腺苷A2A受体在慢性间歇低氧小鼠空间记忆损害中的作用

目的 探讨腺苷A2A受体(A2A receptor,A2AR)在慢性间歇低氧所致小鼠记忆损害中的作用及机制。方法 取42只清洁级健康雄性C57BL/6小鼠,随机分为空白对照组、空气模拟对照组、慢性间歇低氧模型组(模型组)、模型组+A2AR激动剂CGS21680组(A2AR激动剂组)、模型组+A2AR抑制剂SCH58261组(A2AR抑制剂组)、模型组+A2AR基因敲除组(A2AR敲除组)及模型组+DMSO溶剂对照组(溶剂对照组),每组6只。采用八臂迷宫测试各组幼鼠参考记忆错误、工作记忆错误及总错误数,尼氏染色法观察并计算海马CA1区神经元数量,膜片钳技术进行海马CA3-CA1区神经元长时程增强重要参数场兴奋性突触后电位(field excitatory postsynaptic potential, fEPSP)的测定,蛋白免疫印迹法检测海马突触融合蛋白syntaxin表达水平。结果 与对照组比较,模型组参考记忆错误、工作记忆错误及总错误次数均升高(P＜0.01),fEPSP斜率及syntaxin蛋白水平下降(P均＜0.01);与模型组比较,A2AR抑制剂组、A2AR基因敲除组参考记忆错误、工作记忆错误及总错误次数减少(P＜0.05),fEPSP斜率及syntaxin蛋白水平升高(P均＜0.05),A2AR激动剂组参考记忆错误、工作记忆错误及总错误次数增多(P＜0.01),fEPSP斜率及syntaxin蛋白水平下降(P均＜0.05)。结论 慢性间歇低氧可通过激活腺苷A2AR,导致海马CA3-CA1区神经元突触可塑性降低,造成小鼠空间记忆损害;敲除或抑制腺苷A2AR可改善海马神经元突触可塑性,减轻小鼠记忆损害。     

腺苷A2A受体基因敲除致小鼠肺动脉高压及低氧的诱导作用

目的 研究腺苷A2A受体基因敲除小鼠肺动脉压力变化、肺血管重构情况,及慢性低氧环境对其的影响,探讨A2A受体在肺动脉高压发生发展中的调节作用.方法 将A2A受体基因敲除小鼠(KO)及野生型小鼠(WT)随机分为常氧组和低氧组,低氧组置于低氧舱内(O2:9％～10％).2周后检测右心室收缩压(RVSP)、体循环压(SBP)、右心室/左心室加室间隔质量比(右心肥大指数)、肺组织HE染色、弹力纤维染色、透射电镜观察及免疫组化检测肺阻力血管平滑肌细胞肌动蛋白(α-SMA)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达情况.结果 常氧环境下,与WT相比A2ARKO小鼠呈现:①RVSP升高,右心肥大指数增加;②肺阻力血管壁增厚,管腔减小;③血管壁PCNA阳性细胞增多,α-SMA表达增强;④肺细小动脉内皮细胞活化,平滑肌细胞、成纤维细胞肥大,胶原纤维大量沉积.低氧2周后,KO小鼠RVSP升高及肺阻力血管重构程度进一步加重.结论 A2AR在肺动脉高压及肺血管重构发生发展过程中起重要的调节作用,慢性低氧可诱导肺动脉高压及肺血管重构进一步加重.     

三种腺苷受体拮抗剂对小鼠空间记忆的影响比较

目的：探讨腺苷受体非特异性拮抗剂咖啡因、腺苷A1受体特异性拮抗剂DPCPX及腺苷A24受体特异性拮抗剂SCH58261对小鼠空间记忆的影响。方法：C57BL／6J雄性小鼠65只，分成咖啡因低剂量组（10mg／kg，n=15）、咖啡因高剂量组（50mg／kg，n=15）、DPCPX组（5mg／kg，n=10）、SCH58261组（5mg／kg，n=10）和生理盐水对照组（n=15）。每日4次训练结束后立即腹腔注射给药。用Morris水迷宫检测定位航行的潜伏期和空间探索指标，评价实验动物的空间学习记忆能力。结果：①咖啡因小剂量（10mg／kg）组分别与高剂量（50mg／kg）组和对照组相比，定位航行试验的逃避潜伏期显著缩短，空间搜索试验穿越原平台位置的次数显著增多。②DPCPX和SCH58261对小鼠Morris水迷宫的定位航行试验的潜伏期和空间探索能力无明显影响。结论：腺苷受体非特异性拮抗剂咖啡因小剂量能够提高小鼠的空间学习记忆能力，而单用腺苷A1或A24受体特异性拮抗剂对空间学习记忆并无明显影响，小剂量咖啡因对空间学习记忆的影响可锥存在腺菩以外的调节机制。     

