HPLC测定紫草提取物中β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量

目的: 建立HPLC测定紫草提取物中β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量。 方法: 采用HPLC,Agilent HC-C₁₈色谱柱 (4.6 mm ×250 mm,5 μm);流动相乙腈-水-甲酸(70:30:0.05),检测波长275 nm,柱温40 ℃,流速1 mL·min^-1。 结果: β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁在50~200 μg具有良好的线性关系(r=0.999 8 ),平均加样回收率103.31%,RSD 1.44%(n=5)。 结论: 方法准确,重复性好,可作为紫草提取物的含量控制。     

HPLC同时测定紫朱软膏中左旋紫草素和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁含量

目的建立同时测定紫朱软膏中紫草的左旋紫草素和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁含量的高效液相色谱方法。方法采用Welch Materials XB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,18.5μm),流动相乙腈-水-甲酸(75∶25∶0.05),检测波长516 nm,柱温30℃,流速1.0 mL/min,进样量20μL,对紫朱软膏中紫草的有效成分左旋紫草素和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁进行定量测定。结果左旋紫草素在0.025 6~0.256μg范围内线性关系良好(r2=0.999 5),平均回收率为98.12%(RSD=1.92%);β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁在0.174 4~2.616μg范围内线性关系良好(r2=0.999 2),平均回收率为100.46%(RSD=1.17%)。结论本试验建立的方法简便,测定结果准确,可用于紫朱软膏的质量控制和评价。     

HPLC法测定新疆软紫草属4种植物根中萘醌类成分

目的采用HPLC法测定新疆软紫草属4种植物(新疆紫草、黄花软紫草、天山软紫草、硬萼软紫草)根中7种萘醌类成分(左旋紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁、2-甲基丁基酰紫草素)的含有量。方法该药材石油醚提取物的分析采用Agilent-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.05%甲酸;体积流量1 mL/min;柱温30℃;检测波长275 nm。结果 7种成分在各自范围内线性关系良好,平均加样回收率为97.37%～99.75%,RSD为0.42%～1.94%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于软紫草的质量控制。     

高效液相色谱法同时测定复方当归栓中5种活性组分的含量

目的:建立一种高效液相色谱分析方法,用于同时测定复方当归栓中5种活性成分苦参碱、氧化苦参碱、阿魏酸、左旋紫草素和β,β-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量。方法:采用HPLC法,Kromasil ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-0.1%三乙胺水溶液(用磷酸调节pH3)梯度洗脱,分别在检测波长220,316,516 nm,测定了苦参碱和氧化苦参碱、阿魏酸、左旋紫草素和β,β-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量。结果:通过1次进样,同时测定了复方当归栓中理化性质差异较大的5种活性成分的含量,且线性关系良好(r0.999 6),平均回收率为96.92%～102.22%,RSD3.1%。结论:该法简便、灵敏、准确、重复性好,可用于同时测定该制剂中5种活性成分的含量,并为该制剂质量控制提供了方法学基础。     

HPLC测定新疆紫草不同部位中8种羟基萘醌的含量

建立同时测定新疆紫草Arnebia euchroma不同部位中左旋紫草素、β-羟基异戊酰紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁和异戊酰紫草素等8种羟基萘醌含量的高效液相色谱法。采用Waters Xbridge C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.05%甲酸水溶液(70∶30),检测波长275 nm,流速1mL·min~(-1),柱温30℃。定量结果显示,新疆紫草各部位中主要成分含量差异较大,根皮含量最高,其次是根,再次是茎残基,根木质部和地上部分含量较低。本研究为确定紫草药用部位提供科学依据。     

HPLC法同时测定紫白栓中9种成分

目的建立HPLC法同时测定紫白栓(紫草、大黄、白及等)中贝母兰宁、山药素Ⅲ、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、异丁酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰紫草素、芦荟大黄素、大黄素甲醚的含有量。方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Waters Symmetry C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长254、275 nm。结果 9种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 1),平均加样回收率96.98%～100.03%,RSD 0.72%～1.64%。结论该方法简便、准确、可靠,可用于紫白栓的质量控制。     

UPLC同时测定兰紫解毒颗粒中4种成分的含量

目的 建立一种同时测定兰紫解毒颗粒中苦参碱、氧化苦参碱、左旋紫草素、β,β-二甲基丙烯酰阿卡宁4种化学成分含量的方法,为其质量控制提供参考.方法 采用超高效液相色谱法(UPLC),Acquity BEH C18色谱柱(3.0 mm×30 mm,1.7 μm),以乙腈-0.1％醋酸铵水溶液为流动相,梯度洗脱,同时测定兰紫...     

