HPLC-ELSD测定青蒿素片中青蒿素的含量

 目的建立HPLC-ELSD测定青蒿素片中青蒿素含量的方法,并用于青蒿素片中青蒿素含量的测定。方法采用蒸发光散射检测器对青蒿素片中青蒿素进行HPLC分析,Thermo C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);以甲醇-水(80:20)为流动相;流速为1.0mL·min^-1;柱温为25℃;蒸发光散射检测器漂移管温度60℃,载气(N₂)压力5.8×10^-3Pa,增益值为50。结果青蒿素在1.002～4.008μg内呈现良好的线性关系(r=0.9996),平均加样回收率为99.45%(RSD为2.3%)。结论本法简单、准确、重复性好,可用于测定青蒿素片中青蒿素的含量。     

复方利咽润喉颗粒质量标准研究

目的建立高效液相色谱-蒸发光散色(HPLC-ELSD)法测定复方利咽润喉颗粒中熊果酸的含量。方法采用汉邦ODS C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;柱温:30℃;流动相:甲醇-水-冰醋酸(83∶17∶0.1);流速:1.0 m l/m in;检测器:A lltech ELSD-2000蒸发光散射检测器(漂移管温度:72℃,气体流量:1.9 L/m in)。结果熊果酸在4.227~42.27μg范围内呈良好线性关系,回收率为98.54%,RSD为2.12%。结论该方法具有良好的精密度和重现性,结果准确可靠,是测定熊果酸含量的较好方法。     

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定柴胡药材中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的含量

目的制定柴胡药材中柴胡皂苷a、d的含量测定方法。方法用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD),A lltim a C18色谱柱,流动相甲醇-水(80∶20),速度0.8 m l.m in-1;蒸发光散射检测器参数:漂移管温度40℃,气压3.5bar。结果柴胡皂苷a和柴胡皂苷d分别在1.908~19.08μg(r=0.999 6)和1.804~18.04μg(r=0.999 2)范围内线性关系良好,平均回收率分别为98.35%(RSD=1.26%)和97.64%(RSD=1.58%)。结论该方法简便、灵敏、可靠、准确、重现性好,可作为柴胡药材的质量控制方法。     

高效液相色谱-蒸发光散射测定童喘清颗粒中黄芪甲苷的含量

目的建立了童喘清颗粒含量测定的高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)方法。方法采用汉邦ODS C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;柱温:30℃;流动相为乙腈-水(36∶64),流速1.0 m l/m in;蒸发光散射检测器(漂移管温度:110℃,气体流量:2.3 L/m in)检测。结果黄芪甲苷量在2.036~20.460μg范围内呈良好线性关系,r=0.999 1,样品平均回收率为97.8%,RSD为1.97%。结论HPLC-ELSD测定童喘清颗粒中黄芪甲苷结果准确可靠、快速、灵敏、重现性好。     

高效液相色谱-蒸发光散射法测定柴胡中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的含量

目的采用高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)法建立柴胡中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的含量测定方法,并测定不同产地柴胡中柴胡皂苷a,d的含量。方法采用Phnom enex C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-水(43∶57)为流动相,流速0.8 m l/m in,A lltech ELSD2000ES蒸发光散射检测器,漂移管温度99℃,气速3.0 L/m in,外标法定量。结果柴胡皂苷a在0.296~2.96μg范围内呈良好线性关系,回归方程为Ya=1.387 6X-2.920 2(r=0.999 8),平均回收率为97.4%,RSD为2.39%(n=6);柴胡皂苷d在0.299~2.99μg范围内呈良好线性关系,回归方程Yd=1.259 5X-1.290 6(r=0.999 6),平均回收率为98.1%,RSD为2.47%(n=6)。结论该方法简便易行,结果准确,重现性好,可作为柴胡药材质量控制的方法。     

