盾叶薯蓣离体培养体系的建立及薯蓣皂苷元含量分析

以盾叶薯蓣叶片为外植体,研究不同浓度激素组合对盾叶薯蓣愈伤组织、不定芽及再生植株的影响,并对不同材料诱导获得的再生植株中薯蓣皂苷元含量进行了分析。结果表明,诱导愈伤组织的最适培养基为MS+BA2.0mg·L-1+2,4D0.1mg·L-1;诱导不定芽及芽生长的培养基的最适培养基为MS+BA0.1mg·L-1(0.05mg·L-1)+病毒唑5mg·L-1;诱导试管苗生根的最适培养基为MS/2+IAA0.2mg·L-1+NAA0.2mg·L-1。相同外植体诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量差异不明显;不同盾叶薯蓣诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量差异明显。     

基于胚性愈伤的四倍体盾叶薯蓣人工种子研究

目的:建立四倍体盾叶薯蓣人工种子的制作方法,并考察相关影响因素,为四倍体盾叶薯蓣的产业化推广提供技术支持。方法:以四倍体盾叶薯蓣的胚性愈伤作为人工种子的包埋繁殖体,研究人工胚乳组成、种皮基质、贮藏环境、萌发基质等因素对人工种子萌发与成苗的影响。结果:种皮基质为4%海藻酸钠+2%Ca Cl2+2%壳聚糖,胚乳成分为1/2 MS液体培养基+0.2 mg/L BA+0.5 mg/L NAA+0.1 mg/L青霉素+0.3%多菌灵粉剂+0.2%苯甲酸钠+1.0%蔗糖+0.5%活性炭+1.0%木薯淀粉时,人工种子的萌发率和成苗率最高;4℃条件下贮藏20 d后其萌发率及成苗率分别为76.7%、71.7%。结论:以胚性愈伤作为包埋繁殖体的四倍体盾叶薯蓣人工种子制作技术具有生产应用前景。     

菊叶薯蓣茎段离体快速繁殖技术研究

目的:建立菊叶薯蓣茎段快速繁殖体系,为其推广种植提供可行性。方法:利用植物组织培养技术,将菊叶薯蓣带腋芽的茎段斜插入不同培养基中培养,诱导其成为完整植株并进行炼苗和移栽。结果:在诱导培养基MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA中,芽苗诱导率达93.33%,效果最佳;生根诱导用1/2MS+0.2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.5mg/L KT培养基,生根率可达89.73%;试管苗移栽成活率达98%以上。结论:所建立的菊叶薯蓣快速繁殖体系是高效可行的。     

盾叶薯蓣悬浮培养细胞固定化的初步研究

用3%海藻酸钠固定盾叶薯蓣悬浮细胞,在MS+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.lmg/L培养液中常温振荡培养较长时间后,培养液提取物经TLC检测,表明该系统分泌出盾叶薯蓣主要成分──薯蓣皂甙元,但不能连续分泌。     

罗汉果试管苗茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生

目的 为罗汉果Siraitia grosvenorii种质资源的保存提供一条新途径.方法 以继代15d生长健壮的罗汉果试管苗0.8～1cm长嫩梢进行预培养,剥取2～3 mm茎尖,25℃下60%PVS_2装载,再用100%PVS_2在0℃脱水处理,更换新鲜100%PVS_2后投入液氮保存24 h,化冻,用MS+1.2 mol/L蔗糖的液体培养基洗涤,滤纸吸干后接种于MS+1.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+0.1mg/L GA_3+0.8%琼脂粉+45 g/L蔗糖的恢复培养基上,25℃暗培养7 d,转入正常光下培养.再生苗生根培养基为1/2 MS+0.2 mg/L NAA+30 g/L蔗糖.结果 嫩梢于MS+0.7 mol/L蔗糖的培养基上预培养3 d,茎尖装载40 min,脱水50 min,液氮保存后于40℃水浴中快速化冻,洗涤40 min,恢复培养1周时存活率最高可达100%,30 d时再生率最高可达78.33%.再生苗转入生根培养基可形成完整植株.结论 罗汉果种质资源的玻璃化法超低温保存操作简单、成活率高、再生植株正常.     

