左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症模型大鼠海马NR不同亚型表达的影响

目的探讨左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症模型大鼠海马NR不同亚型NR2A、NR2B表达的影响。方法建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型,并随机分为5组:模型组,阳性药(二甲双胍0.18g/kg+盐酸氟西汀1.8mg/kg)组,左归降糖解郁方高、中、低剂量(32.82,16.41,8.20g/kg)组,以正常大鼠为空白对照组,每组10只,灌胃给药28天。给药后,采用Morris水迷宫实验评价大鼠行为学变化,Western-blotting和RT-PCR法定量检测各组大鼠海马NR2A、NR2B相关基因及蛋白的表达情况。结果与空白对照组比较,模型组大鼠(P0.01)逃避潜伏期延长,空间探索时间减少,海马NR2A、NR2B表达明显升高(P0.01),差异有显著统计学意义;与模型组比较,阳性药组和左归降糖解郁方高剂量组大鼠逃避潜伏期明显缩短,空间探索时间增加(P0.01),海马NR2A、NR2B的表达减少(P0.05),差异有统计学意义。结论左归降糖解郁方可通过调控DD大鼠海马NR2A、NR2B的表达,明显改善DD大鼠的抑郁样行为。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元凋亡的影响

目的观察左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠学习记忆能力以及海马JNK、Bcl-2、Bax表达的影响,探讨其对糖尿病并发抑郁症大鼠海马损伤的保护机制。方法采用高脂饲料灌胃联合尾静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,继续给予28 d慢性应激建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型。实验大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组及左归降糖解郁方高、中、低剂量组。末次给药后,采用Morris水迷宫测试大鼠逃避潜伏期时间,Western blot检测海马JNK、Bcl-2、Bax蛋白表达;RT-PCR检测JNK、Bcl-2、Bax基因表达。结果与空白组比较,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长(P0.01),JNK、Bax蛋白及基因表达明显上升,Bcl-2表达明显下降(P0.05,P0.01);与模型组比较,左归降糖解郁方高剂量组大鼠逃避潜伏期明显缩短(P0.01),JNK、Bax蛋白及基因表达均明显下降,Bcl-2表达明显升高(P0.05,P0.01)。结论左归降糖解郁方能明显改善糖尿病并发抑郁症大鼠的学习记忆能力,其作用机制可能与抑制海马神经元凋亡有关。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元微小兴奋性突触后电流的影响

目的观察左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元微小兴奋性突触后电流(mEPSC)频率及幅度的影响,探讨其对海马神经元保护作用的可能机制。方法选用17~19 d胚胎大鼠离体培养海马神经元,神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。细胞随机分为空白对照组、抑郁组、糖尿病组、糖尿病并发抑郁症组、空白血清组、左归降糖解郁方组和阳性药组,培养10 d后加入皮质酮(50μmol/L)和/或高糖(15 mmol/L)建立细胞模型,给予药物血清干预18 h,采用全细胞膜片钳记录神经元mEPSC,比较各组神经元mEPSC频率和电流幅度。结果经NSE免疫细胞化学鉴定,培养7 d后神经元纯度达95%以上。与空白对照组比较,抑郁组、糖尿病组和糖尿病并发抑郁症组大鼠海马神经元mEPSC的频率和幅度均显著上升(P0.01);与糖尿病并发抑郁症组比较,左归降糖解郁方组和阳性药组大鼠海马神经元mEPSC的频率和幅度均显著下降(P0.01)。结论左归降糖解郁方可降低糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元mEPSC的频率和幅度,对海马神经元有保护作用。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马星形胶质细胞GFAP、S100B的影响

