广金钱草不同变异类型产量和质量的研究

目的:对人工栽培群体不同变异类型广金钱草药材的农艺性状、总黄酮、多糖、夏佛塔苷含量进行分析,遴选优良变异类型,为广金钱草优良品种选育提供依据。方法:采用紫外分光光度法测定总黄酮、多糖含量,HPLC法测定夏佛塔苷含量。结果:药材产量、总黄酮、多糖、夏佛塔苷含量在不同变异类型间存在差异,紫红茎柔毛近贴生型产量、总黄酮、多糖、夏佛塔苷含量均最高。结论:紫红茎柔毛近贴生型广金钱草是具有高产优质潜力的变异类型。     

不同采收时间广金钱草药材产量和质量研究

目的:考察不同采收时间对广金钱草产量和质量的影响。方法:在广金钱草不同采收时间收集药材样品,测定生长指标、产量和多糖、总黄酮、夏佛塔苷的含量。结果:广金钱草在不同采收时间各项生长指标、产量和多糖、总黄酮、夏佛塔苷含量差异显著。结论:广金钱草适宜在10月初采收。     

广金钱草化学诱变植株表型及SRAP遗传差异

目的:选育优良广金钱草品种(系)。方法:采用迭氮钠(NaN_3),甲基磺酸乙酯(EMS)和秋水仙素最佳剂量对广金钱草种子进行诱变处理,初步筛选出13株表型变异的广金钱草植株,对广金钱草变异植株及对照基因组DNA进行相关序列扩增多态性(SRAP)分析。结果:广金钱草在株高、地茎、分枝状况等方面发生大量变异;10对SRAP引物扩增出多态性条带3 285个,平均每对引物扩增出328.5条带,多态性比例平均为96.45%,广金钱草化学诱变植株遗传相似系数范围0.326~0.476,遗传相似系数较低,表明经化学诱变剂处理后广金钱草在基因组水平上存在真实的遗传差异;相似性差异程度大小顺序为V-13V-7V-6V-11V-10V-12V-9V-8V-4V-5V-3V-2V-1,表明NaN_3在分子水平上对广金钱草的影响比EMS和秋水仙素小;化学诱变处理后广金钱草变异程度高于不同种源地的变异,进一步表明人工诱变育种可以缩短育种年限,提高突变率。结论:该研究揭示了广金钱草化学诱变株表型特异性和遗传多样性,筛选了一些特异资源,为高产优质广金钱草新品种(系)的选育提供重要的科学依据。     

广金钱草总黄酮胶囊对照品的研究(英文)

目的:为广金钱草总黄酮胶囊制备含量测定用化学对照品。方法:采用常规柱层析结合制备型HPLC分离目标化合物,通过HPLC法测定其纯度和稳定性及其在胶囊中的含量,根据光谱数据(UV、IR、ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、1H-13CCOSY、1H-1HCOSY、1D-HOHAHA、1D-NOE、HMBC)鉴定其结构。结果:分离到的化合物被鉴定为异夏佛塔苷,其纯度在99以上,常温条件下放置3个月内稳定,其溶液在常温条件下8h内稳定。异夏佛塔苷在广金钱草总黄酮胶囊中含量为3.0以上。结论:该化合物可作为广金钱草总黄酮胶囊的含量测定用对照品,并且能从广金钱草中分离得到。     

正交试验优选复方广金钱草颗粒的提取工艺

目的:优选复方广金钱草颗粒的提取工艺。方法:以夏佛塔苷、总黄酮提取量和干膏得率的综合评分为指标,通过正交试验考察加水量、提取时间及温度对复方广金钱草颗粒水提工艺的影响;以总多糖、总黄酮含量及除杂量的综合评分为指标,通过正交试验优选水提液的醇沉工艺;以干膏得率、总黄酮及23-乙酰泽泻醇B含量的综合得分为指标,通过正交试验优选复方广金钱草颗粒的醇提工艺。采用UPLC测定夏佛塔苷及23-乙酰泽泻醇B含量,流动相分别为甲醇-0.4%磷酸溶液(32∶68)和乙腈-水(73∶27);采用UV测定总黄酮和总多糖含量。结果:最佳水提工艺条件为加8倍量水回流提取3次,每次1.5 h;最佳醇沉工艺为醇沉浓度60%,初始密度1.0 g·mL-1,醇沉时间8 h;最佳醇提工艺为加8,6倍量60%乙醇提取2次,提取时间分别为1,0.5 h。结论:优选的提取工艺稳定可行,适用于复方广金钱草颗粒的工业生产。     