人工种子在盾叶薯蓣快速繁殖技术中的初步应用

为提高盾叶薯蓣试管苗的移栽成活率,在组织培养的基础上,对盾叶薯蓣人工种子中人工种皮、人工胚乳制作,人工种子一次性成苗及移栽成活率等问题进行了初步研究,结果表明,人工种子快速繁殖的最适条件为：从盾叶薯蓣愈伤组织表面切取2～3mm小块茎,包埋在2.5%海藻酸钠里,滴入2%CaCl2中反应8～10min,人工胚乳MS/2＋IAA0.4mg/L直接播种在MS/2培养基上,一次性成苗率可达100%左右,移栽成活率高达85%。说明以组织培养为基础的盾叶薯蓣人工种子快速繁殖技术具有一定的优越性。     

白及人工快繁中有效增殖途径的研究

目的:对白及Bletilla striata人工快繁中的增殖途径进行研究,以炼苗成活率为标准,筛选最有效的增殖途径,为白及组培试管苗在生产上的应用提供技术支持。方法:在白及增殖基本培养基(MS+AC 1.0 g/L+香蕉泥50 g/L+蔗糖20 g/L)中,分别添加不同质量浓度2,4-D、6-BA、NAA、KT,以不同增殖代数试管苗为材料,进行单因素实验;在此基础上,选择适宜的植物激素种类进行完全组合实验,观察不同增殖代数中试管苗的增殖方式,确定各增殖代试管苗的最佳增殖途径。结果:1、2代增殖苗适合以愈伤组织-丛生芽增殖,在基本培养基+2,4-D 0.1 mg/L+KT 0.5 mg/L中,增殖系数可达8.32和7.68;3代增殖苗以分蘖繁殖为主、愈伤组织-丛生芽增殖为辅,在基本培养基+6-BA 0.1 mg/L+NAA 1.5 mg/L中,增殖系数为4.73;4代以后增殖苗则以分蘖增殖为主、假鳞茎繁殖为辅,在基本培养基+6-BA 0.1 mg/L+NAA 1.5 mg/L中,增殖系数亦可达3.50以上。在1/2MS+AC 1.0 g/L+蔗糖15 g/L+香蕉泥80 g/L+6-BA 0.01 mg/L+NAA 1.0 mg/L中培养90 d后,可获得根粗苗壮、约70%具假鳞茎的再生植株,生根率100%;再生植株移栽成活率亦达100%。结论:在白及的人工快繁体系中,低代数试管苗适宜采用愈伤组织-丛生芽增殖,而不适宜直接生根培养;高代数试管苗则适合采用分蘖、假鳞茎繁殖方式进行增殖。     

盾叶薯蓣四倍体株系生化指标及有效成分分析

目的:提高盾叶薯蓣药材的品质.方法:对诱导获得的盾叶薯蓣四倍体株系进行了试管苗生化指标及薯蓣皂苷元含量分析.结果:大部分四倍体株系APX、SOD和POD的活力高于或相近于二倍体株系,可溶性蛋白电泳谱带也表明,四倍体株系与对照株系相比具有一定的差异.经诱导获得的四倍体株系试管苗与对照株系相比薯蓣皂苷元含量有较大差异,大部分四倍体株系薯蓣皂苷元含量都超过了二倍体株系.结论:经诱导获得的四倍体株系在生理生化指标及有效成分含量方面与二倍体表现出明显差异,说明多倍体诱导可以作为盾叶薯蓣优良品种选育的途径.     

ABA与CCC对南天竹离体保存的影响

为探索南天竹种质资源离体保存的方法,以南天竹试管苗为材料,研究不同浓度ABA和CCC对其离体保存时的生长、增殖、存活率及恢复生长的影响。结果表明,CCC对株高的抑制大于ABA,对增殖的抑制较ABA弱,最高存活率(83.33%)远大于ABA的(56.67%)。适合南天竹试管苗离体保存的培养基为MS+30 g·L~(-1)蔗糖+0.5 mg·L-16-BA+0.05 mg·L~(-1)NAA+5.0 mg·L~(-1) CCC,保存120d后,存活率为83.33%、增殖系数为2.33、株高为1.59 cm,恢复生长成活率达96.67%,且形态正常。添加CCC可延缓南天竹试管苗生长,用于南天竹种质资源的离体保存。     

盾叶薯蓣四倍体的鉴定和薯蓣皂苷元的定量分析

目的 提高盾叶薯蓣药材的品质.方法 采用高效液相色谱法,对组织培养条件下诱导获得的盾叶薯蓣四倍体株系试管苗薯蓣皂苷元的量和部分株系一年生田间苗薯蓣皂苷元的量进行了分析,并对部分株系一年生田间苗农艺性状进行了鉴定.结果 经诱导获得的四倍体株系试管苗与对照相比薯蓣皂苷元的量有较大差异;而且四倍体株系试管苗与一年生苗薯蓣皂苷元的量有较强的相关性,大部分四倍体株系表现出典型的多倍体性状.结论 在组织培养的基础上,利用多倍体育种来改善盾叶薯蓣的品质是可行的.     