腺苷A_(2A)受体在小鼠大脑中动脉局灶缺血损伤中的作用及机制

目的 探讨阻断腺苷A2A受体对神经元缺血性损伤的影响及其可能机制.方法 将腺苷A2A受体基因敲除(A2ARKO)小鼠24只及同窝野生型(A2ARWT)小鼠24只分为A2ARKO组和A2ARWT组,每组下设脑缺血2 h(各6只)、脑缺血后再灌注22 h(各6只)和脑缺血后再灌注46 h(各12只)3个时相点,另外9只A2ARWT小鼠设为假手术组.线栓法制作大脑中动脉阻寒(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,脑组织切片甲酚紫染色结合网象分析技术测定脑梗死体积,干湿质量法测定脑组织含水量,免疫组化染色榆测钙结合蛋白(Calbindin D-28k,CB)和水通道白4(aquaporin,AQP4).结果 在脑缺血2 h、脑缺血后再灌注22 h和脑缺血后再灌注46 h,测定A2ARKO组的腩梗死体积均小于A2ARWT组的梗死体积;与A2ARWT组比较,A2ARKO组脑内CB表达较多,AQP4表达较少,脑含水最较低.结论 阻断腺苷A2A受体对脑缺血急性期和再灌注期损伤均有保护作用,并减轻缺血引起的脑水肿,可能与抑制细胞内钙超载和AQP4的表达有关.     

急性心理应激对小鼠记忆的影响

目的 研究急性心理应激对小鼠学习记忆功能的影响。方法 雄性昆明小鼠42只随机分成4组,即:八臂迷宫心理应激组(A)、八臂迷宫对照组(B)、Barnes迷宫心理应激组(C)、Barnes迷宫对照组(D),每组10只。旁观应激2d后,用放射状八臂迷宫和Barnes迷宫进行空间学习记忆能力的测试。结果 1.心理应激后小鼠完成八臂迷宫的时间[(527.4±95.15)s]较应激前[(362.20±70.61)s]延长,错误的臂数(6.70±3.34)较应激前增加,首错前连续正确的臂数(4.0±1.83)较应激前减少(P<0.01),与对照组比较也出现同样结果。2.心理应激后小鼠完成:Barnes迷宫时间[(111.1±67.43)s]较应激前时间[(59.92±32.81)s]延长,错误的洞数(9.6±6.31)较应激前增加(P<0.01),对照组的比较也得到同样的结果。结论急性心理应激可以损伤小鼠的空间学习和工作记忆能力。     

急性心理应激对小鼠记忆的影响

目的研究急性心理应激对小鼠学习记忆功能的影响.方法雄性昆明小鼠42只随机分成4组,即:八臂迷宫心理应激组(A)、八臂迷宫对照组(B)、Barnes迷宫心理应激组(C)、Barnes迷宫对照组(D),每组10只.旁观应激2d后,用放射状八臂迷宫和Barnes迷宫进行空间学习记忆能力的测试.结果 1.心理应激后小鼠完成八臂迷宫的时间[(527.4±95.15)s]较应激前[(362.20±70.61)s]延长,错误的臂数(6.70±3.34)较应激前增加,首错前连续正确的臂数(4.0±1.83)较应激前减少(P< 0. 01),与对照组比较也出现同样结果.2.心理应激后小鼠完成Barnes迷宫时间[(111.1±67.43)s]较应激前时间[(59.92±32.81)s]延长,错误的洞数(9.6±6.31)较应激前增加(P < 0. 01),对照组的比较也得到同样的结果.结论急性心理应激可以损伤小鼠的空间学习和工作记忆能力.     

