核酸检测技术在血液筛查中的应用研究

目的大样本、多方法调查深圳地区无偿献血人群中乙肝、丙肝和艾滋病病毒血清学阴性者的核酸阳性率,探讨在我国血液筛查中引进核酸扩增技术的必要性,了解和分析献血者血清学阴性核酸阳性感染状况。方法采用大样本数调查,应用ROCHE PCR-ELISA、PCR-微流芯片、实时荧光PCR方法和CHIRON TMA(转录依赖的扩增技术)多种方法对血清学检测阴性的献血者进行HBV DNA、HCV RNA和HIV-1RNA检测,对乙肝阳性献血者追踪检测ALT和乙肝两对半标志物,对丙肝核酸阳性献血者追踪检测ALT及抗-HCV及HBV DNA和HCV RNA病毒载量。结果共对141288人份血样进行了检测,检出HBsAg(-)、HBV DNA阳性28例,总阳性率为0.020%,其中21例为anti-HBc阳性,占0.015%。HIV-1RNA未检出阳性,17例HBsAg(-)、HBV DNA阳性样本追踪发现,9例发生了血清转换现象,4例呈窗口期特征,所有追踪的HBV DNA阳性献血者ALT检测结果正常。1例anti-HCV(-)、HCV RNA阳性献血者追踪发现为典型窗口期献血,ALT显著升高。结论应采用高灵敏度的核酸扩增技术筛查血液中的乙肝和丙肝病毒,可提高血液安全。     

病毒核酸检测在血液筛查中的应用

目的:探讨病毒核酸检测技术在血液筛查中的应用效果。方法:选择血清学检测为阴性的献血者为研究对象,选择PCR-微流芯片、ROC HE PCR-ELISA、实时荧光PCR方法、转录依赖的扩增技术(CHIRON TMA)等多种方法对研究对象进行HCV RNA、HBV DAN、HIV-1 RAN检测,如果献血者的乙肝为阳性,则应进行乙肝两对半标志物和ALT追踪检测,如果献血者为丙肝核酸阳性,则应进行HBV DNA、HCV RNA、抗-HCV和ALT病毒载量的追踪检测。结果:共检测血液样本4521份,其中HBS AG(-)、HBV DNA阳性共2例,总阳性率为0.047%;未检出HIV-1 RNA阳性,追踪检测2例HBS AG(-)、HBV DNA阳性样本显示,1例表现为窗口期特征,1例存在血清转换现象;HBV DNA阳性者进行追踪检查发现,ALT正常。追踪检测1例ANTI-HCV(-)、HCV RNA阳性者,结果显示ALT上升明显,为典型窗口期献血。结论:在血液筛查中应用病毒核酸检测技术,能让血液安全性得以有效提升。     

HBsAg(+)/NAT(-)献血者HBsAg定量检测及血清学特征

目的探讨HBsAg(+)/核酸检测(nucleic acid test,NAT)(-)献血者的乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)定量水平和血清学特征。方法对104名HBsAg(+)/NAT(-)献血者进行HBsAg定量检测和HBV两对半检测,对HBsAg定量结果进行统计学描述,比较不同HBV血清学模式组的HBsAg定量。结果广州地区HBsAg(+)/NAT(-)献血者在无偿献血者中的占比为0.19%,在HBsAg双试剂确认阳性献血者中的占比为24.87%;HBsAg定量均处于中低水平并以低水平(HBsAg100 IU/m L)为主(97.12%,101/104),中位数为1.16 IU/m L;两对半检测均为HBeAg阴性,共出现8种血清学组合模式,以小三阳"145"模式最多(56.73%,59/104);HBsAb阳性者较单HBeAb阳性者的HBsAg定量低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论获得HBsAg(+)/NAT(-)献血者的HBsAg定量水平和血清学特征,为评价其血液安全性提供了一定的实验依据。     

HBV DNA检测在血清HBsAg与HBsAb共存模式中的临床价值

目的检测HBsAg与HBsAb共存模式血清中HBV DNA的拷贝数,探讨其在相应患者临床诊疗中的应用价值。方法用ELISA法检测乙肝两对半,统计HBsAg与HbsAb双阳性的血清学模式分布;荧光定量PCR检测HBsAg与HBsAb共存模式标本的HBV DNA病毒载量;在96例共存模式中,按S/CO比值高低将其分为A、B、C、D 4组,计算各组的HBV DNA阳性率。结果在所有HBsAg与HBsAb共存模式中,HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBcAb阳性模式比例最高,为53.1%(51/96);HBsAg、HB-sAb、HBeAb、HBcAb阳性模式所占比例为35.4%(34/96)。HBeAg阳性组的HBV DNA阳性率为86%;HBeAg阴性组HBV DNA阳性率为53.1%,两组差异显著(P<0.05)。HBV DNA阳性样本中,HBeAg阳性组的平均病毒载量对数值高于HBeAg阴性组(5.08±1.12/ml vs 4.43±1.15/ml,P<0.05)。在共存模式中,以C组(HBsAg≥2,HBsAb 1.0～1.9)HBV DNA阳性率最高,达61.5%(59/96),显著高于其他各组(P<0.05)。结论对于HBsAg与HBsAb共存模式的血清样品,可用荧光定量PCR技术检测HBV DNA来确定体内病毒是否处于复制状态和载量高低,以提高临床诊断的准确性和改进治疗方法。     

