Ac-SDKP抑制SiO2介导的肺泡Ⅱ型上皮MLE-12细胞向间质转化的作用及机制

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸（Ac-SDKP）通过调控刺猬（hedgehog, HH）信号通路,对二氧化硅（SiO2）诱导的肺泡II型上皮MLE-12细胞发生上皮-间质转化（EMT）的作用及其机制。方法体外采用50μg/mL SiO2培养小鼠MLE-12肺泡Ⅱ型上皮细胞。实验分组为:（1）对照组、 SiO2诱导组、 Ac-SDKP组和SiO2+Ac-SDKP组;（2）溶剂对照组、 SiO2诱导组、 GDC-0449组和SiO2+GDC-0449组;（3）溶剂对照组、SiO2诱导组、GANT61组和SiO2+GAN61组。免疫细胞化学染色法检测SMO和Gli1的定位表达。免疫印迹法检测I型胶原蛋白（collagen type I, Col I）、α-SMA、E-cadherin、SHH、Smoothened （SMO）、胶质瘤相关癌基因同源蛋白（glioma-associated oncog... 更多     

高通量转录组测序研究过表达Ocstamp对MLE-12细胞基因表达的影响

目的 研究过表达Ocstamp对MLE-12细胞基因表达的影响。方法 构建稳定过表达Ocstamp和空载对照（NC）的MLE-12细胞并进行高通量转录组测序和生物信息学分析。蛋白免疫印迹法检测p-毛细血管扩张性共济失调突变激酶（ATM）、p-毛细血管扩张性共济失调（ATR）、p-p53、p21、p16、I型胶原蛋白（Col I）、Ⅲ型胶原蛋白（ColⅢ）、XI型胶原蛋白（Col XI）、己糖激酶2(HK2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、磷酸果糖激酶1(PFK1)、M2型丙酮酸激酶（PKM2）的表达，β半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老。结果 高通量转录组测序结果显示，与NC组相比，过表达Ocstamp的MLE-12细胞中有2 794个差异基因，其中GO分析和KEGG分析显示衰老信号、糖酵解信号和胶原沉积信号出现了异常激活，蛋白免疫印迹结果显示，与NC组相比较，p-ATM、p-ATR、p-p53、p21、p16、Col I、IColⅢ、Col XI、HK2、LDHA、PFK1、PKM2在Ocstamp过表达组中均上调（P<0.05），且β半乳糖苷酶染色阳性。结论 过表达Ocstamp能介导...     

AcSDKP对硅肺纤维化大鼠胶原含量及NF-κBp65表达的影响

目的研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对硅肺纤维化大鼠肺内胶原合成及核转录因子κB(NF-κB)p65的影响。方法将大鼠分为3组:对照组(每只大鼠支气管内灌注生理盐水1mL,8周后处死)、硅肺模型组(每只大鼠支气管内灌注SiO2混悬液1mL,8周后处死)、AcSDKP治疗组(每只大鼠支气管内灌注SiO2混悬液1mL,并持续给予AcSDKP 800μg·kg-1·d-1,8周后处死)。从HE染色、VG染色和羟脯氨酸胶原测定法检测各组大鼠肺纤维化程度及胶原含量,用免疫组化法和免疫印迹法检测NF-κB p65蛋白的表达。结果与对照组比较,硅肺模型组硅结节的数量、胶原含量和NF-κB p65的表达增高。与硅肺模型组相比,AcSDKP治疗组矽结节的数量、胶原含量和NF-κB p65的表达降低。结论 AcSDKP可能会通过增加B抑制蛋白(I-κB)的稳定性来抑制NF-κB p65的活性及表达,进而影响着肺泡炎与硅肺纤维化的进展。     

抗纤维化短肽Ac-SDKP对Ang Ⅱ诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞分化的调控作用与机制