盾叶薯蓣四倍体株系抗氧化酶活性及有效成分分析

目的 提高盾叶薯蓣药材的品质.方法 通过组织培养,对诱导获得的盾叶薯蓣四倍体株系,进行了试管苗抗氧化酶活性及薯蓣皂苷元含量分析.结果 大部分四倍体株系APX活性、SOD和POD比活力高于或相近于二倍体株系.经诱导获得的四倍体株系试管苗与对照相比薯蓣皂苷元含量有较大差异,大部分四倍体株系薯蓣皂苷元含量都超过了二倍体株系.结论 经诱导获得的四倍体株系在抗氧化酶活性及有效成分含量方面与二倍体表现出明显差异,说明多倍体诱导可以作为盾叶薯蓣优良品种选育的途径.     

植物生长抑制剂对短瓣石竹离体保存的影响

目的:建立一种能延长短瓣石竹种质资源离体保存时间的方法。方法:以短瓣石竹无菌苗为材料,研究了无机盐、PP333、CCC、ABA、甘露醇及蔗糖对短瓣石竹无菌苗离体保存的影响,并进行再生苗与继代苗形态指标的比较。结果:短瓣石竹无菌苗在3种无机盐(MS、 1/2 MS、1/4 MS)浓度培养基上的离体保存时间无显著差异,培养90 d后植株叶片开始逐渐枯黄掉落,存活率达到80%;添加蔗糖浓度为25～30 g/L的无菌苗长势较好,植株健壮,叶片嫩绿,保存时间长达100 d;四种植物生长抑制剂均能抑制植株的生长,具有壮苗的作用,其中PP333的壮苗效果最佳,且植株长势良好。结论:在1/2 MS+1.0～1.5 mg/L PP333+25 g/L蔗糖培养基上,无菌苗能保存120 d,植株恢复培养生长正常,成活率达90%以上,适合短瓣石竹无菌苗的离体保存。     

丹参组培快繁技术研究

选择不同外植体研究丹参组织培养中,不同激素水平对组织生长、分化、试管苗生根等的影响.结果表明:以叶片为外植体,接种在MS 6-BA 0.8～1.0 mg/L培养基上,丛生芽分化率为98%～100%,且所需时间较短;茎尖接种用MS 6-BA0.2～1.0 mg/L培养基,成苗率达95%以上;试管苗生根以MS IBA1.0 mg/L KT 1.0 mg/L最好,高达99%.     

盾叶薯蓣辐射株系抗氧化酶活性及薯蓣皂苷元含量分析

目的 提高盾叶薯蓣药材的品质.方法 通过组织培养,对辐射诱变获得的盾叶薯蓣株系进行了抗氧化酶活性及薯蓣皂苷元含量分析.结果 经诱变获得的株系SOD、POD比活力和APX活性与对照株系相比差异很大,大部分辐射诱变株系薯蓣皂苷元含量都超过了对照株系,但试管苗与一年生苗薯蓣皂苷元含量相关性不明显.结论 经诱导获得的辐射诱变株系在清除活性氧能力及有效成分含量方面与对照表现出明显差异,说明辐射诱变可以作为盾叶薯蓣优良品种选育的途径.     

施肥水平和种植密度对薯蓣试管苗产量和薯蓣皂苷含量的影响

盾叶薯蓣DioscoreazingiberensisC .H .Wrigh为薯蓣科植物,其根茎所含的皂苷是目前合成避孕药等多种甾体类激素的起始原料,国内外需求量很大。致使盾叶薯蓣野生资源长其遭受破坏性采挖,自然恢复能力激剧下降。近年来国内一些单位开展了人工引种栽培技术研究[1] ,但产量和含量不十分理想。为此,浙江省中药研究所开展优质薯蓣试管苗的选育,本文就优质试管苗的栽培技术开展了研究。1　材料和方法1.1　材料和施肥方法本试验供材料为....     