软紫草与硬紫草萘醌类化学成分的研究

目的:对软紫草与硬紫草中萘醌类化学成分进行研究。方法:利用硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱等方法分离纯化,通过理化常数和波谱数据鉴定化合物结构,利用圆二色谱测定萘醌化合物绝对构型。结果:从软紫草中分离得到6个化合物,鉴定为阿卡宁(AE-1),乙酰阿卡宁(AE-2),β,β-二甲基丙烯酰阿卡宁(AE-3),异丁酰阿卡宁(AE-4),α-甲基-正丁酰阿卡宁+异戊酰阿卡宁(AE-5),β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁(AE-6);从硬紫草中分离鉴定了6个化合物,分别为紫草素(LE-1),乙酰紫草素(LE-2),β,β-二甲基丙烯酰紫草素(LE-3),异丁酰紫草素(LE-4),α-甲基-正丁酰紫草素+异戊酰紫草素(LE-5),β-羟基异戊酰紫草素(LE-6)。结论:软紫草中萘醌类化学成分绝对构型为S型,硬紫草中为R型。     

一测多评法测定新疆紫草中主要萘醌类成分的含量

以β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁为内参物,测定新疆紫草中乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、异丁酰紫草素、α-甲基-正丁酰紫草素的含量,建立紫草中5种萘醌类成分的一测多评定量分析方法。采用高分辨LC-MS对含量测定的5个色谱峰进行鉴定。采用不同高效液相(HPLC)系统和不同色谱柱考察相对校正因子的耐用性,同时采用外标法与一测多评法对16批新疆紫草药材进行分析,并对含量测定结果进行比较。结果表明相对校正因子的耐用性良好,16批样品一测多评法与外标法所得结果无显著差异。所建立的含量测定方法可用于同时测定新疆紫草中5种萘醌类成分。     

新疆紫草根与茎残基部分化学成分及含量的比较研究

目的:比较新疆紫草根及茎残基部分成分及含量。方法:采用薄层色谱法及HPLC指纹图谱鉴别新疆紫草成分;紫外-可见分光光度法测定新疆紫草中羟基萘醌总色素含量;HPLC测定β-β'-二甲基丙烯酰阿卡宁和紫草素的含量总和。结果:10批药材根与茎残基部分薄层斑点数目、形状一致,根的斑点大、色泽深;指纹图谱中两者指纹特征相同,相同保留时间下,根的峰面积更大;10批药材中根的羟基萘醌总色素含量平均为3.631%,茎残基平均为1.516%,紫草素与β-β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量总和的平均值在根及茎残基中分别为0.896%、0.309%。结论:新疆紫草根与茎残基部分所含成分基本一致,但根中羟基萘醌总色素含量、β-β'-二甲基丙烯酰阿卡宁与紫草素总含量均高于茎残基部分两倍以上。     

新疆紫草羟基萘醌有效部位制备工艺研究

目的以β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量为指标,研究新疆紫草抗炎有效部位的制备工艺。方法采用高效液相色谱法测定羟基萘醌中β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量,通过正交设计法优选提取工艺,再经硅胶柱色谱得到羟基萘醌有效部位。结果最佳提取工艺为55℃,15倍量石油醚浸提2h,浸提2次,得到的浸膏经10倍量硅胶柱色谱得到羟基萘醌有效部位。结论此工艺路线成本低,重复性较好,可用于工业化生产,获得较高纯度的羟基萘醌。     

高效液相色谱测定条件的耐用性试验研究

目的：本研究以紫归敏康片中β,β′-二甲基丙烯酰紫草素含量测定确定的色谱条件为研究对象,考察其含量测定高效液相色谱（HPLC）条件的耐用性。方法：在不同的检测波长、流速、柱温、流动相配比、流动相PH、色谱柱等仪器条件下,对制剂中的指标性成分β,β′-二甲基丙烯酰紫草素进行含量测定。结果：在测试范围内,检测波长、流动相配比、流动相PH、色谱柱对含量测定无明显影响（RSD〈3.0%）,流速、柱温有较大影响（RSD〉3.0%）。结论：通过耐用性试验考察,确定了含量测定色谱条件的适宜性,保证了含量测定的准确性、重现性和可信性。     

新疆紫草7种萘醌类成分的同时测定

目的:建立同时测定新疆紫草中紫草酸、紫草素、乙酰紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素、异戊酰紫草素7种成分的HPLC检测方法.方法:选用安捷伦ZORBAX SB-C18(4.6 mm× 250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.03％甲酸为流动相进行梯度洗脱,检测波长516,254 nm,柱温30℃,进样量6μL,流速1 mL· min-1.结果:7种萘醌类对照品在进样量范围内分别与峰面积呈现的良好线性关系(r＞0.999 1);仪器精密度和稳定性RSD均＜3％;加样回收率在97％～103％ (n=3).结论:该方法快速、准确、重复性好,可同时定量新疆紫草的7种水溶性及脂溶性萘醌类成分,为新疆紫草的质量评价提供了更为全面的科学依据.     