目的 探讨抗纤维化短肽N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞分化的调控作用与机制.方法 采用AngⅡ诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞分化,并予以缬沙坦、Ac-SDKP和PD98059预处理.免疫组织化学染色法检测E-钙黏蛋白(E-cad)的表达,激光共聚焦扫描显微镜检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)1/2的共定位表达.Western-blot法检测E-cad、α-SMA、Ⅰ型胶原、血管紧张素受体1(AT1)、P-ERK1/2及ERK1/2的定量表达.结果 与对照组比较,Ang Ⅱ刺激组细胞E-cad表达下降,α-SMA、Ⅰ型胶原、AT1和P-ERK1/2的表达增高;而缬沙坦、Ac-SDKP、PD98059预处理后,均降低Ang Ⅱ诱导的A549细胞α-SMA、Ⅰ型胶原、AT1的表达升高及E-cad表达下降(P<0.05).结论 AngⅡ-AT1-ERK1/2通路介导肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞分化,而Ac-SDKP可通过AngⅡ-AT1-ERK1/2通路介导抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞分化.     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸对肌成纤维细胞分化的作用

目的矽肺是我国最严重的职业病之一。文中研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline,Ac-SDKP)对血管紧张素(angiotensin,Ang)Ⅱ诱导的细胞外信号调节激酶信号(extracelluler signal-regulated kinase,ERK1/2)信号和Jun氨基末端激酶信号(Jun N-terminal kinase,JNK)的调控,抑制人胚肺MRC-5成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化。观察AngⅡ是否经由ERK1/2和JNK信号诱导人胚肺MRC-5成纤维细胞向肌成纤维细胞分化以及Ac-SDKP对此过程的调节作用。方法实验分为5组:对照组(无血清培养基培养)、AngⅡ诱导组(采用100 nmol/L AngⅡ诱导MRC-5细胞)、SP600125干预组(予以JNK信号阻断剂SP600125预处理)、PD98059干预组(ERK1/2信号阻断剂PD98059预处理)和Ac-SDKP干预组(Ac-SDKP预处理)。MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及其上游转录因子血清反应因子(serum response factor,SRF)、p-ERK1/2和p-JNK的定位及表达;Western blot法检测Ⅰ型胶原、α-SMA、SRF和p-ERK1/2、p-JNK的表达水平。结果 AngⅡ诱导组A值(0.56±0.08)为对照组(0.27±0.05)的2.07倍;SP600125干预组、PD98059干预组和Ac-SDKP干预组A值分别为(0.39±0.02)、(0.40±0.03)、(0.36±0.05)与AngⅡ诱导组(0.56±0.08)比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);AngⅡ诱导组的Ⅰ型胶原、α-SMA、SRF蛋白水平明显上调,分别是对照组的4.50、3.50和3.00倍;AngⅡ诱导组能够上调p-JNK和p-ERK1/2的表达,分别是对照组的6.71和7.90倍;而Ac-SDKP干预组能够抑制p-JNK和p-ERK1/2的表达,分别是AngⅡ诱导组的29.79%和46.84%。结论Ac-SDKP能够通过对AngⅡ介导的ERK1/2信号、JNK信号的调节,抑制肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化。     

PDGF/ROCK通路在AcSDKP抑制大鼠矽肺纤维化形成中的作用

目的:探讨血小板源性生长因子/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(PDGF/ROCK)通路在肺纤维化发病机制中的作用以及N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)能否通过对PDGF/ROCK的调节而发挥抗矽肺纤维化作用。方法:采用非暴露式气管二氧化硅混悬液灌注法制备大鼠矽肺模型。60只SPF级健康成年Wistar 大鼠随机分为模型对照4周组、模型对照 8 周组、矽肺模型 4 周组、矽肺模型 8 周组、AcSDKP 治疗组和AcSDKP预防治疗组,每组10 只。免疫组织化学染色法检测各组大鼠肺组织中phospho-PDGFR-β的表达与分布,Western blotting法检测各组大鼠肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、PDGFR-β、phospho-PDGR-β、ROCK、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的表达。 结果:与相应模型对照组比较,矽肺模型组大鼠肺组织中α-SMA、PDGFR-β、phospho-PDGFR-β、ROCK以及Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);形态学检测可见较多的phospho-PDGFR-β阳性表达细胞分布在矽结节与间质纤维化区域。与矽肺模型4周组和模型8周组比较,AcSDKP 治疗组和预防治疗组大鼠肺组织中α-SMA、PDGF-β、phospho-PDGFR-β、ROCK、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);免疫组织化学染色,phospho-PDGFR-β蛋白表达明显减少。 结论:PDGF介导的ROCK信号转导通路可能通过促进大鼠肌成纤维细胞转化而促进矽肺大鼠肺组织中的胶原合成,进而促进矽肺纤维化的形成。AcSDKP 可能通过PDGF/ROCK通路抑制矽肺大鼠肺内肌成纤维细胞的分化,减少其胶原的合成与分泌,进而发挥抗矽肺纤维化的作用。     

