巨噬细胞膜仿生白蛋白纳米体系的构建及其胶质瘤靶向递药性能评价

目的 构建包载WEE1激酶抑制剂adavosertib的巨噬细胞膜仿生白蛋白纳米粒(MM-BSA/Ada),体外评估其作为胶质瘤靶向递药体系的可行性。方法 制备MM-BSA/Ada并筛选最佳膜-核比和最佳药-载比,检测其载体安全性和对C6胶质瘤细胞抗增殖活性,考察其体外细胞摄取、跨血脑屏障转运和跨膜后摄取的能力。结果 MM-BSA/Ada具有良好的稳定性,CCK-8结果初步显示,未载药纳米粒在体外细胞实验中对脑血管内皮细胞呈低毒性;与未包膜纳米粒和游离药物相比,MM-BSA/Ada给药后的体外抗胶质瘤细胞增殖活性(P＜0.001)、胶质瘤细胞摄取量(P＜0.001)、体外血脑屏障透过量(P＜0.01)及跨膜后摄取量(P＜0.001)均显著提高。结论 MM-BSA/Ada有较好的胶质瘤靶向递药性能,有望为胶质瘤提供新的放射增敏策略。     

桔梗-莪术药对对口服纳米粒细胞摄取的影响及体外抑制乳腺癌转移作用的研究

基于对肿瘤细胞及肿瘤微环境发挥联合作用抑制转移,该文将抑制肿瘤细胞增殖和转移的桔梗-莪术中药药对与调控肿瘤微环境的中药活性成分水飞蓟宾纳米粒联合,研究该药对对纳米粒细胞摄取的影响及体外抑制乳腺癌增殖迁移的作用,为促进纳米粒口服吸收及增强药效提供实验基础。采用纳米沉淀法制备载水飞蓟宾脂质聚合物纳米粒(NPs),透射电镜观测纳米粒形态。该纳米粒呈球形或类球形,具有壳核结构,其平均粒径为107.4 nm, Zeta电位为-27.53 mV。采用体外Caco-2/E12共培养细胞模型和激光共聚焦显微镜观察结果表明药对可增强对纳米粒的细胞摄取。利用激光共聚焦逐层扫描研究小鼠在体纳米粒肠细胞摄取,药对可增强肠绒毛细胞对纳米粒的摄取。分别利用小鼠乳腺癌4T1细胞以及共培养4T1/WML2细胞模型考察纳米粒对乳腺癌4T1细胞增殖和迁移的抑制作用。CCK8法测定细胞增殖实验研究结果表明含药对NPs可增强对4T1乳腺癌细胞增殖抑制作用。细胞划痕实验结果表明含药对NPs可增强对4T1乳腺癌细胞迁移抑制作用。该文丰富了中药纳米载体的口服吸收研究,也为更好地发挥中医药优势抑制乳腺癌转移提供了新思路。     

酶敏感多肽胶束的构建及其向T细胞递送药物的可行性研究

目的 构建包载芳烃受体抑制剂CH223191的酶敏感多肽胶束并对其进行表征,初步评估此多肽胶束向T细胞递送药物的可行性。方法 采用固相合成法合成了序列为stearyl-HHHRRRRRPLGLAGK-(Mal)的多肽(SHRP)。制备了载药胶束SHRP-CH,测定了其粒径、载药量、临界胶束浓度等,评价其细胞毒性及免疫原性,并使用流式及激光共聚焦考察了CD8⁺T细胞对胶束的摄取效率。结果 SHRP-CH的粒径为(133.8±7.4)nm,酶处理后粒径减少为(92±5.8)nm,载药量和包封率分别为(7.1±1.2)%、(67.7±2.3)%,酶解前后的胶束均具备较低的细胞毒性;CD8⁺T细胞摄取实验证实了此胶束体系向T细胞递送药物的可行性。结论 SHRP多肽酶敏感胶束体系具有较好的载药能力及低细胞毒性,有希望成为T细胞药物递送的潜在载体。     

