小鼠胚胎干细胞体外非定向分化培养系统的建立及其形态学观察

目的 建立胚胎干细胞(embryonic stem cells，ES cells)体外非定向分化培养系统，为其向各种成熟细胞的定向诱导分化提供方法学和形态学基础。方法 选用BALB／c小鼠ES细胞，分别进行未分化培养和非定向分化培养，对培养系统中ES细胞的发育和分化情况进行观察。结果 ①ES细胞在含小鼠白血病抑制因子的培养液中保持未分化状态，呈克隆性生长；②ES细胞在分化第2～10天和11～13天分别发育为拟胚体(embryonic bodys，EBs)和囊胚；③分化第14天，囊胚贴壁形成以贴壁点为中心的细胞群落并分化多种类型细胞，包括类上皮细胞、心肌细胞和神经细胞等；④分化第17～30天，三维组织结构形成；⑤分化第36天，细胞出现衰退裂解。结论 ES细胞在该培养系统中自然分化为包括三个胚层的多种类型细胞，为下一步定向分化提供技术支持。     

小鼠胚胎干细胞体外定向分化为心肌细胞的实验研究

1981年，英国Evans等首先报道了由小鼠囊胚内细胞群经体外培养而成功获得胚胎性干细胞(embryonic stem cells，ES)。同年，美国Martine。建立了小鼠ES细胞系，由于ES细胞具有分化的全能性，在体外培养过程中加入合适的诱导分化剂可以诱导出所需要的特殊类型细胞和组织，从而引起了人们的极大关注。ES细胞向心肌细胞定向分化的研究将为临床心肌损害的治疗提供一条新的思路。     

从人胚胎干细胞获得造血集落形成细胞

人类胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)是未分化的多潜能细胞,能在体外培养基中无限增殖。本文用体外研究证实当与小鼠骨髓基质细胞系S17或卵黄囊内皮细胞系C166共培养时,人ES细胞能分化为造血前体细胞。这种造血分化需要胎牛血清,而不需其他外源的细胞因子。ES细胞来源的造血前体细胞表达细胞表面抗     

昆明种系小鼠胚胎干细胞的分离培养及特性鉴定

目的 提高昆明小鼠胚胎干细胞（ES细胞）建株的成功率。方法 收集小鼠3．5d的囊胚培养,用小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层,形成的ES细胞样集落,经两次亚克隆分离培养ES细胞;进行相差显微镜观察、碱性磷酸酶染色和体内外分化能力鉴定。结果 获得两个稳定ES细胞集落,传至第11代。ES细胞呈集落样生长,碱性磷酸酶染色强阳性,体外分化的细胞沿拟胚体外向性生长,形态多样,在体分化可形成来源于3个胚层的组织。结论 两次亚克地获得的细胞具有ES细胞主要的生物学性状,有助于提高昆明小鼠ES细胞建株的能力。     

牛胚胎干细胞分离克隆及定向分化研究

胚胎干（embryonic stem,ES）细胞自Evans和Kanfman（1981）首次从小鼠胚胎中分离到后,胚胎干细胞技术一度成为各国学者研究的热点。ES细胞是自附置前早期胚胎或附置后胚胎原始生殖细胞分离克隆的一种具有自我更新和全向分化潜能的细胞,其具有与胚胎细胞相似的形态特征及分化潜能,同时又可以在体外进行培养、扩增、转化、筛选和冻存。它为克隆治疗以及深入研究基因结构与功能、胚胎发育、各种遗传病模型以及克隆动物和转基因动物等提供了新型实验材料。ES细胞在发育生物学基础研究、组织工程研究、临床医学等方面具有诱人的应用前景和重要的科学意义。本研究以牛为实验材料,探讨影响牛ES细胞分离克隆的因素,完善牛ES细胞的分离克隆程序,为人类ES细胞的研究提供相关的技术参数,主要取得了如下几方面的成果。     

胚胎干细胞向心肌细胞分化及中药干预研究

胚胎干细胞(ES)在体外分化培养条件下可以分化出各种组织细胞,其中包括心肌细胞,而且ES在体外向心肌细胞分化与体内完整胚胎心肌发育过程相符合。ES细胞还是研究心肌细胞发育分化机制、分子机制及鉴定其关键基因的理想模型。文章对ES细胞及其定向分化为心肌细胞的分子机制及中药干预研究进行综述。参考文献18篇。     