种植方式与密度及采收期对广金钱草质量的影响

目的:探讨广金钱草的种植方式、种植密度及采收期对其产量和有效成分含量的影响,确定广金钱草的种植方式、种植密度和最佳采收时期。方法:采用广金钱草种苗移栽和扦插移栽的定植方式种植,收集不同时期的广金钱草样品,种子苗不同种植密度的样品,采用紫外分光光度法测定总黄酮含量,采用高效液相色谱法测定夏佛塔苷、异夏佛塔苷、维采宁-2、异牡荆苷、异红草苷含量,结合产量、生长形态,研究两种定植方式不同采收期有效成分动态变化,种子苗移栽及茎叶有效成分积累变化,考察不同密度种植的影响。结果:不同种植方式的广金钱草在生物形态及有效成分的积累存在显著的差异,通过茎叶有效成分的动态积累,可以确定其最佳采收期及最佳种植密度。结论:广金钱草在花蕾期前后采收,种植密度在株行距20 cm×30 cm的条件下,产量和质量综合比较得到最佳。     

不同种源地广金钱草药材质量变异与遗传多样性分析

目的:研究不同种源地广金钱草药材质量变异及遗传多样性,为合理利用广金钱草种质资源及优良品种选育奠定基础.方法:采用AFLP分子标记技术,对18个种源地广金钱草进行遗传多样性分析,用NTSYSpc-2.11F软件计算并分析广金钱草种质间的相似度,构建遗传系统进化树;采用HPLC测定药材夏佛塔苷含量,并进行方差分析.结果:通过筛选得到8对AFLP引物组合,共扩增出844个DNA条带,多态性条带为717个,多态性位点平均为84.27％;通过聚类分析,将18个种源地的广金钱草种质分为3大类.种源间广金钱草药材夏佛塔苷含量差异显著,海南三亚种源夏佛塔苷含量显著高于其他种源地药材夏佛塔苷含量.结论:不同种源广金钱草药材质量差异显著,遗传多样性丰富,蕴藏着优质的种质资源,可以进行综合开发及优良品种选育.     

广金钱草分布和品质适宜性区划研究

通过对华南和西南地区(广东、广西、海南和云南)的广金钱草实地调研,结合夏佛塔苷、多糖的含量,运用最大信息熵模型和地理信息技术,分别筛选出影响广金钱草分布适宜性和品质适宜性的主导生态因子,再对广金钱草的分布和品质进行适宜性区划。分布区划的结果表明,4月均温、最冷季节均温、土壤类型和寒冷指数4个生态因子对广金钱草分布适宜性的影响最大。品质区划的结果表明:1多糖含量与4月降水量呈显著性正相关;夏佛塔苷含量与4月均温、最冷季节均温呈显著性负相关,与10月、11月降水量,4月、5月日照时长呈极显著负相关,与4月降水量、温度季节性变化标准差呈显著性正相关,与2月、3月降水量呈极显著性正相关。2分别以夏佛塔苷、多糖为品质指标,依据品质区划模型绘制出广金钱草的品质区划图。该研究可为广金钱草生产区划、种植基地选择和定向培育提供科学选址依据。     

一测多评法评价不同荫蔽度下广金钱草的质量

目的建立一测多评(QAMS)法同时测定广金钱草中5种黄酮成分(夏佛塔苷、维采宁-2、异夏佛塔苷、异荭草苷、异牡荆苷),研究不同生长期不同荫蔽度对广金钱草生长和药效成分含量的影响。方法设置0(不遮阴)、50%、75%、90%4个不同荫蔽度,对比不同生长期各处理组广金钱草的产量及形态特征,并通过QAMS测定各处理组的药效成分。结果维采宁2、异夏佛塔苷、异荭草苷、异牡荆苷与内参物夏佛塔苷的相对校正因子分别为1.222,1.275,1.402,1.554,QAMS法与外标法余弦相似度均大于0.995,相关性良好。遮阴处理下的广金钱草产量显著减少,生长形态和活性成分含量有差异。结论 QAMS法可用于广金钱草中5种黄酮成分的含量测定。广金钱草采收期可考虑在花期,光照有利于花期广金钱草黄酮含量的积累,在花期过后,适当的遮阴可减缓黄酮成分的代谢。     