目的研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马星形胶质细胞GFAP及S100B的影响。方法采用高脂乳剂灌胃、尾静脉注射链脲佐菌素(STZ,38mg/kg)、28天慢性应激联合的方法复制糖尿病并发抑郁症大鼠模型,并随机分为5组:模型组,阳性药(二甲双胍0.18g/kg+百忧解1.8mg/kg)组,左归降糖解郁方高、中、低剂量(32.82,16.41,8.20g/kg)组,以正常大鼠为空白组,灌胃给药4周。采用Morris水迷宫测试大鼠空间学习记忆能力,免疫组化法检测海马星形胶质细胞GFAP及S100B的表达情况,Elisa法检测血清中S100B含量。结果与空白组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长,差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,阳性药组和左归降糖解郁方高剂量组逃避潜伏期缩短,差异有统计学意义(P0.01)。与空白组比较,GFAP、S100B表达在模型组显著升高,差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,阳性药组和左归降糖解郁方高剂量组GFAP、S100B表达显著减少(P0.01或P0.05)。结论左归降糖解郁方能显著改善大鼠空间学习记忆功能,可能与减少星形胶质细胞反应性增生有关。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障精细结构AQP4、Cx43的影响

目的研究左归降糖解郁方(黄芪、贯叶连翘、姜黄、熟地黄、山茱萸等)对糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障精细结构水通道蛋白AQP4和缝隙连接蛋白Cx43表达的影响。方法采用高脂乳剂灌胃、尾静脉注射链脲佐菌素、28 d慢性应激联合的方法复制糖尿病并发抑郁症大鼠模型,并随机分为5组:模型组,阳性药(二甲双胍+盐酸氟西汀)组,左归降糖解郁方高、中、低剂量组,以正常大鼠为空白组,灌胃给药4周。给药后,采用Morris水迷宫测试大鼠空间学习能力,HE染色法观察海马组织病理学,免疫组化法检测海马血脑屏障精细结构AQP4和Cx43表达情况。结果与空白组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长(P0.01),海马细胞存在明显损伤,AQP4和Cx43表达下降,差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,阳性药组和左归降糖解郁方高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短,差异有显著统计学意义(P0.01),海马细胞形态趋于正常,且AQP4和Cx43表达增多,差异有统计学意义(P0.05)。结论左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠的治疗作用可能与调控海马血脑屏障精细结构AQP4和Cx43表达有关。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症模型大鼠海马齿状回神经元树突及Wnt5a/RhoA信号通路的影响

目的 探讨左归降糖解郁方治疗糖尿病并发抑郁症的可能作用机制。方法 60只大鼠随机分为正常组、模型组、无翅型MMTV整合位点家族成员5a (Wnt5a)激动剂组、左归降糖解郁方组、左归降糖解郁方+Wnt5a抑制剂组,每组12只。除正常组外,其余各组大鼠采用高脂饲料饲养、链脲佐菌素注射和慢性温和不可预知应激联用法建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型。造模成功后Wnt5a激动剂组大鼠给予双侧海马立体定位注射Wnt5a激动剂Foxy-5各5μl,连续7天;左归降糖解郁方组给予左归降糖解郁方20.52 g/(kg·d)灌胃;左归降糖解郁方+Wnt5a抑制剂组进行灌胃给药和双侧海马立体定位注射Wnt5a抑制剂Box5,给药剂量和注射方法同上。正常组和模型组给予10 ml/(kg·d)生理盐水灌胃。各组灌胃均连续4周。干预结束后采用强迫游泳实验(不动时间)和旷场实验(活动次数)评价大鼠的抑郁样行为;检测大鼠的血糖和胰岛素含量,并计算胰岛素抵抗指数;采用高尔基染色观察大鼠海马齿状回神经元的树突形态;采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)注射及免疫荧光检测齿状回神经元增殖水平;采用RT-qPCR和Western ...     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马腺苷A1受体及谷氨酸转运体的影响