代谢型谷氨酸受体4在ES细胞体外分化为心肌细胞中的表达研究

目的:探索代谢型谷氨酸受体4(metabotropic glutamate receptor 4,mGluR4)在小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)体外分化为心肌细胞中的表达情况。方法:采用悬滴培养法,体外诱导ES细胞分化为心肌细胞,分别以维甲酸(retinoic acid,RA)和溶剂二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)作为阳性对照和阴性对照;利用免疫荧光法和流式细胞术,鉴定ES细胞衍生心肌细胞团中心肌特异性蛋白α-actinin/Troponin-T和mGluR4共表达情况;用Western Blot法,考察ES细胞定向分化为心肌细胞过程中mGluR4蛋白表达水平;同时观察了小鼠胚胎心脏发育过程中mGluR4基因和蛋白表达变化。结果:ES细胞及其分化来的早期心肌细胞团均表达mGluR4,随着心肌细胞逐渐成熟,mGluR4蛋白表达水平下调。流式细胞术结果显示,贴壁分化11 d的细胞团中mGluR4与心肌特异性蛋白Troponin-T共表达细胞比率仅为(3.00±1.00)%。同时,小鼠胚胎心脏发育过程中mGluR4基因和蛋白表达也呈下降趋势,直至成体小鼠心脏中不表达mGluR4蛋白。结论:ES细胞体外分化为心肌细胞过程中mGluR4有表达并呈下调趋势,与小鼠体内心脏发育过程中mGluR4表达情况基本一致。     

特异性标记胚胎干细胞分化的成血管细胞

克隆小鼠flk1基因启动子和增强子,构建成血管细胞特异性表达GFP载体,并转染小鼠胚胎干细胞(ES).将ES分化形成胚胎体(EB),观察EB中GFP表达,收集第4天的EB细胞进行流式细胞分析和分选,以获得GFP+细胞进行血细胞集落形成实验,以确定GFP标记细胞造血分化潜能.结果显示,成功构建成血管细胞特异性表达GFP载体;转染的ES形成的EB中可见绿色荧光细胞.流式细胞分析结果发现,转基因组EB中的GFP+细胞(27.5%)与对照组EB中FLK1+细胞(28.1%)比较差异无统计学意义;GFP+和FLK1+细胞形成集落数比较差异无统计学意义.表明对ES分化产生的成血管细胞实现了特异性标记,为后续研究ES体外造血分化的分子机制奠定了基础.     

大鼠胚胎干细胞的研究进展

胚胎干细胞是来源于早期胚胎内细胞团或着床后胚原始生殖细胞的一类未分化的全能性(多能性)干细胞,具有无限增殖和全向分化的能力。ES细胞能够自我更新和多向分化的生物学特性具有重要的医学价值,在基因治疗、组织工程学、药学研究等许多领域都具有广泛的应用前景。至今为止人类已建立了数百个小鼠的ES细胞系。但相对大鼠而言,由于其ES细胞在体外培养时较易发生分化,故建系较难。Iannaccone等从大鼠PVG近交系大鼠的囊胚分离克隆了大鼠ES细胞系-RESC-01。本文主要综述了目前分离、培养大鼠胚胎干细胞的技术进展,我实验小组在预实验中得到的结果及面临的问题,讨论其在临床工作中的应用前景。     

淫羊藿素诱导小鼠胚胎干细胞体外定向分化为神经细胞

目的:采用淫羊藿素(icaritin,ICT)改变小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)体外培养微环境,论证ICT提高ES细胞体外定向分化为神经细胞的效应。方法:采用拟胚体培养法,评价ICT对ES细胞体外定向分化为神经细胞的诱导作用;并利用RT-PCR法和免疫荧光法鉴定神经细胞特异基因和蛋白表达谱。结果:ICT在10-7mol/L浓度时,对ES细胞定向分化为神经细胞表型呈现最佳诱导效应,在分化d8 8时,分化率高达80%(P<0.001),并呈良好的量效和时效关系。分化神经表型者表达神经元特异性微管蛋白(β-tubulin Ⅲ)基因和神经胶质细胞特异性胶质纤维酸性蛋白(GFAP)基因,同时伴有神经前体细胞特异性标志蛋白(nestin)及β-tubulin Ⅲ和GFAP特异性蛋白阳性表达。结论:应用拟胚体培养微环境调控法,ICT可诱导小鼠ES细胞定向分化为神经细胞,并与神经发育依赖性特异基因和蛋白表达呈正相关。     

