秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡

目的探讨秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡的作用。方法 MTT法检测肺癌细胞A549的增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶caspase3、8、9的活性,免疫印迹法检测K-Ras、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达的变化。结果秦皮甲素可抑制人肺癌细胞A549的增殖,IC50值为0.4 mmol/L,并诱导凋亡;caspase3和caspase9表达增强,caspase8表达无明显改变。p-ERK1/2和K-Ras蛋白表达减弱,而ERK1/2蛋白表达无明显变化。结论秦皮甲素通过显著抑制K-Ras的表达和ERK1/2的磷酸化水平诱导人肺癌细胞A549凋亡。     

PUMA介导大蒜素诱导人卵巢癌耐顺铂SKOV-3/DDP细胞凋亡

目的探讨p53上调凋亡调控因子(PUMA)在大蒜素诱导人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株(SKOV-3/DDP)细胞凋亡中的作用。方法将SKOV-3/DDP细胞随机分为4组:正常对照组、大蒜素组(于培养基中加入终质量浓度为20μg/mL大蒜素作用细胞48 h)、顺铂组(5μg/mL)、大蒜素+顺铂组。MTT法检测细胞存活率,荧光显微镜和流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western-blot检测PUMA、bax及bcl-2的基因表达。结果与对照组比较,大蒜素组SKOV-3/DDP细胞凋亡率有明显的增加(P<0.05),且作用呈剂量依赖性,PUMA,Bax mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调(P<0.05);与大蒜素组比较,顺铂+大蒜素组的细胞生长抑制率及凋亡率均有显著增加(P<0.05),Bax表达上调及Bcl-2表达下调的程度大于单用组(P<0.05);用特异性SiRNA沉默PUMA后,大蒜素组细胞凋亡率呈显著性下降(P<0.05)。结论 PUMA在介导大蒜素诱导SKOV-3/DDP细胞凋亡中发挥了关键性作用。     

毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷对人宫颈癌HeLa细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响

目的探讨毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(CG)对宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响。方法体外培养HeLa细胞,分为对照组和实验组,实验组用不同质量浓度的CG分别处理24、48 h,采用MTT法测定CG对HeLa细胞增殖的影响:Hoechst 33258染色观察细胞凋亡情况;采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期;Western blotting法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)、Bcl-2/Bax蛋白表达情况。结果 CG(2.5~100μg/mL)能抑制HeLa细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;质量浓度为20、40、80μg/mL的CG作用HeLa细胞48 h后,细胞凋亡率逐渐上升,分别为10.40%、25.50%、39.40%,明显高于对照组(1.80%);实验组HeLa细胞Caspase-3的活性形式cleaved Caspase表达量显著增加;促凋亡蛋白Bax表达量升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量降低,呈剂量依赖性。结论 CG能抑制HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞Caspase-3活性、下调Bcl-2蛋白的表达及上调Bax蛋白有关。     

葛根素减轻PM2.5对血管内皮细胞损伤的机制研究

探讨PM2.5对EA.hy926型人脐静脉内皮细胞损伤的影响及葛根素的保护作用及机制。采集大气PM2.5分别以0,20,200,400 mg·L~(-1)染毒EA.hy926细胞24 h,MTT法测细胞存活率,流式细胞术测细胞凋亡,Western blot法测p-ERK1/2,Bax,Bcl-2蛋白水平,ELISA法测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)含量,并测细胞丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活性;分别加入葛根素(10,50,100μmol·L~(-1))和ERK1/2通路特异性阻滞剂PD98059 20μmol·L~(-1)检测葛根素的干预作用及机制。检测发现与对照组比较,PM2.5染毒后呈剂量依赖性降低EA.hy926细胞存活率,上调p-ERK1/2蛋白水平及Bax/Bcl-2蛋白比率以促进细胞凋亡,诱导分泌TNF-α及IL-6含量增高,降低SOD活性,增加MDA含量及LDH活性(P0.05);葛根素呈剂量依赖性增加EA.hy926细胞的存活率,下调p-ERK1/2蛋白水平及Bax/Bcl-2蛋白比率以抑制细胞凋亡,降低TNF-α及IL-6含量,增加SOD活性,降低MDA含量及LDH活性(P0.05)。研究显示葛根素可能通过抑制ERK1/2通路减轻PM2.5对EA.hy926细胞的损伤。     

