乙型肝炎病毒表面抗体定性结果保护意义范围的研究

目的采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法与时间分辨荧光免疫分析技术法（TRFIA）检测乙肝病毒抗-HBS血清学指标,有专业文献报道TRFIA法检测乙肝病毒抗-HBSAb结果大于100mIu/ml才具有保护意义,因此,对照研究ELISA法定性结果保护意义的范围。方法用ELISA法和TRFIA法同时测定,在应用ELISA方法中抗-HBS结果S/CO值在1.0～4.99、5.0～7.99、8.0以上范围内各50样本,总共150份样本的抗-HBS值。S/CO值在1.0～4.99范围内的结果中,有6.0%标本在TRFIA方法中结果大于100mIu/ml;S/CO值在5.0～7.99范围内的结果中,有78%标本结果在TRFIA方法中大于100mIu/ml,S/CO值在8.0以上范围内的结果中,有100%标本结果在TRFIA方法中大于100mIu/ml。结论普遍采用的ELISA定性实验方法以S/CO比值报告阴性、阳性。阳性是否有保护意义不明确,通过实验组对比可以了解S/CO值达到多高才能提示有保护意义,真正起到预防乙型肝炎病毒感染的作用。     

TRFIA定量检测乙型肝炎病毒标志物的应用评价

目的:评价时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术在乙型肝炎病毒感染血清标志物(HBVM)定量测定中的应用。方法:同一质控品用ELISA法和TRFIA同时测定,对比分析两者的相关性、精密度、灵敏度及回收率。结果:两种方法的HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb定性符合率分别为100%、98%、100%、98%、100%,与ELISA法比,TRFIA精密度、灵敏度均较高,HBsAg最低检出浓度达0.13ng/ml,回收率为97.8%。结论:TRFIA定量检测HBVM优于ELISA法,在临床上具有广泛的应用前景,值得推广。     

时间分瓣免疫荧光技术定量检测HBsAb的应用价值

目的 探讨时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)定量检测乙肝表面抗体（HBsAb）在普通人群免疫力预测中的应用价值。 方法 选择经ELISA检测,结果为HBsAb阳性的400例血清标本,按S/CO值分为4组,分别为第1组1.0～5.0、第2组5.1～10.0、第3组10.1～20.0、第4组>20.0,每组100例,以TRFIA检测以上受检者的HBsAb,并对检测结果进行对比分析。 结果　以TRFIA检测结果>10IU/L为阳性判定标准,400份标本TRFIA检测阳性362例,按阳性结果判断,两种方法测定结果符合率为90.5%,4组TRIFA检测阳性率分别为73%、95%、100%、100% ;以TRIFA检测HBsAb结果>100IU/L作为人体对乙肝病毒有效免疫的分界, 4组的有效免疫率分别为5%、10%、75%、95%。 结论 TRFIA作为定量检测HBsAb的一种方法,可以对普通人群的乙肝病毒免疫力进行预测,指导普通人群的疫苗免疫和加强免疫。     

时间分辨免疫荧光技术定量检测HBsAb的应用价值

目的 探讨时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)定量检测乙肝表面抗体(HBsAb)在普通人群免疫力预测中的应用价值.方法 选择经ELISA检测,结果为HBsAb阳性的400例血清标本,按S/CO值分为4组,分别为第1组1.0～5.0、第2组5.1～10.0、第3组10.1～20.0、第4组>20.0,每组100例,以TRFIA检测以上受检者的HBsAb,并对检测结果进行对比分析.结果 以TRFIA检测结果>10 IU/L为阳性判定标准,400份标本TRFIA检测阳性362例,按阳性结果判断,两种方法测定结果符合率为90.5%,4组TRIFA检测阳性率分别为73%、95%、100%、100%;以TRIFA检测HBsAb结果>100 IU/L作为人体对乙肝病毒有效免疫的分界,4组的有效免疫率分别为5%、10%、75%、95%.结论 TRFIA作为定量检测HBsAb的一种方法,可以对普通人群的乙肝病毒免疫力进行预测,指导普通人群的疫苗免疫和加强免疫.     