不同来源和部位的广金钱草中化学成分研究

目的:研究不同市场、不同产地、不同部位的广金钱草中3种化学成分含量,为广金钱草临床应用提供科学依据。方法:采用HPLC法,对不同药材市场、不同产地广金钱草地上部分、茎及叶中夏佛塔苷、异夏佛塔苷和异牡荆苷的含量进行测定。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%甲酸溶液(32∶68),流速为1.0 mL/min,检测波长为272 nm。结果:叶中夏佛塔苷、异夏佛塔苷和异牡荆苷的含量均高于地上部分和茎;亳州、安国、玉林、樟树、禹州5个市场地上部分及五通、中庸、宛田3个产地样品叶中夏佛塔苷含量多数均≥0.13%;异夏佛塔苷存在于地上部分、茎、叶中,异牡荆苷仅存在于叶中;玉林市场药效成分含量要优于其他市场,五通产地的药材质量要优于中庸、宛田产地。结论:广金钱草药材质量评价时,建议增加异夏佛塔苷这一指标;贮存药材时,建议减少贮存时间、保持药材完整性;叶是广金钱草3种化学成分的主要富集部位。     

三金排石颗粒质量控制研究

目的:建立三金排石颗粒的定性和定量控制方法.方法:采用薄层色谱法对三金排石颗粒中所含的广金钱草、牛膝、益母草、甘草进行定性鉴别,采用高效液相色谱法测定方中君药广金钱草的特征性成分夏佛塔苷的含量.结果:实验研究建立的薄层色谱法可鉴别出广金钱草、牛膝、益母草、甘草,阴性对照无干扰;夏佛塔苷进样量在0.09082～0.9082 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,夏佛塔苷平均回收率为103.71％,RSD为1.01％.结论:本研究所建立的方法操作简单可行,具有较好的专属性和准确度,可用于三金排石颗粒的质量控制.     

广金钱草适宜采收期研究

目的:考察不同采收时间广金钱草中总黄酮、异牡荆苷含量及产量变化趋势,以确定其最佳采收期。方法:采用柱色谱-UV法测定总黄酮含量;采用HPLC测定异牡荆苷含量,色谱条件:DiamonsilTM C18色谱柱(迪马公司,250mm×4.6mm,5μm);柱温25℃;甲醇-0.2%磷酸水溶液进行梯度洗脱;检测波长271nm;流速1mL/min。结果:总黄酮和异牡荆苷的含量在7月份达到最大,产量在8～9月份最高。结论:从产量和有效成分黄酮的含量变化上综合考虑,建议广金钱草最佳采收期在8月。     

星点设计-效应面法优选广金钱草提取工艺

目的优选广金钱草中夏佛塔苷和异牡荆苷的提取工艺。方法以乙醇体积分数、提取时间和加液量为自变量,以夏佛塔苷和异牡荆苷含有量的总评"归一值"为因变量,采用星点设计-效应面法优选广金钱草提取工艺。结果最佳提取工艺为12倍量65%乙醇提取2次,每次1.2 h。结论建立的数学模型预测精确度高。     

橡胶林下间作广金钱草的产量及药材质量研究

目的:初步评价广金钱草在橡胶林下的间作发展潜力。方法:以广金钱草的露地栽培为对照,对不同橡胶林下间作广金钱草的产量及其主要药材质量指标进行了比较研究。结果:与露地栽培相比,橡胶林下各间作处理广金钱草的产量及其黄酮、多糖、浸出物含量均有降低,整体上均呈现光照条件相对好的处理含量高于光照条件差的处理的趋势,其中,产量的下降幅度较大;广金钱草的夏佛塔苷、浸出物含量在荫蔽度较高的传统成龄胶园及中幼林中明显低于露地栽培处理,但在全周期间作模式胶园间作区靠中间位点该两指标及多糖含量均接近于甚至稍优于露地栽培处理;除传统成龄胶园间作处理下的灰分含量偏高外,各处理的广金钱草地上部药材质量均符合2015版中国药典标准。结论:初步认为,光照不足会影响橡胶林下间作广金钱草的产量及药效成分含量,其在海南进行露地栽培较具潜力,但也可作为荫蔽度较低的胶园的备选间作物。     

RP-HPLC法同时测定广金钱草中夏佛塔苷和异夏佛塔苷

目的用RP-HPLC分离广金钱草中的夏佛塔苷和异夏佛塔苷,并对其进行定量测定。方法色谱柱为依利特C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-0.025 mol/L磷酸溶液(三乙胺调pH至3.02)(15∶85);柱温30℃;体积流量0.9 mL/min;检测波长270 nm。结果广金钱草中夏佛塔苷的线性方程为Y=2×106X-153 980,进样量在0.158⁰.898μg范围内线性关系良好(r=0.999 7),回收率为100.0%,RSD为0.7%;异夏佛塔苷的线性方程为Y=3×106X-86 359,进样量在0.0760.898μg范围内线性关系良好(r=0.999 7),回收率为100.0%,RSD为0.7%;异夏佛塔苷的线性方程为Y=3×106X-86 359,进样量在0.076⁰.436μg范围内线性关系良好(r=0.999 6),回收率为99.9%,RSD为0.6%。结论增加异夏佛塔苷的色谱检测有利广金钱草及其制剂的质量控制。     

