白头翁皂苷B4对结扎大鼠肾动静脉所致缺血再灌注损伤的治疗作用及相关机制研究

探讨白头翁皂苷B4对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响及机制。50只大鼠采用右肾摘除,左肾进行肾动静脉结扎制作缺血再灌注模型后,随机分为模型组(生理盐水)和白头翁皂苷B4低、中、高剂量组(1.25,2.5,5 mg·kg~(-1))。假手术组(10只)为对照组(生理盐水)。尾静脉注射5 d后眼眶采血收集血清,尿液全自动生化分析仪检测血尿素氮(BUN)、肌酐(Cre)、尿蛋白浓度(CSF)和尿微量白蛋白浓度(mALB),计算尿总蛋白及尿总白蛋白,收集肾脏标本。PAS染色法检测肾脏病理改变,Western blot法检测NLRP3通路相关炎性因子及TLR4/NF-κB通路炎性因子蛋白的表达。结果显示,模型组BUN、Cre、尿总蛋白、尿总白蛋白水平显著升高(P0.01),肾小管损伤严重;同时NLRP3通路相关炎性因子及TLR4/NF-κB通路炎性因子蛋白的表达显著增加(P0.01或P0.05)。白头翁皂苷B4各组能不同程度降低BUN和Cre水平(P0.05);白头翁皂苷B4低、高剂量组对尿总蛋白、尿总白蛋白水平有下降趋势,其中高剂量组能显著降低尿总白蛋白水平(P0.05);肾小管损伤减轻,肾小管上皮细胞脱落减少,不同程度减少相关炎性因子的表达(P0.01或P0.05)。白头翁皂苷B4可减轻大鼠肾缺血再灌注损伤,其作用机制可能与白头翁皂苷B4抑制NLRP3信号通路及TLR4/NF-κB信号通路介导的炎症反应有关。     

白头翁皂苷B4对脂多糖诱导的急性肺损伤的保护作用研究

目的探讨白头翁皂苷B4对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤(Acute Lung Injury,ALI)的保护作用及其潜在的作用机制。方法采用RAW 264.7细胞进行细胞实验,用B4预先给药后,LPS刺激(100 ng·mL-1)24 h,然后测定培养液中一氧化氮(Nitric Oxide,NO)、肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor,TNF-α)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)的浓度。将BALB/c小鼠随机分为正常对照组,模型组,地塞米松组(5 mg·kg~(-1)),B4高、中、低(2、4、8 mg·kg~(-1))剂量组。给药组小鼠腹腔注射不同剂量的药物,正常对照组和模型组给予生理盐水;地塞米松组、B4组及模型组鼻腔内滴入LPS建立急性肺损伤模型,24 h后收集支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar Lavage Fluid,BALF),全自动血液分析仪检测BALF中白细胞、中性粒细胞的数量,酶联免疫吸附法测定BALF中TNF-α,IL-1β和IL-6的水平,苏木素—伊红(HE)染色观察肺组织病理形态的改变。蛋白免疫印迹法(Western Blot)测定肺组织中NF-κB蛋白表达水平。结果在细胞实验中,白头翁皂苷B4能够显著降低NO、TNF-α、IL-1β和IL-6的高表达(P 0.05,P 0.01)。体内实验中,与正常对照组相比,模型组小鼠BALF的中性粒细胞数量、TNF-α、IL-1β和IL-6的含量,肺组织损伤,以及NF-κB的蛋白表达均有显著上升(P 0.05,P 0.01);与模型组相比,白头翁皂苷B4低剂量组可以显著减少中性粒细胞的数量,降低TNF-α,IL-6的含量,改善肺组织损伤并下调NF-κB的蛋白表达(P 0.05,P 0.01)。结论白头翁皂苷B4能够有效改善LPS诱导的肺部损伤,其作用机制可能与下调NF-κB蛋白,降低相关炎性因子的释放有关。     