HBsAg阳性产妇血清和乳汁中HBV DNA载量分析

目的：探讨HBsAg(+)产妇血清和乳汁中HBV DNA载量关系及相关性,为慢性乙型肝炎产妇母乳喂养提供实验依据。方法对148例HBsAg(+)产妇血清和乳汁中乙肝病毒采用实时荧光定量PCR (FQ-PCR)方法检测HBV DNA,按产妇血清HBV载量分为HBV DNA载量<420 IU/ml组、420~104 IU/ml组、105~106 IU/ml组、107~108 IU/ml组,并同时收取产妇乳汁进行HBV DNA检测,比较不同组间乳汁HBV DNA阳性率以及血清HBV DNA与乳汁HBV DNA的相关性。结果148例HBsAg(+)产妇血清HBV DNA阳性率为31.8%(47/148),乳汁阳性率为16.2%(24/148),两者比较差异有统计学意义(χ2=7.355,P<0.05);HBsAg(+)产妇血清HBV DNA载量<420 IU/ml时,其对应的乳汁中均未检出HBV DNA;血清HBV DNA载量在420~104 IU/ml区间时,其对应乳汁中HBV DNA检出率为14.3%(3/18);血清HBV DNA载量在105~106 IU/ml区间时,其对应乳汁中HBV DNA检出率为71.4%(5/7);血清HBV DNA载量在107~108 IU/ml区间时,其对应乳汁中HBV DNA检出率为84.2%(16/19)(χ2=20.88,P<0.05);当血清HBV DNA含量升高时,乳汁中含量也相应增高,二者中度相关(r=0.628)。结论 HBsAg(+)产妇乳汁有不同载量的HBV DNA存在,其含量低于相应血清;随着血清HBV DNA载量的升高,产妇乳汁中HBV DNA载量有增高趋势,母乳喂养有潜在的传染性。     

核酸检测在血液传染病筛查的应用价值

目的 探讨核酸检测在血液传染病筛查[乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)]的应用价值.方法 选取2018-2019年在该院住院因手术或输血需要检测乙肝五项和抗HCV、HIV抗原抗体的500例患者血清标本.化学发光法检测乙肝五项、抗HCV、HIV抗原抗体,提取核酸定性检测HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA.比较两种方法的检测结果,不一致的标本检测病毒载量确认最终结果.结果 检测出11例HBV化学发光与核酸定性结果不一致标本,未检出HCV和HIV化学发光与核酸定性结果不一致标本.2例HBsAg阳性HBV DNA定性阴性检测标本检测载量均小于20 IU/mL.9例HB-sAg阴性HBV DNA定性阳性样品中2例未检测到HBV DNA载量,6例标本检测到HBV DNA载量小于20 IU/mL,1例标本HBV DNA载量为23.6 IU/mL.结论 HBV、HCV、HIV病原体核酸检测有利于检测出窗口期和免疫状态异常的感染者.     

兰州地区献血者HBV DNA检出率及相关因素分析

目的探讨兰州地区无偿献血人群中HBV DNA阳性检出率及相关因素,为保证血液安全提供参考。方法选取我中心2015—2017年58例经ELISA法检测HBsAg为阴性,应用实时荧光聚合酶链反应技术(Real Time-PCR)检测血清HBV DNA,定性实验检测结果为阳性的无偿献血者作为研究对象,比较HBV DNA检出率在献血方式、性别、民族、年龄等方面有无差异。结果 2015—2017年共有58例HBV DNA为阳性,检出率为3.4酃。自愿献血与团体献血HBV DNA检出率比较,有显著性差异(P<0.05);不同性别、不同年龄间HBV DNA检出率比较,有显著性差异(P<0.05);不同少数民族之间HBV DNA检出率比较,无显著性差异(P>0.05)。结论兰州地区无偿献血者中存在HBsAg检测结果为阴性但是HBV DNA为阳性的献血者,存在输血传播疾病的风险,核酸检测可以降低HBV输血传播的风险,提高血液质量的安全性,同时应扩大自愿献血和团体献血人群比例,减少应急献血人群比例,取消互助献血。     