LC-MS/MS测定紫草中醇溶性成分和水溶性成分的含量

目的:建立液相色谱串联质谱法测定紫草中醇溶性成分和水溶性成分(左旋紫草素,β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁,β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁,紫草酸,咖啡酸,迷迭香酸)的含量,用于紫草的质量控制。方法:采用Agilent ZORBAX SB C_(18)色谱柱(4. 6 mm×50 mm,1. 8μm),以0. 1%甲酸乙腈(A)-0. 1%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0～3 min,5%～95%A;3～7 min,95%A; 7～7. 01 min,95%～5%A; 7. 01～8. 50 min,5%A);流速0. 2 mL·min-1,柱温35℃,进样量5μL;采用负离子电离模式,MRM扫描模式进行定量。结果:左旋紫草素,β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁,β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁,紫草酸,咖啡酸,迷迭香酸分别在10. 12～1 012μg·L~(-1)(r=0. 998 1),10. 88～1 088μg·L~(-1)(r=0. 991 2),10. 08～806. 4μg·L~(-1)(r=0. 997 6),20. 32～1 016μg·L~(-1)(r=0. 996 6),10. 37～1 037μg·L~(-1)(r=0. 999 6),10. 26～1 026μg·L~(-1)(r=0. 997 8)均有良好线性关系(r≥0. 991 2);平均加样回收率分别为95. 8%(RSD 3. 2%),103. 5%(RSD 2. 3%),105. 3%(RSD 2. 1%),96. 1%(RSD 3. 3%),98. 9%(RSD 2. 7%),100. 8%(RSD 3. 4%)。13批次紫草样品中6个种成分含量存在较大差异。结论:所建立的方法合理可行,为综合评价紫草质量提供一定依据。     

紫草炭制前后萘醌类化合物含量变化及止血作用研究＊

目的 采用传统的蒙药炮制方法，对紫草进行炭制，通过紫外可见分光光度法和高效液相色谱法对紫草炭制前后萘醌类化合物进行含量测定，比较原药材和炭制紫草中的含量变化。初步评价紫草炭制品的止血活性。方法 UV法测定原药材和炭制紫草的羟基萘醌总色素的含量，HPLC法测定β，β′- 二甲基丙烯酰阿卡宁含量。采用毛细管法测定小鼠全血凝血时间和出血时间。结果 UV和HPLC的结果表明，炭制紫草的羟基萘醌总色素和β，β′- 二甲基丙烯酰阿卡宁的含量均不同程度的下降。云南白药阳性对照组及给药三组均与空白对照组比较具有显著差异（P<0.01），延长全血凝血时间效果明显，且160101C炮制组的凝血时间最短，但是给药组之间均没有太明显的差异。结论 本研究可为今后的蒙医药中炭制紫草的质量标准及药理实验提供科学依据。     

紫草醇提工艺优化研究

目的 优选紫草的醇提工艺,确定最佳提取工艺参数.方法 采用HPLC法,以β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁为检测指标,用正交实验法考察了4种因素(乙醇浓度、乙醇用量、温浸时间、温浸次数)对其含量的影响.结果 紫草的最佳提取工艺条件为加10倍量95%乙醇,于50℃温度下搅拌浸泡3次,每次60 min.结论 制备工艺合理,便于生...     