目的:研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症模型大鼠海马腺苷A1受体(adenosine A1 receptor,A1R)及谷氨酸转运体(excitatory amino acid transporter-2,EAAT-2)的影响。方法:建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型,并依据体质量随机分为5组:糖尿病并发抑郁症模型组、阳性药组和左归降糖解郁方高、中、低剂量组,每组10只,另取10只SD大鼠作为正常组。各组灌胃给予相应药物,连续4周。生化法检测各组大鼠血糖值,Openfield实验检测大鼠抑郁样行为,ELISA法检测大鼠海马匀浆液谷氨酸含量,免疫组化检测大鼠海马谷氨酸转运体EAAT-2和腺苷受体A1受体(A1R)的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血糖显著增加而活动次数明显减少,海马A1R和EAAT-2表达均显著减少,而谷氨酸含量明显增多。给予左归降糖解郁方干预后,模型大鼠血糖和海马谷氨酸含量均显著降低,抑郁行为明显改善,海马A1R和EAAT-2表达显著增多。结论:左归降糖解郁方可有效调控糖尿病并发抑郁症大鼠海马兴奋性神经递质谷氨酸水平,其可能通过激活腺苷A1受体、上调EAAT-2表达,从而减轻糖尿病并发抑郁症的兴奋性神经毒性,进而产生抗抑郁作用。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马谷氨酸及N-甲基-D-天冬氨酸受体2A、2B的影响

目的观察左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马谷氨酸、N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA receptor,NR)2A及NR2B表达的影响,探讨其对糖尿病并发抑郁症大鼠海马损伤的保护机制。方法建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型,随机分为模型组、阳性药组及左归降糖解郁方高、中、低剂量组,以正常大鼠为正常组,每组16只,各给药组给予相应药物灌胃,连续28 d。采用Open-field实验评价大鼠行为变化,ELISA检测海马谷氨酸含量,免疫荧光法检测海马NR2A、NR2B表达。结果与正常组比较,模型组大鼠自主活动次数明显减少(P0.01),海马谷氨酸含量明显升高(P0.01),NR2A、NR2B表达明显升高(P0.01);与模型组比较,阳性药组和左归降糖解郁方高剂量组大鼠自主活动次数明显增加(P0.01),海马谷氨酸含量明显下降(P0.01),NR2A、NR2B表达降低(P0.05)。结论左归降糖解郁方可明显改善糖尿病并发抑郁症大鼠的抑郁行为,其药效作用可能与调控大鼠海马谷氨酸含量及NR2A、NR2B表达有关。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马星形胶质细胞神经营养的影响

目的研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症模型大鼠海马星形胶质细胞神经营养功能的保护作用。方法采用复合方法建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型。实验大鼠随机分为模型组、阳性药组和左归降糖解郁方高、中、低剂量组,每组12只,另取12只SD大鼠作为正常组。各给药组给予相应药物灌胃,连续4周。旷场实验检测大鼠抑郁行为,免疫组化检测大鼠海马星形胶质细胞标记物特异性蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及神经元细胞标记物微管相关蛋白2(MAP2)的表达,Western blot和RT-PCR检测大鼠海马星形胶质细胞营养分泌物脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、神经生长因子(NGF)表达。结果与正常组比较,模型组大鼠活动次数明显减少,海马GFAP表达明显增加,MAP2、BDNF、GDNF、NGF表达明显减少;左归降糖解郁方干预后,模型大鼠抑郁行为明显改善,大鼠海马BDNF、GDNF、NGF、MAP2表达增加,GFAP表达明显减少。结论左归降糖解郁方可有效改善大鼠海马星形胶质细胞的分泌功能,其可能通过增强星形胶质细胞的营养作用保护神经元,从而发挥抗抑郁作用。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元病理形态及凋亡的影响

