人工种子在盾叶薯蓣快速繁殖技术中的初步应用

为提高盾叶薯蓣试管苗的移栽成活率,在组织培养的基础上,对盾叶薯蓣人工种子中人工种皮、人工胚乳制作,人工种子一次性成苗及移栽成活率等问题进行了初步研究,结果表明,人工种子快速繁殖的最适条件为：从盾叶薯蓣愈伤组织表面切取2～3mm小块茎,包埋在2.5%海藻酸钠里,滴入2%CaCl2中反应8～10min,人工胚乳MS/2＋IAA0.4mg/L直接播种在MS/2培养基上,一次性成苗率可达100%左右,移栽成活率高达85%。说明以组织培养为基础的盾叶薯蓣人工种子快速繁殖技术具有一定的优越性。     

杜鹃兰人工种子技术研究

目的:建立杜鹃兰人工种子制作方法.方法:以杜鹃兰为实验材料,通过液体悬浮培养建立原球茎悬浮系,并以原球茎为人工种子的繁殖体,研究了人工种皮基质、人工胚乳组分、贮藏条件、萌发基质等对人工种子萌发率和成苗率的影响.结果:以4%海藻酸钠+2% CaCl_2+2%壳聚糖为人工种皮基质,1/2 MS液体培养基+0.2 mg·L~(-1) NAA+0.1 mg·L~(-1)GA_3+0.5 mg·L~(-1) BA+0.4 mg·L~(-1)青霉素+10.0 mg·L~(-1)内生真菌提取物+0.3%多菌灵粉剂+0.2%苯甲酸钠+1.0%蔗糖作为人工胚乳成分制作的人工种子,其萌发率和成苗率最高.这样的人工种子在4℃条件下贮藏20 d后的萌发率及成苗率分别为68%,65%左右,随着贮藏温度的升高和贮藏时间的延长,人工种子的萌发率和成苗率均大幅度下降.结论:通过研究确立了杜鹃兰人工种子制作基本技术.     

不同半夏人工种子繁殖材料与体系的筛选与评价

目的 研究半夏人工种子最佳繁殖体及最优胚乳配比，为半夏人工种子技术规模化应用提供理论依据和数据支撑。方法 选取栽培块茎、组培不定芽、大田珠芽(一、二、三代)和地下块茎6种种胚繁殖体，采用6因素4水平正交设计人工胚乳配比，并对种子活力、生长指标、生物量及成分含量进行综合评价。结果与结论以组培不定芽为人工种胚，处理25的胚乳配方表现最佳，发芽率达到92.00%,成苗率达到81.00%,发芽指数达到40.68,活力指数达到2.56;以组培不定芽为人工种胚，处理(0.4%多菌灵+0.1%甲基硫菌灵+0.05%代森锰锌+0.2%苯甲酸钠+0.5%活性炭+1.0%淀粉+0.1 mg/L NAA+0.01 mg/L KT),为最佳人工胚乳组合，可作为最佳繁殖体系进行半夏人工种子的制作方案。     

利用人工种子技术快速繁殖白及

目的:建立白及人工种子的制作方法,并考察相关影响因素,为白及的繁育提供一条新途径.方法:以白及种子为材料,在1/2MS培养液中萌发后作为人工种子的包埋材料,研究了人工胚乳组分、人工种皮基质、贮藏条件、萌发基质等对人工种子萌发率和成苗率的影响.结果:以4.0％海藻酸钠+0.2 mol·L-1CaCl2+0.4mg·L-1青霉索+0.3％多菌灵粉剂+0.2％苯甲酸钠为人工种皮基质,MS+1.0 mg·L-1NAA+2.0 mg·L-1KT作为人工胚乳成分制成的人工种子,其生长速度和成苗率最高.人工种子在4℃条件下贮藏较长时间还可保持较高的活力.结论:通过研究确立了白及人工种子制作基本技术,但其在有菌环境中的播种技术还有待进一步研究改进.     

铁皮石斛人工种子制作及影响因素研究

目的建立铁皮石斛人工种子制作方法,并考察相关影响因素,为铁皮石斛的繁育提供一条新途径。方法以铁皮石斛原球茎为包埋体制作人工种子,考察胚乳、种皮组分对人工种子萌发和成苗的影响。结果以MS+0.5 mg/L BA+0.5 mg/L NAA+3 g/L AC+30 g/L海藻酸钠+3 g/L百菌清为基本胚乳,在2%CaCl2中反应15 min是铁皮石斛人工种子制作的较佳条件,胚乳中分别添加15 g/L木薯淀粉和10 g/L保水剂能明显提高人工种子的萌发率和成苗率,种皮中添加10 g/L纳米SiO2和10 g/L纳米TiO2均能明显提高萌发率,但添加10 g/L纳米SiO2成苗率最高。结论建立了铁皮石斛人工种子制作方法,获得了较高的萌发率和成苗率。     