胚胎干细胞的研究新进展

随着干细胞生物学研究热潮的掀起，胚胎干细胞（embryonic stem cell，ES细胞）的研究也取得了巨大进步。ES细胞是指胚泡期的内细胞团中分离出的尚未分化的、能在体外培养、具有发育全能性的早期胚胎细胞。ES细胞具有胚胎细胞和体细胞的某些特性，既可进行体外培养、扩增、转化和制作基因突变模型等遗传操作，又保留了分化成包括生殖细胞在内的各种组织细胞的能力。因此，具有无限增殖、自我更新和多向分化的潜能。ES细胞在临床移植医学、细胞治疗、组织工程、药理学及发育生物学基础等研究领域具有重要的科学意义和巨大的应用前景，对于有效地治疗人类多种疾病，维护和促进人类健康具有巨大的潜在价值。     

淫羊藿苷诱导小鼠胚胎干细胞体外定向分化为心肌细胞方法学研究

目的 采用药物淫羊藿苷(icariin,ICA)改变小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)体外培养的微环境,建立一种药物介导提高ES细胞体外定向心肌细胞分化率的实验体系.方法 采用悬滴培养法,构建ICA诱导ES细胞体外定向分化为心肌细胞的实验评价体系;并利用RT-PCR法和免疫荧光法鉴定心肌细胞.结果 ICA在10-7mol&#183;L-1浓度时,对ES细胞定向分化为心肌细胞呈现最佳诱导效应,分化率最高达84%(P＜0.001).ES细胞源心肌细胞表达心肌特异性基因肌球蛋白重链(α-MHC)和心室肌球蛋白轻链(MLC-2v),且心肌特异性肌小节α辅肌动蛋白(α-actinin)和肌钙蛋白T(troponin T)呈阳性表达.结论 悬滴培养法结合药物改善微环境,可用于药物诱导ES细胞定向分化心肌细胞的实验体系.     

胚胎干细胞研究进展

胚胎干细胞 (embryonicstemcell,ES细胞 )是从哺乳动物的囊胚内细胞群 (innercellmass,ICM)和原始生殖细胞 (Pri mordialgermcells,PGCs)经体外分化、抑制培养并分离克隆出来的一种原始、高度未分化细胞[1 ] 。ES细胞是一种具有自我复制、更新和发育全能性并能产生后代能力的早期胚胎细胞。在特定条件下可分化为人体 2 0 0多种细胞类型 ,并可构建成心、肝、肾等各种组织和器官 ,最后能发展成一个完整的个体。自 1 998年Thomson[2 ] 等分离并克隆了人的ES细胞后 ,国内外掀起了ES细胞研究的高潮 ,打开了体外生产可供移植治疗的所有类型…     

胚胎干细胞的体外培养及分化的研究现状和前景

胚胎干细胞(Embryonicstemsell,ES细胞)是从早期胚胎内细胞团(Innercellmass,ICM)或原始生殖细胞(Primordialgermcell,PGCs)经体外分化抑制培养分离克隆的,ES细胞在组织工程、基因治疗和发育生物学等的应用研究中起着重要作用。本文介绍了ES细胞的生物学特点及国内外研究进展和动态,阐明了建立ES细胞系的技术要点以及它的应用前景。     

胚胎干细胞向造血细胞分化的研究进展

0 引言 成熟血细胞和造血干细胞来源的缺乏一直严重阻碍着临床输血和造血干细胞移植的发展,将胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES)这一能在体外大量扩增的全能干细胞体外分化为成熟血细胞和造血干细胞有可能解决这些难题。ES 细胞向造血细胞的体外分化也可为阐明哺乳动物造血发育的细胞和分子机制提供良好的模     