HPLC-ELSD同时测定筋骨草药材中乙酰哈巴苷和哈巴苷含量

目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)同时测定筋骨草药材中乙酰哈巴苷和哈巴苷含量的方法,并对不同产地和批次的筋骨草药材进行测定。方法采用Dikma C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相A为水,B为乙腈,梯度洗脱(0~6 min,5%B;6~11 min,5%~15%B;11~17 min,15%B);洗脱流速1 mL/min;柱温30℃。蒸发光散射检测器漂移管温度103℃,以压缩空气为雾化气,气体流速1.6 L/min。结果乙酰哈巴苷在0.017~17.32μg、哈巴苷在0.003~1.62μg范围内呈良好线性关系,精密度和准确性良好。福建6个批号样品的乙酰哈巴苷和哈巴苷含量较高。结论乙酰哈巴苷和哈巴苷可作为监测筋骨草药材质量的指标性成分。     

UPLC-ELSD法同时测定不同产地知母中7个成分的含量

目的建立超高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(UPLC-ELSD)测定不同产地知母中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷B-Ⅱ、知母皂苷B-Ⅲ、宝藿苷Ⅰ、知母皂苷A-Ⅲ、菝葜皂苷元等7个成分的含量。方法采用UPLC-ELSD法,ACQUITY BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);流动相为乙腈(A)-0.2%冰醋酸(B),梯度洗脱;蒸发光散射检测器(ELSD)雾化器(氮气)流量为2.5 L·min~(-1);蒸发温度80℃;载气压力3.14 bar;进样体积10μL。结果 7个化合物分离度良好,呈现较好的线性关系(r0.999 0),平均加样回收率均在96.98%~102.60%,RSD≤2.80%。结果显示7个被测成分在不同产地之间含量差异较大。结论该方法简单准确,省时高效,可为不同产地知母药材质量控制提供科学依据。     

HPLC-ELSD法测定清肝疏郁颗粒剂中两种成分的含量

目的:建立高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法同时测定清肝疏郁颗粒剂中柴胡皂苷A和D的含量。方法:色谱柱:Diamonsil(2)-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-水(C);流速:1.0 m L/min;检测器:蒸发光散射检测器(Alltech ELSD-2000ES);漂移管温度为115℃;气体流速为3.0 L/min。结果:柴胡皂苷A、D的线性范围分别为10.00~100.00μg/m L(r=0.9991);10.00~100.00μg/m L(r=0.9995),平均回收率(n=6)分别为98.66%,100.56%;RSD分别为:2.47%,2.12%。结论:该方法准确、灵敏、简便、重复性好,为清肝疏郁颗粒剂的质量控制提供了依据。     

HPLC-ELSD法测定乙肝宁颗粒中黄芪甲苷含量

目的:建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定乙肝宁颗粒(黄芪、白花蛇舌草、党参等)中黄芪甲苷含量.方法:采用Agilent C18(250 mm×4.0 mm,5μm)色谱柱;流动相:甲醇-水(75:25);流速:1.0 mL·min-1;检测器:SEDEX75.结果:黄芪甲苷在0.5984～2.3936μg范围内具有良好的线性关系,回收率为95.41%(RSD为1.1%,n=5).结论:本法具有良好的精密度和重现性,结果准确可靠,是测定黄芪甲苷含量的较好方法.     

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定毛冬青药材中Ilexgenin A的含量

目的 建立毛冬青药材中Ilexgenin A的高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)的含量测定方法.方法 采用Lichrospher-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液(60:40),流速1 ml/min,蒸发光散射检测器:漂移管温度96℃,气体流速2.1 L/min.结果 Ilexgenin A在0.7～14.5μg浓度范围内线性关系良好,r = 0.999 7(n = 6).平均回收率为100.32 %,RSD = 1.38 % (n = 6).结论 本法操作快速、准确,可作为毛冬青药材中IlexgeninA的质量控制方法.     