盾叶薯蓣四倍体诱导的研究

目的 选育盾叶薯蓣Dioscoreazingiberensis新种质资源,以期为高产、高皂苷元含量薯蓣育种打下基础。方法 以刚露出绿色芽点的盾叶薯蓣愈伤组织块为材料,采用两种方法处理:①愈伤组织块浸泡到秋水仙素水溶液中。②培养基中添加秋水仙素。结果 成功获得了染色体数加倍的薯蓣新材料,其中以1×103mg/L秋水仙素水溶液浸泡24 h效果最好,诱导率达到35.2%,四倍体植株与二倍体亲本相比,二者在外观形态、生理指标、显微结构上有明显区别。结论 四倍体植株体型大、具生长优势,离体条件下利用愈伤组织块诱导多倍体是盾叶薯蓣倍性育种的一条有效途径。     

八角莲愈伤组织诱导及分化研究

目的 探讨了八角莲的愈伤组织诱导及分化技术.方法 采用八角莲成熟种子为材料,经过种子消毒诱导出芽,成功培育出无菌幼苗,再用幼叶、叶柄进行试管繁殖.结果 种子外植体以70%酒精消毒45 s+3%次氯酸钠消毒5 min组合进行灭菌效果最佳,污染率为0.00%,出芽率为1.9%;种子在MS+6-BA 2.0 mg/L + GA3 0.5 mg/L激素配比上容易萌芽,出芽率为15.6%;在取材部位筛选中,以幼叶为外植体对诱导出芽效果最佳,最佳诱导愈伤组织激素组合为MS + 6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.3 mg/L,愈伤组织诱导率为85.7%;结论筛选适合的外植体和激素组合,对八角莲愈伤组织诱导和丛生芽分化具有良好的促进作用.     

盾叶薯蓣离体培养体系的建立及薯蓣皂苷元含量分析

以盾叶薯蓣叶片为外植体,研究不同浓度激素组合对盾叶薯蓣愈伤组织、不定芽及再生植株的影响,并对不同材料诱导获得的再生植株中薯蓣皂苷元含量进行了分析。结果表明,诱导愈伤组织的最适培养基为MS+BA2.0mg·L-1+2,4D0.1mg·L-1;诱导不定芽及芽生长的培养基的最适培养基为MS+BA0.1mg·L-1(0.05mg·L-1)+病毒唑5mg·L-1;诱导试管苗生根的最适培养基为MS/2+IAA0.2mg·L-1+NAA0.2mg·L-1。相同外植体诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量差异不明显;不同盾叶薯蓣诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量差异明显。     

北柴胡快速繁殖及种子萌发条件研究

目的 建立北柴胡的选优育优技术体系,规模化生产北柴胡优质种苗和种子.方法 应用植物组织培养技术分别对种植于山西陵川、万荣及甘肃陇西、陕西商洛等8个地区的优质北柴胡进行快速繁殖;对种植于山西万荣的中柴1号北柴胡种子进行种皮损伤和植物激素处理,比较各种处理对种子萌发率的影响.结果 附加6-BA 1.0mg/L和KT 0.2 mg/L的B5培养基适合于各地北柴胡芽的快速增殖与生长;附加NAA 0.1 mg/L、IBA 0.5 mg/L和DSC 1.0mg/L的1/2MS培养基对北柴胡试管苗的生根有良好的促进作用;北柴胡试管苗的年繁殖系数超过1×108,移栽成活率达94%～97%.植物激素处理对北柴胡种子萌发无明显作用,打磨损伤处理种皮可使种子的萌发率提高20%,并且能大幅度缩短种子的萌发时间.结论 植物组织培养技术是快速、大量繁殖优质北柴胡的有效手段,一定程度的种皮损伤可以促进北柴胡种子的萌发.     

基于均匀设计优化手参体细胞胚胎发生及植株再生体系

目的以手参茎尖为外植体,研究手参体细胞胚胎发生体系。方法应用均匀设计法筛选其最适合的胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导、体细胞胚胎发育及植株再生的培养基。结果手参茎尖胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导最适宜的培养基为:CM+6-BA 1.0 mg/L+IAA 2.0 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L,诱导率为98%;体胚发育及植株再生最适宜的培养基为:CM+6-BA 1.00 mg/L+IAA 0.10 mg/L,体胚萌发率为100%,萌发的体胚在发育培养基上继续培养50 d后全部发育成完整植株。结论对不同阶段培养材料的形态结构及超微结构的观察证明了手参体细胞胚胎的发育过程。     