电化学发光法与ELISA测定乙肝表面抗体结果的比较

目的比较电化学发光法和酶联免疫法在定量检测乙肝表面抗体(HBsAb)中的应用。方法用E411化学发光分析仪及原装试剂,对180例患者血清用电化学发光法(ECLIA)和酶联免疫法(ELISA)检测HBsAb。结果 HBsAb浓度达到100 IU/L以上时ELISA法阳性结果与ECLIA法定量结果基本相符,阳性率达95.8%以上。HBsAb浓度为10.1~100.0 IU/L时ELISA的阳性率为21.2%。结论低度感染时ELISA法检测HBsAb的灵敏度较低,特异性高。中、高度感染时两种方法检测的敏感性相近。     

HBsAg与HBsAb中和比的研究及应用探讨

目的明确 HBsAb 与 HBsAg 中和作用不同时间两者之间的消耗比,为 HBsAg/HBsAb 确认试验的标准化奠定基础。方法将卫生部临床检验中心提供的质控血清用电化学发光法测定;并将5ng/ml HBsAg 与30mIU/mlHBsAB 质控血清不同比例37℃作用不同时间后,用电化学发光法测定 HBsAg、HBsAb 浓度的变化;留取日常工作中酶联免疫吸附试验测定病人血清,结果为 HBsAg( )、HBsAB(-)、HBeAg(-)、HBeAb( )、HBcAb( )的标本30份;结果为 HBsAg(-)HBsAB( )、HBeAg(-)、HBeAb(-)、HBcAb(-)的标本30份,将两种血清不同比例混合37℃作用不同时间用 ELISA、电化学发光法测定 HBsAg、HBsAb 浓度的变化。结果 5ng/ml、2ng/ml、0.5ng/ml HBsAg、30mIU/ml HBsAb 质控血清电化学发光法测定结果分别为116.2 COI、42.43 COI、14.02 COI、62.54 mIU/ml;ELISA 的中和比,以 HBsAg 完全被 HBsAb 中和计算即有223/774=0.283 ng HBsAg/mIU HBsAb,如果以 HBsAb 完全被 HBsAg 中和计算即有570/757=0.753 ng HBsAg/mIU HBsAb。而 ECLIA 的中和比,以 HBsAg 完全被 HBsAb 中和计算即有2304/1664=1.38 COI HBsAg/mIU HBsAb,如果以 HBsAb 完全被 HBsAg 中和计算即有13106/1577=8.31COIHBsAg/mIU HBsAb。5ng/ml HBsAg 与30mIU/mlHBsAB 质控血清37℃水浴作用1h 中和比在3.00～4.25COI HBsAg/mIU HBsAb 之间;2h 中和比在2.31～3.47COI HBsAg/mIU HBsAb 之间;24h 中和比在2.03～2.43COI HBsAg/mIUHBsAb 之间。结论 ELISA 完全中和比在0.283～0.753 ng HBsAg/mIU HBsAb;ECLIA 完全中和比在1.38～8.31 COI HBsAg/mIUHBsAb。     

两种免疫分析方法检测乙肝病毒血清标志物的差异分析

目的:比较酶联免疫吸附试验分析方法(ELISA)和化学发光免疫法(CLIA)检测乙型肝炎病毒血清标志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb)的差异。方法:采用ELISA法和CLIA法对2011年1～12月在我院传染病门诊首次就诊300例患者的血清样本进行平行检测乙型肝炎病毒血清标志物,分析两种免疫分析方法灵敏度和阳性结果符合性。结果:CLIA法检测血清HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb检测的灵敏度分别为0.2ng/ml、10mIU/ml、0.1Ncu/ml、1Ncu/ml和0.5Ncu/ml,均高于ELISA法。CLIA法和ELISA法测定300份血样HB-sAg、HBsAb、HBeAg和HBcAb结果差异无统计学意义(P>0.05),CLIA法测定HBeAb差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA法相对于CLIA法测定HBsAg、HBsAb、HBeAg和HBcAb的阳性符合率分别为94.17%、96.23%、97.20%和92.42%,而HBeAb阳性符合率仅为65.52%。结论:采用CLIA检测乙型肝炎血清标志物的灵敏度和符合率优于ELISA法,并且可以直接对血清标志物表达进行定量,值得临床推广应用。     

