骨康含药血清对大鼠成骨细胞BMP-2表达的影响

目的:通过观察骨康含药血清对成骨细胞BMP-2表达的影响,探讨其治疗骨质疏松症的作用机制。方法:将6只大白兔随机分为3组:正常血清组、骨康含药血清组和雌二醇含药血清组,分别将血清添加入体外分离、培养的成骨细胞,每组8个样本,采用酶联免疫吸附法,检测成骨细胞BMP-2的表达。结果:骨康含药血清组BMP-2含量显著低于空白对照组(P<0.05),骨康含药血清组与雌二醇含药血清组BMP-2的含量无明显差异。结论:在去势状态下,骨康可能通过促进BMP-2的分泌,达到治疗骨质疏松症的目的。     

抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的探讨抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化及骨保护蛋白(OPG)和核因子-кB受体活化子配体(RANKL)蛋白表达的影响。方法采用中药血清药理学方法制备含抗骨增生胶囊大鼠血清。取乳鼠颅骨,利用复合胶原蛋白酶反复消化,离心,体外培养成骨细胞。加入不同浓度的抗骨增生胶囊含药血清进行干预,噻唑蓝(MTT)法检测中药血清对成骨细胞增殖的影响,测定碱性磷酸酶(ALP)活性,Western Blot检测OPG和RANKL蛋白表达。结果成骨细胞经抗骨增生胶囊含药血清作用后,细胞的生长呈现不同程度的增殖,中、高剂量中药组在24、48、72 h均有明显的促进作用(P0.01),且呈剂量依赖性。低剂量中药组在24、48 h时与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05),72 h时作用较强(P0.05)。除低剂量组培养24 h外,低、中、高剂量中药组培养24、48、72 h后,ALP分泌均呈不同程度增加,均有明显的促进作用(P0.01)。成骨细胞经过抗骨增生胶囊含药血清低、中、高剂量作用72 h后,对比值进行统计分析,与空白对照组比较,OPG表达明显升高(P0.01),RANKL表达明显降低(P0.01)。结论抗骨增生胶囊含药血清可以促进成骨细胞的增值、分化,从而促进骨形成。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法：将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组，通过体外分离和培养成骨细胞体系，运用分光光度计测定含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果：成骨细胞在10％的血清中培养7天时，用分光光度计测定ALP活性。发现骨康含药血清和罗盖全含药血清均能明显提高成骨细胞的ALP活性，骨康血清组和罗盖全血清组对成骨细胞ALP活性的平均影响率分别为128．1％和129．1％。结论：中药骨康含药血清能明显提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性。     

补肾强督方含药血清对强直性脊柱炎OPG/RANKL通路的作用

目的探讨补肾强督方对强直性脊椎炎(ankylosing spondylitis,AS)骨保护素和核转录因子-κB受体活化因子配基(osteoprotegerin receptor activator for nuclear factorκB ligand,OPG/RANKL)通路的作用机制。方法选取2009年1-5月卫生部中日友好医院中医风湿病科门诊和住院活动期AS患者30例,予补肾强督方,每天1剂,早晚分两次口服,连续3个月;另选取健康志愿者30名。采集治疗前后患者血清及健康人血清。将成骨细胞hFOB1.19分为患者治疗前组、治疗后组及健康人组(对照组)。各组细胞分别于含相应血清的基础培养基中进行培养。取成骨细胞培养上清液,采用ELISA法检测成骨细胞OPG/RANKL含量及mRNA表达,采用RT-PCR检测OPG/RANKL蛋白表达。结果与对照组比较,治疗前组成骨细胞OPG含量、OPG mRNA及蛋白表达、OPG/RANKL mRNA及蛋白表达均降低,RANKL mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与治疗前组比较,治疗后组OPG含量、OPGmRNA及蛋白表达、OPG/RANKL mRNA及蛋白表达升高,RANKL mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 AS患者血清能直接抑制成骨细胞OPG表达、促进RANKL表达、下调OPG与RANKL比率,补肾强督方治疗后的血清能直接促进成骨细胞表达OPG,抑制表达RANKL,上调OPG与RANKL比率,补肾强督方可能是通过直接上调成骨细胞OPG/RANKL而抑制破骨细胞分化和功能,达到促进骨生成,抑制骨吸收。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响.方法:将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组,通过体外分离和培养成骨细胞体系,运用分光光度计测定含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响.结果:成骨细胞在10%的血清中培养7天时,用分光光度计测定ALP活性,发现骨康含药血清和罗盖全含药血清均能明显提高成骨细胞的ALP活性,骨康血清组和罗盖全血清组对成骨细胞ALP活性的平均影响率分别为128.1%和129.1%.结论:中药骨康含药血清能明显提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性.     