比较四种因素所致实验性急性肾损伤及炎性坏死因子的表达

目的:观察比较内毒素(LPS)、甘油、顺铂和庆大霉素等4种因素所致实验性急性肾损伤动物血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cre),以及肾脏相关炎性坏死因子表达的变化。方法:采用大、小鼠进行整体动物实验。给小鼠腹腔注射顺铂或尾静脉注射LPS,给大鼠肌肉注射甘油或腹腔注射庆大霉素,造模一定时间后行眼眶静脉采血,分离血清,测试血清BUN、Cre。以qPCR法检测白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、转录因子κB (NF-κB)、凋亡坏死因子(Caspase3)、模式识别受体TLR4等mRNA表达。结果:LPS、甘油、顺铂和庆大霉素均可导致血清BUN、Cre升高。四种因素所致急性肾损伤中,肾小管均出现不同程度的损伤。LPS所致肾组织损伤可见白细胞浸润,甘油、顺铂和庆大霉素肾损伤动物肾小管内出现蛋白管型。此外炎性坏死因子表达明显升高,除顺铂组大鼠肾脏凋亡坏死因子Caspase3表达明显升高外,其它三种因素所致肾脏的Caspase3未见明显变化。地塞米松可以明显降低血清BUN和Cre,下调炎性坏死因子及凋亡因子的表达。结论:四种因素可以明显致实验性急性肾损伤,同时使受损肾脏炎性坏死子mRNA表达明显升高,与血清BUN和Cre的升高具有相关性。除此,顺铂还伴有凋亡因子Caspase3表达的明显上调,表现出与其它三种因素的不同性。地塞米松对于实验性急性动物肾功能损伤具有明确的保护作用。     

满药赤雹根总皂苷抗炎作用实验研究

目的:评价赤雹根总皂苷(TSRT)的抗炎活性.方法:二甲苯致小鼠耳肿胀实验,昆明种小鼠,随机分为TSRT240,120,60 mg·kg-1剂量组,Asp 200 mg·kg-1组及模型对照组,连续ig给药3 d.角叉菜胶致大鼠足跖肿胀实验,Wistar大鼠,随机分为TSRT 200,100,50 mg·kg-1剂量组,Asp 160 mg·kg-1组及模型对照组,连续ig给药3d.大鼠皮内色素渗出实验,分组及给药剂量同“大鼠足跖肿胀实验”,ig给药1次.小鼠棉球肉芽肿实验,分组及给药剂量同“小鼠耳肿胀实验”,连续ig给药7d.以耳肿胀度、足跖肿胀度、色素渗出量及肉芽肿质量为指标评价TSRT对急、慢性炎症的影响.结果:在小鼠耳肿胀实验中,TSRT 240,120,60 mg·kg-1剂量组小鼠耳肿胀度均明显低于模型对照组(P＜0.01);在大鼠足跖肿胀实验中,致炎后1-4h,TSRT 200,100 mg·kg-1剂量组大鼠足趾肿度均明显低于模型对照组(P＜0.01),致炎后2～4h,TSRT 50 mg·kg-1剂量组大鼠足趾肿度均明显低于模型对照组(P＜0.05);大鼠皮内色素渗出实验中,各剂量组皮内蓝斑的面积及色素渗出量均低于模型对照组(P＜0.05～P＜0.01);大鼠棉球肉芽肿质量显著低于模型对照组(P＜0.05～P＜0.01).结论:赤雹根总皂苷对急慢性炎症有明显的抗炎作用.     

糖肾平胶囊通过PI3K/Akt信号通路干预高糖+LPS诱导足细胞凋亡的机制

目的:观察糖肾平对高糖环境下脂多糖(LPS)对足细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:利用雄性Wistar大鼠,分别用糖肾平小、中、大剂量(0. 525,1. 05,2. 1 g·kg-1),厄贝沙坦(17. 5 mg·kg-1)灌胃给药,制备相应药物血清。采用高糖,LPS体外刺激大鼠足细胞建立模型。并分为正常组(5%正常大鼠血清),高糖组(5%模型大鼠血清+4. 5‰葡萄糖),高糖+LPS组(5%模型大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1),厄贝沙坦组(5%厄贝沙坦组大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS1 mg·L-1),糖肾平小剂量组(5%糖肾平小剂量大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1),中剂量组(5%糖肾平中剂量大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1),大剂量组(5%糖肾平大剂量大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1)。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)及逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测足细胞中CD2相关蛋白(CD2AP),nephrin和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号转导通路中关键因子的蛋白和mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,高糖组和高糖+LPS组足细胞nephrin,CD2AP,PI3K,Akt蛋白及mRNA表达明显减少(P 0. 05,P 0. 01); B淋巴细胞瘤-2相关凋亡蛋白(Bad蛋白)及mRNA表达明显增加(P 0. 05,P 0. 01)。与高糖+LPS组比较,厄贝沙坦组足细胞CD2AP,PI3K,Akt蛋白及mRNA表达明显增加(P 0. 05,P 0. 01); nephrin mRNA表达增加; Bad蛋白及mRNA蛋白表达减少。糖肾平各组足细胞CD2AP,PI3K,Akt蛋白及mRNA表达明显增加(P 0. 05,P 0. 01); Bad蛋白及mRNA蛋白表达减少(P 0. 05,P 0. 01)。结论:糖肾平维持足细胞裂孔隔膜蛋白稳定表达,保护肾小球滤过屏障,同时进一步激活PI3K/Akt信号通路,抑制足细胞凋亡;是其多靶点防治糖尿病肾病的作用机制之一。     