目的观察左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症(diabetes mellitus with depression,DD)大鼠海马神经元病理形态的影响,探讨其保护作用机制。方法采用尾静脉注射链脲佐菌素联合慢性应激建立DD大鼠模型。72只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组和左归降糖解郁方低、中、高剂量组,每组12只,分别给予相应药物。末次给药后,检测大鼠血糖及行为学变化,分别采用HE染色、尼氏染色、高尔基染色观察大鼠海马组织病理形态,免疫组化检测大鼠海马Caspase-3的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血糖显著升高,海马区神经元数量显著减少,神经元凋亡增加,神经元胞体出现变形、树突棘减少等病理损伤情况;给予左归降糖解郁方干预后,模型大鼠高血糖和抑郁样状态缓解,海马神经元数量显著增加,神经元形态基本恢复正常,左归降糖解郁方高、中剂量组Caspase-3表达较模型组明显降低。结论左归降糖解郁方可明显改善DD大鼠血糖和学习记忆能力,其机制可能与减缓海马损伤和凋亡、恢复神经元数量与形态有关。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠下丘脑IRS-1/PI3K/AKT信号通路的影响

目的研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠下丘脑IRS-1/PI3K/AKT信号通路的影响。方法将糖尿病并发抑郁症模型动物随机分为模型组、阳性药组(二甲双胍0.18g/kg+氟西汀1.8mg/kg)、左归降糖解郁方高剂量组(20.53g/kg)和低剂量组(10.26g/kg),每组8只。另取8只健康大鼠为正常组。灌胃给药28d并每周测量动物体重。实验结束后,采用血糖仪检测大鼠空腹血糖。采用免疫荧光法检测大鼠下丘脑p-IR,p-IRS-1、p-PI3K,p-Akt蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠体重显著降低而血糖含量显著升高(P0.01),下丘脑p-IR,p-IRS-1,p-PI3K,p-Akt蛋白表达水平均显著降低(P0.01)。与模型组比较,在体重方面,左归降糖解郁方高剂量组大鼠体重在给药的第2周至第4周有显著性增加(P0.01),而低剂量组大鼠体重仅第3周和第4周有显著性差异;在血糖方面,左归降糖解郁方的2个剂量均可显著降低大鼠的血糖(P0.01);在胰岛素信号方面,左归降糖解郁方高剂量组可显著升高模型大鼠下丘脑p-IR,p-IRS-1,p-PI3K,p-Akt的表达,而低剂量仅对p-IR和p-IRS-1蛋白的表达有显著性影响(P0.01或P0.05)。结论左归降糖解郁方可有效改善糖尿病并发抑郁症大鼠下丘脑的胰岛素信号通路,从而改善动物脑内的胰岛素抵抗状态。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马胰岛素抵抗的影响

目的研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马胰岛素抵抗的调节作用。方法建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型,并随机分为4组,模型组,阳性药组(二甲双胍0.18 g/kg+氟西汀1.8 mg/kg),左归降糖解郁方高、低剂量组(20.52、10.26g/kg),另设健康大鼠为对照组。各组大鼠ig给药28 d后,采用血糖仪及ELISA法检测空腹血糖及外周胰岛素抵抗程度。采用旷野实验和强迫游泳实验检测大鼠抑郁样行为。采用免疫荧光法和Western blotting法检测大鼠海马胰岛素受体磷酸化蛋白(p-IR)、磷酸化的胰岛素受体底物-1(p-IRS-1)的表达,采用Westernblotting法检测海马磷酸化的磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠血糖显著升高并伴随明显的外周胰岛素抵抗,其在旷野实验中的活动次数显著降低、在强迫游泳实验中的不动时间显著延长;蛋白检测结果表明大鼠脑内p-IR、p-IRS-1、p-PI3K、p-Akt表达水平均显著降低。与模型组比较,左归降糖解郁方高剂量组大鼠血糖水平显著降低,外周胰岛素抵抗水平减轻,其在旷野实验中的活动次数显著增加、在强迫游泳实验中的不动时间显著缩短,而海马内p-IR、p-IRS-1、p-PI3K、p-Akt表达显著升高。结论左归降糖解郁方可有效调节糖尿病并发抑郁症大鼠海马胰岛素信号通路,从而改善动物脑内的胰岛素抵抗状态。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障紧密连接蛋白、IV型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症(DD)大鼠海马血脑屏障紧密连接蛋白(ZO-1)、IV型胶原蛋白(Co IV)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法采用ig高脂乳剂、尾iv链脲佐菌素(STZ,38 mg/kg)、28 d慢性应激联合的方法建立DD大鼠模型并随机分为5组:模型组,阳性药(盐酸二甲双胍0.18 g/kg+百忧解1.8 mg/kg)组,左归降糖解郁方高、中、低剂量(32.82、16.41、8.20 g/kg)组,并以正常大鼠为对照组,每组10只。给药4周后,电镜下观察血脑屏障的形态变化,免疫组化法检测海马血脑屏障Co IV、ZO-1、α-SMA的表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠ZO-1、α-SMA的表达下降,Co IV的表达升高,差异显著(P0.05);与模型组比较,阳性药组和左归降糖解郁方高剂量组大鼠ZO-1、α-SMA的表达升高,Co IV的表达下降,差异显著(P0.05、0.01)。结论左归降糖解郁方可以保护DD大鼠血脑屏障的损伤,其保护机制可能与升高血脑屏障ZO-1和α-SMA的表达,降低Co IV的表达有关。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠HPA轴及海马糖皮质激素受体表达的影响