乙肝病毒五项指标TRFIA定量测定与RIA检测结果的相关性研究

目的以微粒子酶免疫分析(MEIA)为金标准,探讨时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)和放射免疫分析(RIA)技术在定量检测乙肝表面抗原(HBsAg)、表面抗体(HBsAb)、e抗原(HBeAg)、e抗体(HBeAb)、核心抗体(HBcAb)5项乙型肝炎血清学标志物(HBV-M)的临床应用价值.方法应用MEIA、TRFIA及RIA 3种方法,对200例乙肝病毒携带者血清进行HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb5项HBV-M指标检测.结果 TRFIA法检测HBsAg、HBsAb、HBeAg与MEIA结果完全符合,在HBeAb、HBcAb 2项指标中略高于MEIA法.TRFIA法及RIA法检测显示所选病例的HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb二者定量测定结果阳性符合率分别为96.5%、0%、83.0%、78.0%、94.2%.与TRFIA法相比,RIA法检测HBsAg、HBeAg、HBeAb易出现漏检.TRFIA法检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的诊断灵敏度、诊断特异性和结果总符合率均优于RIA法.结论 TRFIA法和RIA法在定量检测的HBV-M 5项指标结果具有相关性,但两种方法之间检测结果浓度绝对值不可比.TRFIA技术用于HBV-M检测,是一种灵敏的定量检测方法,具有特异性强、灵敏度高、线性范围宽、标准曲线稳定性好、无放射污染,易于自动化.     

乙肝五项定量检测的应用体会

目的 探讨乙肝五项定量检测在临床中的应用效果.方法 对150例临床标本进行ELISA、IRMA、SPPIA法进行检测,并行血清HBV-DNA荧光检测.结果 用IRMA、SPPIA定量法检测在HBSAg浓度为0.5ng/ml时即能检出,还可动态监测各项指标浓度.而用ELISA定性法,在HBSAg浓度为2ng/ml时方能检出,易出现假阴性,且只提供阳性或阴性指标.讨论用IRMA、SPPIA定量法检测HBSAg,其灵敏度高,与HBV-DNA可互补,为临床提供治疗依据及判断预后.     

乙肝五项定量检测的应用体会

目的 探讨乙肝五项定量检测在临床中的应用效果.方法 对150例临床标本进行ELISA、IRMA、SPPIA法进行检测,并行血清HBV-DNA荧光检测.结果 用IRMA、SPPIA定量法检测在HBSAg浓度为0.5ng/ml时即能检出,还可动态监测各项指标浓度.而用ELISA定性法,在HBSAg浓度为2ng/ml时方能检出,易出现假阴性,且只提供阳性或阴性指标.讨论用IRMA、SPPIA定量法检测HBSAg,其灵敏度高,与HBV-DNA可互补,为临床提供治疗依据及判断预后.     

应用时间分辨荧光免疫分析技术检测SARS病毒抗原的初步研究

目的 建立定量检测SARS冠状病毒N蛋白的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)。方法 采用经SARS-CoVN蛋白和配对实验筛选的两株抗SARSN蛋白单克隆抗体,以双抗体夹心法为基础建立检测SARS-CoVN抗原的时间分辨荧光免疫分析技术,进行方法学的评价,并与相应ELISA试剂盒进行比较。结果 该法的测量范围为(0.02~150)ng/ml,灵敏度为0.02ng/ml;批内、批间CV分别为(3.3~6.2)%和(5.3~9.6)%,与采用ELISA试剂盒检测灭活SARS-CoVN蛋白情况比较的结果一致。结论 本研究建立的检测SARSN蛋白的时间分辨荧光免疫分析技术灵敏度高,特异性好,具有潜在的临床应用价值。     

Detection of SARS-associated coronavirus N protein by time-resolved fluoroimmunoassay]

OBJECTIVE: To develop a method for quantitative detection of severe acute respiratory syndrome (SARS)-associated coronavirus (SARS-CoV) N protein by timed-resolved fluoroimmunoassay (TRFIA). METHODS: Using a monoclonal antibody (mAb) against SARS-CoV N protein, screened by SARS-CoV N protein and matching experiment, a method for quantitative detection of SARS-CoV N protein by TRFIA was established on the basis of double sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and evaluated against the ELISA kit. RESULT: The measurement range of the assay was 0.02-150 ng/ml with a sensitivity of 0.02 ng/ml, the coefficient of variability within runs of 3.3%;-6.2%;, and coefficient of variability between days of 5.3%;-9.6%;. The results of detection were consistent between ELISA and TRFIA. CONCLUSION: TRFIA is a new, sensitive and specific immunoassay for detecting SARS N protein with potential value in clinical applications.     