辽东楤木总皂苷降血糖作用研究

目的测定辽东楤木总皂苷降血糖活性.方法:辽东楤木总皂苷以120,60,30mg·kg-1剂量连续灌胃给正常小鼠9d;以100,50,25mg·kg1剂量连续给药四氧嘧啶诱导高血糖家兔4周;以120,60,30mg·kg-1剂量单次给药链脲霉素致高血糖小鼠,并分别于给药后测定血糖值.结果:辽东楤木总皂苷连续给药120,60mg·kg-1两剂量组使受试正常小鼠血糖明显降低;总皂苷连续灌胃给药,可使四氧嘧啶高血糖家兔血糖值明显降低,且随给药时间延长其降糖作用日趋明显,停药后其降糖作用可维持2～4h;单次灌胃给药,三剂量组于给药后2、4h使链脲霉素诱导的高血糖小鼠血糖明显降低,与给药前比较有非常显著或显著差异.结论:辽东楤木总皂苷具有较好的降血糖活性.     

白头翁皂苷B4在正常大鼠和溃疡性结肠炎大鼠体内组织分布情况的比较

目的:建立大鼠体内白头翁皂苷B4的UPLC-ESI-MS/MS,比较白头翁皂苷B4在正常大鼠和溃疡性结肠炎大鼠肝、脾、肾、心、肺组织中的分布情况,为研究白头翁汤治疗溃疡性结肠炎的作用过程和机制提供参考。方法:雄性SD大鼠等分为正常组和模型组,均按5 g·kg~(-1)灌胃给药白头翁汤冻干粉,分别于15,45,120,360 min用5%水合氯醛麻醉正常大鼠和模型大鼠,取肝、脾、肾、心、肺组织,采用UPLC-ESI-MS/MS分析,以0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,ACQUITY BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),柱温35℃,流速0.4 m L·min~(-1)。结果:白头翁皂苷B4在大鼠体内存在广泛分布与代谢。在正常大鼠的肝、脾、肾、心、肺组织中,白头翁皂苷B4均在120 min时达到最大质量浓度。与正常组比较,在模型组大鼠肝、心组织中白头翁皂苷B4质量浓度各时间点均明显升高(P0.05);在脾和肾组织中,分别于45 min和120 min时明显升高(P0.05);在肺组织中,于120 min时显著增加(P0.05)。结论:溃疡性结肠炎大鼠对白头翁皂苷B4的吸收和生物利用度均优于正常组,溃疡性结肠炎的病理状态可导致白头翁汤中白头翁皂苷B4的吸收增强。     

雄黄的毒性研究

目的 研究雄黄的毒性特点,提出雄黄的相对安全用药剂量和用药时间建议,为雄黄的临床安全用药提供科学依据.方法 小鼠单次灌胃给药,测定LD50.采用SD大鼠随机分为对照组和雄黄5,10,20,80,160 mg· kg-1·d-1(相当于药典剂量高限的1/2,1,2,8,16倍)剂量组,各剂量组均每日灌胃给药1次,连续3个月,于给药后1,2,3个月和停药1个月,测定尿液定性、血常规以及血清生化指标,并观察肝、肾、心、脑等主要脏器的组织形态学变化,确定无明显不良作用水平( NOAEL).以世界卫生组织认为的人群内对化合物的敏感性差异倍数(10)乘以药理学上按照体表面积折算大鼠与人剂量的倍数(约为6)作为安全系数(60),结合NOAEL估计不同用药周期内的相对安全剂量.参照我国相关的技术指导原则规定的1个月动物长期毒性试验支持临床试验用药周期2周的方法,估计雄黄相对安全的用药时间.结果 在雄黄中As2S2质量分数为90%,可溶性砷为1.696 mg·g-1情况下,给小鼠单次灌胃给药的LD50为20.5 g·kg -1(等于摄入可溶性砷34.8 mg·kg-1),相当于人日用量约12812倍.而给大鼠反复灌胃给药时,雄黄超过一定剂量用药达到2个月或以上时,可造成肾脏和肝脏病理损害,其中肾脏显示更为敏感.大鼠灌胃雄黄1,2,3个月的无明显毒性剂量(NOAEL)分别为160,20,10 mg· kg-1·d-1(累积摄入可溶性砷8.14,2.04,1.53 mg·kg-1).估计临床使用雄黄的相对安全剂量范围为10～160mg(依用药时间不同).结论 反复使用雄黄时,建议在可溶性砷≤1.7mg·g-1的条件下,雄黄用药1～2周时,剂量不超过160 mg;用药2～4周时,剂量不超过20 mg;如果降低剂量至10 mg或以下,则在用药6周内相对安全.     