透明质酸功能化白蛋白纳米粒的构建及眼刺激性评价

目的 制备性质稳定,眼刺激性小的透明质酸功能化白蛋白纳米粒。方法 以香豆素6为荧光探针,采用乳化-沉降法制备白蛋白纳米粒,碳二亚胺法将透明质酸偶联到纳米粒表面,荧光胺衍生化法测定氨基的减少量计算取代度,考察纳米粒的制剂学性质和对家兔眼刺激性。结果 修饰后透明质酸对白蛋白纳米粒表面氨基的取代度为25.06%,纳米粒呈球形,包封率为86.94%,载药量为2.97%,48 h累计释放率接近70%,Draize实验结果表明功能化纳米粒对家兔眼部无明显刺激。结论 该方法成功制得透明质酸功能化的白蛋白纳米粒,所得纳米粒刺激性小,有望作为眼后部给药的药物载体。     

聚乙烯亚胺-乳酸羟基乙酸共聚物阳离子纳米粒介导宫颈癌细胞基因转染效率的研究

 目的优化聚乙烯亚胺-乳酸羟基乙酸共聚物(PEI-PLGA)阳离子纳米粒介导的癌细胞基因转染效率。方法用二步法制备报告基因质粒pCMVβ/PEI-PLA纳米粒复合物,透射电镜观察粒子形态,Zeta粒度仪测定粒径和表面电荷。以pCMVβ基因质粒与纳米粒的比(N/P)、转染时间和基因转染剂量为条件,转染效率为指标,正交设计法优化pCMVβ/PEI-PLGA纳米粒复合物的转染效率。结果pCMVβ/PEI-PLGA纳米粒复合物呈单分散球形,N/P比为10∶1,Zeta电位为+16.5mV,平均粒径为217nm,基因质粒剂量为每孔3μg时,纳米粒复合物的转染效率最高为16.35%。结论PEI-PLGA纳米粒可有效将报告基因质粒转移入宫颈癌细胞,优化实验条件可提高转染效率。     

CD133抗体修饰的紫草素微乳的制备及抗三阴性乳腺癌研究

目的评价CD133抗体修饰的紫草素微乳(anti CD133 antibody-modified shikonin-loaded microemulsion,Anti CD133Ab-SKN-MEs)治疗三阴性乳腺癌的可行性及优势。方法利用经典的成乳工艺制备紫草素微乳(SKN-MEs),再通过EDC/NHS缩合技术制备Anti CD133Ab-SKN-MEs,以粒径、Zeta电位、包封率为指标优化投料比、抗体修饰密度等工艺参数;采用MTT法考察三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖行为,利用异硫氰酸荧光素(FITC)作为探针定性定量考察细胞摄取行为,借助膜联蛋白V-PE/7-氨基放线菌素D(Annexin V-PE/7-AAD)试剂盒考察给药组诱导细胞凋亡行为;借助悬浮培养技术富集MDA-MB-231干细胞,通过各给药组孵育观察细胞成球性以及CD133+细胞率;建立裸鼠MDA-MB-231异位移植瘤模型,设生理盐水、紫草素(SKN)、SKN-MEs、Anti CD133Ab-SKN-MEs,4 mg/kg隔天iv 5次,观察肿瘤体积、裸鼠生存时间、抑瘤率和CD133+细胞比率。结果 Anti CD133Ab-SKN-MEs的最佳质量比为1.0%,抗体密度为0.025%,粒子形态圆整,粒径为(31.4±2.1)nm,电位为(-18.7±2.5)m V,包封率为(93.6±2.8)%;Anti CD133Ab-SKN-MEs对MDA-MB-231细胞的IC50为(1.53±0.43)μg/m L,细胞摄取显著高于SKN和SKN-MEs,孵育8 h可诱导(67.9±4.2)%细胞凋亡;Anti CD133Ab-SKN-MEs可以显著抑制MDA-MB-231干细胞的成球性,明显降低CD133+细胞率;Anti CD133Ab-SKN-MEs体内抑瘤率为78.5%,69 d后仍有12.5%裸鼠存活,瘤组织CD133+细胞率显著降低。结论与SKN相比,Anti CD133Ab-SKN-MEs在治疗三阴性乳腺癌方面优势明显,机制可能与降低肿瘤细胞干性作用有关。     