热休克因子1及热休克蛋白对慢性心理应激鼠工作记忆的保护作用

目的 采用HSF1基因敲除小鼠模型探讨热休克因子1及热休克蛋白(heat shock protein,HSP)在慢性心理应激中对工作记忆的保护作用.方法 将热休克因子1(heat shock factor 1)基因野生型小鼠(HSF1+/+)和热休克因子1基因敲除小鼠(HSF1-/-)暴露于2个月的慢性心理应激,部分小鼠在暴露于心理应激前给予热休克预处理,2个月后采用T迷宫检测各组小鼠工作记忆,western blots检测和比较HSP72,HSP25表达,采用单因素方差分析和多因素析因设计方差分析对各组小鼠T迷宫转换正确数和HSP72,HSP25表达进行比较.结果 HSF1基因野生型小鼠中,慢性心理应激对T迷宫转换正确数(8.90±0.46)次与对照组(9.58±0.48)次没有明显影响(F(1,65)=0.23,P＞0.05),HSF1基因敲除小鼠中,慢性心理应激引起T迷宫转换正确数(4.00±0.26)次明显低于对照组(7.33±0.43)次,F(1,65)=32.39,P＜0.05).同时野生型小鼠心理应激后海马组织中HSP72表达(1.35±0.11),HSP25表达(1.05±0.03)明显高于HSF1基因敲除小鼠(0.23±0.03),(0.26±0.02),均P＜0.05).热应激也诱导HSP72(1.71±0.05),HSP25(1.33±0.05)表达增加,明显高于HSF1基因敲除小鼠[(0.26±0.03),(0.23±0.08),均P＜0.05],但未发现热应激预处理对T迷宫转换正确数有影响(F(1,65)=0.32,P＞0.05).结论 HSF1以及慢性心理应激诱导的HSP72,HSP25表达,在慢性心理应激中对工作记忆具有保护作用.     

热休克因子1及热休克蛋白对慢性心理应激鼠工作记忆的保护作用

目的采用HSF1基因敲除小鼠模型探讨热休克因子1及热休克蛋白(heat shock prote in,HSP)在慢性心理应激中对工作记忆的保护作用。方法将热休克因子1(heat shock factor 1)基因野生型小鼠(HSF1 / )和热休克因子1基因敲除小鼠(HSF1-/-)暴露于2个月的慢性心理应激,部分小鼠在暴露于心理应激前给予热休克预处理,2个月后采用T迷宫检测各组小鼠工作记忆,western b lots检测和比较HSP72,HSP25表达,采用单因素方差分析和多因素析因设计方差分析对各组小鼠T迷宫转换正确数和HSP72,HSP25表达进行比较。结果HSF1基因野生型小鼠中,慢性心理应激对T迷宫转换正确数(8.90±0.46)次与对照组(9.58±0.48)次没有明显影响(F(1,65)=0.23,P>0.05),HSF1基因敲除小鼠中,慢性心理应激引起T迷宫转换正确数(4.00±0.26)次明显低于对照组(7.33±0.43)次,F(1,65)=32.39,P<0.05)。同时野生型小鼠心理应激后海马组织中HSP72表达(1.35±0.11),HSP25表达(1.05±0.03)明显高于HSF1基因敲除小鼠(0.23±0.03),(0.26±0.02),均P<0.05)。热应激也诱导HSP72(1.71±0.05),HSP25(1.33±0.05)表达增加,明显高于HSF1基因敲除小鼠[(0.26±0.03),(0.23±0.08),均P<0.05],但未发现热应激预处理对T迷宫转换正确数有影响(F(1,65)=0.32,P>0.05)。结论HSF1以及慢性心理应激诱导的HSP72,HSP25表达,在慢性心理应激中对工作记忆具有保护作用。     

电针、手针长强穴对FMR1基因敲除小鼠学习记忆能力的影响

目的观察电针、手针长强穴对FMR1基因敲除小鼠学习记忆能力的影响。方法用Morris水迷宫实验测试电针、手针长强穴对FMR1基因敲除小鼠的学习记忆功能。结果①空间航行实验,手针组比电针组差异具有统计学意义（P<0.05）;②空间搜索实验,各象限无明显差异,FMR1基因敲除小鼠在电针干预后,在2、3象限停留的时间比其它2个象限长。结论手针长强穴能提高FMR1基因敲除小鼠的学习和记忆能力。     