电化学发光法和酶联免疫吸附法对HBSAg和HBSAb测试结果的评价

目的：探讨电化学发光法（ECLIA）和酶联免疫吸附法（ELISA）在乙型肝炎病毒血清标志物检测中的差异。方法：分别使用ECLIA和ELISA法对2013年1-12月广州医学院荔湾医院收集的标本进行HBV-M检测,分析两种检测方法的差异及临床应用价值。结果：两种检测方法测定HBs Ag的阳性率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,有较好的一致性（Ka Pp=0.96）。ELISA法测定HBs Ab的S/CO比值〉11.0者156例,其中152例ECLIA法测定值〉100 mlU/mL,一致性达97.4%。结论：ELISA法测定HBs Ag与ECllA法测定结果一致;与ECLIA相比,ELISA测定的HBs Ab具有肯定的免疫保护作用的S/CO比值〉11.0;不具有免疫保护作用的S/CO比值〈5。     

时间分辨免疫荧光分析检测乙型肝炎病毒表面抗原

目的 时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)是当前标记免疫分析研究应用领域的热点之一,具有高灵敏性和高特异性,用于生物分子的超微量检测.本研究者在建立一种灵敏度高、特异性强、操作简便的检测方法.方法 以Eu-DTTA{N1-(P-异硫氰基苄基)-二乙三胺四乙酸铕钠}为示踪物,建立了用TRFIA检测乙型肝炎血清学标志物乙型肝炎病毒表面抗原的方法.结果 所建立的标准曲线分析范围分别为0.2～300 ng/ml,分析灵敏度为0.05 ng/ml,检测参考标准品的批内变异系数均小于10%,与免疫放射测定同时定量检测多份血清样本,相关系数高达95%.结论 TRFIA分析范围宽,灵敏度高,操作简便,具有优越的定量检测能力,价格适中,十分适合临床推广应用.     

乙型肝炎表面抗体化学发光免疫分析法的建立

目的建立乙型肝炎表面抗体(HBsAb)化学发光免疫分析(CLIA)检测试剂盒。方法采用两株乙型肝炎表面抗原(HBsAg)分别包被磁微球和标记吖啶酯(AE),建立双抗原夹心化学发光免疫检测试剂盒,优化反应体系并对试剂盒的各项性能指标进行评价。结果 HBsAb-CLIA检测试剂的灵敏度为0.03 mIU/ml,测量范围为0.03~960 mIU/ml;分析内和分析间精密度分别为2.94%~5.14%和3.03%~6.33%;与乙型肝炎E抗体(HBeAb)、乙型肝炎核心抗体(HBcAb)等无交叉反应;673名正常人血清测试结果表明该检测试剂的正常参考范围为0~10 mIU/ml;用本试剂与进口雅培同类试剂同时检测1 411例临床样本,其相关方程为y=0.944x+4.056,相关系数为0.947。结论已成功制备操作简单,成本低,各项性能指标均能达到临床检测要求的HBsAb-CLIA试剂盒,可用于临床血清样本HBsAb浓度的测定。     