脑胶质瘤靶向的细胞膜仿生递药系统的构建与体外评价

目的基于肿瘤细胞的同源把向性,拟构建一种脑股质瘤U251细胞膜包覆介孔二氧化娃纳米粒(mesoporous silica nan-oparticles,MSN)的仿生递药系统(U251/MSN),以化疗药物多柔比星(doxorubicin,D0X)为模型药物,初步评价其在胶质瘤靶向治疗中的应用可能。方法使用共挤出法制备U251/MSN-DOX。对纳米粒的粒径、电位、形态进行表征;测定其载药量与包封率;考察纳米粒的细胞毒性、比较包膜前后纳米粒以及不同细胞膜仿生纳米粒在胶质瘤细胞U251中的摄取差异;并通过构建体外血脑屏障(brain-blood barrier,BBB)模型考察仿生纳米粒的跨膜转运效率。结果仿生纳米粒U251/MSN呈球形,可观察到明显的“核壳”结构,粒径为(1:35.70±3.85)nm,载药量为(18.57±2.17)%,包封率为(64.99±2.52)%,细胞实验表明,U251/MSN-DOX细胞毒性低,且较MSN-D0X以及非同源细胞膜纳米粒具备更强的靶向性和跨BBB效率。结论胶质瘤细胞膜可通过共挤出法有效包覆在MSN表面,制备的仿生纳米粒具有良好的靶向性和跨BBB能力,显示出在肿瘤靶向,特别是脑部肿瘤靶向递药领域的应用价值。     

共载紫杉醇和纳米银的叶酸-白蛋白纳米粒的制备和体外评价

目的以叶酸-白蛋白作为纳米载体,并包载抗癌药物紫杉醇和纳米银,以达到增加药物毒性和细胞摄取以及提高抗叶酸受体高表达肿瘤的目的。方法通过紫外吸收法测定牛血清白蛋白(BSA)的平均叶酸结合数,采用自组装法制备纳米粒,并对其形状、粒径、Zeta电位和包封率进行表征;另外在人口腔上皮癌KB细胞模型上考察纳米粒的细胞摄取能力,以及载药纳米粒的体外抗肿瘤的效果。结果紫外吸收结果表明叶酸-白蛋白的平均叶酸结合数为11个,在电镜下纳米粒呈球形、大小分布均匀,Fa-BSA-Ag NP/PTX的粒径为(98.20±3.58)nm,Zeta电位为(-39.90±1.98)m V。细胞摄取实验结果显示叶酸修饰白蛋白纳米粒更易于被KB细胞摄取。细胞毒性和凋亡实验结果表明叶酸的修饰和共载纳米银能够增加药物对肿瘤细胞增殖的抑制能力和促进KB细胞凋亡。结论制备的纳米粒粒径小,包封率高,可以增强纳米粒被摄取的能力和载药纳米粒的毒性。     

线粒体靶向性的姜黄素TPP-PEG-PLGA脂质体的制备及促肝癌细胞凋亡研究

目的 研究姜黄素3-苯羧基-三苯基溴化膦-聚乙二醇-聚乳酸聚乙醇酸共聚物(TPP-PEG-PLGA)脂质体的线粒体靶向性及促肝癌细胞凋亡效果。方法 以薄膜水化法制备姜黄素TPP-PEG-PLGA脂质体,评价该载药系统的稳定性、溶血、体外释放及体内代谢情况;以荧光实验研究脂质体的肝癌细胞摄取、线粒体靶向和肝肿瘤组织靶向效果;在等剂量给药条件下,评价姜黄素TPP-PEG-PLGA脂质体促肝癌细胞凋亡效果。结果 姜黄素TPP-PEG-PLGA脂质体呈圆球型结构,具有较好的稳定性、较小的溶血率和良好的缓释药物性能;药动学结果显示,姜黄素TPP-PEG-PLGA脂质体能将药物的半衰期延长3倍,生物利用度提高4倍;荧光实验显示,TPP阳离子能促进脂质体的细胞摄取,靶向进入线粒体,还可以提高药物在肝肿瘤组织部位的靶向和滞留效果;细胞药效显示,姜黄素TPP-PEG-PLGA脂质体能明显升高肿瘤细胞内H₂O₂水平,降低线粒体膜电位,提高促凋亡蛋白Bax表达,明显降低抗凋亡蛋白BCl-2表达,这些细胞凋亡试验结果均明显优于姜黄素脂质体和姜黄素。结论 本研究表明姜黄素TPP-PEG-PLGA脂质体具有良好的线粒体靶向功能,能增强药物促肝癌细胞凋亡效果。     

