青天葵形态遗传多样性研究

目的探讨不同品种的青天葵及其替代品在形态学上的遗传多样性。方法从叶型，叶脉，叶片大小，叶重等10个形态学指标进行统计，并用统计分析软件进行处理分析。结果通过对13个青天葵样品的形态性状进行调查分析，发现不同品种的青天葵在叶型，叶脉，叶片大小，叶重等形态学数据上存在差异；聚类分析结果显示，以欧式距离15来看可分为两类，毛叶芋兰为一类，毛唇芋兰为一类，与种属间的分类一致；在毛唇芋兰品种中，又可分为小叶青天葵，中叶青天葵和大叶青天葵3类，大叶品种间的多样性与地理种源有一定的关联。结论青天葵在形态学上存在遗传多样性。     

青天葵总DNA的提取与随机扩增多态性DNA反应条件的建立

目的 建立并优化青天葵样品总DNA提取方法及随机扩增多态性DNA(RAPD)反应.方法 采用改进的高盐低pH法提取青天葵鲜叶和药材样品,通过正交设计和均匀设计,改变反应体系和扩增程序优化随机扩增多态性DNA.结果 使用高盐低pH值法可较好地提取新鲜叶片的DNA,药材叶片含杂质较多,但都能用于RAPD.反应体系为:缓冲液2.0 μ1,0.5 μl dNTP(各2.5 mmol·L-1),0.8 μl Mg2+(25 mmol·L-1),0.5 μl引物(20 pmol·μl-1),0.2 μl Taq酶(5U·μ1-1),1 μl DNA(50 ng),1μl BSA(20 mg·ml-1),加双倍蒸馏水至20 μl.扩增程序为:94 ℃预变性3 min;94 ℃变性30 s,40 ℃退火30 s,72 ℃延伸60 s,40个循环;72℃延伸5 min.结论 建立并优化了的青天葵样品总DNA提取方法及RAPD反应体系.     

两种青天葵的鉴别研究

对来源于毛唇芋兰及毛叶芋兰的两种青天葵进行性状、显微特征及薄层色谱比较鉴别;认为可称毛叶芋兰为毛叶青天葵,以区别青天葵正品毛唇芋兰。     

不同产地连翘的DNA指纹图谱构建与聚类分析

目的以不同产地的14批连翘Forsythia suspensa为材料,运用RAPD技术对其进行遗传多样性研究并构建DNA指纹图谱。方法采用RAPD技术,从45条RAPD随机引物中进行筛选,以14批连翘进行DNA指纹图谱的分析研究。结果从45条RAPD随机引物中筛选出11条多态性好的引物,利用这11条RAPD引物进行PCR扩增,共获得80条谱带,平均每个引物扩增出7.27条谱带,其中多态性谱带67条,多态性条带比率为83.8%,是连翘药材资源研究的一种有效分子标记。14批连翘药材间的遗传相似系数(genetic similarity,GS)在0.487 5~0.962 5,表明遗传多样性比较丰富。聚类结果显示遗传多样性与连翘药材来源地有明显的相关性,而且与其亲缘关系较近有关,符合植物种群分布的一般规律。结论以14批不同产地连翘药材资源的RAPD扩增谱带为基础,构建连翘药材资源的DNA指纹图谱并进行聚类分析。     

不同产地西洋参种质遗传多样性的RAPD和ISSR分析

目的采用RAPD和ISSR分子标记技术对我国10个产地的西洋参Panax quinquefolium的遗传多样性进行分析。方法以人参及加拿大西洋参为对照,采用CTAB法提取基因组DNA,选取13个RAPD随机引物及12个ISSR引物对样品进行PCR扩增,根据条带数目,应用NTSYS-pc2.10e软件采用UPGMA方法进行聚类分析。结果 13条RAPD引物共扩增出97条清晰条带,多态性条带81,多态性百分率为85.51%;12条ISSR引物共扩增出99条清晰条带,多态性条带64,多态性百分率为64.65%;通过聚类分析,RAPD及RAPD+ISSR综合将样品聚为4大类;ISSR将样品聚为2大类。结论 RAPD和ISSR标记构建的样品聚类树状图在分类上稍有差异,但总体趋势一致。人参与西洋参被明显区分开来;在ISSR上,吉林兴参镇与北岗镇西洋参与人参聚为一大类;在生长环境及种植条件影响下,东北部分产地西洋参与加拿大西洋参相比在遗传多样性上有所改变。     