ANYTEST2000时间分辨荧光免疫分析仪的使用方法学评价

目的比较时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）两种方法在测定乙肝病毒标志物（HBV—M）时结果的符合程度、灵敏度、特异性，并通过内质控的定量分析，对TRFIA法的方法学进行客观评价，了解TRFIA法测定HBVM的准确性和可行性为其在临床上广泛应用提供依据。方法对200份随机标本同时用TRFIA及ELISA法作表面抗原（HBsAg）的测定；并以HBsAg为例，对系统探测灵敏度，低、中、高质控血清的批内和批间精密度，线性范围等进行定量测定和描述。结果HBsAg阴性阳性结果，经配对资料的卡方检验，无显著性差异，P〉0．05，HBsAg的最小测定值为0．02ng／mL，低、中、高三种质控血清的批内和批间CV均小于5％，线性r=0．999。结论TRFIA法测定HBVM特异性、灵敏度及结果符合率较ELISA法高，TRFIA作为定量的方法，可为临床疗效观察提供依据，能较好的为临床检测服务。     

HBV DNA检测在血清HBsAg与HBsAb共存模式中的临床价值

目的检测HBsAg与HBsAb共存模式血清中HBV DNA的拷贝数,探讨其在相应患者临床诊疗中的应用价值。方法用ELISA法检测乙肝两对半,统计HBsAg与HbsAb双阳性的血清学模式分布;荧光定量PCR检测HBsAg与HBsAb共存模式标本的HBV DNA病毒载量;在96例共存模式中,按S/CO比值高低将其分为A、B、C、D 4组,计算各组的HBV DNA阳性率。结果在所有HBsAg与HBsAb共存模式中,HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBcAb阳性模式比例最高,为53.1%(51/96);HBsAg、HB-sAb、HBeAb、HBcAb阳性模式所占比例为35.4%(34/96)。HBeAg阳性组的HBV DNA阳性率为86%;HBeAg阴性组HBV DNA阳性率为53.1%,两组差异显著(P<0.05)。HBV DNA阳性样本中,HBeAg阳性组的平均病毒载量对数值高于HBeAg阴性组(5.08±1.12/ml vs 4.43±1.15/ml,P<0.05)。在共存模式中,以C组(HBsAg≥2,HBsAb 1.0～1.9)HBV DNA阳性率最高,达61.5%(59/96),显著高于其他各组(P<0.05)。结论对于HBsAg与HBsAb共存模式的血清样品,可用荧光定量PCR技术检测HBV DNA来确定体内病毒是否处于复制状态和载量高低,以提高临床诊断的准确性和改进治疗方法。     

TRFIA、FQ-PCR方法联合检测乙肝标志物的应用探讨

目的探讨检测乙肝标志物联合使用时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）和荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法的应用价值.方法 2008年1月至2014年5月云南省第二人民医院检验科对门诊疑似乙肝患者2 476例,分别行TRFIA检测其血清学标志物HBV（HBV-M）和行FQ-PcR方法检测其HBv.DNA含量,并对2种方法的阳性检出率进行比较.结果 2 476例受检者中,FQ-PcR检测其HBv-DNA阳性1 656份,总阳性率为66.9%,其中TRFIA法HBsAg、HBeAg、HBcAb均阳性861份,使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性816份,占94.8%;TRFIA法HBsAg、HBeAb、HBcAb均阳性1 023例,使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性674份,占65.9%;HBsAg、HBeAg均阳性27份,其中使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性26份,占96.3%;HBsAg、HBcAb均阳性148份,其中使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性117份,占79.1%;HBsAb、HBeAb均阳性55份,其中使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性2份,占3.64%;HBsAb、HBeAb、HBcAb均阳性123份,其中使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性11份,占8.94%;HBeAb阳性22份,其中使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性2份,占9.09%;HBeAb、HBcAb均阳性43份,其中使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性3份,占6.98%;HBcAb阳性37份,其中使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性2份,占5.41%;HBsAb阳性89份,其中使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性2份,占2.22%;均阴性48份,其中使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性1份,占2.08%.结论 TRFIA法用来排查机体有无感染乙肝病毒,对于乙肝传染性强弱仅能做一个初步的估计指标,不能准确检测出血清HBV-DNA低滴度者,故靠TRFIA法诊断和判断病情是不够的;FQ-PCR法检查乙肝患者体内的乙肝病毒数量、复制指标,能够能为精确的判断出乙肝病毒在体内的复制、传染强弱情况,是对TRFIA法不足的补充.而FQ-PCR法在检测时也容易受到一些人为或非人为因素的影响.二者联合检测可提高其准确性,有利于病情的判断和诊治.