腺苷A1受体基因敲除小鼠戊四氮致痫后大脑皮层蛋白组学的研究

目的观察腺苷A1受体基因敲除小鼠在戊四氮致痫后大脑皮层蛋白质的表达变化,探讨腺苷A1受体的抗癫痫和脑保护作用机制。方法采用PCR技术鉴定腺苷A1受体基因敲除小鼠与野生型小鼠,应用戊四氮(30mg/kg)腹腔注射制作癫痫模型,利用蛋白组学双向电泳检测癫痫发作后大脑皮层蛋白质表达变化,选取部分差异点进行质谱分析。结果点燃组癫痫模型点燃成功后24h、1个月,分别与对照组小鼠相比,大脑皮层多种蛋白质表达差异具有统计学意义。腺苷A1受体基因敲除小鼠与野生型小鼠相比较,对照组两者之间与点燃组两者之间多种蛋白质表达差异具有统计学意义。癫痫模型点燃成功后腺苷A1受体基因敲除小鼠与野生型小鼠相比,大脑皮层内表达下调蛋白为谷氨酰胺合成酶、醛缩酶A及甘氨酸受体;表达上调蛋白为蛋白激酶C及3-磷酸甘油醛脱氢酶。结论腺苷A1受体可能通过改变大脑皮层内多种蛋白质表达发挥其抗癫痫和脑保护作用。     

空间记忆维持期小鼠海马酪氨酸激酶B含量的变化

目的观察Morris水迷宫实验中小鼠记忆维持阶段海马酪氨酸激酶B(trkB)蛋白和mRNA的表达情况。方法将28只C57BL/6品系小鼠分为实验组(n=14)和对照组(n=14),实验组参加水迷宫实验,包括4 d训练和1 d探索实验;对照组仅参加1 d探索实验。记录训练期小鼠的潜伏期、游泳距离和平均游泳速度;探索实验中记录小鼠穿越平台次数和平台象限滞留时间百分比。探索实验结束后采用ELISA法测定小鼠海马trkB蛋白含量,采用Real-Time PCR法测定trkB mRNA表达。结果水迷宫训练期,实验组小鼠潜伏期和游泳距离随训练次数增加逐渐缩短(P<0.05);探索实验中实验组小鼠穿越平台次数和平台象限滞留时间百分比明显高于对照组(P<0.05);两组小鼠海马trkB蛋白和mRNA表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 Morris水迷宫实验显示,小鼠形成对平台空间位置的长期记忆;但在记忆维持阶段,小鼠海马trkB合成没有增加。     

纳洛酮对东莨菪碱所致大鼠空间工作记忆障碍的影响

目的研究纳洛酮对东莨菪碱所致大鼠空间工作记忆障碍的影响。方法大鼠随机分成三组 :正常组、东莨菪碱组和纳洛酮治疗组 ,采用水迷宫延缓性匹配作业。药物实验前 3 0min腹腔注射 ,记录每只大鼠延缓性匹配作业前后两次逃避潜伏期的时间。结果 ( 1)前后两次逃避潜伏期在正常组呈极显著性差异 ( 4 6.4± 17.7,13 .4± 8.2 ,P <0 .0 0 1) ,东莨菪碱组无差异 ( 2 3 .6± 14 .3 ,18.1± 9.8,P >0 .0 5 ) ,纳洛酮治疗组呈显著性差异 ( 2 7.9± 14 .3 ,9.0± 3 .8,P <0 .0 5 )。 ( 2 )前次逃避潜伏期三组间进行比较 ,东莨菪碱组显著低于正常组 ( 2 3 .6± 14 .3 ,46.4± 11.7,P <0 .0 5 )。结论M 型胆碱能受体阻滞剂东莨菪碱能损害大鼠空间工作记忆 ,阿片受体阻滞剂纳洛酮能够改善这种损害 ,说明阿片系统和胆碱能系统在大脑学习记忆过程中存在相互影响。     