野生红景天的RAPD和ISSR遗传多样性分析

目的采用RAPD和ISSR分子标记进行野生红景天种间亲缘关系及种内的遗传多样性分析。方法用CTAB法提取基因组DNA,然后通过筛选得到的11个RAPD及11个ISSR引物对不同采集地的4种野生红景天进行遗传多样性分析。结果 11条RAPD引物共扩增出96条条带,多态性百分比为90.62%;11条ISSR引物共扩增出102条条带,多态性百分比为100%。ISSR多态性的检测能力优于RAPD;聚类分析结果表明,ISSR法、RAPD和ISSR联用法均将17个样品聚为3大类;RAPD将样品聚为4大类。结论 2种标记均可用于红景天属植物种间亲缘关系与种内遗传多样性研究;4种红景天种内存在一定的遗传差异,种间基因流较小。     

黔产宽叶缬草的RAPD分析

目的探讨黔产宽叶缬草在分子水平上的遗传多样性。方法试剂盒法提取20份宽叶缬草样本的总DNA,扩增多态性(RAPD)技术从40个随机引物中筛选出13个,对总DNA样品进行扩增,Popgene 1.32和NTSYS 2.10e软件分析样本的Nei’s、Shannon’s多样性指数以及Jaccard遗传相似性系数,UPGMA法进行聚类分析。结果 20份宽叶缬草样本中共扩增出102条清晰条带,其中88条具有多态性,多态率为86.27%,Nei’s和Shannon’s多样性指数分别为0.303 0和0.453 7,Jaccard遗传相似系数在0.411 8~0.882 4之间。另外,UPGMA聚类分析可将来自剑河县的13份样本聚为一类,江口县的7份样本聚为另一类,而且剑河地区又分为栽培与野生样本2个分支。结论黔产宽叶缬草种水平上具有较高的遗传多样性,其RAPD标记可用于遗传多样性研究,为今后开发该植物的选种与育种工作奠定基础。     

黑龙江省不同产地满山红遗传多样性的RAPD分析

目的:分析不同产地满山红遗传背景与遗传关系,建立中药满山红的RAPD分析方法。方法:CTAB法提取不同产地满山红的基因组DNA;琼脂糖凝胶电泳法检测PCR扩增产物,SPSS17.0软件进行聚类分析,NTSYS2.10e软件进行遗传距离计算。结论:从100条随机引物中筛选出10个随机引物,其扩增产物谱带多,特征好,共扩增出806条条带,多态性条带数710条,多态性比例为88.1%。结论:不同产地间的满山红存在丰富的遗传多样性,RAPD分析技术可用于鉴定满山红。     

河南益母草野生居群遗传多样性的SCoT分析

目的 研究河南益母草野生居群遗传多样性.方法 利用SCoT分子标记对位于河南伏牛、太行、大别和桐柏4大山脉的8个益母草居群66个样品进行遗传多样性分析.结果 10对引物共扩增出240条带,其中多态性条带为238条,多态性百分率(PPB)为99.17％.Nei's遗传多样性指数(H)平均值为0.264 2,Shannon's多态性信息指数(I)平均值为0.39,遗传分化系数(Gst)为0.294 6,种群间基因流为1.197.Mantel Test分析表明,河南益母草居群间的亲缘关系与它们之间的地理距离有着明显的相关性(r=0.366 3,P＜0.05).结论 河南野生益母草种群具有较高的遗传多样性,其遗传距离与地理距离存在明显的相关性.     