目的:探讨复方中药左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症(diabetes mellitus with depression,DD)大鼠HPA轴及糖皮质激素受体的调控作用,阐明其对海马组织的可能保护机制。方法:采用尾静脉注射STZ联合慢性应激建立DD大鼠模型,并按随机数字表法分为模型组、左归降糖解郁方低、中、高剂量组和阳性药组,同时以正常大鼠为对照组。末次给药后,测定各组大鼠血糖值及抑郁行为,病理切片染色观察大鼠海马组织损伤情况,ELISA试剂盒检测大鼠血浆促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin releasing hormone,CRH)、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)、皮质酮(corticosterone,CORT)水平,蛋白免疫印迹法(Western-blotting)检测大鼠海马糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)表达。结果:左归降糖解郁方能显著降低模型大鼠的血糖值和抑郁样行为,海马病理损伤情况得以缓解,且血浆ACTH、CORT水平下降,海马GR蛋白表达上升。结论:左归降糖解郁方能明显改善DD大鼠血糖值和抑郁行为,保护海马神经元,其作用可能与上调GR表达密切相关。     

左归降糖解郁方调控Glu-mGluR_(2/3)-PI3K信号通路在糖尿病并发抑郁症海马NVU神经元凋亡中的保护作用

目的:探讨左归降糖解郁方调控Glu-mGluR_(2/3)-PI3K信号通路在糖尿病并发抑郁症(DD)海马神经血管单元(NVU)中神经元凋亡的保护作用及其机制。方法:原代分离、纯化和培养SD大鼠海马神经元(Ne)、星形胶质细胞(As)与脑微血管内皮细胞(Bm),并对其进行免疫细胞化学染色鉴定;采用Transwell小室及高糖联合皮质酮干预构建DD海马NVU细胞模型;实验设正常对照组、模型对照组、10%空白血清对照组、mGluR_(2/3)激动剂5μmol/L组、PI3K阻断剂2μmol/L组、左归降糖解郁方32.8 g/kg 10%含药血清组。造模及给药18 h后,采用CCK8法检测NVU中海马神经元细胞存活力,采用ELISA法检测NVU中海马神经元细胞上清液谷氨酸(Glu)含量;采用免疫荧光联合高内涵细胞成像(HCA)分别检测NVU中AS细胞内代谢型谷氨酸受体2/3(mGluR_(2/3))蛋白表达水平和海马神经元细胞内的细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、半胱天冬酶-9(Caspase-9)蛋白表达水平;采用Tunel染色NVU中海马神经元细胞凋亡水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组海马神经元细胞存活率显著降低(P<0.01),细胞上清液中Glu含量显著升高(P<0.01),AS细胞内mGluR_(2/3)蛋白表达显著上调(P<0.01),Ne细胞内ERK、Casepase-9蛋白表达明显上调、PI3K蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01),海马神经元细胞凋亡显著增加(P<0.01);与模型对照组比较,左归降糖解郁方32.8 g/kg 10%含药血清组海马神经元细胞存活力显著增加(P<0.05),Glu含量显著降低(P<0.05),mGluR_(2/3)、ERK、Casepase-9蛋白表达显著下调,PI3K蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01),海马神经元细胞凋亡数量显著下降,且核固缩、染色质浓染等阳性特征明显减轻。结论:左归降糖解郁方可调控mGluR_(2/3)活化介导的Glu-mGluR_(2/3)-PI3K信号通路异常,这可能是其抑制糖尿病并发抑郁症海马神经元凋亡的重要机制。     