半夏人工种子贮藏技术的研究

目的:研究半夏人工种子的贮藏技术。方法:通过正交实验设计,研究不同浓度的保鲜剂、植物生长物质和防腐剂等因素对半夏人工种子在常温和低温下贮藏后的萌发率影响。结果与结论:以3%海藻酸钠为种皮基质,添加0.1 mg.L^-1GA₃,0.2%苯甲酸钠,1%多菌灵,0.1%Cl₂O以及0.2%壳聚糖制成人工种子,在25℃条件下贮藏30 d后,可获得65%的萌发率。以3%海藻酸钠为种皮基质,添加0.1 mg.L^-1GA₃,0.2%苯甲酸钠,1%多菌灵,0.2%Cl₂O以及0.1%壳聚糖制成人工种子,在4℃条件下贮藏30 d后,可获得80%的萌发率。     

菊叶薯蓣茎段离体快速繁殖技术研究

目的:建立菊叶薯蓣茎段快速繁殖体系,为其推广种植提供可行性。方法:利用植物组织培养技术,将菊叶薯蓣带腋芽的茎段斜插入不同培养基中培养,诱导其成为完整植株并进行炼苗和移栽。结果:在诱导培养基MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA中,芽苗诱导率达93.33%,效果最佳;生根诱导用1/2MS+0.2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.5mg/L KT培养基,生根率可达89.73%;试管苗移栽成活率达98%以上。结论:所建立的菊叶薯蓣快速繁殖体系是高效可行的。     

青叶胆组织培养条件优化及不同交配方式子代植株再生能力比较研究

目的优化青叶胆Swertia mileensis组织培养快速繁殖技术,同时比较不同交配方式后代植株的再生能力,从而探讨青叶胆片断化居群繁殖保障机制。方法以自交、近交、远交和自然结实种子为材料,相同方法消毒后接种于空白MS培养基上,60 d后统计各组萌发率;在此基础上,以各组无菌苗带节茎段为外植体,采用正交试验考察不同来源外植体在添加不同植物激素及质量浓度组合的MS培养基中诱导愈伤组织及丛芽分化能力。结果自交、近交、远交和自然结实种子萌发率之间无显著性差异(P0.05);适宜的愈伤组织诱导培养基为MS+ZT 0.5 mg/L+2,4-D 0.05 mg/L,在此培养条件下,自交、近交、远交和自然结实种子苗带节茎段愈伤组织诱导率分别达100%、96.67%、96.55%和96.29%,各组间无显著性差异;适宜的丛芽发生培养基为MS+BA 2.0 mg/L+KT 0.1 mg/L+NAA 1.0 mg/L,4种来源不同的愈伤组织丛芽分化率均为100%;生根则在1/2 MS+NAA 1.0 mg/L中进行,4种来源不同的试管苗生根率均为100%,生根苗在生长势上亦无明显差别。结论优化的青叶胆组织培养快速繁殖技术,为保护其野生资源、种苗繁殖提供了有效途径,同时从植物生理学角度初步推测青叶胆近交的获益可以补偿与近交相伴的适合度损失,其后代植株在再生能力方面与异交无显著差异。     

钝叶决明花粉粒体外萌发及花药培养

目的观察钝叶决明Senna obtusifolia花粉粒形态,测定花粉活力,确定花粉萌发最适条件和花药诱导培养产生诱导愈伤组织的培养条件及其倍性鉴定,为决明单倍体育种奠定基础。方法采用小孢子压片显微观察花粉粒形态;I2-KI染色法观测花粉活力并确定活力最大的花蕾大小;液体培养结合显微观察确定花粉萌发的最适培养液组成、温度和萌发时间;醋酸洋红染色法确定小孢子发育时期;花药离体培养确定产生愈伤组织的条件;改良苯酚品红染色法鉴定愈伤组织倍性。结果钝叶决明花粉粒呈椭球形并具有3条萌发沟,多为2孔萌发;花蕾纵径为1.0~1.1 cm时,花粉的活力最高;花粉萌发的最适培养液是10%蔗糖+1%硼酸,以25℃培养1~3 h为最佳萌发期;小孢子处于单核靠边期时花蕾纵径为0.9~1.1 cm;愈伤组织诱导培养基组成为MS+1.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L NAA+3%蔗糖+0.6%琼脂;愈伤组织增殖培养基组成为MS+1.0mg/L 6-BA+1.0 mg/L IAA+1.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L GA3+3%蔗糖;愈伤组织存在倍性分离现象,具有单倍体和二倍体细胞。结论钝叶决明花粉萌发的最适培养液是10%蔗糖+1%硼酸;花药离体培养最佳时期为花蕾纵径为0.9~1.1 cm,获得的嵌合体花药愈伤组织为进一步进行决明单倍体诱导和育种奠定了基础。     