25个无花果品系间种质资源的RAPD分析

目的:采用RAPD技术对不同来源的25个无花果栽培品系进行种质资源亲缘关系分析,并从分子水平加以分类,为进一步构建无花果DNA指纹图谱和品种性状改良奠定基础。方法:以25种无花果叶片为材料提取其基因组DNA,采用40条随机引物对其进行RAPD扩增。利用DPS v7.5软件计算遗传距离,利用UPGMA方法进行聚类分析。结果:40条引物共扩增出257条带,其中139条为多态性条带,多态位点率为54.1%。遗传距离变化范围在0.025～0.874,平均为0.449。在遗传距离为0.83时,可将25个无花果品系分为2大类:布兰瑞克为一类;其他24个品系聚为一类。大多数品系均聚集在遗传距离小于0.17的范围内。同时利用RAPD分子标记鉴别出了7、18、23号无花果。结论:25个无花果品系间遗传多样性较低,种群间相关性较强。     

青天葵活性部位的体内抗肿瘤作用研究

目的:确定广西特产药材青天葵体内抗肿瘤作用的活性部位。方法:体外初步筛选出的青天葵石油醚和乙酸乙酯活性部位,利用S180和H22小鼠模型进行了体内抗肿瘤试验。结果:青天葵石油醚和乙酸乙酯部位对小鼠移植性肉瘤S180和小鼠肝癌H22均有明显的抑瘤活性,并且对H22荷瘤小鼠可延长其生存期。它们也能改善小鼠的免疫机能。结论:首次确定了青天葵的石油醚和乙酸乙酯部位是体内抗肿瘤作用的有效部位。在此基础上,可以更深入探讨青天葵抗肿瘤作用的有效成分或成分群以及抗肿瘤作用的特点。     

青天葵植物化学成分和药理活性研究进展

青天葵是我国传统出口名贵药材,值得深入的研究与开发.该文通过查阅全面的国内外相关文献,按照化合物的结构类型对青天葵植物化学成分进行分类综述,并对其药理活性进行总结.青天葵植物化学成分主要含有萜类、黄酮类、氨基酸类以及挥发油等化合物种类,具有清热解毒、抗炎、抗病毒、镇痛、镇咳、平喘、治疗慢性支气管炎等药理活性.     

青天葵中总游离氨基酸的提取工艺研究

目的优选青天葵中总游离氨基酸的最佳提取工艺。方法以青天葵中总游离氨基酸提取率为考察指标,在对提取溶剂、提取温度、提取时间、提取次数及料液比进行单因素考察的基础上,采用正交试验设计对工艺参数进行优选,并进行验证试验。结果最佳提取工艺为：料液比为1：20,水浴40℃下浸提1．0h。结论优选得到的提取工艺稳定、可行。     

青天葵化学成分的研究

目的研究青天葵Nervilia fordii全草的化学成分。方法采用硅胶柱层析、凝胶柱层析和反相硅胶柱层析等色谱方法对青天葵的化学成分进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果从青天葵的甲醇提取物中分离得到10个化合物,分别鉴定为鼠李素(1)、鼠李秦素(2)、鼠李柠檬素(3)、鼠李秦素-3-O-β-D-葡萄糖苷(4)、鼠李柠檬素-4’-O-β-D-葡萄糖苷(5)、鼠李柠檬素-3-O-β-D-葡萄糖-(1→4)-β-D-葡萄糖苷(6)、沙苑子苷(7)、豆甾醇(8)、豆甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(9)、酵母甾醇(10)。结论化合物9为首次从该植物中分离得到。     