Ac-SDKP抑制YEATS4拮抗实验性矽肺的机制

目的研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酰(N-acetyl-seranyl-aspartate-lysyl-proline,AcSDKP)通过调节含YEATS结构域蛋白4(YEATS domain containing protein 4,YEATS4)从而抑制矽肺纤维化的作用及其机制。方法 RAW264.7细胞分为si RNA阴性对照组(si RNA-Control,si C)、si RNA-YEATS4组(siY)、SiO_2+si RNA阴性对照组(S+si C)和SiO_2+si RNA-YEATS4组(S+siY);以及对照组(Control,C)、SiO_2诱导组(SiO_2,S)、SiO_2+Ac-SDKP处理组(SiO_2+Ac-SDKP,S+Ac)和Ac-SDKP处理组(Ac)。Wistar大鼠分为对照24周组(Control 24week,C24)、矽肺24周组(Silicosis 24 week,S24)和Ac-SDKP治疗组(Ac-SDKP treatment 24 week,Ac24)。免疫印迹法(Western blot)检测I型胶原(Collagen type I,COL I)、巨噬细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、精氨酸酶-1(Arginase-1)和YEATS4的表达。免疫组织化学染色法(Immunohistochemical staining,IHC)检测YEATS4在肺组织中的定位及表达。结果 Western blot结果显示,在RAW264.7细胞中,分别与si C、S+si C组比较,siY组、S+siY组COL I、MCP-1、Arginase-1表达均明显降低(P0.05);与C组比较,S组COL I、MCP-1、Arginase-1和YEATS4高表达;与S组比较,S+Ac组中COL I、MCP-1、Arginase-1和YEATS4表达降低(P 0.05)。IHC及Western blot结果显示,与C24组大鼠比较,S24组中COL I、MCP-1、Arginase-1和YEATS4表达上调;与S24组比较,Ac24组中COL I、MCP-1、Arginase-1和YEATS4表达降低(P0.05)。结论 Ac-SDKP可能通过抑制YEATS4发挥抗矽肺纤维化的作用。     

Ac\|SDKP调节Rac1信号抑制皮肤肌成纤维细胞的转化和迁移

目的 研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)通过阻断小G蛋白Ras相关的C3肉毒素底物(Rac1)信号,抑制转化生长因子β1(TGF-β1)介导的皮肤肌成纤维细胞转化的机制。 方法 原代培养大鼠乳鼠皮肤成纤维细胞,分为空白对照组、TGF-β1诱导组及Ac-SDKP预处理组。划痕实验检测细胞迁移能力,免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Rac1蛋白的表达,Western-blot法检测α-SMA、血清应答因子(SRF)、心肌蛋白相关转录因子(MRTF-A)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)及Rac1蛋白的表达。 结果 细胞划痕实验显示,TGF-β1诱导组与空白对照组比较,细胞迁移至中央划痕区的距离明显增大,Ac-SDKP预处理组与TGF-β1诱导组比较,细胞迁移至中央划痕区的距离减小。免疫细胞化学法检测结果显示,TGF-β1诱导组α-SMA和Rac1的阳性表达较空白对照组增强,而Ac-SDKP预处理组可明显抑制α-SMA和Rac1的阳性表达。TGF-β1诱导组的α-SMA,SRF,MRTF-A,ColⅠ及Rac1蛋白表达均较空白对照组明显上调,Ac-SDKP预处理组的蛋白表达较TGF-β1诱导组下降(P<0.05)。 结论 Ac-SDKP能够阻断Rac1信号,抑制TGF-β1介导的皮肤成纤维细胞迁移能力的提高和肌成纤维细胞转化。     