左归降糖解郁方调控经典Wnt信号改善糖尿病并发抑郁症海马神经干细胞增殖与分化研究

目的 研究左归降糖解郁方调控模拟糖尿病并发抑郁症脑环境下的体外海马神经干细胞增殖与分化作用及分子机制。方法 纯化和培养SD大鼠海马神经干细胞并通过标记巢蛋白（Nestin）进行荧光鉴定。取第3代海马神经干细胞进行实验，分为正常组、模型组、空白血清组、左归降糖解郁方含药血清组、左归降糖解郁方含药血清+海马无翅基因3a(recombinant wingless type MMTV integration site family member 3a,Wnt3a)信号抑制剂XAV-939组。在干细胞培养液中添加葡萄糖和皮质酮模拟糖尿病并发抑郁症脑环境进行造模，空白血清组和左归降糖解郁方含药血清组于造模同期分别给予不同血清。干预18 h后，采用WST-1检测干细胞活力，采用Brdu免疫荧光结合高内涵细胞成像技术评价干细胞的增殖能力，分别采用双皮质素（doublecortin,DCX）、胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）、神经元核抗原（neuron specific nuclear protein,NeuN）免疫荧光评估干细胞的分化能力，采...     

左归降糖解郁方对模拟DD环境致胎鼠海马神经元凋亡保护作用的研究

目的研究左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁症(diabetes mellitus with depression,DD)环境下海马神经元凋亡的保护作用。方法从胎鼠海马组织中分离、纯化和培养海马神经元,采用神经元特异性烯醇化酶(NSE)鉴定海马神经元。采用高糖(150m M)联合皮质酮(200μM)诱导复制模拟DD环境海马神经元损伤模型。实验分为空白对照组、空白血清组、高糖联合皮质酮组、二甲双胍0.18g/kg+氟西汀1.8mg/kg(M+F)组、左归降糖解郁方32.82g/kg(ZGJTJYF)组,造模及药物干预18h,采用MTT法,流式细胞术,高内涵成像分析系统检测各组海马神经元损伤及干预后活力及凋亡的变化情况。结果与空白对照组比较,高糖联合皮质酮组海马神经元胞体破裂,神经网络断裂,细胞活力减小,凋亡显著(P0.05);ZGJTJYF组海马神经元胞体圆润,神经网络丰富,细胞活力较强,凋亡率小,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。空白血清组细胞状态和细胞活力与正常对照组比较,无明显差异,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。M+F组细胞状态和细胞活力与模型组比较有明显差异(P0.05),与ZGJTJYF组比较不具有统计学意义。结论左归降糖解郁方能增强模拟DD环境下海马神经元的活力,减少其凋亡,对模拟DD环境下海马神经元具有保护作用。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症胎鼠海马神经元NR-5-HT信号轴的影响