人参皂苷Rg3脂质体靶向递送双氢青蒿素与紫杉醇用于三阴性乳腺癌的治疗

利用中药活性成分人参皂苷Rg₃完全代替胆固醇作为脂质体膜材料，制备同时负载双氢青蒿素与紫杉醇的人参皂苷Rg₃脂质体，并评价其对三阴性乳腺癌的体外抗肿瘤作用。采用薄膜水化法制备脂质体，单因素试验优化脂质体处方工艺，对其粒径、Zeta电位和稳定性等理化性质表征，评价药物在多种介质(pH 5.0、7.4)中的释放行为。以CCK-8方法检测其对MDA-MB-231细胞和4T1细胞的增殖抑制作用。以细胞划痕实验评价其对MDA-MB-231细胞和4T1细胞迁移能力的影响，并进一步评价脂质体的靶向能力和溶酶体逃逸机制。利用H9c2细胞对制剂潜在的心肌毒性进行安全性评价。所制备的脂质体呈类球状、粒径均匀分布，平均粒径为(107.81±0.01)nm, Zeta电位为(-2.78±0.66)mV,双氢青蒿素和紫杉醇的包封率分别为57.76%±1.38%和99.66%±0.07%,总载药量为4.46%±0.71%,双氢青蒿素和紫杉醇的累积释放度在pH 5.0条件下优于pH 7.4,低温下储存7 d稳定性良好。给药24 h后，当双氢青蒿素的浓度为70μmol·L<...     

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??OBJECTIVE To investigate the potential anticancer effect of combretastatin A4 liposomes (SSL-CA4) in destruction of vascular mimicry (VM) in MDA-MB-231 breast cancer cells in vitro. METHODS The in vitro inhibitory effect and blocking wound-healing effect of SSL-CA4 were investigated. The VM destruction of SSL-CA4 was evaluated in three dimensional matrigel culture model in MDA-MB-231 cells. The in vitro inhibitory test showed that the maxium inhibition ratio of SSL-CA4 on MDA-MB-231 cells was close to 50%. SSL-CA4 blocked the wound-healing of MDA-MB-231 cells, which was similar to free CA4. RESULTS SSL-CA4 could inhibit the formation of VM in vitro via inhibition on the VM channel indicators including hypoxia-inducible factor (HIF-??), vascular endothelial-cadherin (VE-Cad), and matrix metallopeptidases (MMP-2). The inhibition on indicators of SSL-CA4 was significantly higher than CA4 treatment groups (P<0.05). CONCLUSION SSL-CA4 has significant anticancer activity via inhibition of VM in MDA-MB-231 cell line.     