抗纤维化短肽对血清诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成与I、III型胶原表达抑制作用的实验研究

①目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对不同浓度血清(FBS)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的调节作用。②方法选用新生大鼠心脏成纤维细胞;采用3H-TdR掺入法检测心脏成纤维细胞的增殖;采用3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原的合成,采用westernblot法检测心脏成纤维细胞I型与III型胶原的表达。③结果在0.4%、2%和10%几种血清浓度的条件下,随着血清浓度的增加,反映心脏成纤维细胞增殖3H-TdR掺入量和胶原合成的3H-脯氨酸掺入量增加。表明一定浓度的血清能诱导心脏成纤维细胞增殖和胶原合成。与0.4%血清的基础培养条件相比较,10%高浓度血清能刺激心脏成纤维细胞I、III型胶原蛋白的表达。在10-10~10-8mol/L浓度范围内,AcSDKP对10%诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成有抑制作用,并且在10-9mol/L时,AcSDKP对心脏成纤维细胞增殖、胶原合成抑制作用最强。同时10-9mol/L的AcSDKP对心脏成纤维细胞I、III型胶原蛋白的表达也有明显的抑制作用。④结论AcSDKP对血清介导的心脏成纤维细胞增殖、胶原合成以及I、III型胶原蛋...     

LPA在小鼠矽肺模型的表达及其对小鼠肺上皮细胞EMT影响

目的 探究溶血磷脂酸(LPA)在小鼠矽肺模型中的表达及其对小鼠肺上皮(MLE-12)细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。方法 20只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和模型组,对照组每天给予0.9%氯化钠溶液,模型组采用鼻腔滴注100 mg/L二氧化硅(SiO₂)悬浊液50μl,连续7 d,在第28天时处死,取部分肺组织,免疫组化观察溶血磷脂酸1型受体(LPAR1)的表达,Western blot检测平滑机动蛋白α(α-SMA)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)和LPAR1的蛋白表达;细胞增殖实验检测SiO₂对MLE-12细胞的增殖能力;细胞划痕实验检测SiO₂对MLE-12细胞的迁移能力;将MLE-12细胞分为对照组、SiO₂刺激组和抑制剂组,Western blot检测LPAR1和EMT相关蛋白的表达水平。结果 Western blot检测显示模型组小鼠肺组织内α-SMA和COLⅠ表达增高,模型建立成功;免疫组化显示在模型组小鼠气管支气管周围上皮细胞内LPAR1表达阳性,呈现亮棕色;Western blo...     

Ac-SDKP 通过调节HDAC6 和HSP90抑制矽肺纤维化的机制研究

目的 探讨Ac-SDKP 通过对组蛋白去乙酰化酶6（HDAC6）、热休克蛋白90（HSP90）的调节，抑制大鼠矽肺纤维化的作用机制。方法 非暴露式支气管内灌注法复制大鼠矽肺模型，分为对照4 周组、矽肺模型4 周组、对照8 周组、矽肺模型8 周组、Ac-SDKP 抗纤维化治疗组和Ac-SDKP 预防治疗组。采用转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导原代培养新生大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化，并予以Ac-SDKP 和HDAC6 特异性抑制剂TCS HDAC6 20b 预处理。采用苏木精- 伊红染色法观察病理形态变化，免疫组织化学法、Western blot 检测Ⅰ型胶原、α- 平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、HDAC6 及HSP90 的表达。结果 免疫组织化学法结果显示，HDAC6 和HSP90 阳性表达主要位于矽结节内，给予Ac-SDKP 抗纤维化治疗或预防治疗均能抑制Ⅰ型胶原、α-SMA、HDAC6 及HSP90 蛋白表达的上调。而TGF-β1 能诱导大鼠成纤维细胞α-SMA 阳性表达，同时伴随HDAC6 和HSP90 蛋白表达上调，而予以TCS HDAC6 20b 或Ac- SDKP 预处理均能抑制该变化。结论 Ac-SDKP 能够通过对HDAC6 和HSP90 信号的调节，在体内外抑制矽肺大鼠肌成纤维细胞分化和胶原沉积，从而发挥抗矽肺纤维化的作用。     