盾叶薯蓣种质资源离体保存技术研究

目的:探索盾叶薯蓣种植资源的离体保存方法。方法:以盾叶薯蓣试管苗为材料,考察植物生长调节剂、温度及渗透压对试管苗保存时间、生长恢复状况及遗传稳定性的影响。结果:在培养室温度15℃、光照度1 500Lx、每日光照时间16 h的环境下,盾叶薯蓣试管苗在培养基MS+Sugar 60 g/L+Agar 3.7 g/L+CCC 1.0 mg/L+PP333 2.0 mg/L+ABA 1.0 mg/L中保存6个月,存活率超过60%,生长恢复状况及遗传稳定性良好。结论:本研究结果可实现盾叶薯蓣种质资源的中短期保存,能够满足科研和生产实际的需要。     

竹节参离体培养及植株再生

目的:探索竹节参离体培养与植株再生技术及优化培养条件。方法:以竹节参的胚、茎、叶作为外植体,应用正交的方法,筛选出竹节参最佳的愈伤组织诱导和分化培养基。结果:竹节参不同外植体的最优消毒方法分别为,种子消毒采用75%酒精浸泡60 s,0.1%氯化汞浸泡12 min;茎和叶片采用75%酒精浸泡15 s,5%次氯酸钠浸泡5 min。光照条件下愈伤组织诱导的最佳培养基配方是,胚用MS+1.5 mg/L NAA+1.5 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L KT;茎用MS+1.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L KT,叶为MS+1.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 2,4-D+0.2mg/L KT;黑暗条件下,胚为MS+1.0 mg/L NAA+1.5 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L KT,茎为MS+1.5 mg/L NAA+1.5mg/L 2,4-D+0.1 mg/L KT,叶为MS+1.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L KT。丛芽诱导最佳培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L GA3。生根诱导最佳培养基为MS+...     

盾叶薯蓣悬浮培养细胞固定化的初步研究

用3%海藻酸钠固定盾叶薯蓣悬浮细胞,在MS+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.lmg/L培养液中常温振荡培养较长时间后,培养液提取物经TLC检测,表明该系统分泌出盾叶薯蓣主要成分──薯蓣皂甙元,但不能连续分泌。     

八角莲丛生芽分化及试管苗移栽技术研究

目的探讨了八角莲的组织培养和快速繁殖技术。方法以八角莲的叶片作为外植体,接种在不同的培养基上,观察八角莲愈伤组织丛生芽的诱导率。结果以NAA1.0mg/L+6-BA0.2mg/L的激素配比最有利于新芽生根;苔藓+腐殖土的栽培基质中,八角莲试管苗的生长状况最好。结论通过合理筛选激素配比,可促进八角莲愈伤组织产生丛生芽并生根形成幼苗,为快速繁殖八角莲提供依据。     

蒺藜愈伤组织培养体系的建立及其总黄酮醇苷的测定

目的建立蒺藜Tribulus terrestris愈伤组织培养体系,并考察种子、全草及愈伤组织中总黄酮醇苷量。方法采用正交试验研究不同外植体、培养基、光照条件、激素种类及其配比等对蒺藜愈伤组织诱导和增殖的影响,确定蒺藜愈伤组织培养体系,采用HPLC测定其种子、全草及愈伤组织中总黄酮醇苷量。结果以蒺藜茎段为外植体,诱导愈伤组织的适宜培养基为MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 0.1 mg/L,25℃全天恒温暗培养;最佳增殖培养基为MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 0.2mg/L+ZT 1.0 mg/L,12 h/d光培养,p H 6.2,继代周期为35 d。种子、全草及愈伤组织中总黄酮醇苷量分别为1.46%、2.01%、5.22%。结论愈伤组织质地疏松,适合建立稳定高效的组织培养体系,其有效成分总黄酮醇苷量高于种子和全草。     

檀香体胚发生及影响因素的研究

目的　探讨檀香胚性细胞发生体胚的技术。方法　以檀香实生苗的下胚轴为材料 ,MT为基本培养基 ,附加不同种类的植物激素。结果　基本培养基以 MT或 MS为好 ;IAA与 BA结合有利于胚性愈伤组织的形成 ,诱导率可达 36 .7% ;体胚发生 ,以 MT+IAA(NAA) 0 .2 mg/ L+BA1mg/ L 培养基较好 ,能诱导体胚发育 ,长出正常茎叶 ;BA浓度为 0 .5～ 1.0 mg/ L 时 ,既有利于体胚发生 ,又能保证一定的增殖速度。结论　成功地诱导出檀香胚性愈伤组织 ,通过体细胞胚胎发生长出正常茎叶 ,为利用生物技术的手段进行檀香人工种子的研究奠定基础