G1期.人参皂甙Rg3对人乳腺癌细胞体内的增长具有明显的抑制作用,与对照组比较,人参皂甙Rg3各浓度组proCaspase-3和proCaspase-9蛋白表达水平均明显降低(P<0.05).[结论]人参皂甙Rg3在体内和体外均可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,机制认为可能与诱导细胞凋亡、改变细胞周期和Caspase-3,Caspase-9活化有关系.