p38MAPK信号通路对矽肺患者人胚肺成纤维细胞中TGF-β1表达的影响

目的探讨p38MAPK信号通路是否通过对SiO2活化的矽肺患者AM介导的人胚肺成纤维细胞（HELF）中TGF-β1表达的调控作用,进而参与肺纤维化的发生发展。方法以支气管肺泡灌洗法收集矽肺患者AM,在体外用含有SiO2（50μg/ml）的DMEM培养基和不含SiO2的DMEM培养基培养18h,然后收集培养的AM上清液。用组织贴块法获取培养HELF,与AM上清液共同孵育,用免疫细胞化学法检测HELF中TGF-β1的表达,Western blot法检测HELF中p-p38MAPK蛋白表达。结果经SiO2刺激的矽肺患者AM介导的HELF中TGF-β1和p-p38MAPK的表达与其他组相比增加,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论在本实验条件下,经SiO2刺激的矽肺患者AM培养上清可促进HELF表达TGF-β1和p-p38MAPK,10μmol/LSB203580可以抑制HELF表达TGF-β1和p-p38MAPK。     

miR-21对食管癌细胞放疗敏感性的作用及机制

目的 探讨miR-21对食管癌(EC)细胞放疗敏感性的作用及其机制.方法 将处于指数生长期的人食管癌KYSE150细胞置于培养瓶中培养,使用X放射线照射KYSE150细胞,得到放疗抵抗株KYSE150R;通过基因编辑技术合成hsa-miR-21 mimic和miR-21 inhibitor,使用Lipo3000进行细胞转染,分为KYSE-150细胞对照组(miR-21 inhibitor NC转染KYSE-150细胞)、KYSE-150细胞实验组(miR-21 inhibitor转染KYSE-150细胞)、KYSE-150R细胞对照组(miR-21 mimic NC转染KYSE-150R细胞)及KYSE-150R细胞实验组(miR-21 mimic转染KYSE-150R细胞);克隆形成实验检测放射敏感性,计算细胞存活分数,根据单靶多击模型模拟存活曲线;增殖实验,用酶标仪在450 nm处测定吸光度;Western blot分析p-ATM(Ser1981)、p-ATR(Ser428)、p-BRCA1(Ser1524)、p-Chk1(Ser345)、p-Chk2(Thr68)、p-H2AX(Ser139)、p-p53(Ser15)、p53的表达.结果 克隆形成实验显示,在亲本株KYSE150细胞中,inhibitor-KYSE150组细胞存活分数低于阴性对照组inhibitor NC组(P<0.05);在放疗抵抗KYSE150R细胞中,mimic-KYSE150R在细胞存活分数高于阴性对照组mimic NC-R组(P<0.05);细胞增殖实验显示,inhibitor-KYSE150组细胞增殖曲线高于阴性对照组inhibitor NC组,mimic-KYSE150R在细胞增殖曲线低于阴性对照组mimic NC-R组(P<0.05);蛋白质印迹分析显示,inhibitor-KYSE150组细胞中p-ATM、p-ATR、p-H2AX、p-BRCA1、p-CHK1、p-CHK2及p-p53表达水平低于inhibitor NC组细胞(P<0.05);mim-ic-KYSE150R组细胞中p-ATM、p-ATR、p-H2AX、p-BRCA1、p-CHK1、p-CHK2以及p-p53表达水平高于mimic NC-R组细胞(P<0.05).结论 miR-21过表达可降低EC对放疗敏感性,其机制可能与肿瘤细胞中DNA损伤有关.     