黄芩素通过激活Caspases和Bcl-2家族蛋白诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡

目的研究黄芩素对卵巢癌HO-8910细胞凋亡的调控作用及其可能的作用机制。方法选取人卵巢癌细胞系HO-8910细胞,经黄芩素不同浓度及不同时间处理后,分别采用噻唑蓝(MTT)法测定对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;采用Westernblotting法检测Bcl-2家族蛋白表达情况。结果黄芩素对HO-8910细胞有明显的增殖抑制作用,呈浓度-时间依赖性。与对照组比较,黄芩素组细胞凋亡率明显升高(P0.05、0.01)。黄芩素上调Bax/Bcl-2值,上调cleaved Caspase-3及cleaved Caspase-9的蛋白表达量,呈浓度依赖性。结论黄芩素通过激活Caspase和Bcl-2家族蛋白对卵巢癌HO-8910细胞发挥抗增殖及诱导凋亡活性。     

紫草素诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡机制的探讨

目的:研究紫草素诱导人前列腺癌细胞(PC-3)凋亡及其作用机制。方法:以PC-3细胞为研究对象,以不同浓度的紫草素处理PC-3细胞,另设空白组,处理不同时间后,分别采用噻唑蓝(MTT)法检测紫草素对PC-3细胞增殖抑制情况;显微镜观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生;蛋白质免疫印迹(Western blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和磷酸化-细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达。结果:不同浓度的紫草素对PC-3细胞的生长抑制呈时间和剂量依赖性;形态学观察结果显示紫草素作用PC-3细胞后可使细胞变圆,脱落,皱缩,细胞内出现空泡,周围出现凋亡小体;与空白组比较,不同浓度的紫草素明显升高Caspase-3和Bax蛋白的表达,明显降低Bcl-2蛋白的表达,不同浓度的紫草素作用细胞48 h后可诱导细胞产生ROS,ROS清除剂二硫苏糖醇(DTT)可以明显逆转紫草素诱导的PC-3细胞的生长抑制率,且0.2 mmol·L-1DTT可以抑制由紫草素诱导的Caspase-3和ERK1/2的活化。结论:紫草素通过ROS/ERK1/2信号通路诱导人前列腺癌PC-3细胞发生凋亡。     

开心散抑制过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡的机制

目的:研究开心散(Kaixin San,KXS)对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并探讨其抗凋亡的机制。方法:以过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡为模型,采用MTT比色法,琼脂糖凝胶电泳分析,荧光染色观察及流式细胞技术,考察KXS对凋亡的保护作用;采用比色法测定caspase活性、Western blot技术检测胞浆中细胞色素C水平,RT-PCR技术分析Bcl-2和Bax mRNA的表达,考察KXS抗凋亡的机制。结果:KXS可以有效地改善H2O2诱导的PC12细胞的凋亡,抑制caspase-3、caspase-9的活性,降低胞浆中细胞色素C的水平,增加Bcl-2mRNA的表达,减少BaxmRNA的表达,从而导致Bcl-2/Bax比值的增加。结论:KXS可能通过线粒体途径抑制H2O2诱导的PC12细胞的凋亡。     