HBsAg阳性孕妇IL-4的表达在HBV宫内传播中的作用

目的 探讨HBsAg阳性孕妇外周血IL-4水平在乙型肝炎病毒（HBV）宫内传播中的表达变化。方法 以陕西省西北妇女儿童医院住院分娩的306例HBsAg阳性孕妇为病例组,74例健康孕妇为对照组进行流行病学调查,采用ELISA法检测孕妇和新生儿外周血乙型肝炎5项指标,采用实时荧光定量PCR检测HBV DNA水平,采用流式液相芯片法检测细胞因子IL-4水平。结果 HBsAg阳性孕妇发生HBV宫内显性感染（DBI）、HBV宫内隐匿性感染（OBI）和HBV宫内传播(BIT)率为11.44%（35/306）、36.60%（112/306）、48.04%（147/306）。对照孕妇IL-4水平低于HBsAg阳性孕妇组、HBV宫内未传播组(NBIT)、显性感染组（DBI）和隐匿性感染组（OBI）,差异均有统计学意义（均有P<0.01）;HBeAg阴性组中DBI组的IL-4水平高于OBI组和HBIT组,差异有统计学意义（P<0.05）; 随着母血中HBV DNA载量的增高,DBI组IL-4水平呈下降趋势（P<0.05）,在HBV DNA载量小于10³ IU/mL时,DBI组IL-4水平高于OBI组（P<0.05）和NBIT组（P<0.01）,并且随着BIT程度的加重,母血中IL-4水平呈增高趋势（P<0.05）;多因素分析显示：孕妇HBeAg和HBV DNA 载量与其IL-4水平呈正相关;孕妇HBeAb与其IL-4水平呈负相关。结论 HBsAg阳性孕妇细胞免疫功能紊乱导致 IL-4水平升高,开展HBsAg阳性孕妇外周血IL-4监测对其新生儿是否发生HBV宫内传播可能具有一定预测作用。     

浙江省农村自然人群隐匿性乙型肝炎病毒感染（OBI）情况及进化特征分析

 【摘要】目的 了解浙江省德清县农村一般人群隐匿性及实际乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染情况及病毒株S基因的分子特征。方法 采用多级抽样方法进行横断面调查,在取得调查对象知情同意的基础上采集调查表信息并采血。采用Epidata 3.2软件录入调查表信息,双录入并核对;采用SPSS 18.0软件进行数据分析;对所有样品进行乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen,HBsAg) ELISA检测及病毒载量real time PCR测定,并对HBsAg检测阳性或病毒载量测定阳性的标本进行后续HBV S基因PCR扩增和测序;采用MEGA 5.0软件对测得序列进行进化分析。结果 共调查对象1 720例,调查人群中HBsAg阳性者共162例,隐匿性乙型肝炎病毒感染(occult hepatitis B virus infection,OBI)者共4例,实际HBV感染率为9.65% (166/1 720),OBI感染率为2.57‰ (4/1 558)。显性和隐匿性病毒株病毒载量中位数及四分位数范围分别为866 (425,12 500)IU/mL和314 (216,677.5)IU/mL,前者显著高于后者。HBsAg阳性血清样本扩增得到71株显性病毒株S基因序列,HBsAg阴性血清样本扩增得到4株OBI病毒株S基因序列。OBI病毒株均为C基因型,adrq+血清型。显性HBV病毒株54株为B基因型,其中有2例标本为adw3血清型,其余52例均为adw2血清型;余17株为C基因型,adrq+血清型。OBI病毒株中C基因型的比例显著高于显性HBV病毒株中C基因型的比例。B基因型显性病毒株发生I104F、L109V、I110L、S113T、T126I、P127T、Q129R、M133L、F134L、P135A、T140A、K141I、T143M/S、V159A、Y161F、A166G和R169P突变,C基因型显性病毒株发生I126S、I126T及F158S突变。OBI病毒株发生Q129R、I126T、 M133T及F161Y突变。结论 浙江省德清县一般人群存在一定比例的OBI感染,OBI感染病毒载量较低,OBI病毒株存在氨基酸突变,C基因型为其可能的优势基因型,需重视OBI预防问题。     

阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎患者血清HBsAg水平疗效的临床价值

目的探讨阿德福韦酯治疗慢性乙肝患者HBsAg水平疗效的临床价值。方法化学发光法检测40例慢性乙型肝炎患者在阿德福韦酯治疗前和治疗过程中HBsAg水平,聚合酶链反应技术检测HBV DNA及连续监测法检测ALT水平,并分析HBV DNA与HBsAg的相关性。结果 40例乙肝患者治疗前HBV DNA水平为(7.12±0.97)×106IU/mL,HBsAg水平为(1.91±0.37)×103IU/mL;经阿德福韦酯治疗3个月HBsAg已下降,6个月后显著下降(P<0.05),治疗3个月后HBV DNA显著下降(P<0.05);治疗两年后HBsAg和HBV DNA降至较低水平即(0.86±0.77)×103 IU/mL、(3.12±0.72)×102 IU/mL;治疗3个月ALT显著下降,治疗6个月基本恢复正常;治疗两年后其中1例慢性乙型肝炎患者产生耐药,从而导致HBV DNA、HBsAg和ALT水平反弹;同时HB-sAg与HBV DNA之间呈正相关。结论定期检测HBsAg浓度,有助于评估阿德福韦酯治疗乙肝疗效和及时发现耐药。