RP-HPLC法测定青蒿中青蒿素的含量

目的建立青蒿(黄花蒿)干叶中青蒿素的含量测定方法,为甲醇提取青蒿素的工业化生产工艺提供依据。方法采用正交试验设计,优选测定条件,采用Shimadzu Shim-pack VP-ODS C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(55∶45),流速为1.0 mL.min-1,检测波长为210 nm。结果最佳的含量测定条件为加40倍量甲醇,超声提取3次,每次50 min。青蒿素在1～40μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.99998),平均加样回收率为99.8%,RSD为1.0%(n=6)。结论该方法简便、准确,适用于黄花蒿中青蒿素的含量测定。     

DNA条形码序列对9种蒿属药用植物的鉴定

目的采用DNA条形码序列对9种常见的蒿属药用植物进行鉴定,为常见蒿属药用植物的鉴定提供分子依据。方法对9种常见蒿属药用植物的4条候选DNA条形码序列(ITS2、rbcL、matK、psbA-trnH)进行PCR扩增和测序,比较各序列的扩增和测序效率,应用BLAST1、Distance方法来评估各序列的鉴定效率。此外,基于MEGA5分析9种常见蒿属药用植物ITS2序列种间K2P遗传距离并构建NJ树。结果除matK外,其余3条片段的PCR扩增和测序效率均为100%,ITS2序列对9种蒿属药用植物的物种水平鉴定成功率最高,为100%,而psbA-trnH、rbcL、matK、matK+rbcL的鉴定成功率(BLAST1法)分别为83.3%、66.7%、54.5%、75%。通过ITS2序列的种间K2P遗传距离及NJ树均能将不同物种全部区分。结论 ITS2序列可以作为鉴定蒿属药用植物的潜在条形码。     

毛莲蒿的化学成分

 目的：对毛莲蒿的化学成分进行研究。方法：采用硅胶和聚酰胺柱层析进行分离，运用红外光谱、紫外光谱、质谱、核磁共振谱与标准品对照的方法鉴定15个化合物。结果：分离鉴定了3个倍半萜类：taurin（1）、1，11-bis-epi-artesin（2）、yomogin（3）；3个黄酮类：5，7，3′，4′-四羟基-6，8-二甲氧基黄酮（4）、5，7，3′，4′-四羟基-6-甲氧基黄酮（5）、5，6，3′，4′-四羟基-7-甲氧基黄酮（6）；3个三萜类：蒲公英赛醇乙酸酯（7）、木栓酮（8）、α-香树脂醇（9）；2个甾体类：β-谷甾醇（10）、胡萝卜苷（11），2个香豆素类：莨菪亭（12）、7-羟基-6，8-二甲氧基香豆素（13）；2个有机酸类：异阿魏酸（14）、咖啡酸（15）。结论：所有化合物均为首次从该植物中分得。     

青蒿醇提物对H22肝癌小鼠的抑瘤作用研究

目的：观察青蒿醇提物对H：：肝癌小鼠的体内抑瘤作用。方法：取H。肝癌细胞接种于小鼠右腋皮下,随机分为模型对照组、5-氟尿嘧啶组（5-Fu）及青蒿醇提物125mg／（kg·d）组、500mg／（kg·d）组,5-Fu组肌肉注射给药,其余各组灌胃给药。连续给药8d后,剖瘤称取质量,计算抑瘤率;利用高效液相色谱仪测定青蒿醇提物中青蒿素含量。结果：与模型对照组比较,青蒿醇提物各剂量组均不同程度的抑制肿瘤生长（P〈0．Ot）,青蒿醇提物125me,／（kg·d）组和青蒿醇提物500m/（kg．d）组的抑瘤率分别为54．6％、50．6％;本实验青蒿醇提物中青蒿素含量为0．02％,而在青蒿素抗H。小鼠肝癌试验中,青蒿素在剂量为10mg／（kg·d）时,对H22小鼠肝癌已没有明显的抑制作用。结论：青蒿醇提物对肝癌有明显的抑制作用;除青蒿素以外,中药青蒿中可能存在其它的抗肿瘤成分。     

Isolation and identification of dihydroartemisinic acid from artemisia annua and its possible role in the biosynthesis of artemisinin

Dihydroartemisinic acid (2) was isolated as a natural product from Artemisia annua in a 66% yield, and its structure was confirmed by 1H and 13C NMR spectroscopy. Compound 2 could be chemically converted to artemisinin (4) under conditions that may also be present in the living plant. The results suggest that the conversion of 2 into 4 in the living plant might be a nonenzymatic conversion.     