萝卜硫素介导HDAC6信号通路改善肌红蛋白诱导的肾小管上皮细胞凋亡

目的:探讨萝卜硫素对肌红蛋白诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡及组蛋白乙酰化酶6(HDAC6)表达的影响。方法:体外采用肌红蛋白诱导HK-2细胞的横纹肌溶解致急性肾损伤模型,CCK8法分析HK-2细胞增殖活性,流式细胞术检测HK-2细胞凋亡率,Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3和HDAC6蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组HK-2细胞存活率及Bcl-2蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Bax、cleaved Caspase-3、HDAC6蛋白表达显著升高(P0.05)。与模型组比较,萝卜硫素组和HDAC6抑制剂23BB组HK-2细胞存活率及Bcl-2蛋白表达显著升高,细胞凋亡率及Bax、cleaved Caspase-3、HDAC6蛋白表达显著降低(P0.05)。结论:萝卜硫素能通过抑制HDAC6蛋白表达降低肌红蛋白诱导的HK-2细胞凋亡,对急性肾损伤具有保护作用。     

姜黄素对人肾癌Caki-2细胞生长和凋亡的影响及其机制

目的:观察姜黄素对体外培养的人肾癌Caki-2细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用,并探讨其可能的作用机制。方法:应用不同浓度的姜黄素分别作用于人肾癌Caki-2细胞12、24、36、48、72、96 h,采用MTT法评价姜黄素对Caki-2细胞的生长抑制作用;应用不同浓度的姜黄素分别作用于人肾癌Caki-2细胞36、48、72、96 h,采用Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒评价姜黄素对Caki-2细胞的凋亡诱导作用;Western blot检测姜黄素对Caki-2细胞H-Ras、p-Raf-B、p-MEK1/2、p-ERK1/2、ERK1/2、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,β-actin作为内参蛋白。结果:不同浓度的姜黄素能显著抑制Caki-2细胞生长,36、48、72、96 h呈剂量、时间依赖关系;不同浓度的姜黄素能显著诱导Caki-2细胞凋亡,48、72、96 h呈剂量、时间依赖关系;姜黄素作用后,Caki-2细胞中H-Ras、p-Raf-B、p-MEK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达显著增加,ERK1/2、β-actin蛋白表达与空白组相比无统计学差异。结论:姜黄素对体外培养的人肾癌Caki-2细胞有显著的生长抑制作用,其机制可能与通过抑制H-Ras蛋白表达、直接或间接下调ERK信号通路蛋白表达相关;同时,姜黄素对Caki-2细胞有显著的凋亡诱导作用,其机制可能与上调促凋亡蛋白Bax表达、下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达相关。     

大蒜素对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究大蒜素对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:以不同浓度大蒜素(12.5、25、50μg/mL)和顺铂(40μg/mL)分别干预对数生长期Ishikawa细胞,采用MTT法检测Ishikawa细胞增值抑制;通过流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡状况,采用Western blotting法检测Ishikawa细胞中caspase-3蛋白表达,RT-PCR法检测Ishikawa细胞中Bax mRNA、bcl-2 mRNA表达并计算Bax/bcl-2表达比值。结果:大蒜素能够显著提高子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖抑制率,阻滞Ishikawa细胞周期于G2/M期,提高细胞凋亡率,上调caspase-3蛋白和Bax mRNA表达,下调bcl-2 mRNA表达,提高Bax/bcl-2表达比值,且上述作用均具有一定的剂量依赖性。结论:大蒜素对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖具有抑制作用以及促其凋亡的作用,机制可能与大蒜素能够改变Ishikawa细胞周期以及调节凋亡相关基因、蛋白表达有关。     

金花茶种子诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡及其机制的研究

目的 探讨金花茶种子诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡的机制.方法 用不同浓度金花茶种子乙醇提取物的正丁醇萃取物(CCEB)干预人前列腺癌PC3细胞,分别采用流式细胞仪、Western印记法等检测其对细胞凋亡及Bax、Bcl-2等表达的影响.结果 CCEB作用于人前列腺癌PC3细胞后,引起PC3细胞DNA片段化率增大,线粒体膜电位下降,细胞内caspase-3活性增高,Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少,胞浆中细胞色素c含量增加.结论 CCEB诱导PC3细胞凋亡与caspase依赖性线粒体途径相关.     