伊马替尼胶束的制备与体外克服肿瘤耐药性的研究

目的 伊马替尼(imatinib,IMN)包埋于托可索仑(tocofersolan,TPGS)胶束中,以提高其水溶性,并对其理化性质进行表征,及与人源耐药细胞株MCF-7/ADR的作用效果。通过TPGS胶束运输IMN进入细胞,可克服肿瘤细胞的多药耐药性,提高抗肿瘤效果,为进一步体内药效研究提供基础。方法 采用薄膜分散法制备IMN-TPGS胶束,对其粒径、电位、形态、载药量和包封率及体外释放行为进行表征,考察该胶束对MCF-7/ADR细胞的抗肿瘤效果。结果 IMN-TPGS胶束平均粒径为(22.69±2.39)nm,表面呈电中性,外观圆整,载药量为(1.55±0.06)%,包封率为(63.49±2.42)%;具有较高的耐稀释性,血清稳定性和冻干-复溶稳定性;在体外释放72 h后,累积释放度近100%,释放速率缓慢;IMN-TPGS胶束对MCF-7/ADR的IC₅₀为12.27 μmol·L^-1,细胞毒性大,细胞内药物含量高,可诱导近半数细胞凋亡。结论 IMN-TPGS胶束粒径均一,分散性良好,稳定性高,具有较强抗稀释性,有利于体液长循环,对耐药细胞株有明显的抗肿瘤效果,在一定程度上可以克服其多药耐药性。     

PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶包载多柔比星脂质体用于治疗小鼠骨肉瘤的研究

目的 制备聚乳酸乙醇酸-聚乙二醇-聚乳酸乙醇酸共聚物(PLGA-PEG-PLGA)水凝胶包载的多柔比星(Doxorubicin,DOX)脂质体的复合载体,并考察其体外性质和抑瘤效果。方法 采用水化薄膜法制备DOX脂质体,考察其粒径分布和包封率,再利用PLGA-PEG-PLGA水凝胶包载制备得到的DOX脂质体得到DOX-Lip-Gel复合载体,考察其体外释放、黏性测试以及对荷瘤小鼠的治疗效果。结果 制备得到的DOX-Lip的粒径约为(89.3±4.7) nm,包封率约为(85.3±2.6)%,PLGA-PEG-PLGA水凝胶在25 ℃处于溶液状态,而在37 ℃时可凝固成胶,黏性测试结果表明水凝胶的相变温度约为30 ℃。并且水凝胶聚合物具有良好的生物相容性,在体内可以缓慢的降解。与对照组相比,DOX-Lip-Gel可以缓慢的释放药物,且释放期长达200 h。体内抑瘤实验表明DOX-Lip-Gel具有更好的抗肿瘤效果。结论 制备得到的DOX-Lip-Gel对荷瘤小鼠进行瘤周给药,对抑制骨肉瘤在小鼠体内的增长具有显著的抑制作用。     

闹羊花素Ⅲ体外经皮渗透特性研究

目的 研究闹羊花素Ⅲ(rhodojaponin Ⅲ,RJ-Ⅲ)的体外经皮渗透特性。方法 利用摇瓶法、皮肤孵育法、Franz扩散池法和胶带剥离法,分别考察RJ-Ⅲ的油水分配系数、RJ-Ⅲ在皮肤中的稳定性、体外经皮渗透参数和不同层次离体皮肤中的储留量。结果 RJ-Ⅲ的油水分配系数为(0.98±0.02);RJ-Ⅲ在皮肤匀浆液中孵化24 h,RSD值为3.98%;离体透皮实验表明在小鼠皮肤、大鼠的活性表皮与皮肤上,RJ-Ⅲ的稳态透皮速率分别是(5.05±0.28) (3.62±0.30)(1.04±0.10) μg·cm^-2·h^-1,经皮渗透系数分别为7.3×10^-3、5.2×10^-3、1.4×10^-3 cm·h^-1;皮肤储留实验表明,与角质层和活性表皮相比,RJ-Ⅲ更多的存在于接收室。结论 RJ-Ⅲ具有良好的经皮稳定性和适宜的经皮渗透特性,为RJ-Ⅲ经皮给药制剂的开发提供理论基础和实验依据。     

国产非那雄胺片与原研制剂体外溶出一致性评价及采用计算机模拟技术建立体内外相关性模型研究

目的 通过比较国产非那雄胺片与原研制剂的体外溶出行为,评价仿制药与参比制剂的质量一致性,利用计算机模拟技术分析体内外相关性。方法 参照《中国药典》2015年版方法(2020年版《中国药典》该项目没有变化),分别考察国产制剂与原研制剂在4种不同溶出介质(pH 1.2盐酸溶液、pH 4.5醋酸盐溶液、pH 6.8磷酸盐溶液、水)中的体外溶出行为。同时借助GastroPlus^TM软件结合体外溶出试验结果,建立非那雄胺片体内外相关性模型。结果 在选定条件下,国内15家制药公司中有3家公司产品在4种溶出介质中的溶出曲线均与原研制剂相似。软件分析结果提示,体外溶出曲线与软件模拟的体内行为不相似。结论 大部分非那雄胺片仿制制剂在体外的溶出曲线与原研制剂存在一定的差异,国产非那雄胺片工艺水平及处方有待提高,反映体内释放行为的生物体相关溶出条件有待进一步研究。     