温阳补肾方对兔激素性股骨头坏死血清OPG、RANK、RANKL的影响

目的：探讨温阳补肾方对兔激素性股骨头坏死血清OPG、RANK、RANKL表达的影响,进一步揭示温阳补肾方对激素性股骨头坏死的作用机制。方法：136只新西兰大白兔随机分为正常组、模型组、中药低、中、高剂量组。造模成功后,分别于给药后第4、8、12周取血清,用酶联免疫法检测OPG／RANK／RANKL含量。结果：第4周时,正常组、中药中、高剂量组RANK、RANKL明显低于模型组（P〈0．01）,而OPG明显高于模型组（P〈0．01）。第8周时,正常组、中药低、中、高剂量组RANK、RANKL明显低于模型组（P〈0．01）,而OPG明显高于模型组（P〈0．01）。第12周时正常组、中药低、中、高剂量组RANK、RANKL明显低于模型组（P〈0．01）,而OPG明显高于模型组（P〈0．01）。结论：大剂量激素使用可上调RANK、RANKL的表达,下调OPG的表达,使骨过度吸收从而破坏骨质导致股骨头坏死。温阳补肾方可以提高OPG表达,降低RANK、RANKL的表达,抑制破骨细胞的活化,促进新骨的形成,是治疗激素性股骨头坏死的作用机制之一。     

补肾壮骨液对骨质疏松模型大鼠血清OPG、RANKL蛋白表达的影响

目的：观察补肾壮骨液（BGY）对骨质疏松（POP）模型大鼠骨形态计量学变化及血清OPG、RANKL表达的影响。方法：采用去势法建立大鼠POP动物模型,BGY三个剂量组和阳性对照组分别给予BGY和rhIGF-1。3个月后,采用图象分析系统进行骨形态计量学分析,ELISA法分别测定大鼠血清OPG、RANKL。结果：BGY高、中剂量组骨形态计量值与模型组比较有显著性差异（P〈0.05）;BGY三个剂量组、阳性对照组及模型组的血清OPG和RANKL均较正常组升高,而BGY三个剂量组、阳性对照组测得较高的OPG和RANKL值,较之模型组有显著性差异（P〈0.05,P〈0.01）。结论：BGY可通过上调OPG,下调RANKL的表达,影响OPG/RANKL/RANK系统,使其骨量增加,骨结构改善,从而起到防治POP的作用。     

补肾中药对绝经后骨质疏松症患者骨密度和细胞因子OPG及RANKL影响的研究

目的：观察补肾中药对绝经后骨质疏松症（PMOP）患者的骨密度及细胞因子骨保护素（OPG）和核因子κB受体活化因子配体（RANKL）的影响。方法：选择60例患者设为治疗组。另选48例健康绝经同龄女性为对照组。治疗组口服补肾中药骨康方治疗。对照组不予服药。采用双能X射线骨密度仪测量腰椎、股骨颈及Wards三角的骨密度。采用夹心酶联免疫吸附法测定OPG和RANKL水平。结果：治疗后治疗组腰椎及股骨颈骨密度明显升高,OPG和RANKL水平明显降低,与治疗前比较,差异有显著性或非常显著性意义（P〈0.05, P〈0.01）。治疗后治疗组腰椎、股骨颈及Wards三角骨密度还是明显低于对照组（P〈0.05）,而OPG和RANKL水平明显高于对照组（P〈0.01）。结论：补肾中药可增加PMOP患者骨密度,降低OPG和RANKL水平。     

抗疏健骨颗粒对骨质疏松模型大鼠OPG和RANKL的影响

目的：观察抗疏健骨颗粒对骨质疏松模型大鼠骨保护素（OPG）和核因子邸受体活化因子配基（RANKL）的影响,探讨抗疏健骨颗粒防治骨质疏松症的作用机理。方法：60只大鼠随机分为6组,每组10只,除假手术组外切除大鼠双侧卵巢诱发大鼠骨质疏松症模型,连续给不同剂量的药物灌胃12周,心脏取血,离心取上清,采用ELISA法检测血清中OPG和RANKL含量,并与假手术组、模型组和尼尔雌醇组进行比较。结果：假手术组、尼尔雌醇组、抗疏健骨颗粒大剂量组OPG及OPG／RANKL与模型组比较P〈0．01;抗疏健骨颗粒中剂量组OPG、OPG／RANKL及大剂量组RANKL与模型组比较P〈0．05;抗疏健骨颗粒小剂量组OPG、RANKL、OPG／RANKL与模型组比较P〉0．05;抗疏健骨颗粒中剂量组RANKL与模型组比较P〈0．01;OPG含量随着抗疏健骨颗粒剂量的增大逐渐增高。结论：抗疏健骨颗粒能够升高OPG,抑制成骨细胞表达RANKL,从而达到防治骨质疏松症的作用。     

骨康及其含药血清中类性激素样物质含量的测定

目的：验证骨康方及其含药血清中是否有类性激素样物质的存在，同时探讨骨康含药血清的理想采血时间、以及给药剂量与血药浓度之间的关系。方法：采用放免法分别测定骨康方中及其不同给药剂量、不同采血时相的含药血清中类雌二醇(E2)样物质和类睾酮(T)样物质的含量。结果：骨康高浓度煎剂样品和骨康低浓度煎剂样品中均含有类E2样物质和类睾酮(T)样物质，而且呈明显的量效关系；最后一次用药后2小时采血的含药血清中类E2样物质含量最高，其中又以骨康中剂量组相对较高。结论：中药骨康及其含药血清中本身就含有类性激素样作用的物质；中药骨康含药血清理想采血时相可能是用骨康中剂量连续灌胃7天、最后一次用药后2小时采用。