连豆清脉方水提液干预ANGⅡ诱导内皮细胞凋亡及Bax/Bcl-2,caspase9/XIAP mRNA表达的实验研究

目的观察连豆清脉方水提液对ANGⅡ诱导内皮细胞凋亡干预及Bax/Bcl-2、caspase9/XIAP mRNA表达的影响。方法体外培养大鼠动脉内皮细胞株(RAOEC),连豆清脉方水提液干预ANGⅡ诱导RAOEC凋亡,采用流式细胞仪检测ANGⅡ诱导凋亡及线粒体膜电位改变,RT-PCR荧光相对定量检测Bax/Bcl-2及caspase9/XIAP mRNA表达水平变化,组间差异统计性分析采用Students T-test。结果 ANGⅡ诱导模型组内皮细胞诱导10 h后线粒体膜电位为(0.580±0.137),24 h凋亡率为30.4%±5.2%,连豆清脉方(500μg)组内皮细胞线粒体膜电位(4.361±1.251),24 h凋亡率为13.5%±3.8%,连豆清脉方能够部分抑制ANGⅡ诱导内皮细胞作用,差异具有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR荧光相对定量显示ANGⅡ组Bax和caspase9 mRNA水平显著升高(P<0.05),连豆清脉方干预组下调促凋亡蛋白Bax和caspase 9表达,上调凋亡抑制蛋白Bcl-2表达(P<0.05)。结论连豆清脉方脉方能够稳定线粒体膜电位,通过干预Bax、Bcl-2和caspase 9 mRNA表达,抑制ANGⅡ诱导的内皮细胞凋亡。     

黄芩苷对人肺腺癌A549细胞的抑制作用及相关机制

目的体外观察黄芩苷对人肺腺癌细胞株A549凋亡的影响及其可能机制。方法采用0、0.625、1.25、2.5、5.0、10.0 mg/L黄芩苷作用于A549细胞24、48、72 h,MTT法检测药物对A549细胞的抑制率;RT-PCR法检测1.22mg/L黄芩苷处理A549细胞24 h Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA的表达情况。结果不同质量浓度的黄芩苷呈时间、剂量依赖性地抑制A549细胞的生长,1.22 mg/L黄芩苷作用A549细胞24 h后,Bax、Caspase-3 mRNA表达水平显著升高,Bcl-2 mRNA表达显著下降,Bcl-2/Bax比值显著降低(均P<0.01)。结论黄芩苷体外能诱导A549细胞凋亡,与上调Bax、Caspase-3表达,下调Bcl-2表达有关。     

吴茱萸碱抑制HDAC6促进人白血病K562细胞周期阻滞和凋亡的机制研究

目的探讨吴茱萸碱通过抑制组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)促进人白血病K562细胞周期阻滞以及凋亡的机制。方法采用CCK-8法检测吴茱萸碱对K562细胞增殖的影响;流式细胞术检测K562细胞周期和凋亡;化学比色法检测K562细胞HDAC6活性;Western blotting法检测K562细胞中HDAC6、Cyclin D1、CDK4、Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、ERK、p-ERK、p38和p-p38蛋白的表达。结果 CCK-8法结果提示,吴茱萸碱在一定浓度范围内(1~16μmol/L)可以有效抑制K562细胞增殖,并呈时间和浓度依赖性;流式细胞术结果显示,吴茱萸碱可将K562的细胞周期阻滞于G0/G1期;2、4、8μmol/L吴茱萸碱诱导K562细胞48 h后,其凋亡率分别为(11.47±1.05)%、(12.77±0.79)%和(18.58±1.37)%,与对照组(2.79±1.01)%相比差异显著(P0.01);化学比色法结果显示,吴茱萸碱能有效抑制HDAC6的活性;Western blotting结果显示,吴茱萸碱能上调Bax、Cleaved Caspase-3、p38和p-p38蛋白的表达,下调CDK4、Cyclin D1、Bcl-2、HDAC6、ERK和p-ERK蛋白的表达。结论吴茱萸碱可能是通过抑制HDAC6的活性,激活MAPK信号通路,进而上调促凋亡蛋白的表达,下调周期蛋白的表达,从而抑制K562细胞的增殖,诱导细胞周期阻滞和凋亡。     