基于NANO-LC-MS/MS和生物信息学的抗特发性肺纤维化靶点的筛选与验证

目的 利用生物信息技术检索特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)基因芯片数据,并结合体外实验,筛选与验证IPF相关的蛋白,为该疾病的药物开发提供潜在的作用靶点。方法 采用基因表据库(Gene Expression Omnibus,GEO) 检索“IPF”词条,下载GSE150910芯片数据,利用Bioconductor 软件包 DESeq2分析正常组和IPF组差异表达基因,对所获得差异基因进行基因本体论(gene ontology,GO)功能分析、日本京都基因与基因组百科全书(kyoto gene and genome encyclopedia,KEGG)通路分析、蛋白互作网络分析并作可视化处理。通过液质联用对差异基因对应的蛋白质进行定量;体外研究关键蛋白对α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)分泌或形成的影响。结果 共筛选到69个与细胞外基质形成相关的差异表达基因,包括53个上调基因和16个下调基因;功能分析显示,差异基因主要涉及到细胞外基质的降解(degradation of the extracellular matrix)、胶原蛋白降解(collagen degradation)和胶原链三聚化(collagen chain trimerization)通路;蛋白互作网络分析和蛋白定量研究显示,与IPF相关的基因主要为金属蛋白酶(MMP-3, 9, ADAMTS14)和P4HA3等;金属蛋白酶抑制剂和P4HA3抑制剂能抑制肺纤维α-SMA分泌。结论 通过筛选差异表达基因, 明确相关基因和蛋白在IPF发生或发展过程中作用,为IPF新药研发提供新思路和方案。     

蛹虫草活性成分的提取分离及体外抗氧化作用研究

目的 以抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)活性为导向,筛选蛹虫草子实体有效部位,分离纯化单体化合物,并检测其体外抗氧化作用。方法 通过硅胶色谱柱,半制备高效液相等色谱技术对蛹虫草子实体进行分离纯化,检测各组分对PTP1B的抑制活性;应用核磁碳谱、氢谱数据分析鉴定单体化合物结构;利用MTT法检测单体化合物对PC12细胞的增殖作用,及其对过氧化氢(H₂O₂)损伤的PC12细胞存活率的影响,试剂盒检测单体化合物对细胞乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响。结果 发现5个对PTP1B具有较强抑制作用的活性成分,将其中活性最高的成分进一步分离纯化,获得单体化合物,经鉴定为β-D-吡喃葡萄糖基-9-甲基-4,8鞘氨醇(5),其对PTP1B具有较强的抑制活性,半抑制浓度(IC₅₀)为(3.42±0.59) μmol·L^-1。该单体化合物对H₂O₂诱导的PC12细胞氧化损伤具有明显的保护作用。结论 首次以抑制PTP1B活性为导向,在蛹虫草中分离得到脑苷脂类单体化合物,其具有抑制PTP1B作用和体外抗氧化活性,为蛹虫草用于糖尿病的预防和治疗奠定理论基础。     

小檗碱磷脂固体分散体改善氧化应激治疗2型糖尿病

目的 制备包载小檗碱(BBR)的磷脂固体分散体促进药物吸收,增强降糖、降脂药效,并初步阐明其抗2型糖尿病(T2DM)作用机制.方法 溶剂挥发法制备小檗碱磷脂固体分散体(SD),对其粒径、形貌、体外释放、胃肠道吸收、治疗T2DM药效和作用机制进行了充分研究.结果 SD在水溶液中粒径约为118 nm,形貌为球形;相比于游离...