异氟醚对老年小鼠空间参考记忆和脑细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的 观察异氟醚对老年小鼠空间学习记忆能力及其大脑Caspase-3蛋白表达、细胞凋亡的影响.方法 24只16月龄C57BL/6老年小鼠分层随机分为异氟醚组(Iso,n=12)和对照组(Con,n=12).lso组使用1.0%异氟醚行麻醉暴露4h/d,连续2d;Con组同期只使用30%的氧气和70%氮气混合气.在麻醉暴露后,采用Morris水迷宫检测小鼠空间学习记忆能力,再分别使用免疫荧光染色法及TUNEL法检测小鼠大脑皮质区(CX)、海马Cal区和齿状回(DG)的Caspase-3蛋白表达及神经细胞凋亡的变化.结果 在Morris水迷宫的定位航行测试中,2组间逃避潜伏期的变化差异无显著性(F=0.007,P=1.235),但在空间探索实验测试中,Iso组在原平台所在象限(靶象限)停留时间[(34.5±5.0)%]明显短于Con组[(45.1±4.9)%],差异具有显著性(P<0.01).测试过程中2组小鼠寻找平台游泳的速度差异无显著性F=1.537,P=0.241).免疫荧光染色检测结果显示,DG、CAI及Cx区均可见Caspase-3阳性细胞,然而2组间的单位面积的阳性细胞数(阳性密度)比较差异无显著性(P>0.05).TUNEL 法检测到极少量阳性凋亡细胞.结论 重复使用1%异氟醚麻醉暴露可损害老年小鼠的空间参考记忆能力,但无明显影响大脑Caspase-3蛋白表达及细胞凋亡.     

施普善对慢性低O2高CO2大鼠空间学习记忆损害的干预作用

目的：观察慢性低O2高CO2大鼠的学习记忆改变及施普善的干预作用。方法：通过八臂迷宫训练筛选的SD大鼠,随机分为对照组（n=8）、慢性低O2高CO2组（n=8）、慢性低O2高CO2＋施普善1mL／kg组（简称施普善1mL／kg组,n=-8）和慢性低O2高CO2＋施普善2．5mL／kg组（简称施普善2．5mL／kg组,n=8）。将慢性低O2高CO2组及施普善干预组（1mL／kg、2．5mL／kg）大鼠放置于低O2高CO2密闭氧舱饲养4周,每天8h,每周6d。施普善干预组每天进氧舱前按既定剂量腹腔注射,慢性低O2高CO2组注射生理盐水。以八臂迷宫和Morris水迷宫实验测定其空间学习记忆功能。结果：与正常对照组相比,慢性低O2高CO2组的工作记忆错误（WME）为（1．31±1．19）次,明显高于正常对照组（0．56±0．50）次（P〈0．05）,而施普善1mL／kg组和2．5mL／kg干预组WME均较慢性低O2高CO2模型组明显减少（P〈0．05）。Mortis水迷宫,定位航行测试显示,慢性低O2高CO2模型组第3、第4、第5天的逃避潜伏期均较对照组明显延长（P〈0．05）,施普善1mL／kg组与慢性低O2高CO2组相比,第4、第5天的逃避潜伏期明显缩短（P〈0．05）,施普善2．5mL／kg组与慢性低O2高CO2组相比,第3、第4、第5天的逃避潜伏期明显缩短（P〈0．05）。空间搜索测试结果显示,慢性低O2高CO2组的平台穿越次数明显少于正常对照组及施普善干预组。结论：慢性低O2高CO2大鼠空间学习记忆受损,短时记忆受损明显,施普善干预可以改善慢性低O2高cO。大鼠模型的空间学习记忆能力。     

慢性癫痫对大鼠空间记忆再生能力的影响

目的:探讨慢性癫痫对大鼠空间记忆再生能力的影响,检测组胺前体物质组氨酸和胆碱酯酶抑制剂TAK-147对癫痫诱发记忆障碍的作用.方法:大鼠在放射状八臂(四臂放食物)迷宫训练成功后,隔日腹腔注射亚惊厥剂量(35 mg/kg)的戊四唑,直至完全点燃.完全点燃后在同一迷宫中测记忆的再现过程.结果:完全点燃后第1 d至第18 d,大鼠在放射状迷宫中的错误次数较对照组明显上升,且维持在一相对平衡的状态,31 d后与对照组一致.TAK-147剂量依赖性地改善了癫痫诱发的空间记忆再现障碍,包括参考记忆和工作记忆.组氨酸剂量依赖性地改善参考记忆,不影响工作记忆.结论:戊四唑点燃癫痫可导致大鼠空间记忆再生能力下降,可能与癫痫造成的胆碱能神经和组胺能神经活性降低有关.     