目的:研究左归降糖解郁方(ZGJTJYF)对模拟糖尿病并发抑郁症(Diabetes mellitus with depression,DD)环境下大鼠胎鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NR)-5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)信号轴的影响。方法:分离、纯化、培养并鉴定胎鼠海马神经元,将培养的海马神经元随机分为6组:空白组、空白血清组、模型组、氟西汀+二甲双胍阳性药组、左归降糖解郁方组和NR阻断剂MK-801组。除空白组和空白血清组外,其余各组分别给予葡萄糖(150 mmol/L)和皮质酮(200μmol/L)用以构建DD海马神经元体外模型,氟西汀+二甲双胍阳性药组和左归降糖解郁方组分别给予10%相应含药血清,阻断剂组加入100 mmol/L MK-801,干预18 h。采用高内涵细胞成像分析技术(High Content Analysis,HCA)检测NR2A、NR2B和5-HT1AR蛋白的表达;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测NR2A、NR2B、5-HT1AR基因的表达。结果:与空白组比较,模型组NRs蛋白和基因表达显著升高,5-HT1AR则表达显著降低;与模型组比较,氟西汀+二甲双胍阳性药组和左归降糖解郁方10%含药血清组可以逆转上述表达;使用阻断剂后NRs蛋白和基因表达明显降低,5-HT1AR蛋白含量显著升高,但基因表达显著降低。结论:左归降糖解郁方抗DD海马神经元损伤,可能与调控NR-5-HT信号轴有关。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠血糖血脂的影响

目的 研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠血糖、血脂的影响。方法 采用ig高脂乳剂、iv链脲佐菌素（STZ,38 mg/kg）和慢性应激联合的方法制备糖尿病并发抑郁症大鼠模型,并随机分为5组：模型组,阳性药（二甲双胍0.18 g/kg+百忧解1.8 mg/kg）组,左归降糖解郁方高、中、低剂量（20.53、10.26、5.13 g/kg）组,同时以正常大鼠为对照组。各组造模同时ig给药,共4周;生化法检测各组大鼠血糖、糖化血红蛋白水平、胰岛素抵抗及血脂水平,ELISA法测定大鼠血浆皮质酮水平,HE染色观察大鼠肾上腺的病理改变。结果 与对照组比较,模型组大鼠血糖、糖化血红蛋白、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）和血浆皮质酮水平显著升高,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平显著降低（P<0.05）,具有明显的胰岛素抵抗。给予左归降糖解郁方干预后,大鼠血糖、糖化血红蛋白、TC、TG、LDL-C水平显著降低,HDL-C水平显著升高,胰岛素抵抗程度减轻,血浆皮质酮水平明显降低（P<0.05、0.01）,肾上腺损伤程度减轻。结论 左归降糖解郁方可改善糖尿病并发抑郁症大鼠的血糖、血脂异常,该作用可能与其保护肾上腺,降低循环系统皮质酮水平有关。     

左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁症环境下模型大鼠海马神经元凋亡相关蛋白的影响

目的探讨左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁症(DD)环境下海马神经元凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-8的调控作用。方法采用受孕18 d SD大鼠胎鼠进行海马神经元原代培养,葡萄糖联合皮质酮干预构建DD模拟环境。将培养的海马神经元随机分为正常组、空白血清组、模型组、阳性药(二甲双胍+氟西汀)药物血清组和待测药(左归降糖解郁方)药物血清组,正常组和模型组给予等量培养液,其余组给予相应体积分数10%药物血清或空白血清,造模干预18 h后,Hoechst荧光染色检测海马神经元凋亡;高内涵分析技术检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-8的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠海马神经元树突断裂或减少,神经网络连接降低,细胞存在明显的浓染、破碎、光点分布不均现象,Bcl-2蛋白表达显著下降(P0.05),Bax和Caspase-8蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,阳性药药物血清组和待测药药物血清组大鼠海马神经元网络连接显著恢复,Hoechst荧光染色可见细胞核明显均匀化,局部亮点明显减少,Bcl-2蛋白表达水平显著上调(P0.05,P0.01),Bax和Caspase-8蛋白表达水平显著下调(P0.05,P0.01)。结论左归降糖解郁方对模型大鼠海马神经元凋亡的保护作用可能与调控海马神经元Bcl-2,Bax和Caspase-8的表达有关。