线粒体膜电位在三氧化二砷诱导K562细胞凋亡中的作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导K562细胞凋亡的发生机制。方法分别以1、2、4、8、16μmol/LAs2O3诱导K562细胞凋亡,MTT法检测不同时间点细胞增殖抑制率,DNA Ladder法检测细胞凋亡,Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率,Rhodamine123染色流式细胞术检测线粒体膜电位(ΔΨm)变化,ELISA法检测胞浆细胞色素C(CYTC)水平,分光光度法检测Caspase-3活性,流式细胞术检测Bcl-2和Bax表达。结果MTT结果显示As2O3能抑制K562细胞生长,且呈现时间剂量依赖性;4~16μmol/L的As2O3作用24h均可诱导K562细胞凋亡,同时伴有ΔΨm下降,胞浆内CYTC蛋白浓度及Caspase-3活性增高,胞浆Bcl-2/Bax值下降,且均呈剂量依赖性。结论As2O3诱导K562细胞凋亡可能是通过降低ΔΨm,激活线粒体凋亡途径实现的,Bcl-2/Bax值下降可能与其有关。     

马钱子碱诱导KG-1细胞凋亡及其机制研究

目的:考察马钱子碱对人急性髓系白血病KG-1细胞凋亡的影响,并探究相关机制。方法:采用CCK-8法检测马钱子碱对KG-1细胞增殖的影响,确定实验组的用药浓度分别为40、158、276μg/mL,作用时间为48 h;通过流式细胞术检测KG-1细胞的凋亡率;采用RT-qPCR法检测Bax、Akt、Bim mRNA表达;通过Western-blot法检测Bim、p-Akt、Bax、Active Caspase-3、Active Caspase-9蛋白表达。结果:马钱子碱能抑制KG-1细胞的增殖,40、158μg/mL组主要是早期凋亡,而276μg/mL组则以晚期凋亡为主。与对照组比较,158、276μg/mL组的Bim、Bax mRNA表达显著升高,而Akt mRNA表达显著降低,各给药组Bax、Active Caspase-3蛋白表达均显著升高,158、276μg/mL组Bim、Active Caspase-9蛋白表达显著升高(P0.05或P0.01)。结论:马钱子碱对KG-1细胞具有显著的增殖抑制作用,该作用通过诱导凋亡实现,其机制可能为上调Bax、Bim表达,触发凋亡的线粒体途径,使Caspase-9激活,导致KG-1细胞凋亡。     

姜黄素联合FOLFOX诱导胃癌细胞发生凋亡及其机制研究

目的观察姜黄素联合FOLFOX（folinic acid fluorouracil oxaliplatin）对胃癌细胞株BGC-823生长的影响,并探讨其可能的发生机制。方法设立空白对照组、姜黄素组、FOLFOX组［5-FU（0.1 mmol/L）+奥沙利铂（5 μmol/L）］及姜黄素联合FOLFOX组。CCK8法检测细胞活性,Hoechst染色观察细胞凋亡,Caspase-3试剂盒检测Caspase-3活性, 实时荧光定量PCR法测定Bcl-2、Bax mRNA表达的变化,Western blot法测定Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果各用药组均能抑制BGC-823细胞增殖、诱导细胞凋亡、增加Caspase-3的活性、降低Bcl-2 mRNA及Bcl-2蛋白表达而增加Bax mRNA及Bax蛋白表达,且姜黄素联合FOLFOX组疗效优于姜黄素组及FOLFOX组,差异有统计学意义（P<0.01）。结论姜黄素联合FOLFOX组能够明显抑制BGC-823细胞的增殖,其联合作用可能通过促进Bax的表达及Caspase-3的活性、抑制Bcl-2表达,从而加速肿瘤细胞的凋亡。     