甜叶菊种质离体保存后的DNA甲基化研究北大核心CSCD

目的:以甜叶菊组培苗为材料,研究培养温度、甘露醇及多效唑等三个因素对种质保存时再生苗生长的影响,并检测离体保存过程中甲基化水平与模式的变化。方法:离体保存试验采用正交设计法,培养温度设定5、10、15℃3个温度,甘露醇浓度设定0、20、40 g/L 3个浓度,多效唑浓度设定0、0.4、0.8 mg/L 3个浓度;甲基化水平和模式的变化采用甲基化敏感扩增多态性技术(MSAP)进行检测。结果:T4处理(10℃条件下添加20 g/L的甘露醇)能有效地减缓甜叶菊种质的生长速度,并保持较高的存活率;与对照相比,保存6个月后各处理再生苗的甲基化水平存在不同程度的降低,且T4处理的甲基化模式以超甲基化为主。结论:甜叶菊离体保存中的最佳培养体系为:MS+30 g/L蔗糖+5 g/L琼脂粉+20 g/L甘露醇的培养基中10℃低温处理,该处理条件下组培苗的表观遗传变化为甲基化水平的降低和以超甲基化模式为主。     

甜叶菊种质离体保存后的DNA甲基化研究

目的:以甜叶菊组培苗为材料,研究培养温度、甘露醇及多效唑等三个因素对种质保存时再生苗生长的影响,并检测离体保存过程中甲基化水平与模式的变化。方法:离体保存试验采用正交设计法,培养温度设定5、10、15℃3个温度,甘露醇浓度设定0、20、40 g/L 3个浓度,多效唑浓度设定0、0.4、0.8 mg/L 3个浓度;甲基化水平和模式的变化采用甲基化敏感扩增多态性技术(MSAP)进行检测。结果:T4处理(10℃条件下添加20 g/L的甘露醇)能有效地减缓甜叶菊种质的生长速度,并保持较高的存活率;与对照相比,保存6个月后各处理再生苗的甲基化水平存在不同程度的降低,且T4处理的甲基化模式以超甲基化为主。结论:甜叶菊离体保存中的最佳培养体系为:MS+30 g/L蔗糖+5 g/L琼脂粉+20 g/L甘露醇的培养基中10℃低温处理,该处理条件下组培苗的表观遗传变化为甲基化水平的降低和以超甲基化模式为主。     

盾叶薯蓣四倍体诱导的研究

目的 选育盾叶薯蓣Dioscoreazingiberensis新种质资源,以期为高产、高皂苷元含量薯蓣育种打下基础。方法 以刚露出绿色芽点的盾叶薯蓣愈伤组织块为材料,采用两种方法处理:①愈伤组织块浸泡到秋水仙素水溶液中。②培养基中添加秋水仙素。结果 成功获得了染色体数加倍的薯蓣新材料,其中以1×103mg/L秋水仙素水溶液浸泡24 h效果最好,诱导率达到35.2%,四倍体植株与二倍体亲本相比,二者在外观形态、生理指标、显微结构上有明显区别。结论 四倍体植株体型大、具生长优势,离体条件下利用愈伤组织块诱导多倍体是盾叶薯蓣倍性育种的一条有效途径。     

植物生长促进剂对半夏试管微型种茎形成及萌发的影响

目的:探讨植物生长促进剂在半夏试管微型种茎形成中的作用,研究半夏块茎型人工种子生产技术。方法:以野生宽叶半夏的带芽块茎为外植体,优化植物生长促进剂的添加设计,筛选适宜的试管微型种茎诱导、增殖培养基及种茎萌发、成苗配套技术。结果:以MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA为试管微型种茎的最佳诱导培养基;以MS+1.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IBA为最佳增殖培养基;种茎移栽中,10 mm以上种茎发芽率、发芽势、发芽指数最高,分别为95.7%、89.3%、87.1,且幼苗的成活率最高、株高最大、叶片数最多,分别为99.3%、11.8 cm、6.2片。结论:以6-BA与IBA优化配比,能显著提高半夏试管微型种茎的形成,建立了野生优质宽叶半夏高效试管微型种茎繁育技术体系。     

道地中药颖半夏组培快繁优化研究

目的:建立并优化道地中药颖半夏的组培快速繁殖体系。方法:将不同大小的茎尖接种于培养基MS+6-BA 2.0 mg/L+IAA 0.2 mg/L,考察最适宜大小的外植体;以MS培养基为基本培养基,通过不同种类和浓度的植物生长调节剂配比试验,筛选颖半夏试管苗快速繁殖与生根的最佳培养基组成。结果:最适宜的外植体为直径0.4mm的茎尖,诱导丛生芽的最适培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+KT 0.1 mg/L;诱导试管苗生根的最适培养基为1/2 MS+NAA 0.2 mg/L+PP333 0.2 mg/L。结论:采用组织培养方法可进行颖半夏的快速繁殖,为后续的道地药材种质资源保护奠定了基础。