HPLC法同时测定解毒生肌膏中6种成分

目的建立HPLC法同时测定解毒生肌膏(紫草、白芷、当归等)中6种成分的含有量。方法该药物甲醇提取液的分析采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);乙腈-0.5%冰醋酸为流动相,梯度洗脱;体积流量0.8 m L/min;柱温30℃;检测波长300 nm(欧前胡素、异欧前胡素)和516 nm(紫草素、乙酰紫草素、异丁酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素);进样量20μL。结果欧前胡素、异欧前胡素、紫草素、乙酰紫草素、异丁酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素分别在2.74~54.80μg/m L(r=0.999 1)、1.90~38.00μg/m L(r=0.999 5)、2.12~42.40μg/m L(r=0.999 2)、8.48~169.60μg/m L(r=0.999 8)、4.92~98.40μg/m L(r=0.999 7)、4.66~93.20μg/m L(r=0.999 1)范围内线性关系良好,平均加样回收率(RSD)分别为99.72%(1.15%)、97.39%(1.49%)、98.29%(1.87%)、99.29%(1.94%)、98.51%(1.42%)、97.21%(1.55%)。结论该方法简便准确,专属性强,重复性好,可用于解毒生肌膏的质量控制。     

一测多评法同时测定新疆软紫草中6种萘醌类成分

目的建立新疆软紫草Arnebia euchroma中紫草素、乙酰紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰紫草素和β,β′-二甲基丙烯酰紫草素6种萘醌类成分的一测多评测定方法。方法采用高分辨LC-MS对软紫草药材中的主要萘醌类色谱峰进行鉴定。采用HPLC法,以乙酰紫草素为内参物,建立了乙酰紫草素与紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰紫草素和β,β′-二甲基丙烯酰紫草素的相对校正因子,并考察了相对校正因子的耐用性和重现性。比较了外标法和一测多评法对新疆软紫草中6种成分的测定结果。结果各相对校正因子重复性良好,一测多评法测定结果与外标法测定结果无显著差异。结论建立同时测定6种成分的一测多评法控制新疆软紫草药材的质量是准确、可靠的。     

紫草中萘醌类化合物的质谱鉴别及3种成分的UPLC同时测定

目的鉴别紫草药材中的萘醌类化合物,建立紫草中3种萘醌类成分的UPLC同时测定方法,比较和分析不同产地紫草中此3种成分的含量,为建立紫草的质量评价方法提供科学依据。方法根据化合物的紫外光谱、液相色谱行为及质谱数据等综合信息鉴别紫草中的萘醌类成分,采用UPLC对紫草中紫草素、乙酰紫草素及β,β′-二甲基丙烯酰紫草素的含量进行测定,流动相为乙腈-0.1%用酸水溶液,检测波长274 nm,流速0.3mL.min-1,柱温35°C。结果对紫草药材中的5种萘醌类成分的化学归属进行了指认,并系统分析了该类成分的质谱裂解规律;测定了紫草药材中的3种紫草萘醌的含量,结果表明,紫草素、乙酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰紫草素分别在0.98~98,4.40~440,3.07~307.20μg.mL-1范围内线性关系良好(R2=0.9998),平均回收率分别为(n=6)99.84%,102.23%和102.67%。结论紫草中活性成分的识别可以显著增强其质量控制的准确性和专属性,而快速准确的指标成分含量测定方法,也是质量控制的重要检测手段,定性与定量两方面结合,对于紫草药材及其相关产品的质量检测和控制具有重要意义。     

基于SPR技术的表皮生长因子受体与新疆紫草中4种活性成分的相互作用

目的:以人表皮生长因子受体(EGFR)为靶标,从左旋紫草素,乙酰紫草素,β,β-二甲基丙烯酰紫草素,β-乙酰氧基异戊酰紫草素等新疆紫草所含的4种柰醌类活性成分中筛选潜在的EGFR抑制剂。方法:利用表面等离子体共振(SPR)技术,首先通过预吸附实验,优化固定的p H和浓度,选择最佳条件,构筑EGFR生物芯片。在此基础上,以p H 7.4,浓度10 mmol·L-1的磷酸缓冲溶液(含0.005%聚山梨酯-20)作为相互作用时的缓冲溶液,实时动态研究EGFR与4种单体的相互作用。通过软件计算动力学参数,基于结合动力学常数大小,筛选抑制剂。结果:选择p H 4.5,10 mmol·L-1的乙酸缓冲液、质量分数为10 mg·L-1的EGFR为其最佳的固定条件,最终固定量为250 RU。相互作用结果显示4种单体中,β,β-二甲基丙烯酰紫草素与EGFR有明显的结合作用,其他3种单体无明确响应。动力学参数计算结果显示,EGFR与β,β-二甲基丙烯酰紫草素相互作用的结合速率常数ka为1.27×104L·mol~(-1)·s~(-1),解离速率常数kd为2.92×10-2s-1,解离平衡常数KD为2.31×10-6mol·L-1,卡方值(Chi2)为3.25。KD1×10-5mol·L-1,表明他们有较强的亲和力。结论:β,β-二甲基丙烯酰紫草素可能为EGFR的一种抑制剂。