甘肃产艾叶挥发油的化学成分及遗传毒性研究

目的:分析甘肃产艾叶挥发油的主要化学成分,探讨其对小鼠的遗传毒性.方法:①成分分析:用气相色谱-质谱法分析艾叶挥发油的化学成分,用归一化法测定各组分的相对百分含量.②微核试验:选用昆明种孕鼠30只,随机分为5组:正常对照组,ig给予等容积花生油;艾叶油2,1,0.5 mL·kg-1组,ig给予艾叶油;阳性对照组,ip给予环磷酰胺(CP)40 mg·kg-1.正常对照组和艾叶油组自孕第12天开始ig给药,连续5d.阳性对照组于孕第15天ip给予CP,连续2d.各组孕鼠均于孕第16天用药后处死,取小鼠骨髓细胞和胎鼠肝脏做微核试验.③精子畸形试验:昆明种小鼠雄性40只,随机分为5组,各组用药剂量及给药方式同微核试验,均连续5d.首次给药后35 d处死,取出其附睾制片,读取精子畸形率.结果:从甘肃产艾叶挥发油分离出72个峰,其中鉴定了56个成分,占挥发油色谱峰面积的90.83％.艾叶挥发油灌胃剂量2 mL·kg-1时,孕鼠和雄鼠诱发的骨髓微核率、胚胎肝微核率和精于畸形率均较阴性对照组显著升高(P＜0.05).剂量为1 mL·kg-1时,诱发的胚胎肝微核率较阴性对照组显著升高(P＜0.05),骨髓微核率与精子畸形率与阴性对照组相比,无显著性差异.剂量为0.5mL·kg-时,诱发的骨髓微核率、胚胎肝微核率、精子畸形率与阴性对照组相比,均无显著性差异.结论:甘肃产艾叶挥发油的主要成分为桉叶素(20.45％)、蒿醇(12.12％)、樟脑(6.99％)、青蒿酮(5.85％)、左旋龙脑(4.27％)等;一定剂量的艾叶挥发油对小鼠具有潜在的遗传毒性,并呈剂量-反应关系.     

龙蒿挥发油成分研究

目的:分析龙蒿的化学成分。方法:采用水蒸气蒸馏法提取,运用毛细管气相色谱 质谱联用法对龙蒿挥发性化学成分进行了分析,用气相色谱面积归一化法测定了各成分的相对百分含量。结果:经毛细管色谱分离出36个峰,并鉴定出峰所对应的化合物。其主要化学成分为3,7 -二甲基 1,3,7- 辛三烯(38. 4 3% ) ,1S-α- 蒎烯(36. 96 % ) ,1- 甲氧基-4 (2- 丙烯基) 苯(8 5. 7% ) ,柠檬烯(6 . 33% ) ,1R-α- 蒎烯(3. 4 0 % )等。结论:为进一步开发利用龙蒿提供了科学依据。     

高效液相色谱法测定血浆中泮托拉唑浓度

 目的:建立用高效液相色谱法测定血浆中泮托拉唑浓度的方法,为进行泮托拉唑的体内药物代谢、生物利用度研究提供基础?方法:血浆用0.01mol·L^-1磷酸氢二钠做pH调节剂,二氯甲烷做提取溶剂,硝西泮作内标?采用Platinum C₁₈(5u,250mm×4.6mm)柱,流动相:甲醇-水-醋酸盐缓冲液(40∶60∶5),流速1.0ml·min^-1,检测波长286nm?结果:该法回收率平均在98.36%～104.27%,重现性高,RSD在4.693%～9.12%范围内(n=5),线性范围:20～4000μg·L^-1,最低检测浓度15μg·L^-1?结论:HPLC测定血浆中泮托拉唑的方法简便、准确、灵敏、专一,能满足血药浓度测定及药代动力学研究的需要?     