茚三酮比色法测定青天葵中总游离氨基酸的含量

目的利用α-氨基酸与茚三酮反应产生颜色,产生的颜色可以使溶液的吸光度变化的原理,采用可见光分光光度法测定青天葵中总游离氨基酸的含量。方法以亮氨酸为标准品溶液,在568 nm波长下测定供试品溶液的吸光度,根据朗伯-比尔定律计算供试品中总游离氨基酸的含量。结果茚三酮比色法显色反应的最佳反应条件为加入缓冲液的pH值为5.0,用量为1.0 mL;显色剂用量为2.0 mL;反应温度和时间分别为100℃水浴加热19 min,冷却10 min。结论本方法准确、灵敏、重复性好,具有简便实用的特点。     

青天葵乙酸乙酯部位化学成分的研究

目的:对广西特产药材青天葵乙酸乙酯部位进行化学成分的研究。方法:采用硅胶柱层析,从青天葵乙酸乙酯部位中分离得到了5个化合物,并根据理化常数和光谱分析,对其进行结构鉴定。结果:5个单体化合物的结构分别为:正亮氨酸(norleucine,结晶Ⅰ)、24(S/β)-dihydrocycloeucalenol-(E)-p-hydroxy cinnamate(结晶Ⅱ)、鼠李柠檬素又名泻鼠李素(rhamnocitrin,结晶Ⅲ)、鼠李秦素又名甲基鼠李黄素(rhamnazin,结晶Ⅳ)、胡萝卜苷(dau-costerol,结晶Ⅴ)。结论:以上五种化合物首次从该植物中分离得到。     

青天葵组培物超低温保存研究

目的用超低温方法保存青天葵组培物。方法采用单因子比较法、均匀设计法考察生长周龄、冷冻保护剂、预培养时间、降温方式、化冻方式等因素对青天葵组培物超低温保存后细胞生活力的影响。结果青天葵组培物较佳的超低温保存程序为：5周龄的组培物，在4℃进行低温锻炼12d，以12，5％DMSO＋0．25％LH为冷冻保护剂，在4℃静置处理30min，然后在-18℃，停留1h后投入液氮中保存，材料取出后，在20℃化冻，无菌洗涤后，再接种，组培物能够存活并继续生长。结论超低温保存方式可以成功保存青天葵组培物种质资源。     

不同生长方式青天葵中黄酮类成分的质谱比较分析

目的 检测通过组培快速繁殖试管苗,人工栽培青天葵与传统野生药材之间的黄酮类成分是否发生质或量的改变.方法 通过正离子模式电喷雾质谱对不同生长方式青天葵的黄酮类成分进行比较分析.结果 经质谱初步定性比较,表明不同生长方式对青天葵黄酮类成分组成比例有一定影响.结论 不同来源药材的质量评价中不仅要考虑活性成分的含量,同时应增加能反映活性成分比例的质量评价方法.     

青天葵提取液脱色工艺研究

目的:优选出青天葵提取液最佳脱色工艺。方法:以青天葵中提取液的氨基酸损失率和脱色率为考察指标,在对pH、活性炭用量、脱色温度及脱色时间进行单因素考察的基础上,采用正交试验设计对工艺参数进行优选,并进行验证试验。结果:最佳脱色工艺为pH 3.0,活性炭加入量为0.01 g.mL-1,脱色温度为40℃,脱色时间为20 min。结论:优选得到的提取工艺稳定、可行。     

青天葵组织培养及植株再生的研究

目的:对青天葵进行组织培养并获得再生植株。方法:考察不同外植体、植物生长调节剂、添加物等对根状茎及再生植株生成的影响。结果:以球茎为外植体效果最好,6-BA2mg·L^-1诱导球茎生成根状茎的效果优于6-BA1mg·L^-1,椰汁、活性炭对根状茎的生长有促进作用。结论:青天葵球茎接种于1/2MS+6-BA2mg·L^-1培养基上,能够诱导出芽,芽接种于添加了10%椰汁和1‰活性炭的培养基中能够生成大量的根状茎,将白色的根状茎接种于1/2MS+1‰活性炭的培养基中能够先形成球茎,并进一步形成再生植株;将绿色的根状茎接种于1/2MS+6-BA2mg·L^-1+NAA2mg·L^-1的培养基上能够直接形成再生植株。