尼古丁对小鼠空间学习记忆能力的影响

目的研究尼古丁对小鼠空间学习记忆能力的影响。方法 20只雄性14周龄小鼠被随机分为尼古丁组和对照组,尼古丁组9只,对照组7只,其余4只经筛选后剔除。尼古丁组每天腹腔注射尼古丁溶液250 nmol.kg-1连续13 d;对照组腹腔注射等容积的纯水。用Morris水迷宫测小鼠的空间学习记忆能力;小鼠寻找水下平台的时间作为评价学习记忆功能的指标。结果定位航行实验第2天、第3天尼古丁组潜伏期比对照组长,差异有统计学意义(P<0.05);其余各时间点2组潜伏期比较差异无统计学意义(P>0.05)。尼古丁组小鼠在SE象限的游泳时间为(111.89±21.53)s,高于对照组的(85.44±12.56)s,差异有统计学意义(P<0.05)。反向学习第4天尼古丁组小鼠的潜伏期长于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);其余各时间点2组潜伏期比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论尼古丁短期内能够降低小鼠空间学习能力,长期应用后其效应变弱。     

雌激素对小鼠参考记忆的影响研究

目的:探讨雌激素去除(OVX)与雌激素替代(ER)对小鼠参考记忆的影响。方法:将3月龄的雌性C57BL/6J小鼠40只随机分为对照组和卵巢切除组,卵巢切除组又分为不给雌激素、给雌激素7d、给雌激素40d的3个亚组,每组10只。小鼠摘除卵巢后饲养至7月龄进行8臂迷宫实验,将给雌激素组小鼠于迷宫测试前7d和40d分别皮下埋植控释雌激素(17β-雌二醇)药丸(0.18mg/丸),测试各组小鼠在8臂迷宫的参考记忆错误率。结果:卵巢切除组不给雌激素亚组其参考记忆错误率明显高于对照组(P<0.05);给雌激素7d和40d亚组其参考记忆错误率明显下降(P<0.05,P<0.01),而且长期给雌激素亚组其参考记忆错误率明显少于短期给雌激素亚组。对照组和给雌激素组其错误率无显著性差异(P>0.05)。结论:雌激素去除明显损害了小鼠的空间参考记忆,而雌激素替代可以改善小鼠的记忆能力,并且长期的替代改善效果更明显。     

D-半乳糖致脑老化小鼠的物体识别能力障碍研究

目的应用物体识别方法研究D 半乳糖长期注射致脑老化小鼠模型的学习记忆能力 ,并比较物体识别方法与Morris水迷宫方法对该模型测试的灵敏性。方法C5 7BL/ 6小鼠 ,随机分成正常对照组、D 半乳糖低剂量组 (5 0mg/kg ,sc)、D 半乳糖高剂量组 (10 0mg/kg ,sc) ,连续造模 8周。以物体识别方法和Morris水迷宫方法测试各组动物的学习记忆能力。结果在物体识别测试中 ,D 半乳糖高剂量组分辨指数 (15 .71± 3 .94)较对照组 (4 5 .89± 7.41)减低具有非常显著性意义 (P <0 .0 0 1) ,低剂量分辨指数(2 4.69± 6.2 5 )与对照组的差异也存在显著性意义 (P <0 .0 5 )。在Morris水迷宫测试中 ,D 半乳糖高剂量组动物逃逸潜伏期比对照组延长有显著性意义 (P <0 .0 1) ;高剂量组在目标象限空间探索所停留时间与游泳距离比均较正常对照组减少有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论D 半乳糖可导致小鼠出现显著的物体识别能力障碍 ,用物体识别测试方法比Morris水迷宫方法更灵敏地反映该模型小鼠的学习记忆障碍。