Cytotoxic benzo[j]fluoranthene metabolites from Hypoxylon truncatum IFB-18, an endophyte of Artemisia annua

Two new benzo[j]fluoranthene-based secondary metabolites named daldinone C (1) and daldinone D (2), along with two known metabolites, altechromone A and (4S)-5,8-dihydroxy-4-methoxy-alpha-tetralone, were isolated from the CHCl3/MeOH (1:1) extract of a solid culture of the endophyte Hypoxylon truncatum IFB-18 harbored inside the symptomless stem tissue of Artemisia annua. The structures of the new compounds were elucidated by MS and 1D and 2D NMR spectra and by X-ray diffraction analysis. Their absolute configurations were determined unambiguously by a combination of their CD data and the established exciton chirality rule. Compounds 1 and 2 were substantially cytotoxic against SW1116 cells, with IC50 values of 49.5 and 41.0 microM, respectively, comparable to that (37.0 microM) of 5-fluorouracil. The biosynthetic pathway for 1 and 2 was postulated with the natural occurrence of benzo[j]fluoranthene analogues discussed in brief.     

Artemisia copa aqueous extract as vasorelaxant and hypotensive agent

Ethnopharmacological relevance

Artemisia copa Phil. (Asteraceae) is a medicinal plant commonly used in traditional medicine in Argentina.

Aim of the study

The vasorelaxant and hypotensive activities of the aqueous extract of Artemisia copa have been investigated.

Materials and methods

The in vitro effect of the extract and isolated compounds from Artemisia copa was investigated using isolated rat aortic rings. The acute effect caused by the intravenous (i.v.) infusion (0.1–300 mg/kg) on blood pressure and heart rate was evaluated in spontaneous hypertensive rats. In addition, a phytochemical analysis of the extract was performed by HPLC.

Results

Artemisia copa had a relaxant effect in endothelium-intact aortic rings that had been pre-contracted with 10⁻⁷ M phenylephrine (E_max=96.7±1.3%, EC₅₀=1.1 mg/ml), 10⁻⁵ M 5-hydroxytriptamine (E_max=96.7±3.5%, EC₅₀=1.5 mg/ml) and 80 mM KCl (E_max=97.9± 4.4%, EC₅₀=1.6 mg/ml). In denuded aortic rings contracted by phenylephrine, a similar pattern was observed (E_max=92.7±6.5%, EC₅₀=1.8 mg/ml). l-NAME, indomethacin, tetraethylammonium and glibenclamide were not able to block the relaxation induced by the extract. Nevertheless, the pre-treatment with Artemisia copa attenuated the CaCl₂-induced contraction in a concentration-dependent manner (E_max: 86% of inhibition for 3 mg/ml and 52% de-inhibition for 1 mg/ml). This pre-treatment also induced a significant attenuation of the norepinephrine-induced contraction in a concentration-dependent manner (E_max: 72.7% of inhibition for 3 mg/ml and 27% de inhibition for 1 mg/ml) in a Ca²⁺ free medium. Upon analyzing the composition of the extract, the presence of p-coumaric acid, isovitexin, luteolin and chrysoeriol were found. Luteolin (CE₅₀: 1.5 μg/ml), chrysoeriol (CE₅₀: 13.2 μg/ml) and p-coumaric acid (CE₅₀: 95.2 μg/ml), isolated from the aqueous extract, caused dilatation of thoracic aortic rings pre-contracted with phenylephrine. Artemisia copa administered i.v. also induced a decrease in the mean arterial pressure but did not affect the heart rate in hypertensive rats.

Conclusions

The aqueous extract of Artemisia copa proved to have vasorelaxing and hypotensive effects through the inhibition of Ca²⁺ influx via membranous calcium channels and intracellular stores. The presence of luteolin, chrysoeriol and p-coumaric acid found in this plant could be involved in this effect.