广金钱草总黄酮成分不同提取方法的比较

目的比较不同方法提取广金钱草中总黄酮成分的效果。方法以总黄酮提取率及HPLC指纹图谱评价水提法、醇提法、酶解法和半仿生法提取广金钱草的效果,紫外分光光度法测定总黄酮含有量,HPLC指纹图谱共有模式评价各提取液中黄酮类共有成分的变化。结果酶解法与醇提法的总黄酮得率都较高,其中前者对广金钱草的特征成分夏佛塔苷的提取效果更好,而水提法与半仿生法的提取效果较差,尤以后者为甚。结论 4种提取方法的效果依次为酶解法醇提法水提法半仿生法。     

不同干燥方法对广金钱草鲜品黄酮成分的影响

目的:利用高效液相色谱法同时测定广金钱草鲜品、晒干品、阴干品和烘干品中夏佛塔苷、异夏佛塔苷、异荭草苷3种主要黄酮成分,并对他们进行含量比较。方法:采用Phenomenex Kinetex C_(18)色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),甲醇-0.1%甲酸溶液(pH 3.5)为流动相,等度洗脱,流速:1.0 mL/min,柱温:40℃,检测波长:272 nm。结果:所建立的方法可有效的分离并测定3种黄酮成分,符合方法学考察要求,实验结果显示广金钱草鲜品与不同干燥方式的样品在黄酮含量上具有较大的差异。结论:该方法简便、准确、重复性好,可用于考察不同干燥方法对广金钱草质量的影响,有利于药材的加工。     

广金钱草中总黄酮提取工艺研究

目的：用正交实验法优选广金钱草中总黄酮的提取工艺。方法：以50g原药材的总黄酮提取量为评价指标，选择提取用水倍量（倍）、提取时间（h）、提取次数（次）、醇沉浓度（％）为考察因素，采用正交实验法L9（3^4）确定广金钱草中总黄酮的最佳工艺，采用分光光度法对干浸膏中总黄酮的含量进行了测定，检测波长272nm。结果：最佳提取工艺条件为提取所用水量为15倍，提取次数为3次，回流提取时间为1．5h，醇沉浓度为50％，芦丁在4．36～21．8μg/ml浓度范围之内呈良好的线性关系。平均回收率为98．92％，RSD为1．85％。结论：总黄酮正交提取工艺的研究，结果比较可靠，含量测定方法简便、准确，可用于广金钱草干浸膏中总黄酮的含量测定。     

指纹图谱、模式识别结合一测多评法在广金钱草质量评价中的应用研究

采用Phenomenex PS C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%甲酸水溶液(30∶70),体积流量0.8 mL·min~(-1),柱温30℃,检测波长335 nm,进样量10μL,建立了不同产地广金钱草Desmodium styracifolium的HPLC指纹图谱,确定了10个共有峰,鉴定了其中5个共有峰:维采宁-1、夏佛塔苷、异荭草苷、异夏佛塔苷、异牡荆苷。通过相似度评价、聚类分析、主成分分析和偏最小二乘判别分析方法对21批广金钱草药材指纹图谱进行研究,进而建立了一测多评法同时测定广金钱草药材中上述5种黄酮苷成分,为广金钱草的质量控制和品质评价提供参考。     

EMS诱变广金钱草突变体库的构建

目的:利用甲基磺酸乙酯(EMS)溶液诱变处理广金钱草种子,对M_1和M_2代群体单株在茎、叶、分枝等表型变异进行观察记录,并鉴定和筛选突变体。方法:以广金钱草种子为材料,用不同EMS浓度的磷酸缓冲液(0%,0.5%,0.6%,0.7%,0.8%)分别处理广金钱草种子4、8、12 h,使其发生诱变,得到半致死剂量和处理时间,再用该半致死剂量和处理时间创建突变材料,观察并统计诱变后植株表型性状的变异。结果:EMS诱变广金钱草种子的半致死剂量浓度为0.6%,处理时间为4 h。初步鉴定了M_1代658个单株和M_2代1 131个单株的形态学性状,共获得759份发生一个到多个性状变异的突变株,主要包括叶、株高、分枝数、株型以及其他性状变异。结论:初步构建了EMS诱变广金钱草突变体库,得到了对种植生产有利的变异性状,为优良品种选育提供了基本材料。