金铁锁及其总皂苷体内抗炎作用分析

目的:探讨金铁锁(PR)及其总皂苷(PRTS)的抗炎镇痛作用,并探讨其抗炎机制。方法:实验动物随机分为空白组(大鼠),模型组(大鼠、小鼠),阳性药组(小鼠:吲哚美辛,元胡止痛胶囊0.585 g·kg-1),金铁锁75%乙醇提取物(PR)高、中、低剂量组(小鼠:0.651 1,0.217,0.072 35 g·kg-1,大鼠:0.450 8,0.150 3,0.050 08 g·kg-1),金铁锁总皂苷(PRTS)高、低剂量组(小鼠:0.233 4,0.025 94 g·kg-1,大鼠:0.161 6,0.017 96 g·kg-1)。采用醋酸诱导扭体实验和热板实验来评价镇痛作用;采用二甲苯诱导小鼠耳肿胀实验,脂多糖(LPS)诱导大鼠腹膜炎来评价抗炎作用,通过苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠腹膜组织的病理变化,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中的炎症因子白细胞介素(IL)-6,IL-10。探寻潜在机制,通过大鼠肠系膜组织免疫组化观察肿瘤坏死因子(TNF)-α,IL-1β,核转录因子-κB(NF-κB)p65的表达。结果:与空白组比较,PR及PRTS各剂量组减轻小鼠耳肿胀(P0.01),减少小鼠化学致痛扭体次数(P0.05,P0.01);PRTS高剂量组能提高小鼠痛阈值(P0.05,P0.01);与模型组比较,PR及PRTS各剂量组对急性腹膜炎大鼠腹膜组织病变有所改善,能降低炎症因子IL-6含量(P0.01),同时降低TNF-α,IL-1β,NF-κB p65在肠系膜组织的表达,PR高剂量及PRTS高剂量组能降低IL-10含量(P0.05)。结论:金铁锁及总皂苷具有一定的镇痛抗炎作用,其机制可能与下调炎症因子的释放与表达,抑制NF-κB信号通道有关。     

新藤黄酸对S180细胞株的体内外抗肿瘤作用

目的:评价新藤黄酸对S180肿瘤细胞株的体内外抗肿瘤作用.方法:将不同浓度的新藤黄酸分别作用于体外培养的S180细胞48 h,用CCK-8法检测药物对S180细胞的增殖抑制作用;以8.0,4.0,2.0 mg·kg-1剂量ip给予S180腹水瘤小鼠,每天1次,连续7d,观察45 d对存活时间的影响;以16.0,8.0,4.0 mg·kg-1剂量ig给予荷S180实体瘤小鼠,每天1次,连续12d,评价新藤黄酸的体内抗肿瘤作用;测单次ip给药对小鼠的LD50.结果:新藤黄酸对体外培养S180细胞的增殖有明显的抑制作用,药物作用48 h其IC50为(1.54±0.12) mg·L-1;4.0 mg· kg-1新藤黄酸ip给药可使S180腹水瘤小鼠存活时间较荷瘤对照组延长141.6％,新藤黄酸对S180实体瘤的抑制作用随着剂量的增大而升高,并呈一定剂量依赖性,体内抗肿瘤显著(P＜0.05);单次ip给药对小鼠的LD50为36.66 mg·kg-1.结论:新藤黄酸对S180细胞株具有明显的体内外抗肿瘤作用.