人羊膜诱导胚胎干细胞向表皮样干细胞的定向分化

目的 探索体外定向诱导胚胎干细胞（ES细胞）分化为表皮样干细胞的条件,为研究其分化机理及寻找新的皮肤组织工程种子细胞奠定基础。方法 将小鼠胚胎干细胞单独（对照组）或与人羊膜共培养4－5d,观察其形态分化,分别用β1整合素免疫组化和流式细胞仪检测胚胎干细胞向表皮样干细胞的分化。结果 与人羊膜共培养4－5d后,ES细胞分化为表皮细胞样的单层细胞,细胞排列紧密,呈多边形,免疫组织化学染色后,多数细胞呈现β1整合素阳性,对照组大量细胞死亡,未见β1整合素阳性细胞,流式细胞仪检测结果显示：实验组和对照组β1整合素细胞分别为81．4％和8．4％,两者比较差异显著,Z检验P＜0．01。结论 人羊膜组织可在体外诱导胚胎干细胞分化为表皮样干细胞。     

人羊膜诱导胚胎干细胞向表皮样干细胞的定向分化

[目的]探索体外定向诱导胚胎干细胞(ES细胞)分化为表皮样干细胞的条件,为研究其分化机理及寻找新的皮肤组织工程种子细胞奠定基础.[方法]将小鼠胚胎干细胞单独(对照组)或与人羊膜共培养4～5 d,观察其形态分化,分别用β1整合素免疫组化和流式细胞仪检测胚胎干细胞向表皮样干细胞的分化.[结果]与人羊膜共培养4～5 d后,ES细胞分化为表皮细胞样的单层细胞,细胞排列紧密,呈多边形,免疫组织化学染色后,多数细胞呈现β1整合素阳性,对照组大量细胞死亡,未见β1整合素阳性细胞;流式细胞仪检测结果显示实验组和对照组β1整合素阳性细胞分别为81.4%和8.4%,两者比较差异显著,Z检验P<0.01.[结论]人羊膜组织可在体外诱导胚胎干细胞分化为表皮样干细胞.     

胚胎干细胞的体外培养及分化的研究现状和前景

胚胎干细胞（Embryonic stem sell，ES细胞）是从早期胚胎内细胞团（Inner cell mass，ICM）或原始生殖细胞（Primordial germ cell．PGCs）经体外分化抑制培养分离克隆的，ES细胞在组织工程、基因治疗和发育生物学等的应用研究中起着重要作用。本文介绍了ES细胞的生物学特点及国内外研究进展和动态，阐明了建立ES细胞系的技术要点以及它的应用前景。     

干细胞研究的机遇与挑战

胚胎干细胞(embryonicstemcell,简称ES细胞)是胚胎或原始生殖细胞(PGC)经体外分化抑制培养而筛选出的具有发育多能性的细胞。它在发育阶段上类似于早期胚胎的内细胞团细胞(ICM细胞),具有与早期胚胎相似的分化潜能和正常二倍体核;兼有胚胎细胞和体细胞的类似特性,既可以进行体外培养、扩增、转化和筛选,又可分化为包括生殖细胞在内的各种组织,还可与受体胚胎嵌合,生产包括生殖系在内的各种组织的嵌合体。特别是人类胚胎干细胞的研究取得了突破后,近年来干细胞研究一直是人们关注的热点。本文依据自然辩证法的基本观点,论述干细胞研究领域…     

胚胎干细胞向胆管上皮细胞定向分化的体外实验研究

目的探讨胚胎干细胞（ES细胞）体外定向分化为胆管上皮细胞（BE细胞）的诱导条件和分化规律。方法选用小鼠ES细胞,首先进行拟胚体分化,然后在培养系统中按不同时间段分别添加转化生长因子（TGF）、酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）、肝细胞生长因子（HGF）和上皮生长因子（EGF）等,使ES细胞向BE细胞方向分化。用免疫细胞化学等方法检测BE细胞标记物细胞角蛋白7（CK7）、细胞角蛋白19（CK19）,γ-谷胺酰转肽酶（GGT）的表达,观察其表达时间和空间分布规律。结果ES细胞分化第10天,在拟胚体细胞分化群落中出现一种环状结构并有CK7和GGT表达,分化第13天时有CK19表达,三者的表达都随培养时间延长而增强;光镜下阳性细胞结构符合立方上皮细胞形态学特点。结论ES细胞在特定培养条件和细胞生长因子的作用下,可以定向分化为BE细胞并可以形成类胆管样结构。