大蒜素诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的作用机制研究

目的：探讨大蒜素诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的作用机制。方法：分别以二甲基亚砜（空白对照组）、大蒜素（12.5、25、50 μg/mL）和LY294002 5 μg/mL干预对数生长期Ishikawa细胞。48 h后,用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡状况,Western Blotting法检测p-PI3K、p-AKT、Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果：与空白对照组比较,经大蒜素12.5、25、50 μg/mL或LY294002 5 μg/mL干预能够提高Ishikawa细胞增殖抑制率和凋亡率;经大蒜素25、50 μg/mL或LY294002 5 μg/mL干预能够下调p-PI3K、p-AKT、Bcl-2表达并上调Cleaved Caspase-3、Bax表达,提高Bax/Bcl-2比值,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。与LY294002组比较,经大蒜素50 μg/mL干预能够提高Ishikawa细胞增殖抑制率和凋亡率,下调p-PI3K、p-AKT表达并上调Cleaved Caspase-3、Bax表达,提高Bax/Bcl-2比值,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论：大蒜素能够诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡,可能与抑制PI3K/AKT信号通路活化而使其下游促凋亡蛋白表达上调有关。     

黄芪注射液对重症肺炎大鼠胸腺细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的:探讨黄芪注射液对重症肺炎大鼠胸腺细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法:将40只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组、模型组、黄芪高剂量组、黄芪中剂量组和黄芪低剂量组,每组8只。采用气管穿刺注入感染法制作大鼠重症肺炎模型。分别采用原位末端转移酶标记法(Terminal deoxynucleotidyl transfer-ase dUTP nick end labeling,TUNEL)检测各组大鼠胸腺细胞凋亡及Western blot检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bcl-2和Bax的表达。结果:与对照组比较,模型组和黄芪治疗各组胸腺细胞凋亡增加,凋亡相关蛋白cleaved caspase-3和Bax表达增强,除黄芪高剂量组外Bcl-2表达均减弱,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05);与模型组比较,黄芪高剂量组胸腺细胞凋亡减轻,Bcl-2表达增强,cleaved caspase-3和Bax表达减弱(P<0.05),Bcl-2/Bax比值增加。结论:黄芪注射液能减轻重症肺炎时胸腺细胞凋亡,其机制与促进Bcl-2表达,减轻Bax表达,增加Bcl-2/Bax比值有关。     

忍冬藤提取物诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用及机制研究

目的研究忍冬藤Lonicerajaponica提取物对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF/MS)表征忍冬藤提取物的化学成分;采用MTT法检测忍冬藤提取物对人骨肉瘤细胞HOS、143B以及人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2存活率的影响;采用荧光显微镜观察忍冬藤提取物对HOS、143B细胞凋亡的影响;采用Annexin V/PI双染法检测忍冬藤提取物对HOS细胞凋亡的影响;采用JC-1染色法检测忍冬藤提取物对HOS细胞线粒体膜电位的影响;采用Westernblotting法检测忍冬藤提取物对HOS细胞B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(bcl-2associated X,Bax)、B细胞淋巴瘤2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、活化的多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleavedpolyADP-ribosepolymerases,cleavedPARP)、cleavedCaspase-9和细胞色素C(cytochrome-c,Cyt-C)蛋白表达的影响。结果忍冬藤提取物中鉴定出有机酸类、三萜皂苷类、黄酮类、环烯醚萜类和氨基酸类5种类型的36种化学成分。忍冬藤提取物抑制HOS和143B细胞存活率,显著诱导HOS细胞凋亡(P0.01),Caspase-3抑制剂Z-VAD-FMK显著抑制忍冬藤提取物诱导的HOS细胞凋亡(P0.05、0.01);忍冬藤提取物显著提高HOS细胞Caspase-3活性(P0.01),显著改变HOS细胞线粒体膜电位(P0.05、0.01),显著上调HOS细胞Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、cleaved Caspase-9、Cyt-C和Bax/Bcl-2蛋白表达水平(P0.05、0.01),显著下调Bcl-2蛋白表达水平(P0.05、0.01)。结论忍冬藤提取物能够抑制骨肉瘤细胞增殖,并通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、cleaved Caspase-9和Cyt-C蛋白表达,激活Caspase级联反应有关。