乙酰化微管蛋白α缺失表达在矽肺上皮-间质转化中的意义

目的探讨矽肺纤维化发生、发展进程中,乙酰化微管蛋白α（α-Ac-Tub）缺失表达与上皮-间质转化（EMT）的联系 。方法体内研究采用非暴露式支气管一次性灌SiO2构建矽肺大鼠模型（1,2,4,8周）。体外研究采用转化生长因子β1(TGF-β1)（5 ng/mL）诱导人A549肺泡Ⅱ型上皮细胞。免疫组织化学染色检测α-Ac-Tub、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、肺表面相关蛋白A（SP-A）的表达;免疫荧光检测α-Ac-Tub和α-SMA的表达。免疫印迹法检测I型胶原（Col I）,α-SMA,SP-A和α-Ac-Tub的表达。结果免疫组织化学染色结果显示,在矽结节内α-SMA阳性表达,而α-Ac-Tub及SP-A则多缺失表达。免疫荧光结果显示,α-Ac-Tub在TGF-β1诱导组表达减少,而α-SMA表达增加。免疫印迹结果显示,随着灌尘时间延长,Col I及α-SMA表达明显上调,而α-Ac-Tub及SP-A表达逐渐下调。采用TGF-β1诱导能显著促进α-SMA表达的上调,促进α-Ac-Tub及SP-A表达的下调。结论在矽肺纤维化中,α-Ac-Tub可能参与对EMT的调控。     

抗纤维化短肽对血清诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成与Ⅰ、Ⅲ型胶原表达抑制作用的实验研究

①目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对不同浓度血清(FBS)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的调节作用.②方法 选用新生大鼠心脏成纤维细胞;采用3H-TdR掺入法检测心脏成纤维细胞的增殖;采用3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原的合成,采用westernblot法检测心脏成纤维细胞Ⅰ型与Ⅲ型胶原的表达.③结果 在0.4%、2%和10%几种血清浓度的条件下,随着血清农度的增加,反映心脏成纤维细胞增殖3H-TdR掺入量和胶原合成的3H-脯氨酸掺入量增加.表明一定浓度的血清能诱导心脏成纤维细胞增殖和胶原合成.与0.4%血清的基础培养条件相比较,10%高浓度血清能刺激心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达.在10-10～10-8mol/L浓度范围内.AcSDKP对10%诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成有抑制作用.并且在10-9mol/L时,AcSDKP对心脏成纤维细胞增殖、胶原合成抑制作用最强.同时10-9mol/L的AcSDKP对心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达也有明显的抑制作用.④结论 AcSDKP对血清介导的心脏成纤维细胞增殖、胶原合成以及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达有明显抑制作用.     

高氧所致慢性肺损伤早产鼠肺纤维化与p16蛋白的变化

目的 观察高氧所致慢性肺损伤早产鼠的肺纤维化与p16蛋白的变化情况.方法将120只早产鼠随机分为对照组、高氧CLD 组和地塞米松组,每组40只,采用高浓度氧诱导CLD模型,于实验第1、3、7、14、21天分别应用酶联免疫吸附法及免疫组织化学技术检测其肺组织Ⅰ型胶原和p16蛋白表达.结果 与对照组比较,高氧CLD组第14天和第21天肺纤维化评分及Ⅰ型胶原水平增加,p16蛋白表达水平降低;产前地塞米松治疗可减轻高氧暴露后早产鼠肺纤维化评分及Ⅰ型胶原水平,但对p16蛋白表达水平降低无影响.结论 高氧诱导早产鼠肺组织p16蛋白表达水平降低,可能与CLD肺纤维化的发生机制有关系.     

赖氨酰氧化酶样蛋白4在肾间质纤维化中的表达及意义

目的 赖氨酰氧化酶样蛋白4（lysyl oxidase-like protein 4, LOXL4）是赖氨酰氧化酶（lysyloxidase, LOX）家族的最新成员,本研究旨在观察LOXL4在肾脏纤维化形成中的表达及意义。方法 收集慢性肾脏病患者的肾活检标本,单侧输尿管结扎（unilateral ureteral ligation, UUO）大鼠;TGF-β1刺激大鼠肾成纤维细胞（NRK-49F）。通过q-PCR,Western印迹法和/或免疫组化等方法检测LOXL4的表达及作用。结果 患者肾脏纤维化组织中LOXL4沉积显著高于正常肾组织(P<0.01);与Sham组相比,UUO组大鼠肾脏LOXL4、Col1(collgen 1)表达水平明显升高（P<0.01）;TGF-β1显著促进LOXL4、Col1的表达（P<0.01）;转染LOXL4过表达质粒后,NRK-49F胶原表达水平明显增多（P<0.01）;下调LOXL4后,胶原表达水平明显下降（P<0.01）。结论 在肾间质纤维化中LOXL4表达明显增加,其通过调控胶原纤维的表达而参与肾脏纤维化。     

FIZZ1诱导气道上皮间质转化导致哮喘早期气道重塑

目的 观察FIZZ1在小鼠哮喘模型气道上皮间质转化(EMT)中的作用,探讨FIZZ1引起哮喘早期气道重塑的机制.方法 随机将BALB/c小鼠分为哮喘模型组(OVA组)和正常对照组.采用免疫组织化学法测定小鼠气道上皮中FIZZ1蛋白的表达,采用实时定量-聚合酶链反应法检测小鼠肺组织中FIZZ1mRNA、Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白1、E钙粘蛋白的表达,采用小鼠肺上皮细胞(MLE-12)体外原代培养,FIZZ1重组蛋白及FIZZ1-shRNA干预,免疫印迹法检测E钙粘蛋白、Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白1的表达.结果 与对照组相比,OVA组小鼠气道上皮中FIZZ1、FIZZ1mRNA表达显著增强,Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白1显著增高,E钙粘蛋白明显降低,并且分别与FIZZ1呈正相关和负相关;体外原代培养MLE-12,FIZZ1重组蛋白干预,Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白1增高,E钙粘蛋白显著降低;FIZZ1-shRNA干预,蛋白表达正常.结论 FIZZ1作为EMT的一个潜在诱导剂,诱导E钙粘蛋白表达减少,而Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白1表达增加,从而诱导哮喘早期气道重塑.     

高氧致新生大鼠慢性肺损伤肺组织血管紧张素Ⅱ1型受体表达的变化

目的观察血管紧张素II1型受体(AT1R)在高氧致慢性肺疾病演变过程中的变化。方法足月新生大鼠生后24h内分别置在85%～90%玻璃氧舱和空气中持续暴露,实验开始后的第1,3,7,14,21d留取肺组织,HE染色观察肺组织病理改变、免疫组化和RT-PCR方法检测肺组织AT1R蛋白和mRNA表达。结果新生大鼠肺组织AT1R主要定位在肺泡上皮细胞、间质细胞、间质巨噬细胞、支气管和毛细血管外膜;空气组3d后表达逐渐下降,21d仅在肺泡上皮细胞及血管外膜弱表达;高氧组21d在损伤部位的间质巨噬细胞、成纤维细胞仍有较强的免疫染色。高氧组1,3,7dAT1R蛋白及mRNA表达与空气组无明显差别,14d和21d时较空气组表达显著增强(P<0.01)。结论血管紧张素II作为AT1R配体可能参与高氧慢性肺损伤的发生。     

血小板源性生长因子介导的Akt/c-myc信号转导途径在矽肺纤维化形成中的作用

①目的 探讨血小板源性生长因子(PDGF)AKT通路在矽肺纤维化形成中的作用.②方法 选用非暴露式气管灌注法复制大鼠矽肺模型,将其分为对照组(4周组和8周组)、矽肺模型组(4周组和8周组),采用免疫组织化学法检测磷酸化AKT、c-myc蛋白的定位与分布情况,免疫印迹法检测肺组织内PDGF、AKT、磷酸化AKT、c-myc以及I型和III型胶原蛋白的表达.③结果 与相应的对照组相比,矽肺模型组大鼠肺组织内PDGF、磷酸化AKT、c-myc蛋白以及I型和III型胶原蛋白的表达均增加(P<0.05);各组间比较AKT蛋白表达无明显改变.④结论 PDGF介导的AKT及其c-myc促进细胞增殖途径,促进了肺组织间质细胞的增生及其胶原的合成,促进了矽肺纤维化的形成与进展.